生物制药思考题
生物制药思考题
生物制药复习思考题：一．核心复习题1.药物研究与开发的基本过程？确定疾病→分离出引起疾病的蛋白（2—5年）→找到针对疾病蛋白的有效药物（2—5年）→临床前实验（1—3年）→扩大生产→提法→人体临床试验（2—10年）→FDA批准（2—3年）2.生物技术制药的定义、分类？定义：采用现代生物技术、借助某些微生物、植物、动物生产医药品。
分类方法有三种：按药物的化学本质和特性分类：（1）氨基酸及其衍生生类药物（2）多肽及蛋白质类药物（3）酶与辅酶类药物（4）核酸及其降解物和衍生物类药物（5）糖类药物（6）脂类药物（7）细胞生长因子类（8）生物制品类按原料来源分类：（1）人类组织来源的生物药物（2）动物组织来源的生物药物（3）植物组织来源的生物药物（4）微生物来源的生物药物（5）海洋生物来源的生物药物按生理功能和临床用途分类：（1）治疗药物：肿瘤、爱滋病、心脑血管疾病等（2）预防药物：传染性强的疾病，菌苗、疫苗、类毒素等（3）诊断药物：免疫诊断、酶诊断、放射性诊断、基因诊断试剂（4）其它生物医药用品3.简述生物药物的定义、来源及特性？定义：运用生物学、医学、生物化学等研究成果，从生物体、生物组织、细胞、体液等，综合利用物理学、化学、生物化学、生物技术、药学等学科的原理和方法制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。
来源：（1）天然生物材料：人体、动物、植物、微生物和各种海洋生物等。
（2）人工生物材料特性：（1）药理学特性：治疗的针对性强、药理活性高、毒副作用小，营养价值高，生理副作用常用有发生；（2）在生产、制备中特殊性；（3）检验上的特殊性。
4.基因工程技术生产药物的优点及生产的基本过程？优点：（1）大量生产难以获得的生理活性蛋白质和多肽；（2）提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围；（3）发现，挖掘更多的内源性生理活性物质；（4）改造和去除内源生理活性物质在作为药物使用存在的不足之处；（5）获得新型化合物，扩大药物筛选来源。
生物技术制药课后思考题 (2)
生物技术制药课后思考题1. 什么是生物技术制药？生物技术制药是利用生物技术手段，通过生物材料（如细胞、微生物、酶等）进行药物的研发、生产和应用的一种新型药物生产技术。
该技术利用生物工程、分子生物学、细胞生物学等学科的知识，将生物体内的特定基因或蛋白质进行分离、克隆和重组，进而生产出具有特定药理作用的药物。
2. 生物技术制药的优势有哪些？生物技术制药相对于传统的化学合成药物有以下优势：2.1 高效性和特异性生物技术制药可以通过定向克隆和重组技术，针对特定疾病靶点设计并制备药物。
由于药物的结构和功能可精确控制，因此在治疗效果上具有更高的效率和特异性。
2.2 可重复性和稳定性利用生物技术制药生产的药物，可以通过生物体系的复制和扩增得到，具有较高的生产稳定性。
与传统化学合成药物相比，生物技术制药的药物生产过程更为可控，能够保证批次之间的一致性和质量稳定性。
2.3 安全性和可调控性生物技术制药所使用的生物体或细胞经过严格筛选和检测，可以保证药物的可靠性和安全性。
此外，由于药物的来源可以通过基因工程技术进行调整和干预，使药物的生产和效果在一定程度上可调控。
2.4 可持续发展和生态友好相对于化学合成药物，生物技术制药的生产过程更为环保和持续。
生物技术制药利用生物材料进行生产，可以减少对环境的污染并节约资源。
3. 生物技术制药在医药领域中的应用有哪些？生物技术制药在医药领域中有广泛的应用，包括但不限于以下几个方面：3.1 蛋白质药物生物技术制药主要以重组蛋白质药物为主。
这些药物通过基因工程技术将目标蛋白的基因引入到特定的宿主细胞中，通过表达和纯化等工艺步骤获得目标蛋白质药物。
常见的蛋白质药物包括生长激素、胰岛素、抗体药物等。
3.2 基因治疗基因治疗是一种通过修复或改变人体基因来治疗疾病的方法。
生物技术制药可以通过基因工程技术向患者体内导入特定基因，从而纠正基因缺陷或提高免疫系统的活性，达到治疗效果。
3.3 细胞疗法细胞疗法是一种利用活体细胞来治疗疾病的方法。
生物技术制药课后思考题
第一章：绪论思考题1.什么是生物技术？生物技术所包含的内容及定义。
答：1）生物技术又称生物工程，指人们以现代生命科学为基础，结合先进的工程技术手段和其他基础学科的科学原理，按照预先的设计改造生物体或加工生物原料，为人类生产出所需产品或达到某种目的的技术。
