2-4叶绿素a测定
叶绿素a测定实验报告
叶绿素a测定实验报告（一）实验目的及意义水体富营养化可以通过跟踪监测水中叶绿素的含量来实现，其中叶绿素a是所有叶绿素中含量最高的，因此叶绿素a的测定能示踪水体的富营养化程度。
（二）水样的采集与保存1.确定具体采样点的位置2.在采样点将采样瓶及瓶盖用待测水体的水冲洗3-5遍3.将采样瓶下放到距水面0.5-1m处采集水样2.5L4.在采样瓶中加保存试剂，每升水样中加1%碳酸镁悬浊液1mL5.将采样瓶拧上并编号6.用GPS同步定位采样点的位置（三）仪器及试剂仪器：1.分光光度计2.比色池：10mm3.过滤装置：过滤器、微孔滤膜（孔径0.45μm，直径60mm）4.研钵5.常用实验设备试剂：1.碳酸镁悬浮液：1%。
称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100mL蒸馏水中。
每次使用时要充分摇匀2.乙醇溶液（四）实验原理将一定量的试样用微孔滤膜过滤，叶绿素会留在滤膜上，可用乙醇溶液提取。
将提取液离心分离后，测定750、663、645、630mm的吸光度，计算叶绿素的浓度。
（五）实验步骤1.浓缩：在一定量的试样中添加0.2mL碳酸镁悬浮液，充分搅匀后，用直径60mm 的微孔滤膜吸滤.过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟.如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。
2. 提取：将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，加入7mL乙醇溶液至滤纸浸湿的程度,把滤膜研碎,再少量地加乙醇溶液，把滤膜完全研碎，然后用乙醇溶液将已磨碎的滤膜和乙醇溶液洗入带刻度的带塞离心管中，使离心管内提取液的总体积不超过10mL，盖上管塞，置于的暗处浸泡24h。
3.离心：将离心管放入离心机中，以4000r/min速度离心分离20min。
将上清液移入标定过的10mL具塞刻度管中，加少量乙醇于原提取液的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，合并上清液。
此操作重复2-3次，直至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至10mL。
4.测定：取上清液于10mm的比色池中，以乙醇溶液为对照溶液，读取波长750,663,645和630mm的吸光度。
水体叶绿素a测定方法
水体叶绿素a测定方法文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-叶绿素a的测定方法——乙醇+分光光度法1、水样的保存水样注入水样瓶后，应放置在阴凉处，并避免阳光直射。
若水样的进一步处理需要较长时间（大于12h），则应置于0℃~4℃低温下保存。
水样量视水体中浮游植物多少而定，一般应采0.5~2L。
2、抽滤在抽滤装置的滤器中放入GF/C滤膜。
抽滤时负压应不大于50kPa。
抽滤完毕后，用镊子小心地取下滤膜，将其对折（有藻类样品的一面向里），再用普通滤纸吸压，尽量去除滤纸上的水分。
如不立即提取，应将滤膜放在黑暗低温条件下保存。
在普通冰箱冷冻室中可存放几天，在-20℃低温冰箱中可保存30天。
3、提取研磨可用玻璃研钵。
将滤膜剪碎放入研钵，加入90%乙醇溶液7~8ml，研磨3~5分钟直至变为匀浆。
将研磨后的匀浆移入具塞带刻度的离心管中。
用少量提取液冲洗研钵或匀浆器，冲洗液并入离心管中，使终容积略小于10ml。
盖上关塞，摇动后置于黑暗低温处进行提取至少6-24h。
4、离心将装有提取液的离心管放入离心机中，转速3500~4000rpm，离心10~15min。
将上层叶绿素提取液移入定量试管中，再用少量提取液清洗、离心二次取得提取液。
