13842-生物-植物-染色-DAPI 和Calcoflour染色

DAPI 和Calcoflour染色
1.用牙签挑取适量新鲜的分生孢子于1ml液体培养基的离心管中振
匀。

2.将振匀的孢子悬液吸取到带有无菌盖玻片的小培养皿中，一定温
度(37℃)下培养一段时间，吸去培养基，用4%多聚甲醛（现配现用，用PBS对16%的多聚甲醛直接稀释到使用所需量）固定1h 以上，然后用PBS溶液洗去甲醛（避免直接冲盖玻片把菌丝冲掉），晾干。

3.吸取大约100ul DAPI (0.8μg/ml的工作液) 染料(SIGMA)滴到盖玻
片上对核进行染色，室温避光放置至少5min。

PBS洗去DAPI染液。

晾干。

4.吸取大约100ul Calcofluor(配制2，2.5，3，3.5，4μg/ml不同浓度
的工作液摸浓度，对于构巢曲霉以及烟曲霉野生型，核隔共染所需染液浓度大概为2μg/ml) 染料(SIGMA)滴到盖玻片上对隔膜进行染色，室温避光放置至少5min。

PBS洗去Calcofluor染液。

5.在载玻片上滴20 ul无菌水，盖上盖玻片，洗去多余的水，压片，
指甲油封片在3-4小时内用显微镜对菌丝进行荧光显微观察（或在载玻片上滴一滴mounting medium，封片后可防止荧光淬灭长期保存。

DAPI和Calcofluor：母液1mg/ml -20℃避光保存，工作液4℃避光保存。

经过固定的片子可以在4℃冰箱保存数月以供观察，染色效果很好的片子可以-20℃冰箱保存一年。