2）包括基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程、蛋白质工程、抗体工程、糖链工程、海洋生物技术及生物转化等。
（具体定义见P1）。
2.生物技术药物的概念及分类。
答：1）指采用DNA重组技术或其他生物技术生产的用于预防、治疗和诊断疾病的药物，主要是重组蛋白或核酸类药物。
2）a.按照用途：预防、诊断、治疗；b.按作用类型：细胞因子类、激素类、酶类、疫苗、单克隆抗体类、反义核酸、RNA干扰类、基因治疗药物；c.按照生化特性：多肽类、蛋白质类、核酸类、聚乙二醇化多肽或蛋白质。
3.生物技术药物在理化性质、药理学与作用、生产制备和质量控制方面的特性。
答：1）理化性质（从药物多是蛋白质或核酸出发）：a.相对分子质量大；b.结构复杂；c.稳定性差；2）药理学作用：a.活性与作用机制明确；b.作用针对性强；c.毒性低；d.体内半衰期短；e.有种属特异性；f.可产生免疫原性；3）生产制备特性：a.药物分子在原料中含量低；b.原料中常存在降解目标产物的杂质；c.制备工艺条件温和；d.分离纯化困难；e.产品易受有害物质污染；4）质量控制特性：a.质量标准内容的特殊性；b.制造项下的特殊规定；c.检定项下的特殊规定。
4.生物技术制药的概念和主要研究内容与任务。
答：1）指利用基因工程、细胞工程等生物技术的原理和方法，来研究、开发和生产预防、治疗和诊断疾病的药物的一门科学。
2）主要研究内容与任务：a.生物制药技术的研究、开发与应用；b.利用生物技术研究、开发和生产药物。
第二章：基因工程制药思考题1.简述基因工程制药的基本原理和基本流程。
答：1）利用重组DNA技术将外源基因导入到宿主菌或宿主细胞进行大规模培养和诱导表达以获取蛋白质药物的过程称为基因工程制药。
生物制药思考题(树达)
•生物制药概论1.生物药品和生物制药的概念2.•生物制药的主要研究内容及其代表性产品3.•按生化性质来分，生物药物主要有几类，指出各类代表性的产品及其用途4.•生物制药历史上里程碑式的发现、发明或关键技术的建立5.•基因工程技术、细胞工程技术、发酵工程和酶工程在医药工业中应用的主要内容6.•什么是基因治疗？目前考虑用基因治疗的疾病有哪些？7.•细胞因子的含义？哪些是细胞因子？基因工程制药1.•基因工程技术的含义2.•目前开发和上市的主要基因工程药品及其生化性质、基本用途。
3.目前基因工程制药中常用的目的基因克隆载体主要有哪几种？4.•克隆（无性繁殖）的含义？基因工程无性繁殖系的构建过程？5.•获得目的基因的主要方法？哪种在目前的基因工程技术中应用得更普遍？•简要回答利用酶促合成法（逆转录法）制取目的基因的步骤？7.•请说出在基因工程技术中，从真核细胞总RNA中分离mRNA的基本原理。
8.•采用反转录－聚合酶链式反应（RT-PCR）技术合成目的cDNA的一般程序是什么？9.•请说出聚合酶链式反应（PCR）体外扩增DNA技术的原理和步骤并图示说明。
10.•受体细胞、转化、转染、转导的含义。
11.•最常用的重组体（菌）的筛选方法有哪三种？12.•Sanger双脱氧链终止法测序的基本原理。
13.•请说明在原核细胞中表达真核基因，合成真核蛋白存在的主要问题。
14.•基因工程产物的分离纯化与传统发酵产物的分离纯化相比具有哪些特点？细胞工程制药1.•细胞工程的含义2.•细胞融合的含义3.•细胞融合的方法有哪几种？其基本原理是什么？4.•两种亲本细胞经过融合后，在其融合混合物种可能会存在几种类型的细胞？杂种细胞筛选的一般原理是什么？有哪些最常用的杂种细胞筛选系统？•什么是杂种细胞的有用性状？有用性状的检测方法有哪些？6.•原生质体融合的含义？微生物原生质体融合育种的主要步骤是什么？7.•酶法进行微生物和植物细胞破壁时，不同酶与不同微生物或植物之间的对应关系如何？8.•植物原生质体融合后的杂种细胞有哪些筛选方法？9.•单克隆抗体的含义？利用杂交瘤技术制备单克隆抗体的一般过程如何？利用单克隆抗体检测病原微生物会产生假阳性吗？10.•利用HAT筛选系统筛选杂交瘤细胞的基本原理11.•什么是杂交瘤细胞的克隆化？克隆化的方法有哪些？12.•目前大规模生产单克隆抗体的方法有哪些，简述其基本原理？13.•单克隆抗体的应用14.•微生物的生物转化的含义？利用微生物的生物转化可生产哪些生物药品?15.什么是核酸适配体、肽配体？动植物细胞培养制药1.•动物细胞培养大致可生产哪些药物？2.•血清作为动物细胞培养基的补充成分有哪些优缺点？3.•请说出贴壁依赖性动物细胞的生长阶段并作简要说明4.•动物细胞培养支原体污染的主要处理方法5.•动物细胞类型及其培养方法，操作方式。