最后将提取液定容到10ml。
如果大批样品需同步操作时，可减少离心步骤，直接在提取液中浸泡滤膜6-24h，取其清液即可。
5、测定用90%乙醇溶液作为参照液（参照比色皿中盛放90%乙醇溶液，并用90%乙醇调分光光度计零点）。
测定定容后的提取液在665nm和750nm处的吸光度，并计算两个吸光度的差记为A1；然后向比色皿中加入1滴1mol/L的盐酸酸化，酸化5—10min(可以用不同时间实验再进行调整)后再次测定酸化后的提取液在665和750nm处的吸光度，并且把酸化后的两个吸光度的差记为A2.则提取液中叶绿素a的浓度为：Chla=27.9×（A1－A2）×V提取液/V脱镁叶绿素浓度为：Chla=27.9×（1.7 A2－A1）×V提取液/V其中Chla为水样中的叶绿素a含量，单位为ug/L；V提取液为提取液的最终定容体积,单位为mL；V为抽滤水样的体积，单位为L。
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想叶绿素a法是一种常用的方法，用于测定富营养化湖泊中的藻类数量。
藻类是湖泊生态系统中不可或缺的一部分，它们是湖泊中的初级生产者，对水体性质的改变和生态系统的稳定起着重要作用。
通过测量叶绿素a的含量，我们可以快速、准确地评估湖泊中的藻量，为湖泊生态环境的恢复和管理提供科学依据。
在实际操作中，叶绿素a法主要是通过光谱测量的原理来确定叶绿素a 的浓度。
叶绿素a是藻类中最常见的一种叶绿素，其含量与藻类生物量呈正相关关系。
通过测定叶绿素a的浓度可以间接反映湖泊中藻类的数量。
叶绿素a法的测量过程相对简单，操作方便。
需要从湖水中取样，然后将样品过滤，提取出其中的叶绿素a。
接下来，使用光谱仪或叶绿素荧光仪对提取液的吸光度进行测量，并根据已有的标准曲线，计算出叶绿素a的浓度。
根据叶绿素a的浓度，结合湖泊的水量，可以计算出湖泊中的藻类数量。
通过叶绿素a法测定富营养化湖泊中的藻量，我们可以对湖泊生态系统的变化进行准确监测和评估。
在富营养化的湖泊中，藻类数量往往过多，导致水体浑浊，水质恶化，甚至引起水华等严重问题。
通过及时测定藻类数量，我们可以对湖泊中的富营养化程度进行评估，并针对性地采取相应的措施来改善湖泊生态环境。
然而，在使用叶绿素a法进行藻量测定时，也存在一些问题和限制。
叶绿素a法只能测定叶绿素a的浓度，而不能提供其他藻类的信息。
不同种类的藻类在湖泊中有不同的生态功能和生态作用，因此仅仅通过叶绿素a的浓度无法全面了解湖泊中藻类的组成和结构。
叶绿素a 法只能在湖泊表层水体中进行测定，无法对湖泊底泥和深层水体中的藻类进行评估。
在一些深水湖泊中，底泥中的藻类可能对湖泊生态系统的健康产生重要影响，但使用叶绿素a法无法直接获取这些信息。
叶绿素a法是一种快速、准确测定富营养化湖泊中藻量的有效方法。
它为湖泊生态环境的管理和恢复提供了重要的技术支持。
然而，我们也需要意识到叶绿素a法的局限性，进一步研究和探索其他方法，以便更全面地了解湖泊中藻类的数量和组成。
实验名称：叶绿素a、叶绿素b含量测定
实验名称：叶绿素a、叶绿素b含量测定一、实验目的：熟悉在未经分离的叶绿体色素中测定叶绿素a、叶绿素b的方法。
二、实验原理；根据叶绿体色素提取液对可见光的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测其吸光度，即可利用公式计算出提取液中各种色素的含量：Ca=13.95A665-6.88A649Cb=24.96A649-7.32 A665C T= Ca+ Cb=18.08 A649+6.63 A665三、仪器、试剂与材料：仪器：分光光度计、离心机、研钵；试剂：96%乙醇溶液、石英砂、CaCO3粉末；材料：菠菜叶片；四、实验步骤：1.取干净的菠菜叶片剪碎，分别混匀。
