DNA测序技术发展简史
DNA测序技术发展史一代二代三代测序技术简要原理及比较
DNA测序技术发展史一代二代三代测序技术简要原理及比较一、一代测序技术一代测序技术最早出现于1977年，由Sanger和Gilbert等人开发。
其原理基于DNA链延伸，即通过将DNA链合成过程中加入少量的dideoxy核苷酸（ddNTP），使得DNA链延伸在一些特定位置停止，并通过凝胶电泳分析停止位置来确定每个核苷酸的顺序。
一代测序技术的特点是：1.准确性较高，可以达到99.99%的准确率。
2.读长较短，一般为500至1000个碱基。
3.测序过程复杂，需要进行多次扩增和凝胶电泳分析，耗时较长。
二、二代测序技术二代测序技术的发展始于2005年，它采用大规模并行的方式进行测序，实现了高通量测序。
主要的二代测序技术包括454测序、illumina测序和Ion Torrent测序。
454测序技术采用循环化学法，通过将DNA片段固定在微小的载体上，然后进行多次扩增和测序，最后通过压缩气体冲击来释放碱基，从而实现测序。
illumina测序技术采用桥式扩增法，通过将DNA固定在玻璃芯片上的小孔中，并用荧光标记核苷酸进行扩增和测序，最后通过激光扫描来检测荧光信号。
Ion Torrent测序技术是一种基于半导体芯片原理的测序技术，通过检测氢离子的释放来确定DNA序列。
二代测序技术的特点是：1.高通量：可以同时测序数百万甚至数十亿个片段。
2.快速：通常只需几个小时到几天的时间完成测序。
3.读长较短：大部分二代测序技术的读长在100至1000个碱基之间。
4.相对较低的测序准确率：一般在99%左右。
三、三代测序技术三代测序技术是指第三代测序技术，它的发展始于2024年。
三代测序技术主要包括单分子测序和纳米孔测序。
单分子测序技术（如PacBio和Nanopore）通过将DNA片段转化为单分子，然后通过观察单分子的扩增和测序来获得DNA序列。
纳米孔测序技术则是将DNA分子引入纳米孔中，通过纳米孔内的电信号变化来确定碱基对的序列。
DNA测序技术的发展与应用前景
DNA测序技术的发展与应用前景DNA测序技术被广泛应用于基因组研究、医学诊断、药物开发等领域。
随着技术的快速发展，人们对于DNA测序技术的期望和应用越来越高。
本文将深入探讨DNA测序技术的发展历程以及其应用前景。
一、DNA测序技术的发展历程DNA测序技术的历史可以追溯到上世纪50年代。
当时，Frederick Sanger等人通过发明链终止法（dideoxynucleotide sequencing）开创了DNA测序技术。
这种方法建立在DNA链扩增技术的基础上，利用缺少3'羟基的二代核苷酸停止链的生长，从而确定DNA的序列。
此后，多种改进版本的链终止法被提出，包括Maxam-Gilbert法和Thermo Sequenase法。
到了1990年代，PCR（聚合酶链式反应）技术的出现，为DNA测序技术带来了新的革命。
PCR技术使得DNA片段得到扩增，从而减少了使用大量DNA的需要，并且加快了测序的速度。
同时，自动测序仪的问世也使得测序速度大大提升。
自动测序仪可以同时进行多个样本的测序，数据可以自动收集和处理，从而大大提高了测序的效率和准确性。
到了21世纪初，基于大规模并行测序（massively parallel sequencing, MPS）技术的第三代DNA测序技术开始涌现。
这些技术包括轮廓组、Roche/454、Illumina、Ion Torrent、PacBio SMRT 等。
第三代DNA测序技术的出现，使得整个测序过程更快速、准确和经济，同时也会产生更多的数据。
这些技术的出现，标志着DNA测序技术进入了新的阶段。
二、DNA测序技术的应用前景1. 基因组学研究DNA测序技术的一个重要应用领域是基因组学研究。
随着第三代DNA测序技术的发展，测序速度和产出数量都得到了大幅提升。
研究人员现在可以使用这种技术更全面地研究基因组变异、基因调控等问题。
这种技术可以帮助科学家更好地理解基因组的组成和功能以及其与疾病之间的关系。
DNA测序技术的发展史
DNA测序技术的发展史DNA测序技术是现代生物科技的一个重要领域，它可以让我们更深入地了解生命的本质和机理。