生物制药工艺学思考题及答案
抗生素发酵生产工艺1.青霉素发酵工艺的建立对抗生素工业有何意义？青霉素是发现最早, 最卓越的一种B-内酰胺类抗生素, 它是抗生素工业的首要产品, 青霉素是各种半合成抗生素的原料。
青霉素的缺陷是对酸不稳定, 不能口服, 排泄快, 对革兰氏阴性菌无效。
青霉素通过扩环后, 形成头孢菌素母核, 成为半合成头孢菌素的原料。
2.如何根据青霉素生产菌特性进行发酵过程控制？青霉素在深层培养条件下, 经历7个不同的时期, 每个时期有其菌体形态特性, 在规定期间取样, 通过显镜检查这些形态变化, 用于工程控制。
第一期: 分生孢子萌发, 形成芽管, 原生质未分化, 具有小泡。
第二期: 菌丝繁殖, 原生质体具有嗜碱性, 类脂肪小颗粒。
第三期: 形成脂肪包含体, 积累储蓄物, 没有空洞, 嗜碱性很强。
第四期: 脂肪包含体形成小滴并减少, 中小空泡, 原生质体嗜碱性减弱, 开始产生抗生素。
第五期: 形成大空泡, 有中性染色大颗粒, 菌丝呈桶状。
脂肪包含体消失, 青霉素产量提高。
第六期: 出现个别自溶细胞, 细胞内无颗粒, 仍然桶状, 释放游离氨, pH上升。
第七期：菌丝完全自溶, 仅有空细胞壁。
一到四期为菌丝生长期, 三期的菌体适宜为种子。
四到五期为生产期, 生产能力最强, 通过工艺措施, 延长此期, 获得高产。
在第六期到来之前发束发酵。
3.青霉素发酵工程的控制原理及其关键点是什么？控制原理: 发酵过程需连续流加葡萄糖, 硫酸铵以及前提物质苯乙酸盐, 补糖率是最关键的控制指标, 不同时期分段控制。
在青霉素的生产中, 及时调节各个因素减少对产量的影响, 如培养基, 补充碳源, 氮源, 无机盐流加控制, 添加前体等；控制适宜的温度和ph, 菌体浓度。
最后要注意消沫, 影响呼吸代谢。
4.青霉素提炼工艺中采用了哪些单元操作？青霉素不稳定, 发酵液预解决、提取和精制过程要条件温和、快速, 防止降解。
提炼工艺涉及如下单元操作:①预解决与过滤: 在于浓缩青霉素, 除去大部分杂质, 改变发酵液的流变学特性, 便于后续的分离纯化过程。
(整理)生物制药思考题
第一章绪论1.生物技术的定义与内容生物技术是指应用自然科学和工程学的原理，依靠生物作用剂的作用将物料进行加工以提供产品或为社会服务的技术。
生物技术内容：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程等。
生物技术的一个主要目标就是生物物质的高效生产。
2.什么是生物药物？生物药物可分为哪些类型？生物药物：利用生物体的初级或次级代谢产物、生物组织或整个生物体来生产用于预防、诊断或治疗疾病的医用品。
生物药物的分类（按来源与性质分类）1. 天然生物药物：天然存在于动物、植物、微生物以及各种海洋生物等生物体内，直接通过提取、分离和纯化获得的有效的药理成分；2. 重组药物：重组多肽、蛋白质3. 基因药物：核酸类药物（基因治疗剂、基因疫苗、反义药物等）4. 合成与半合成的生物药物生物药物按功能与用途划分为：1. 治疗药物2. 预防药物（主要预防传染病，疫苗、类毒素）3. 诊断药物（速度快、灵敏度高、特异性强）3. 了解和熟悉一些常见的基因工程肽类药物。
细胞因子（cytokine）：细胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白质的统称。
在很多情况下，多种免疫细胞间的相互作用是通过细胞因子介导完成的。
干扰素类(interferon，IFN)，白细胞介素类（interleukin，IL），集落刺激因子类（colony-stimulating facor, CSF)，表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF），神经生长因子（nerve growth factor，NGF ），肿瘤坏死因子类（tumor necrosis factor，TNF），红细胞生成素（erythropoietin，EPO），凝血因子VIII、IX。
激素:胰岛素(insulin)，生长激素（growth，GH），降钙素（calcitonin ），心钠素（atrial natriuretic factor, ANF ）。