2.称取剪碎的样品0.2g，各2份，分别放入研钵中，加少量石英砂和CaCO3粉末、及2-3ml 96%乙醇溶液，研成匀浆，倒入离心管，再用96%乙醇溶液多次洗涤研钵，洗涤液也倒入离心管中。
3．将离心管放入离心机后取上述提取液放入比色皿中，以96%乙醇为对照，分别测定665nm、649nm处的吸光度值。
4.按公式计算提取液中叶绿素a、叶绿素b及叶绿素a+b的浓度。
五、实验结果及分析：1.研磨提取叶绿素是加入石英砂和CaCO3粉末各有什么作用？加入石英砂有助于研磨得更充分；加入CaCO3粉末可以保护叶绿素在研磨时不被破坏。
2.计算: A665(1)=0.399A A665(2)=1.237A 故A665=0.818AA649(1)=0.208A A649(2)=0.626A 故A649=0.417A 所以: Ca=13.95A665-6.88A649=8.542Cb=24.96A649-7.32 A665=4.421C T= Ca+ Cb=18.08 A649+6.63 A665=12.963。
叶绿素A的测定
叶绿素不属于芳香族化合物，不溶于 水，但溶于有机溶剂（通常采用丙 酮），叶绿素A呈蓝绿色，叶绿素B呈 黄绿色，二者同时被提取出来。在可 见光的范围，两者分别在663nm和 645nm处波长有最大吸收。
叶绿素A的测定方法
利用分光光度法，将所得的上清液在 分光光度计上，用1cm光程的比色皿， 分别读取在 750nm,663nm,645nm,630n m波长处的吸光度，并以90%的丙 酮作空白吸光度测定，对样品吸光度 进行校正。
叶绿素a的测定叶绿素a的测定方法叶绿素a的测定国标叶绿素a叶绿素a测定方法叶绿素a的测定标准叶绿素a的测定公式水体叶绿素a的测定叶绿素含量的测定叶绿素含量测定
目录
1 2 3 4
叶绿素A的测定原理
叶绿素A的测定方法
叶绿素A的测定步骤
叶绿素A的测定影响
叶绿素A的测定原理 有机溶剂直接提取浮游生物浓缩样中 的叶绿素，用分光光度计测定其吸光 度，根据叶绿素的特定波长.吸收，用 相关公式计算其含量。 叶绿素主要有叶绿素A和叶绿素B,前 者分子式为C55H72O5N4Mg,叶绿素 B分子式为C55H70O6N4Mg。
将所测的对应波长的吸光度，代入如 下公式计算： 叶绿素A=（1/V*L）*(11.64*（D663D750)-2.16*(D645-D750）+0.10*（D630D750)*V1
式中:D为所测的吸光度 V为水样体积 V1为提取液定容后的体积 L为比色皿光程
叶绿素A的测定步骤
测定叶绿素A时，样品应该尽快测定， 防止过长，叶绿素降解，尽可能在低温 弱光条件下进行。
控制好提取时间，使得提取更充分，保 证较高的提取效率。
这个实验叫做叶绿素A的测定方法探 讨，实验误差较大，最佳的方法还在 不断地深入研究中，有兴趣的同学可 以查阅相关资料，开动大脑马达，提 出自己的见解。
叶绿素a的测定原理
叶绿素a的测定原理叶绿素a是一种存在于植物和藻类细胞叶绿体中的绿色色素，它起到了光合作用中接受和传递光能的关键作用。
测定叶绿素a的浓度对于研究光合作用的机制以及评估植物和藻类的生长状态具有重要意义。
在实验室中，存在多种方法来测定叶绿素a的浓度，其中包括光度法、荧光法和高效液相色谱法。
下面将重点介绍常用的光度法测定叶绿素a的原理和步骤。
光度法是一种通过测量溶液对特定波长的光的吸收来确定溶液中某种组分浓度的方法。
对于叶绿素a的测定，通常使用的波长为650nm或663nm。
叶绿素a在这两个波长的光下有很强的吸收能力，而溶液中的其他组分对该波长的光吸收较小。
因此，测定叶绿素a的浓度可以通过测量溶液对650nm或663nm光的吸光度来间接确定。
下面是光度法测定叶绿素a浓度的一般步骤：1. 样品制备：将待测样品中的叶绿素a提取到有机溶剂中，一般使用甲醇、乙醇或二氯甲烷等极性较强的有机溶剂作为提取剂。
提取的方法可以根据需求选择，包括搅拌法、超声波法或研磨法等。
提取过程需要避光，以防叶绿素a被光降解。