在这个方面，我们是遥遥领先的，但发展出现代测序技术的过程却注定是漫长而经历了多个复杂的阶段。
人们首先意识到DNA的基本概念是在20世纪初。
当时，人们知道基因是不同样的特征的遗传物质，但不知道它们是由什么构成的。
1928年，费德里克·格里菲斯通过实验证明了细菌遗传的一些基本规律，他向大家证明了DNA是遗传物质。
1953年，詹姆斯·沃森和弗朗西斯·克里克在Nature上发表了重要的论文，推翻了斯特霍默提出的“蛋白质在DNA和RNA之前”模型，提出了“双螺旋模型”。
这种模型被证明是非常先进和准确的，为日后的基因研究奠定了基础。
尽管这种研究启发我们对DNA有更深的理解，但测序本质上还是一种因式分解的过程，需要大量计算和存储资源。
随着计算机技术的进步，人们开始寻找更加高效且自动化的方法来进行基因测序。
1967年，弗雷德里克·桑格在MIT提出了手动测序的方法，这一方法能够分辨不同的核苷酸，并把它们排列在DNA链中。
但是，这种方法非常费时费力，需要大量的人力和技术体力，不适用于大规模的基因测序。
1977年，萨拉和佩耶尔森通过使用可变温度的DNA聚合酶，发明了第一台能够自动测序的机器。
这种机器被命名为Waltz-Sequencer，能够剪下分子并将分子分离成单个碱基。
但是，这种技术仍然存在许多不足之处，例如难以处理大规模的基因数据、噪声干扰和误报等。
1985年，创造了现代的生物技术。
研究人员首次使用克隆克隆DNA，这种克隆克隆DNA可以大幅扩增DNA产物的数量，从而更容易进行测序。
这是现代生物技术的一个重要创新，促进了DNA测序技术的快速发展。
在克隆克隆DNA的基础上，人们开发出了许多更加先进的测序技术，包括基于聚合酶链式反应（PCR）的测序、Sanger测序和pyrophosphate测序等。
DNA测序技术演进历程回顾
DNA测序技术演进历程回顾DNA测序技术是现代生物科学的重要突破之一，它在研究基因组、解析遗传信息以及推动生物医学研究方面具有举足轻重的地位。
本文将回顾DNA测序技术的演进历程，从最早的手工测序方法到现代高通量测序技术的发展，带您一同了解这一领域的进展。
DNA测序的起源可追溯到20世纪50年代，当时的科学家们开始探索DNA结构与序列之间的关系。
1951年，罗斯林德拉克和雷蒙德吉科因率先提出了链终止法，这是一种手工测序方法。
通过合成不完全的DNA链和核酸酶处理，科学家可以确定目标DNA段的序列。
尽管这种方法十分耗时费力，但它为后来的测序技术打下了基础。
进入1960年代，自动测序技术的发展开创了DNA测序的新篇章。
1977年，弗雷德里克桑格和沃尔特吉尔伯格开发出了临时试验板法，成功测序了5位核苷酸。
同年，盖尔西格尔和阿伦香农提出了链特异法，该方法使用放射性标记的短RNA分子来测序DNA。
这两种方法为后来的自动测序技术提供了重要的参考。
1980年代，冈察高和达维德史密斯分别在自己的实验室里发明了两种重要的自动测序技术。
冈察高发明了Sanger测序法，该方法利用了二进制法识别核苷酸的顺序。
史密斯则提出了荧光测序法，利用荧光标记不同核苷酸碱基来测序DNA。
这两种方法都极大提高了测序速度和准确性，被广泛应用于实验室研究。
随着计算机技术和生物信息学的迅速发展，1990年代见证了DNA测序技术的巨大突破。
1990年，国家人类基因组研究院成立，并启动了人类基因组计划。
这一计划的目标是测序人类基因组，并让大众受益。
为了实现高通量测序，第一代测序技术也应运而生。
包括454测序、solexa（现在的Illumina）测序、Solid测序等。
这些技术的出现极大推动了大规模基因组测序的进行。
进入21世纪，下一代测序技术蓬勃发展，其中最有代表性的是Illumina测序（也被称为二代测序）。
Illumina采用无模板PCR和桥式扩增的方法，大大提高了测序速度和准确性。
DNA测序技术的发展及新型方法开发
DNA测序技术的发展及新型方法开发DNA测序技术是现代分子生物学和遗传学的重要手段之一，也是生命科学研究的基础。
自第一次人类基因组测序项目启动以来，DNA测序技术发展迅速，诞生了多种新型测序方法，如二代测序、三代测序和纳米孔测序等。