药用酶及其他蛋白药物：链激酶（streptokinase,SK），尿激酶（urokinase），葡激酶（staphylokinase），组织型纤溶酶原激活剂（tissue-type plasminogen activator，t-PA ），超氧化物岐化酶（superoxide dismutases，SOD）。
生物技术制药课后思考题
第一章：绪论思考题1.什么是生物技术生物技术所包含的内容及定义;答：1生物技术又称生物工程,指人们以现代生命科学为基础,结合先进的工程技术手段和其他基础学科的科学原理,按照预先的设计改造生物体或加工生物原料,为人类生产出所需产品或达到某种目的的技术;2包括基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程、蛋白质工程、抗体工程、糖链工程、海洋生物技术及生物转化等;具体定义见P1;2.生物技术药物的概念及分类;答：1指采用DNA重组技术或其他生物技术生产的用于预防、治疗和诊断疾病的药物,主要是重组蛋白或核酸类药物;2a.按照用途：预防、诊断、治疗；b.按作用类型：细胞因子类、激素类、酶类、疫苗、单克隆抗体类、反义核酸、RNA干扰类、基因治疗药物；c.按照生化特性：多肽类、蛋白质类、核酸类、聚乙二醇化多肽或蛋白质;3.生物技术药物在理化性质、药理学与作用、生产制备和质量控制方面的特性;答：1理化性质从药物多是蛋白质或核酸出发：a.相对分子质量大；b.结构复杂；c.稳定性差；2药理学作用：a.活性与作用机制明确；b.作用针对性强；c.毒性低；d.体内半衰期短；e.有种属特异性；f.可产生免疫原性；3生产制备特性：a.药物分子在原料中含量低；b.原料中常存在降解目标产物的杂质；c.制备工艺条件温和；d.分离纯化困难；e.产品易受有害物质污染；4质量控制特性：a.质量标准内容的特殊性；b.制造项下的特殊规定；c.检定项下的特殊规定;4.生物技术制药的概念和主要研究内容与任务;答：1指利用基因工程、细胞工程等生物技术的原理和方法,来研究、开发和生产预防、治疗和诊断疾病的药物的一门科学;2主要研究内容与任务：a.生物制药技术的研究、开发与应用；b.利用生物技术研究、开发和生产药物;第二章：基因工程制药思考题1.简述基因工程制药的基本原理和基本流程;答：1利用重组DNA技术将外源基因导入到宿主菌或宿主细胞进行大规模培养和诱导表达以获取蛋白质药物的过程称为基因工程制药;2目的基因的获得、表达载体的选择、目的基因与载体的连接、重组DNA转入到宿主细胞、重组子的筛选与鉴定、工程菌的发酵表达重组蛋白、表达产物的分离纯化、重组蛋白制剂的生产;2.与化学药物相比较,基因工程药物有什么特点答：a.基因工程药物是由活细胞代谢产生的；b.基因工程药物的相对分子质量要远远大于一般的小分子化学药物；c.在制备基因工程药物时,需要除去宿主蛋白和核酸残留,同时还要防止其他物质的污染,而化学药物大多是通过组合合成的,杂质是原料残留及反应副产物等;3.原核与真核表达体系各有什么优缺点哪些蛋白质需要用真核表达体系4.答：1原核表达体系优点：宿主遗传背景清楚,商品化菌种齐全,方便购买；原核细胞操作简便、繁殖快、周期短；大规模生产成本低,产量较高；下游纯化工艺简单,易于控制,生产效率高；缺点：缺乏蛋白质折叠和翻译后加工系统；分泌能力不足,真核蛋白质常形成不溶性的包含体,表达产物需经变性、复性才恢复活性；有的表达系统,如大肠杆菌有内毒素,很难除去；大肠杆菌中的表达不存在信号肽,产品多为胞内产物,提取困难;2真核表达系统：优点：具有转录后加工能力,外源基因可以是DNA也可以是cDNA；具有蛋白质折叠和翻译后加工系统,可形成正确折叠、装配和糖基化等修饰的蛋白质；可是重组蛋白分泌表达,有利于纯化；缺点：生长缓慢、操作复杂、产量较低、生产成本较高等;3某些需要修饰的蛋白质需要采用真核表达体系;5.重组蛋白类药物的质量控制要考虑哪几个方面答：蛋白质含量测定、纯度检查、理化性质的鉴定分子量、等电点、序列、肽图、二硫键、氨基酸组成、生物学活性鉴定、内毒素分析、宿主蛋白与核酸残留分析;6.基因工程药物如何提高其疗效今后的发展趋势有哪些7.答：1提高蛋白质药物的稳定性；减少蛋白质药物的免疫原性；延长半衰期；提高组织的特异性;2提高基因工程药物的产量；一些现在还没有使用基因工程的手段的药物,实现基因工程化生产；构建突变体,改造已知的药物,增强疗效,减少临床上疗效弱、易产生抗性等不足;第三章：动物细胞工程制药思考题1.