2. 溶液制备：将提取出的叶绿素a溶解在适当的溶剂中，一般使用甲醇或乙醇等有机溶剂。
溶液中的叶绿素a浓度可以通过分光光度计测定吸光度来确定。
3. 吸光度测定：使用分光光度计，在650nm或663nm的波长下测量样品吸光度。
为了获得准确的测量结果，一般需要对比测量待测样品和纯溶剂的吸光度，以消除对溶剂的吸光干扰。
4. 计算叶绿素a浓度：根据比色法或校正曲线法，将测得的吸光度转换为叶绿素a的浓度。
比色法是通过比较待测样品吸光度与已知浓度叶绿素a标准溶液吸光度的关系，进行定量测定。
校正曲线法是首先制备不同浓度的叶绿素a标准溶液，然后测定它们的吸光度并绘制出吸光度与浓度的标准曲线，通过待测样品的吸光度在标准曲线上插值得到其浓度。
需要强调的是，在测定叶绿素a浓度时，有几个实验注意事项需要注意。
首先，提取过程需要避光，以免叶绿素a被光降解，影响测量结果。
[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定
![[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定](https://img.taocdn.com/s3/m/e49fc262ed630b1c59eeb5c1.png)
[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定篇一 : 叶绿素含量测定叶绿素含量的测定根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A值与其中溶质浓度C以及光径L成正比，即A,aCL。
,)各种有色物质溶液在不同波长下的吸光值可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下的吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素提取液中叶绿素a、b含量，只需测定该提取液在2 个特定波长下的吸光度度值，并根据叶绿素a与b在该波长下的吸光系数即可求出各自的浓度。
在测定叶绿素a、b含量时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长应选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a、b的80 ,丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm 和645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的比吸收系数分别为82.04 和9.27，在波长645nm下分别为16.75和45.60，可根据加和性原则列出以下关系式:A663=82.04Ca +9.27Cb………………A645=16.75Ca+45.6Cb………………式中A663、A664分别为波长663nm和645nm处测定叶绿素溶液的吸光度值;Ca、Cb分别为叶绿素a、b的浓度。
解联立方程、可得以下方程:Ca=0.0127A663-0.00269A645…………Cb=0.0229A645-0.00468A663…………如把叶绿素含量单位由g/L改为mg/L，、式则可改写为:Ca=12.7A663-2.69A645…………Cb=22.9A645-4.68A663…………叶绿素总量CT=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663……叶绿素总量也可根据下式求导A652=34.5×CT由于652nm为叶绿素a与b在红光区吸收光谱曲线的交叉点，两者有相同的比吸收系数，因此也可以在此波长下测定一次吸光度求出叶绿素总量: CT=A652/34.5CT=A652×1000/34.5………因此，可利用、式可分别计算叶绿素a与b含量，利用式或式可计算叶绿素总量。