本文将介绍DNA测序技术的发展历程和新型方法的开发。
一、DNA测序技术的发展1960年，克里克与沃森提出了DNA结构模型，标志着分子生物学和遗传学进入了DNA时代。
此后，人们开始寻找一种可行的方法来测序DNA。
1977年，萨格测序方法被发明，这标志着DNA测序技术正式启动。
萨格测序方法是一种基于化学的测序技术，它利用了DNA合成时核苷酸特异的骨架酯键水解性质。
该方法需要将DNA模板分成多份，并分别加入四种可以特异性终止合成的核苷酸，通过逐个加入这四种核苷酸并测定终止点的方法来确定DNA序列。
1990年，人类基因组计划启动，在更快、更准确、更高效的DNA测序技术的背景下，二代测序技术应运而生。
与萨格测序方法相比，二代测序技术更加高效，能够在短时间内测定大量样本的DNA序列。
二代测序技术主要包括Illumina（Solexa）测序技术、ABI/SOLiD测序技术和454测序技术等。
这些测序技术都是基于PCR扩增技术，它们的共同特点是速度快、通量大并且适用范围广。
1995年，第一款商用二代测序仪器“ABI的Prism DNA Analyzer”上市，标志着这一领域的商业化开始。
此后，二代测序技术快速发展，TCGA（人类癌症基因组图谱）和1000多个人类基因组计划等一系列大型基因组项目的启动，使得二代测序技术得到了广泛应用。
而在2007年之后，第三代测序技术开始崭露头角，它的特点是相对于二代测序，更能克服样品复杂性、GC含量、引物引导偏差等技术瓶颈，同时还实现了单分子测序。
三代测序技术是一种直接测序技术，适用于复杂基因组等长链DNA的建库和测序，可以揭示许多与二代测序不同的基因标记。
DNA测序技术发展的历程
DNA测序技术发展的历程随着科技的不断发展，人类对于自身的认知也得到了前所未有的提升，特别是在基因方面。
DNA测序技术作为基因研究中的重要工具，其发展历程既丰富又曲折。
本文将从发明初期到现今的新技术，探讨DNA测序技术的历程。
一、Sanger测序法的诞生Sanger测序法是DNA测序技术的开创之作，其得名自诺贝尔奖获得者Frederick Sanger。
1958年，Sanger的团队成功地使用放射性同位素示踪技术，确定了蛋白质的氨基酸序列。
几年之后，他们尝试将这种技术应用于DNA的核苷酸序列的测定中，最终提出了Sanger测序法。
Sanger测序法的核心思想是利用DNA聚合酶进行DNA复制，向其中添加外来的ddNTP，ddNTP会在添加后停止复制的过程。
而ddNTP具有特殊性质，比正常的dNTP多了一个氧，使得其不能作为新的复制单位，从而使复制过程停留在某个位置，最终产生一系列截止于ddNTP的DNA碎片。
通过分离这些碎片，并与一段已知基因的DNA碎片混杂，再进行读取即可得到目标DNA 的序列。
Sanger测序法的发明，使得基因科学中关于DNA的研究进展飞速，并为其后的DNA测序技术的发展奠定了思想基础。
二、改进与提高效率的尝试自Sanger测序法提出之后，科学家们渐渐发现它的效率与应用领域也存在很多限制与不足。
在1960-1970年代，不少改进性的尝试都在进行。
比如，Gilbert和Maxam提出了各自的测序方法，相较于Sanger的方法，它们使用的是化学分解的原理，而非添加有毒物质的特殊ddNTP，最终实现了碱基读取的目的。
但在1990年之前，DNA测序的效率还不能满足科学家对于更加全面的基因研究的要求。
而直到1977年，一位名叫Sanger（和发明Sanger测序法的Sanger一点关系都没有）的科学家提出了一项新颖的测序方法——“二代”测序法。
“二代”测序法的核心思想与Sanger测序法相同，但用了不同的原理。
DNA测序技术发展
DNA测序技术发展DNA测序技术是近年来发展最为迅速的生物技术之一，它在基因检测、医学诊断、生态研究等领域都发挥了巨大的作用。
DNA测序技术的发展历程漫长，但却充满了奇迹和意外。
下面就让我们来探究DNA测序技术的历史和发展。
一、DNA测序技术的历史DNA测序技术的探索可以追溯到20世纪初。
当时，人们对DNA的理解还很有限，DNA只被认为是生命的分子基础，而未被应用于实际生产和生活中。