离体培养的动物细胞有哪些类型答：贴壁细胞、悬浮细胞和兼性贴壁细胞;2.生产用动物细胞有哪些种类各有何特点3.答：1原代细胞：直接取自动物组织器官,经过粉碎消化而获得的细胞悬液;需要大量动物,费钱、费劳力;2传代细胞系：染色体组型是2n核型；贴壁依赖,接触抑制；可传代培养50代；无致癌性;3转化细胞系：转化过程可以是自发的和人工的,也可从肿瘤组织中获得；具备无限的生命力；较短的倍增时间；较低的培养条件要求；适合于大规模工业化生产的要求；基因工程药物表达的宿主细胞,主要是转化细胞;4工程细胞系：利用细胞融合技术或基因工程技术对转化细胞系的遗传物质进行修饰改造或重组,获得的具有稳定遗传特性的细胞系;4.常用的动物细胞培养基有哪几类答：天然培养基、合成培养基及无血清培养基;5.动能细胞大规模培养有哪几种方式答：悬浮培养法、微载体培养法、多孔载体培养法、微囊化培养法、中空纤维培养法;6.利用动物细胞生产的药物主要有哪些答：疫苗、单克隆抗体、激素、淋巴因子、多肽生长因子、酶类等;第四章：抗体工程制药思考题1.传统的鼠抗体在治疗应用上有哪些局限答：传统的鼠抗体在人体中反复使用会出现人抗鼠抗体反应HAMA,导致抗体在人体内会迅速被清除,半衰期缩短,甚至出现出现严重的不良反应;2.如何对鼠源性单抗进行改造答：将抗体的Fc段用人源替换,仅保留CDR区超可变区是鼠源的,即为构造成嵌合抗体；或者生产全人源化抗体;3.如何制备杂交瘤细胞答：用免疫原与免疫小鼠,从小鼠体内获得淋巴B细胞,制成细胞悬液,然后与骨髓瘤细胞一起混合,使用聚乙二醇诱导细胞融合,将融合后的细胞混合液在HAT选择性培养基上生长,在培养基上生长的即为杂交瘤细胞,进行抗体检测和克隆化培养,可以获得既能够产生单一性抗体,又能够无限增殖的杂交瘤细胞; 4.在制备单抗时为什么要进行两次筛选答：第一次筛选：获得淋巴B细胞与骨髓瘤细胞的融合细胞；第二次筛选：获得能够产生单克隆抗体的杂交瘤细胞;5.制备单抗时为什么要选用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交细胞答：能够产生抗体的淋巴B细胞不能够无限增殖,而骨髓瘤在体外培养具有无限增殖的特性,但是不能产生抗体,将二者融合,融合细胞继承了两个亲代细胞的特性,形成了能够产生抗体又能够无限增殖;第五章：疫苗及其制备技术思考题1.简述疫苗的概念、组成及其作用原理;答：1是将病原微生物如细菌、立克次氏体、病毒等及其代谢产物,经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂;2组成：具有免疫保护性的抗原,如蛋白质、多肽、多糖及核酸等,与免疫佐剂混合制成;3当机体通过注射或口服等途径接种疫苗后,疫苗中的抗原分子就会发生免疫原性作用,刺激机体免疫系统产生高效价特异性的免疫保护物质,如特异性抗体、免疫细胞及细胞因子等,当机体再次接触到相同的抗原时候,机体的免疫系统便会依循免疫记忆,迅速制造出更多的保护物质来阻断病原菌的入侵,从而使机体获得针对病原体特异性的免疫力,使其免受侵害而得到保护;2.传统的灭活疫苗和减毒活疫苗在实际应用中存在哪些局限答：传统的减毒活疫苗,如果减毒程度不够,在使用时有致病的可能性,过分减毒又会使得免疫原性不足或丧失,失去活疫苗的效力;灭活疫苗常常需要多次接种,抗体滴度随时间而下降;3.简述基因工程亚单位疫苗的主要特点及制备方法;答：1优点：产量高、纯度高、安全性好,用于难以培养或具有潜在致癌性病毒的疫苗制备;缺点：生产成本比较高纯化,产品研发成本高,免疫接种成本高多次注射,与传统疫苗相比,免疫效果较差;2制备方法：在分离出病原体特异抗原编码基因的基础上,将外源基因转入另外一个非致病微生物或细胞中表达,然后通过分离纯化而获得特异的蛋白质;表达系统有大肠杆菌、酵母菌和高等植物;4.何为治疗性疫苗请比较治疗性疫苗与预防性疫苗的主要区别5.答：1治疗性疫苗是指在已感染病原微生物或已患有某些疾病的机体中,通过诱导特异性的免疫应答,达到治疗或防止疾病恶化的天然、人工合成或用基因重组技术表达的产品或制品;2治疗性疫苗兼有治疗和预防的作用,当机体已经处于感染或患病状态时,治疗性疫苗会诱导免疫应答,治疗疾病;预防性疫苗是使机体处于免疫保护状态,当病原菌再次入侵时候,依循免疫记忆,会迅速做出免疫应答,阻止病原菌的入侵;6.设计并简述禽流感H5N1灭活疫苗的主要制备流程;答：P122。
生物制药思考题