叶绿素a检测指导书
小心将离心的上清液注入测定池。用丙酮溶液作参比，分别在750nm、664nm、647nm、630nm波长处测定吸光值。其中，750nm处的测定，用以校正提取的浊度，当1cm测定池光程的吸光值超过0.005时，提取液应重新离心。
4.记录与计算
将测得数据ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ入测定记录表中，分别把在波长664nm、647nm、630nm上测的吸光值减去750nm下的吸光值，得到校正后吸光值E664、E647、E630.再按下式计算叶绿素a、b、c含量。
Pchl-b——样品中叶绿素b含量，单位为微克每升（ug/L）；
Pchl-c——样品中叶绿素c含量，单位为微克每升（ug/L）；
v——样品提取液体积，单位为毫升（mL)；
V——海水样品实际用量，单位为升（L）；
L——测定池光程，单位为厘米（cm）。
Pchl-a=(11.85E664-1.54E647-0.08E630)×v/V·L
Pchl-b=(21.03E647-5.43E664-2.66E630)×v/V·L
Pchl-c=(24.52E630-1.67E664-7.60E647)×v/V·L
式中：Pchl-a——样品中叶绿素a含量，单位为微克每升（ug/L）；
2.2样品的提取
将过滤了的样品滤膜放入具塞离心管，加10mL丙酮溶液,摇荡，放置冰箱贮存室中14h～24h，提取叶绿素-a。若滤得样品不能及时提取，应将该滤膜抽干、对折，再套上一张滤纸，置于装有硅胶的干燥器内，贮存在低于1℃的冰箱中。
2.3样品离心离心速度：（3000～4000）r/min；离心时间：10min。
叶绿素
1.试剂及其配制
1.1丙酮溶液（9+1）：量取900mL丙酮（CH3COCH3）与100mL水混合，保存在棕色试剂瓶中。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验题目: 湖塘水体叶绿素a测定姓名：学号：班级：组别：第一组指导教师：1.实验概述1.1实验目的及要求(1)初步了解叶绿素a测定的原理和常规测定方法;(2)通过实验，掌握叶绿素。
的测定方法及富营养化水样的前处理方法;(3)熟练掌握抽滤装置及分光光度计的使用。
1.2实验原理浮游植物的主要光合色素是叶绿素((Chlorophyll)，常见的有叶绿素a、b和c。
叶绿素a (chl-a >存在于所有的浮游植物中，大约占有机物干重的1-2%，是估算浮游植物生物量的重要指标，因此浮游植物叶绿素a含量的测定成为浮游植物生物量的重要指标而被广泛应用。
浮游植物叶绿素a的测定方法有许多种，根据所使用的仪器可以分为高效液相色谱法<HPLC法)、荧光光度计法和分光光度计法等。
高效液相色谱法能够很精确地测定各种光合色素的含量，但由于仪器昂贵，分析操作步骤繁琐，一般不能用于野外大量样品的快速分析。
荧光光度计也能够精确地测定叶绿素a的含量，特别是能够测定叶绿素a含量较低的样品，但由于分析过程中容易受其他色素或色素衍生物的干扰，也不利于快速分析各类不同的野外样品。
因此，分光光度计法成为最常用的浮游植物叶绿素a含量的测定方法。
在所有分光光度计法中，根据所用的色素萃取液分为了丙酮法、甲醇法和乙醇等，再根据比色所用的，又分为单色法和多色法(例如单色丙酮法和四色丙酮法)等。
主要的细胞破碎法有研磨、低温冻融、超声破碎等。
尽管丙酮现在仍厂泛用于实际分析中，但由于丙酮的萃取效率比较差，特别是对蓝藻的叶绿素a的萃取效率比较低，使得甲醇和乙醇成为替代丙酮的色素萃取剂。
不过，甲醇对人体毒害性大，且在酸化过程中容易产生误差，于是，乙醇成为现在广泛应用的叶绿素a的萃取剂。
超声破碎法因快速、提取效率高等特点也被研究者所青睐。
本实验介绍一种以热乙醇为萃取溶剂，结合超声细胞破碎法为基础的叶绿素a含量侧定方法。