1960年代末，弗雷德里克·桑格和沃尔特·吉尔伯特成功地发现了DNA的重复性序列，从此开启了DNA的探索之路。
1977年，两个独立的团队，弗雷德里克·桑格和沙利文实验室，分别发明了面向DNA序列的化学法，并且实现了第一个重要的测序实验。
这个实验将一个病毒DNA的完整序列测定了出来，打开了DNA测序技术的研究之门。
1985年到2000年，DNA测序技术经历了一个突飞猛进的时期。
在这一时期，追求DNA测序技术的完美和高效性成为了科学界的主旋律。
人们开始采用自动化的方法进行DNA测序，不仅大大提高了测序速度，而且降低了操作难度和人力成本。
同时，生物信息学的发展也让DNA序列分析变得更加简单。
21世纪以来，DNA测序技术进一步迈向了高通量的阶段。
新一代测序技术的发展，使得DNA测序速度和准确度都得到了极大的改善。
目前最先进的新一代测序技术能够单次测序数百万条DNA序列，大大缩短了测序时间，降低了成本。
这种技术对生命科学研究的贡献是巨大的。
二、DNA测序技术的分类根据测序方法和技术的不同，DNA测序技术被分为了Sanger测序、二代测序和三代测序三种类型。
1、Sanger测序Sanger测序，也称为链终止法测序。
它是一种基于化学原理进行的分子生物学技术，是第一代测序技术。
Sanger测序技术是一种革命性的技术，不仅揭示了许多基因的结构和功能，还推动了人类基因组计划的启动。
Sanger测序原理是利用DNA聚合酶进行DNA合成，遇到ddNTP时会停止聚合，并导致DNA链终止。
DNA测序
DNA测序一、DNA测序发展史:DNA测序可以分为四个阶段：DNA的出现、第一代DNA测序技术、第二代DNA测序技术、第三代DNA测序技术1、DNA测序的出现：1975年Sanger和Coulson发明了加减法测定DNA序列。
1977年在引入双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)后,形成了双脱氧链终止法,使得DNA序列测定的效率和准确性大大提高。
Maxam和Gilbert在1977年报道了化学降解法测定DNA的序列。
2、第一代DNA测序技术：传统的化学降解法、双脱氧链终止法以及在它们的基础上发展来的各种DNA测序技术统称为第一代DNA测序技术。
人类基因组计划(human genome projec,tHGP)主要基于第一代DNA测序技术。
包括：化学降解法、双脱氧链终止法、荧光自动测序技术、杂交测序技术3、第二代DNA测序技术：新一代测序技术也称为第二代测序技术,主要包括罗氏454公司的GS FLX测序平台、Illumina公司的SolexaGenomeAnalyzer测序平台和ABI公司的SOL-iD测序平台。
4、第三代DNA测序技术：如生物科学公司(BioScienceCorporation)的HeliScope单分子测序仪(HeliScopeSingleMolecular Sequencer)以及正在研制的太平洋生物科学公司(Pacific Biosciences)的单分子实时DNA测技术[SingleMolecule RealTime (SMRT)DNA sequencingtechnology]和牛津纳米孔技术公司(OxfordNanopore TechnologiesLtd)的纳米孔单分子测序技术等二、Sanger双脱氧链终止法核酸模板在核酸聚合酶、引物、四种单脱氧碱基存在条件下复制或转录时，如果在四管反应系统中分别按比例引入四种双脱氧碱基，只要双脱氧碱基掺入链端，该链就停止延长，链端掺入单脱氧碱基的片段可继续延长。
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DNA测序技术发展简史
摘要：本文回顾了1965年一来DNA测序技术的发展，重点介绍了双脱氧链终止测序法及Maxam-Gillbert DNA化学降解法的出现，以及其他的一些相关技术的发展，以简练清晰的脉络梳理了DNA测序技术的发展史。
关键词：DNA测序；双脱氧链终止测序法；Maxam-Gillbert DNA化学降解法
l953年，Watson和Crick提出DNA双螺旋结构模型以后，人们就开始探索研究DNA 一级结构的方法。