⽣物制药思考题第⼀章绪论1.⽣物技术的定义与内容⽣物技术是指应⽤⾃然科学和⼯程学的原理，依靠⽣物作⽤剂的作⽤将物料进⾏加⼯以提供产品或为社会服务的技术。
⽣物技术内容：基因⼯程、细胞⼯程、酶⼯程、发酵⼯程等。
⽣物技术的⼀个主要⽬标就是⽣物物质的⾼效⽣产。
2.什么是⽣物药物？⽣物药物可分为哪些类型？⽣物药物：利⽤⽣物体的初级或次级代谢产物、⽣物组织或整个⽣物体来⽣产⽤于预防、诊断或治疗疾病的医⽤品。
⽣物药物的分类（按来源与性质分类）1. 天然⽣物药物：天然存在于动物、植物、微⽣物以及各种海洋⽣物等⽣物体内，直接通过提取、分离和纯化获得的有效的药理成分；2. 重组药物：重组多肽、蛋⽩质3. 基因药物：核酸类药物（基因治疗剂、基因疫苗、反义药物等）4. 合成与半合成的⽣物药物⽣物药物按功能与⽤途划分为：1. 治疗药物2. 预防药物（主要预防传染病，疫苗、类毒素）3. 诊断药物（速度快、灵敏度⾼、特异性强）3. 了解和熟悉⼀些常见的基因⼯程肽类药物。
细胞因⼦（cytokine）：细胞分泌的具有⽣物活性的⼩分⼦蛋⽩质的统称。
在很多情况下，多种免疫细胞间的相互作⽤是通过细胞因⼦介导完成的。
⼲扰素类(interferon，IFN)，⽩细胞介素类（interleukin，IL），集落刺激因⼦类（colony-stimulating facor, CSF)，表⽪⽣长因⼦（epidermal growth factor，EGF），神经⽣长因⼦（nerve growth factor，NGF ），肿瘤坏死因⼦类（tumor necrosis factor，TNF），红细胞⽣成素（erythropoietin，EPO），凝⾎因⼦VIII、IX。
激素:胰岛素(insulin)，⽣长激素（growth，GH），降钙素（calcitonin ），⼼钠素（atrial natriuretic factor, ANF ）。
药⽤酶及其他蛋⽩药物：链激酶（streptokinase,SK），尿激酶（urokinase），葡激酶（staphylokinase），组织型纤溶酶原激活剂（tissue-type plasminogen activator，t-PA ），超氧化物岐化酶（superoxide dismutases，SOD）。
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第一章绪论1.生物技术的定义与内容生物技术是指应用自然科学和工程学的原理，依靠生物作用剂的作用将物料进行加工以提供产品或为社会服务的技术。
生物技术内容：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程等。
生物技术的一个主要目标就是生物物质的高效生产。
2.什么是生物药物？生物药物可分为哪些类型？生物药物：利用生物体的初级或次级代谢产物、生物组织或整个生物体来生产用于预防、诊断或治疗疾病的医用品。
生物药物的分类（按来源与性质分类）1. 天然生物药物：天然存在于动物、植物、微生物以及各种海洋生物等生物体内，直接通过提取、分离和纯化获得的有效的药理成分；2. 重组药物：重组多肽、蛋白质3. 基因药物：核酸类药物（基因治疗剂、基因疫苗、反义药物等）4. 合成与半合成的生物药物生物药物按功能与用途划分为：1. 治疗药物2. 预防药物（主要预防传染病，疫苗、类毒素）3. 诊断药物（速度快、灵敏度高、特异性强）3. 了解和熟悉一些常见的基因工程肽类药物。
细胞因子（cytokine）：细胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白质的统称。
在很多情况下，多种免疫细胞间的相互作用是通过细胞因子介导完成的。
干扰素类(interferon，IFN)，白细胞介素类（interleukin，IL），集落刺激因子类（colony-stimulating facor, CSF)，表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF），神经生长因子（nerve growth factor，NGF ），肿瘤坏死因子类（tumor necrosis factor，TNF），红细胞生成素（erythropoietin，EPO），凝血因子VIII、IX。
激素:胰岛素(insulin)，生长激素（growth，GH），降钙素（calcitonin ），心钠素（atrial natriuretic factor, ANF ）。
