荧光显微镜拍照操作规程
基础医学实验教学中心荧光显微镜操作规程
基础医学实验教学中心
荧光显微镜操作规程
一、操作步骤
1.打开电源。
2.放入载玻片，10×下调清后再高倍观察。
A：明视场观察
C：荧光观察
DF：暗视场观察
相差观察：PH1：10×或20×；PH2：40×；PH3：100×
3.明视场校正：把视场光阑调到最小，调节聚光器螺纽，有正六边
形出现时固定不动，调节视场光阑和小螺纽使正六边形在正中间，然后把视场光阑调到最大，调节完毕。
4.相差校正：先换上对中望远镜，调节2个相差环在正中间，用黄
色滤光片观看。
5.看荧光时，打开POWER，过1分钟后打开IGNITION，把荧光
光闸打到O，调3或4选择BLUE或GREEN。
如同时观察明视场可把荧光光闸打到C即可。
6.照相：拉开照相杆，关闭闪光灯，按快门。
二、注意事项
1．调视野时应先调粗准焦螺旋，后调细准焦螺旋。
2．操作时手不要碰到镜头，如果镜头脏了，用镜头纸轻轻擦拭。
2.荧光显微镜的使用方法与注意事项
荧光显微镜的使用方法与注意事项1、打开显微镜电源。
2、需要使用荧光才开启荧光光源，开启汞灯需要记录打开和关闭的时间。
提示：两次开启汞灯的时间必须间隔半小时以上，打开汞灯后，必须半小时后方可关闭。
3、擦拭镜头：擦拭目镜和物镜。
在长纤维脱脂棉签顶端蘸上无水乙醇，从中央部分开始，采用螺旋渐进的方式轻轻逐步擦到边缘。
提示：①无需经常将物镜/目镜拆下来清理擦拭，日常使用时仅需用脱脂棉签及擦镜纸配合无水乙醇擦去油污即可，只有遇到顽固污渍时才应将物镜拆卸清理。
擦拭镜头时，动作应轻柔，不能过于用力，以避免损坏镀膜层。
②留意擦镜纸的两个面，纹路是不同的：其中一面是粗糙的，另一面更光滑些，要使用更光滑的那一面来清洁。
一般不建议用干的擦镜纸直接擦拭，同样可能划伤镜头。
4、放置样本，正置显微镜将样本放至物镜下方，倒置显微镜将样本放至物镜上方。
提示：显微镜样本一定要保持干净，如有盖片样本，一定要干净干燥，以免样本上的试剂污染物镜。
免疫荧光染色用抗荧光淬灭剂封片。
HE染色、免疫组织化学染色、高尔基染色等用中性树脂封片。
5、选择适合于自己实验的物镜放大倍数，由低到高进行观察。
6、选取实验相应方案，如光强，shutter，明场/DIC等。
切换滤光片，将荧光染色标本所需的激发滤光片组转入光路。
提示：选择与荧光染色标本相应滤色块。
如UV——DAPI，hochest等（镜下观察为蓝色）；蓝光——FITC，Alex488等（镜下观察为绿色）；绿光——Alex555，Cy3等（镜下观察为红色）。
7、实验结束，关闭电源。
提示：①显微镜使用过程中，镜体、灯箱及电源等位置应无遮挡或覆盖，以免影响散热从而损耗显微镜寿命。
显微镜使用完后，等灯箱部分冷却后，再盖上防尘罩。
②显微镜包含很多光学部件，避免显微镜碰撞，以保护光学系统。
显微镜属精密仪器，如需搬动，拆修，请联系专业人员。
荧光显微镜操作规程