1965年，美国Cornell大学以Rober Holley为首的科学家小组，第一次完成了长度为75个核苦酸的酵母丙氨酸tRNA的全序列测定并将结果发表在Science杂志上。
其办法是利用各种RNA酶把tRNA降解成寡核苷酸，经分离纯化之后，再分别测定这些寡核苷酸短片段的核苷酸顺序掀开了DNA测序技术研究的序幕[1]。
但那时由于没有找到分别降解四种脱氧核糖核酸的专一酶，只能通过测定RNA 的序列来推测DNA的序列，即先将RNA用酸水解或外切酶降解，再经双向电泳同系层析将其分开（小片段重叠法）。
1971年，华裔分子生物学家吴瑞博士（Dr．Ray Wu）在1968年独创性地设计了一种崭新的引物-延伸测序策略，发展出了测定DNA核苷酸序列的第一个方法，提高了DNA序列分析的速度，并于1971年首次成功地测定了λ噬菌体两个粘性末端的完整序列[2]。
l977年，英国剑桥大学分子生物学实验室的Fred Sanger领导的研究小组在吴瑞博士的基础上分别在Nature和PNAS发表文章，提出DNA聚合酶的双脱氧链终止原理测定核苷酸序列的方法，Sanger作为世界上第一个解决DNA测序的科学家，再一次荣获诺贝尔奖（1980年）[3]。
DNA双脱氧链终止测序法，也称酶法或末端终止法，是利用2’,3’-双脱氧三磷酸核苷(2’,3’-ddNTP或简称ddNTP)来终止DNA的复制反应。
ddNTP可以在DNA聚合酶作用下通过其5’-磷酸基团掺入到正在增长的DNA链中，但由于ddNTP在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基，它们不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键（由M．R．Atkinson等人于1969年发现），从而中断延伸反应。
该法将待测DNA样品分成四组，在每组DNA合成反应混合物的四种普通dNTP中加入少量的一种ddNTP，这样一来，链延伸将与偶然发生但却十分特异的链终止展开竞争，最终得到反应一系列的核苷酸链，其长度取决于从用以起始DNA合成的引物末端到出现过早链终止的位置之间的距离，由于这四组独立的酶反应中分别采用四种不同的ddNTP，将产生四组分别终止于模板链的每一个A、G、C或T的位置上的寡核苷酸，使用变性测序凝胶电泳分析这四组反应的产物，即可从放射自显影片上直接读出DNA的序列[4]。
而美国哈佛的Alan Maxam和Walter Gilbert领导的研究小组也几乎同时发明出DNA序列测定方法——Maxam-Gillbert DNA化学降解法测序，其基本原理是用特异的化学试剂修饰DNA分子中的不同碱基，然后用哌啶切断反应碱基的多核苷酸链。
该法设计四组特异的反应：①G反应，用硫酸二甲酯使鸟嘌呤上的N7甲基化，加热引起甲基化鸟嘌呤脱落，导致多核苷酸链可在该处断裂；②G+A反应，用甲酸使A和G嘌呤环上的N原子质子化，从而使其糖苷键变得不稳定，再用哌啶使键断裂；③T+C反应，用肼使T和C的嘧啶环断裂，再用哌啶除去碱基；④C反应，在有盐存在时，只有C与肼反应，并被哌啶除去。
这样一来，同一个末端标记的DNA片段在四组互相独立的化学反应中分别得到部分降解，每一组反应特异地针对某一种或某一类碱基，生成四组放射性标记的分子，从共同起点（放射性标记末端）延续到发生化学降解的位点，每组混合物中均含有长短不一的DNA分子，其长度取决于该组反应所针对的碱基在原DNA全片段上的位置。
最后，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离此后组产物，再从放射自显影片上即可读出序列[5]。
早期，用引物合成进行DNA序列测都需要将高分子量的DNA分子通过核酸内切限制酶消化降解成一组具一定长度的限制片段后再用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝狡作电泳分离纯化，并从中抽取出DNA片段以供进一步的序列分析使用。
为将这些降解的DNA片段，按其原来的顺序“拼排”起来，至少还需要用一种（有时往往是数种）其它的核酸内切限制酶对同种大分子量的DNA作酶切消化并进行电泳纯化和序列分析。