药用酶及其他蛋白药物：链激酶（streptokinase,SK），尿激酶（urokinase），葡激酶（staphylokinase），组织型纤溶酶原激活剂（tissue-type plasminogen activator，t-PA ），超氧化物岐化酶（superoxide dismutases，SOD）。
第二章基因工程制药1、写出基因工程的基本要素及制备基因工程药物的基本过程。
基因工程基本要素：工具酶，目的基因，载体，宿主制备基因工程药物的基本过程2、列出4种获取目的基因的方式。
1、构建基因文库。
适合于无内含子的原核生物。
2、构建cDNA文库。
适合于真核生物基因克隆。
3、PCR方式。
4、化学合成。
已知基因或蛋白质全长序列，合成短的寡核苷酸片断，拼接为长的DNA片断，再用连接酶连接成完整基因。
3、了解常用的外源基因表达系统。
1、原核表达体系（1）大肠杆菌：目前采用最多的原核表达体系。
（2）枯草芽孢杆菌（3）链霉菌2、真核表达系统（1）酵母（2）丝状真菌。
近年来在30种以上丝状真菌中建立了DNA转化体系。
（3）昆虫细胞表达体系。
以昆虫细胞为表达宿主。
（4）哺乳动物细胞表达系统4、写出大肠杆菌表达系统的优势和缺点。
大肠杆菌：目前采用最多的原核表达体系。
革兰氏阴性菌优势：遗传背景清楚，基因组序列已确定；生长迅速，平均20~30min繁殖一代；易于培养，生产成本低，适合大规模培养；外源基因表达水平高，可达总蛋白的5~30％以上；有大量可供选择利用的克隆和高效表达载体。
缺点：缺乏翻译后加工修饰系统，缺少糖基化功能；没有有效释放蛋白到培养基中的分泌机制；表达的外源蛋白多形成包涵体，蛋白的复性较困难；翻译目的蛋白N端常多一个甲硫氨酸残基（AUG编码）。
5、写出融合表达优点和缺点。
融合表达具有多方面的优点：1、能使外源基因得到有效转译，防止包涵体的形成，促进蛋白质的正确折叠，限制蛋白酶解，利于检测与纯化。
2、成功应用的融合担体蛋白：谷胱甘肽S-转移酶（GST）、麦芽糖结合蛋白（MBP）以及硫氧还蛋白（Trx）等。
3、融合表达一般都有方便的纯化方法（GST 融合蛋白可采用谷胱甘肽-sepharose亲和柱进行纯化，带组氨酸标签的融合蛋白采用金属螯合层析纯化）。
缺点：对融合蛋白进行位点特异性裂解。
6、质粒不稳定有哪两类？1、分裂不稳定性：工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌。
相关因素：（1）质粒的丢失率（宿主菌、质粒特性和培养条件）；（2）含质粒菌与不含质粒菌的生长速度差异2、结构不稳定：DNA从质粒上丢失、质粒上序列发生重排等。
7、画出基因工程药物分离纯化的流程。
8、什么是包含体？包含体形成的原因是什么？包含体表达的优点和缺点是什么？常用哪些试剂溶解包含体？包含体复性的方式有哪些？包含体（Inclusion Body）：外源基因在大肠杆菌中高水平表达时通常形成的一种由目的蛋白构成的不溶的、无活性的蛋白聚集体。
包含体表达的优点：表达量高；密度高（1.2-1.4g/mL之间），容易分离；抗蛋白酶；对宿主毒性小。
包含体复性方法：稀释复性；透析复性；层析复性。
影响复性的操作参数：蛋白浓度、温度、pH、离子强度。
提高蛋白复性率的策略：复性添加剂如PEG、表面活性剂；分子伴侣常用半胱氨酸之间形成二硫键方法：1. 空气氧化法。
在碱性条件下通空气，氧化时可以加入二价铜离子加快反应速度，能够取得更好的效果，缺点是不易控制氧化还原电势，而且二硫键的氧化形成速度慢；2.氧化还原对重排体系。
常用氧化还原对有氧化型谷胱甘肽/还原型谷胱甘肽和胱氨酸/半胱氨酸，通过调整氧化还原两种物质的比例可以控制较精确的氧化还原电势，对二硫键反应进行控制，其二硫键形成速率快于空气氧化法。
9、对基因工程药物进行质量控制时需要做哪些项目分析？目标产品的质量控制：产品的鉴别、纯度、活性、安全性、稳定性、一致性。
1.生物活性测定：活性、比活2.产品的鉴定（1）相对分子量：SDS-PAGE、凝胶过滤，允许10%误差。
必要时采用质谱准确测定。
（2）等电点：等电聚焦测定，等电点常不均一，每批测定结果应一致。
（3）紫外吸收光谱：特征型吸收，每批一致（4）氨基酸序列测定：送检中试头三批产品，N端15个氨基酸序列，C端1～3个氨基酸残基。