文件制修订记录1.0开机：1.1打开房间总电源开关1.2打开电脑电源开关1.3打开数码相机电源开关1.4打开显微镜电源开关（打开汞灯电源开关）2.0调试显微镜光路：2.1把载玻片放到载物台上。
调节聚焦。
2.2根据物镜指数乘0.8确定聚光镜光圈值，调整到位。
2.3将视场光阑缩小，然后调节聚光镜高度，直到从目镜中观察到视场光阑的清晰成像。
2.4放大视场光阑，使其在目镜中的黑框扩展到视野以外。
3.0调试数码相机拍摄照片：3.1在显微镜取景器中对好视野及焦距。
3.2打开photoshop程序。
3.3点击“文件 -- 自动– Kodak mds290 acquine…。
”调出相机控制窗口。
3.4ZOOM定为77。
拍摄图片格式为640*480不要改变。
3.5在相机控制窗口上点preview，观察预览图象的亮度。
选择适当的曝光时间使预览图片的亮度合适。
3.6点拍摄按纽拍摄，等待几秒钟后图片传回电脑并在photoshop窗口里显示。
3.7继续拍摄下一张照片。
3.8拍摄十来张照片后要及时保存照片。
3.9先关闭相机控制按纽。
并保存拍摄条件到默认值。
3.10在photoshop中保存刚拍摄的照片到指定文件夹中，保存后要关闭照片。
3.11保存并关闭全部照片后重新打开相机控制窗口继续拍摄。
3.12拍摄全部完成后保存所拍摄的照片。
需要时将照片通过网络上传到校园网服务器上，不能使用U盘或软盘转移文件。
或者将照片文件刻录到光盘上。
4.0关机：4.1关闭显微镜电源。
4.2关闭汞灯电源。
4.3关闭数码相机电源。
4.4关闭电脑时点“重新启动电脑”，待电脑进入关闭状态并重新启动时按电脑电源开关强制关机。
注意不能直接点击“关闭电脑”。
4.5关闭房间电源总开关。
超高分辨率荧光显微镜操作及注意事项
超高分辨率荧光显微镜操作指南及注意事项
1、开机：由于设备需要保持稳定，因此机器是一直保持开
机状态，网上预约刷卡后即可使用。
2、上样：在上样品之前，请在软件上将载物台向上移动
3000，将镜头与样品分开，以防镜头碰坏。
3、滴油：本显微镜只有油镜，请对应需要观察的染料来使
用适合折射系数的镜油。
4、寻样：将样品安装好后，在软件上选择样品对应的Z轴
位置，再进行微调，以10为步进进行调整。
5、拍照：首先拍照宽场模式，寻找合适的样品。
找到合适
的样品后，再开启需要的激光器，并打开安全锁。
在软件上将拍照模式改为SI，并设定好Z轴上下端和通道。
设定好保存目录，按下RUN进行拍照。
6、下样：将载物台升高3000，然后取下样品，用擦镜纸
将镜油吸掉，换一张擦镜纸沾取少量无水乙醇，将镜油擦干净。
7、关机：将激光安全锁关掉后，关闭打开的激光器。
收拾
好台面即可。
负责人：高丁
分析测试中心。
Nikon 80i显微镜操作流程(荧光)
7、荧光在激发光照射下时间不宜过长，否则易淬灭。
8、未照完的荧光切片可在4度避光条件下短暂保存，不超过24h。
9、数据如何拷贝?是否需要预约?