2.实验内容2.1实验方案设计每组选择一个池塘，实地取水样，测定水样的叶绿素a含量。
2.2实验条件2.2.1实验仪器:1) 幼分光光度计1台;2)抽滤装置(砂芯过滤器、负压表、真空泵等)1台;3)4000r/min离心机1台;4) 15mL带刻度及螺旋盖的离心分离试管6个;5)恒温水浴锅1台;6)直径47 mm的醋酸纤维滤膜;8)超声细胞破碎仪9 ) icm玻璃比色皿2个10)表面皿若干11)10mL比色管7个;2.2.2实验材料1）90%乙醇2）1mol/L盐酸2.3实验过程（实验步骤、记录、数据、分析）2.3.1实验步骤(1) 水样预处理：实验水样由实验室培养的铜绿微囊藻稀释而得，分别取三组浓度水样各50ml，每组两个平行样。
将水样通过醋酸纤维滤膜抽滤，抽滤时负压不应大于0.5大气压（50kPa）。
抽滤完毕后，用镊子小心的取下滤膜，将其对着(有浮游植物样品的一面向里）再用普通滤纸吸压，尽量去除滤膜上的水分;滤膜放置表面皿上冷冻12h以上。
（2）Chl-a的提取:将滤膜剪碎，放入具塞离心管，加入6 mL热乙醇(75℃恒温提取2 min 后用细胞破碎仪破碎，超声时间3S，间隔2S，破碎5 min后，用少量上清液清洗细胞破破碎仪探头（小于1ml）。
将装有提取液的离心管放入离心机，转速4000r/min下离心10min，将上清液移入10 mL比色管中，再用2 mL 热乙醇提取液清洗、离心二次取得上清液清洗、离心两次取得上清液。
最后将提取液定容到10 ml。
（3）Chl-a含量的侧定:用含90%的乙醇溶液座位空白对分光光度计调零。
分别记录在750 nm与665 nm处各自的吸光度(分别记为750a和665妒，750 nm 处的测定是用来进行浊度校正的，吸光度应很低。
665 nm处的吸光)如拉在0.1-0.8单位之间。
在比色皿内加入1滴1mol/l 盐酸使酸化，混匀1 min。
再记录750nm 和665 nm处的吸光度(记为750b和665b)2.3.2数据记录和处理两种波长下叶绿素吸光度测定原始数据：编号665a 665b 750a 750b1 0.090 0.081 0.026 0.031Ⅰ 2 0.090 0.081 0.026 0.0313 0.090 0.081 0.026 0.031平均值0.090 0.081 0.026 0.0311 0.259 0.195 0.033 0.040Ⅲ 2 0.259 0.194 0.033 0.0413 0.259 0.195 0.033 0.041平均值0.259 0.195 0.033 0.0411 0.248 0.190 0.030 0.036Ⅳ 2 0.248 0.190 0.030 0.0363 0.248 0.190 0.030 0.036平均值0.248 0.190 0.030 0.036 通过吸光度的差值来计算对浊度的校正：665a-750a=校正后的665a的吸光度665b-750b=校正后的665b的吸光度数据处理：一号样：校正后的665a的吸光度=665a-750a=0.090-0.026=0.064校正后的665b的吸光度=665b-750b=0.081-0.031=0.050三号样：校正后的665a的吸光度=665a-750a=0.259-0.033=0.226校正后的665b的吸光度=665b-750b=0.195-0.041=0.154四号样：校正后的665a的吸光度=665a-750a=0.248-0.030=0.218校正后的665b的吸光度=665b-750b=0.190-0.036=0.154用校正后的665a与665b的吸光度值进行如下计算：叶绿素a=29.62×(665a-665b)×Ve÷(V E×l) mg/m³式中：Ve———乙醇的准确体积ml;V E———水样的体积L;l———比色皿的长度cm.