（5）氨基酸组成分析（6）免疫印迹（western blot）（7）圆二色光谱（8）肽图：一般用胰蛋白酶或CNBr裂解，再用RP-HPLC或SDS-PAGE分析（9）二硫键分析3.蛋白纯度分析：必须采用非还原SDS-PAGE和HPLC进行检定，其他检测方法包括CE（毛细管电泳）等。
4.杂质检测（1）内毒素：家兔法、鲎试剂法（2）宿主细胞蛋白：免疫分析（3）宿主细胞残余DNA：核酸杂交，100pg/剂量（4）细菌、酵母、真菌、支原体、病毒：微生物学方法（5）其他物质：抗生素，牛血清；采用了抗体亲和层析，检测小鼠IgG含量。
5.稳定性检测：在不同温度下保存，定期取样检测生物活性及其他特性的变化。
6.一致性：各批次产品均符合标准规格。
第三章动物细胞工程制药1、动物细胞可应用于哪些药物的生产？动物细胞作为一种重要的宿主细胞，可用以下药物的生产：病毒、疫苗、其他的各种重组蛋白、单克隆抗体2、请根据哺乳动物的形态对其进行分类。
离体培养的动物细胞主要为哺乳动物细胞。
根据是否需要帖附于支持物上生长的性质，可将动物细胞分为贴壁依赖型和悬浮型两类。
1、贴壁依赖型。
绝大多数细胞在培养时必须贴附在某一固相表面才能生存和生长。
按培养细胞的贴壁的形态主要分为4类：（1）成纤维细胞型。
形状与体内成纤维细胞形状相似而得名，细胞大致呈梭形或不规则三角形。
（2）上皮细胞型。
形状为扁平的不规则多角型。
（3）游走细胞型。
在支持物上分散生长，不连接成片，呈活跃的游走和变形运动。
（4）多形性细胞。
形态不规则。
2、悬浮型。
少数细胞在培养时呈悬浮生长，来源于血液、淋巴组织的细胞、某些肿瘤细胞、杂交瘤细胞、转化细胞为悬浮型。
形态常为球形，可悬浮培养。
3、兼性贴壁细胞。
不严格的依赖支持物，某些情况下可在培养基中良好悬浮生长。
3、写出动物细胞的生理特征。
动物细胞的生理特征:1. 细胞分裂周期长（12~48h ）2. 细胞生长需贴附基质，存在接触抑制3. 正常二倍体细胞生长寿命有限4. 对周围环境十分敏感5. 对培养基要求高：氨基酸、维生素、无机盐、细胞生长因子、贴壁因子、血清等。
6. 对蛋白合成途径和修饰与细菌不同（糖基化）4、简要了解生产用动物细胞的种类及细胞库的类型。
动物细胞种类：1原代细胞：直接取自动物组织、器官，经粉碎、消化得到的细胞悬液。
特点：需要大量动物，例：鸡胚细胞、原代兔肾或鼠肾细胞、血液淋巴细胞。
2. 二倍体细胞系：通过筛选、克隆从原代培养细胞中获得的具有某种特征的有限细胞株。
特点：有限增殖、2n、贴壁、接触抑制。
例：MRC-5、WI-383、转化细胞系：通过某个转化过程形成，常由于染色体断裂成为异倍体。
特点：自发形成，啮齿动物细胞多发；病毒感染后转化；直接从动物肿瘤组织中建立的细胞系。
转化细胞具有无限生命力，一般倍增时间短、对培养条件和生长因子要求较低。
4、融合细胞系：细胞融合：两个或两个细胞合并成一个细胞的过程。
主要为杂交瘤细胞。
5、重组工程细胞系：构建含目的基因的真核细胞表达载体（病毒载体、质粒载体）导入动物细胞，通过选择标记筛选工程细胞。
细胞库类型：1、原始细胞库（master cell bank，MCB）：二倍体细胞：群体倍增水平尽可能低的细胞（传代次数尽可能少的细胞），记录详细档案2、工作细胞库（working cell bank，WCB）：生产用细胞库（manufacturer’s working cell bank，MWCB）5、动物细胞培养所用合成培养基主要成分包括哪些？培养基中添加血清的作用是什么？合成培养基成分明确、组分稳定，主要由成分包括：1、氨基酸必需氨基酸、半胱氨酸、酪氨酸及其他种类氨基酸；2、维生素3、能源物质（葡萄糖、谷氨酰胺）4、无机盐5、缓冲体系6、其他成分如核酸前体物质（腺苷、鸟苷等）、脂类物质等血清作用：1、提供细胞生长所需的各种生长因子和激素2、提供细胞生长所需的贴附因子和伸展因子3、提供可识别金属离子、激素、维生素、脂质的结合蛋白4、提供细胞生长所必须的脂肪酸和微量元素。
6、动物细胞培养采用无血清培养基有何优点？无血清培养基中需要在合成培养基的基础上加入哪些成分？无血清培养基的优点：提高了细胞培养的重现性、减少了血清带来的污染问题、供应充足、产品易于纯化。
在合成培养基中添加一些特殊成分而成：1、激素和生长因子(胰岛素和表皮生长因子等)2、结合蛋白（铁传递蛋白、白蛋白）3、帖附和伸展因子（纤维结合蛋白胶原、一些多肽）4、其他有利于细胞生长的因子和元素（谷胱甘肽、硒等）7、了解动物细胞大规模培养的培养方法。