这无疑既花费大量时间又需要大量金钱（商品提供的核酸内切限制酶的价格十分昂贵），同时为保证能够获得所有的限制片段，必需制备足够数量的DNA，该过程要用不同浓度的凝胶进行电泳并纯化又加剧了DNA的丢失和损伤的可能。
后来采用DNA分子克隆的方法解决了该问题，将不同限制酶消化切割的DNA限制片段随机地克隆到一种M13mp系列载体分子上以获得理想的单链DNA模板。
1891年，J．messing等人该进了其中所使用的寡核苷酸引物，降低了DNA 限制片段与M13mp系列载体分子其他位点的同源性，使采用蓝白斑筛选法对转化菌落的筛选更有效。
1858年，E．Y．Chen和P．H．seebury在DNA双脱氧链终止测序法的基础上发展出Sanger双脱氧链终止-pUC体系DNA序列分析法，首次在体外将待测的DNA片段与pBR332质粒载体或pUC系列的质粒载体分子重组后转化给大肠杆菌JM83菌株，将所得的转化反应物涂布在补加有X-gal及IPTG化学试剂的选择性培养基平板上，采用蓝白斑筛选法选出转化菌落，制备得到含有DNA克隆片段的双链质粒DNA，使用碱变性后可直接作为模板进行序列分析，而无须克隆到M13mp载体分子上，大大地缩短了模板DNA的获得时间[6]。
随着计算机软件技术（特别是计算机图象识别技术）、仪器制造和分子生物学研究的迅速发展，使用了荧光分子标记代替传统的32P或35S同位素标记，测序由手动向自动发展。
1986年，W．anoorge等人在前人工作的基础上，设计出以DNA链末端合成终止法原理的DNA自动荧光测序仪[7]，逐渐成为DNA序列分析的主流，它所采用的自动荧光DNA测序技术是对Sanger双脱氧链终止法测序的改进：用四种不同颜色的荧光染料标记四种双脱氧核苷酸，同时进行四种链终止反应，反应产物在变性电泳凝胶的同一个泳道上进行分离。
对凝胶的结果进行分析时，带有不同染料标记的每一种产物将被激发而发出不同波长的光。
发射光经衍射光栅分解后，用电荷偶联仪(a charge coupled device，CCD)检测，然后通过电脑解译[8]。
20世纪90年代后期，以MD公司的Mega BACE和PE公司的ABI 3700为代表的毛细管电泳仪问世，这些集束化的毛细管电泳代替凝胶电泳后，极大地提高了序列测定的产出率，一天可完成6-8轮序列测定，每轮可测定96-384个样品，自动化的程度也得到了提高[9]。
为提高分析效率，1992年美国的Mathies等人首先提出了阵列毛细管电泳的新方法，采用激光聚焦荧光扫描装置，25只毛细管并列电泳，每只毛细管在1.5小时内可读出350bp，DNA 序列分析效率可达600bp/h。
后来，日本的Kambara（1994年）、美国的Yeung又分别对此进一步完善[10]。
现今，高通量的新一代DNA测序技术进一步发展出来，通过将片断化的基因组DNA 两侧连上接头并运用不同的步骤来产生几百万个空间固定的PCR克隆阵列（每个克隆由单个文库片段的多个拷贝组成），从而能够大规模地平行进行引物杂交、酶延伸反应及荧光标记的成像检测，再经过计算机分析由DNA序列延伸和成像的持续反复确定的测序阅读片段的相邻性就可获得完整DNA序列信息。
目前，市场上新一代测序仪的测序原理主要有四种：使用合成法测序的454（焦磷酸测序）和Solexa，使用连接法测序SOLID和Polonator。
参考书目：
[1]《基因工程原理第二版（上册）》，吴乃虎，64页。
[2]《生物技术原理与实验》，徐小静，张少斌，王俊丽主编，59页。
[3]《高等学校教材生物工程概论》，陶兴无主编，60页。
[4]《生物技术原理与实验》，徐小静，张少斌，王俊丽主编，60页。
[5]《生物技术原理与实验》，徐小静，张少斌，王俊丽主编，64-65页。
[6]《基因工程原理第二版（上册）》，吴乃虎主编，69页。
[7]《基因克隆技术在制药中的应用》，陈汝德编，126页。
[8]《生物技术原理与实验》，徐小静，张少斌，王俊丽主编，65页
[9]《医学分子生物学》，张钦宪何丽娅李平法主编，257页。
[10]《医学分子生物学》，张钦宪何丽娅李平法主编，259页。