一号样：叶绿素a=29.62×(665a-665b)×Ve÷(V E×l) mg/m³=29.62×（0.064-0.050）×10÷(2×1) mg/m³=2.073mg/m³三号样：叶绿素a=29.62×(665a-665b)×Ve÷(V E×l) mg/m³=29.62×（0.226-0.154）×10÷(0.05×1) mg/m³=426.5mg/m³四号样：叶绿素a=29.62×(665a-665b)×Ve÷(V E×l) mg/m³=29.62×（0.218-0.154）×10÷（0.05×1）mg/m³=379.1mg/m³2.4结论从计算结果对比来看，采样点水样的叶绿素含量较低，取样点水面虽有部分绿色藻类，但是可能由于雨水或取水样时人为等因素的影响使其冲散，也可能是水体中适合生长的优势藻类本身含有较少的叶绿素a。
还有，2、3组为平行实验，但结果却有出入，其原因可能是由操作过程引起的，如萃取过程、定容过程、超声破碎完冲洗过程、转移过程和测量吸光度的过程等均有可能带来误差。
2.5思考题。
1、查阅资料，根据所得的叶绿素a的含量，判断所测水样的富营养化程度，并说明依据。
查阅相关资料得：表一富营养化评价标准从上面有关资料可以看出，1号为贫中营养，3、4号为重富营养。
2.试对乙醇-超声法的优缺点加以分析。
优点：有较高的精密度，操作简便快捷，重复效率高，减少了叶绿素a在提取分析过程中的损失，萃取效率高，误差小，而且乙醇对人体的健康影响小，较安全。
缺点：1、水浴温度、萃取时间把握的不够准确，过高或过低的温度、萃取时间的长短都会影响释放的叶绿素的含量进而影响测定结果。
2、乙醇具有易挥发的特点，在实验过程中其浓度会降低而影响实验结果。
3、向比色皿中加酸后让其静置一分钟时没有完全混匀，影响其吸光度的测定进而影响实验结果。
3.本实验还有哪些地方需要改进，请给出你的建议。
（1）应该对池塘多取几个代表性的监测点进行测定，以便为后面对池塘富营养化研究提供更为全面的数据；（2）叶绿素4.为什么要用665nm和750nm这两个波长来测量进行计算？因为665nm波长处的吸光度较大，在0.1-0.8单位之间，可以减小误差；而750nm处波长的吸光度比较低，是用来消除悬浮物的干扰，进行浊度校正的。
5．为什么要加入盐酸进行酸化？答：存天然水体中，浮游植物中不仅存在着具有光合活性的叶绿素a，而且存在着没有光合活性的脱镁叶绿素a，因此应用叶绿素a作为浮游植物生产量的主要指标时需将叶绿素a与脱镁叶绿素a区分开来。
叶绿素a经酸化处理后，镁原子被氢原子取代，叶绿素a降解为脱镁叶绿素a。
脱镁叶绿素a与等量的叶绿a相比，存6 6 5 nm波长下,具有较低的消光系数,故要用酸化的方法测定叶绿素前后光密度的变化。
6.计算叶绿素a的公式的来因。
答：因为在测定过程中，根据测定原理，凡参与计算的各光密度值都应减750nm 处的光密度值，以消除悬浮物质的干扰。
首先测定酸化前和酸化后的光密度E665b和E665a(酸化前测定的光密度值用D665b、D750b表示，酸化后测定的光密度值用D665a、D750a表示)。
E665b=D665b—D750b E665a =D665a—D750a 根据Lorenzen公式。
计算单位样品中叶绿素a含量，采用热乙醇为萃取溶剂，A = 11.5，K=2.43,比色皿光程为1cm，带入最后可得公式叶绿素a=29.62×(665a-665b)×Ve÷(VE×l) mg/m³。
2.6 参考文献【1】陈宇炜、高锡云，浮游植物叶素a含量测定方法的比较测定【J】．湖泊科学，2000，12(2)：185-188．【2】杨彩根、宋学宏、孙丙耀，浮游植物叶绿素a含量简易测定方法的比较【3】梁兴飞、郭宗楼，超声辅助热乙醇提取法测定浮游植物叶绿素a的方法优化【J】,水生生物学报（2006）856-861【4】杨洪芳，丁峰元，陈德辉，乙醇-超声法在浮游植物叶绿素a含量测定中的应用【J】，海洋渔业（2006）309-313指导教师评语及成绩：成绩：指导教师签名批阅日期。