主要仪器信息
设备名称
正置荧光显微镜
厂家型号
Nikon 80i存放Leabharlann 点A103暗室负责人
联系电话
主要功能
病理切片（HE染色、免疫组化及免疫荧光）的图像采集
使用流程
（荧光）
1、开机：从左往右，荧光显微镜稳压器→图像采集系统→显微镜→电脑。双击桌面的拍摄软件，将其打开。
2、按需要转动荧光挡板。1：蓝色，2：绿色，3：红色。拍照时将SHUTTEER调节至O位置。
7、关闭软件。
8、关机：从右往左，电脑→显微镜→图像采集系统→荧光显微镜稳压器。
注意事项
（荧光）
1、荧光显微镜稳压器开启后15min内不得关闭，关闭后3min内不得开启。
2、不要转动粗准焦螺旋内侧的粗调焦扭力矩调节手轮。
3、采集荧光图像时，不得调节白平衡。
4、图像如需后期分析，曝光时间需一致。
5、修改默认目录：File→options。
3、把载玻片放在载物台上，调节聚焦。在镜下用肉眼观察确定拍摄位置，拉出活动杆将视野切换到电脑。
4、在控制窗口点Exposure，观察预览图像的亮度。选择适当的曝光时间预览图片的亮度合适。
5、点Capture按钮拍摄，等待几秒后保存图片，格式为.JPEG或tiff。
6、点Live按钮，继续拍摄下一张照片。
Leica荧光显微镜操作指南
Leica 荧光显微镜操作指南荧光显微镜型号:Leica DMR生产商:德国Leica公司Leica 荧光显微镜操作指南有关显微镜的的结构:荧光显微镜荧光汞灯:荧光汞灯价格昂贵，样品应集中观察，荧光光源关闭后距离下次开机时间须在30分钟以上，否则会大大降低你观察的效果及灯泡的寿命。
更换新的灯泡后第一次使用必须持续15,30分钟后方可关闭荧光电源。
光圈:孔径光阑挡板，荧光转换光路倾斜器:照明视场光阑:一般调至最大不动变倍器:1.0× ,Bose 一般不用只有在相差时选用。
照相机拍照转换档:不拉出为不能拍照只能观察，拉出一半即能观察又可拍照，全部拉出只能拍照目镜观察不到。
筒: 双目镜HC荧光滤光片 1为普通光2为蓝光3为绿光4为紫外光物镜转盘:100倍为油镜，40倍与100倍之间应有空挡便于加油取片。
(注意: 转换镜头时应转动物镜转盘齿轮，不应转动物镜，否则会导致物镜过紧或过松，易使物镜损坏。
)载物台:上有压片夹(注意:放取样本时应扳动压片夹小夹不应直接扳动压片夹) XY调节机械装置:将样品前后左右移动聚光镜转盘:10倍以上要用聚光镜相差环:H 明场直接观察亮 1、2、3、相差，观察不染色的样品D 暗场主要用于观察金属材料显微镜臂上有焦距调节，粗的调节钮为粗调调节幅度较大，细的调节钮为细调，调节幅度小慢调节。
基座:A孔径光阑高大低小,相差时最大视场光阑一般最大Gray on 光强减少，off 光强增大DLF( Day Light Filter )一般白光滤片N4灰度滤片减少1/4Green:绿色滤片B 调中操作指南:1(使用显微镜前，请打开空调除湿一小时。
若不除湿观察样品所拍的照片中会留下水渍状斑。
2. 打开总电源，打开电脑，打开电脑桌面上的的Adobe Photoshop软件的下拉菜单Import Leica.3 打开显微镜上的电源。
注意只有进行荧光观察时才能打开荧光电源，否则不要打开，以免影响高压汞灯的寿命。
正置荧光显微镜简明操作规程
正置荧光显微镜简明操作规程
1.打开LASV4.9
2.在采集设置中有mic1和摄像头mic1中荧光设置可以切换，物
镜可随手动转动镜头自动切换，三个圆圈中第一个AP（照明）和第三个Fnt Fine（亮度）可以调节，中间的（光圈）建议不要
调。
3.摄像头中，主要调曝光，伽码最佳值一般在0.6-1.0左右，饱和度
（1.5）和增益（0）一般不建议调动。
可以点击最后的有两个箭头的图标，然后再点击第一个图标，即可恢复默认值。
4.关于白平衡，拉出矩形框右击点击白平衡。
5.选择好合适的荧光、曝光后，物象微调清晰后可点击采集图像，
选择保存文件夹的位置，一般建议保存在E盘。
如果出现20X物镜“不透光”，可以考虑是光的亮度太小。
6.添加比例尺右侧最上的图标中可以添加标尺，点开标尺的设置窗
口后，四个箭头表示标尺的位置，背景中可将透明度改为0，在保存图片时注意将比例尺合并后保存。
7.关于图片刻录，打开桌面上的图标后，可在左下方查找需要刻录
的文件，同时在右下方可出现具体的文件图片等，将右下方的图片或者文件拖到右上方的框中，点击菜单栏中的刻录图标即可。
8.注意该电脑不可以私自插U盘，结果需要用光盘拷贝。
9.注意显微镜中粗细准焦螺旋前上方（载玻台下方）的两个旋钮不
得转动。
使用注意事项
1.汞灯开启半小时内不能关闭，关闭半小时内不能开启。
2.该电脑不可以私自插U盘，拷贝结果联系该仪器负责人。
荧光显微镜操作规程
荧光显微镜操作规程
荧光显微镜操作规程
使用前先检查汞灯的已运行时间，然后开启汞灯电源。
1、标本的放置
（1）把ND挡板向左拔出，停于挡板位置，阻断荧光。
（2）拉出左右两侧的滤光片转换杆（能让可见光通过）。
（3）打开显微镜的光源（不要调太亮），把玻片放置于载物台，所要观察的标本置于视野中心。
2、根据所需的激发波长推进左右两侧的滤光片杆，停于适当的位置。
3、标本对焦
（1）关闭显微镜的光源。
（2）把ND滤片向右侧推进，停于最左边的空孔位置。
（3）把视场光栅控制杆置于“O”（打开）位置。
（4）标本对焦。
4、调节视场光栅
（1）将视场光栅控制杆置于“C”（关闭）位置。
（2）调节视场光栅对中螺旋，使视场光栅的像在视场中居中
（3）逐渐开大视场光栅，并调节对中螺旋使视场光栅像的八边与视场边缘内接。
5、调节亮度
如果荧光太强或者衰减太快，则把ND滤片置于中间位置。
为了防止荧光衰减，请记住不观察的时候总把ND滤片置于最左（挡板）位置。
注意事项：
1、应一次把全部玻片观察完毕，勿中途切断电源，否则须待冷却后（约 30 分钟）才能再开电源。
最少开机 30 分钟才可关机，以免缩短灯泡寿命。
2、荧光色素于普通光线照射下易消失，故未观察之标本宜置不透
光盒内储存于冰箱（4～5℃）。
而在荧光显微镜之紫外线照射下亦易使荧光消失，故照相宜速。
3、每星期将荧光显微镜至少开机一次，以免显微镜发霉损及镜头与滤光镜。
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奥林巴斯倒置荧光显微镜IX71操作规程
一、普通光源观察
1.接通电源线
打开电源开关,同时按下显微镜前面的按纽
2.用光路选择杆选择"观察"光路(有眼睛图形),选择所需放大倍数的物镜,并将选择环置于相应的位置(1-PHL:4X;2-PHC:10X和20X;3-PH2:40X,4为明场;荧光选择钮置于BF)
使用光调节旋钮和滤光片,调节至适当亮度
3.将标本放在载物台上,转动粗微调调节焦距使视野内图象清晰
4.调节目镜使观察舒适
5.如需拍照,则打开电脑
进入软件,将光路杆调至"旁路光口"(有相机图形),即可拍摄并保存
6.使用完毕后,关闭主开关(至O),取下电源插头等到灯室完全冷却后把防尘罩盖上
二、荧光观察
1.如使用荧光,要接通荧光光源的电源
2.选择所需波段的荧光,并用荧光调节杆调节亮度
3.不观察时,要及时使用光栅切断荧光(●-关,○-开),避免样品荧光衰减
4.如荧光较暗,将周围光亮度减至最低(关灯,拉上窗帘)
5.拍摄步骤同前
注意事项:
1、保持显微镜清洁
及时清理污渍如光学元件上附有灰尘,则应用吹风球吹去
对于有脏污的地方,用7:3的乙醚无水酒精清洁液粘在镜头纸上
从透镜内到外进行圆圈式轻拭,严禁用手指或其它物体直接接触镜头
2、打开荧光光源后,至少要15分钟后才能关闭,关闭后至少要30分钟才能再次开启,不需要使用荧光时禁止打开其电源开关
3、不了解的调节装置要阅读使用说明书或咨询相关老师,弄懂后方可使用。