【资料】转基因动物第二章实验动物的饲养与培育分析汇编
基因工程小鼠饲养繁育及鉴定策略
基因工程小鼠饲养繁育及鉴定策略基因工程小鼠是研究基因功能和疾病机制的重要模型生物，它们通过基因工程技术进行特定基因的敲除、突变或过表达，从而模拟人类疾病的发生和发展过程。
然而，饲养和繁育基因工程小鼠以及对其进行鉴定是一个复杂而关键的过程。
本文将介绍基因工程小鼠饲养繁育及鉴定的策略。
一、基因工程小鼠饲养繁育策略1. 选择合适的饲养环境：基因工程小鼠对其饲养环境的要求较高，应提供适宜的温度、湿度和光照条件，以及清洁的饮水和饲料。
饲养箱应定期消毒，确保小鼠的健康生长。
2. 选择合适的饲料：基因工程小鼠的饲料应根据其基因改造的特点进行调整。
例如，敲除特定基因的小鼠可能需要特殊的饲料补充物来维持其生存和生长。
3. 繁殖管理：基因工程小鼠的繁殖需要进行严格的管理。
通常采用配对交配的方式进行繁殖，确保后代的基因遗传稳定。
此外，对于一些特殊基因型的小鼠，可能需要进行人工授精或胚胎移植等技术手段来实现繁殖。
4. 健康监测：定期对基因工程小鼠进行健康监测，包括体重、行为观察和疾病筛查等。
如发现异常情况，应及时采取相应的处理措施，以保证小鼠的健康状况。
二、基因工程小鼠鉴定策略1. 基因型鉴定：通过PCR、Southern blotting、Western blotting等技术来检测基因工程小鼠是否成功敲除、突变或过表达目标基因。
这些技术可以通过检测目标基因的DNA或蛋白质来确定小鼠的基因型。
2. 表型鉴定：基因工程小鼠的表型鉴定是评估其外部表现和生理特征的过程。
通过观察小鼠的行为、外貌、器官形态等方面的变化，可以初步判断基因改造对小鼠的影响。
3. 功能鉴定：基因工程小鼠的功能鉴定是评估其基因改造对生物学功能的影响。
可以利用行为学实验、生理学指标测定、组织学分析等技术手段来评估小鼠的功能变化，进一步揭示基因改造对生物过程的影响机制。
4. 遗传稳定性鉴定：基因工程小鼠的遗传稳定性鉴定是评估其基因改造是否稳定传递给后代的过程。
第二章实验动物遗传学分类
同源导入近交系的命名
在品系名称后加“•”和供体名称缩写，再加 连字号和目的基因符号，如B10 •129-H-2b 表示以C57BL/10品系为遗传背景，携带来自 129品系H-2b基因的同源导入近交系。 如果供体不是近交系，可以不加以命名，例 如BLAB/c-nu/+表示携带杂合nu基因的 BLAB/c品系，nu基因来自于非近交系。
第二章实验动物遗传学分类
支系的命名（三）
人工喂养（Hand-rearing) : “h”; 人工喂养加奶母代乳 （Foster on Hand-rearing): “fh”； 冷冻保存(Freeze preservatio) : “pe”; C57BL/6peCBA/N表示C57BL/6冷冻 卵或胚胎复苏后移植入CBA/N雌鼠子 宫内产生的鼠。
突变：由于动物基因组中某个核苷酸残基的置 换、缺失或插入，引起一个等位基因的改变。
第二章实验动物遗传学分类
亚系的命名
亚系命名原则是在品系名称后加斜线号， 再加上数字或培育者名称缩写，或者以数 字开头与缩写同时使用， 如A/He(F87)是指近交到87代由Heston 培育的A品系的亚系。
第二章实验动物遗传学分类
3.品系（strain）：实验动物学上把基因高度纯
合的动物称为品系动物，通常指近交系、突变系
动物。
第二章实验动物遗传学分类
作为一个品种、品系应具备的条件
相似的外貌特征：例如小鼠C57BL/6品系的毛 色是黑色的,DBA/2 品系的毛色是灰色的,KM品 种的毛色是白色的。当然,相似的外貌特征只是 品系、品种应具备的条件之一。不同品系、品种 的动物也有外貌相似的,例如A、KM等十几个， 品种、品系动物的毛色都是白色，但它们在其他 的条件上是有区别的。 独特的生物学特性
实验动物学重点
一、实验动物、近交系动物、转基因动物、屏障环境实验动物(Laboratory Animal):是指经人工饲养、繁育，对其携带的微生物及寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚的，应用于科学研究、教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。
包括四个基本内涵：1.遗传背景明确（近交系、封闭群、杂交群）2.对携带微生物和寄生虫实施控制（普通动物、清洁动物、无特定病原体动物、无菌动物）3.在特定的环境条件下，人工培育而成的动物4.应用范围明确近交系(Inbred Strain)是指至少连续经过20代以上全同胞兄妹或亲子交配，品系内所有个体都可追溯到起源于第20代或以后代数的一对共同祖先。
近交系动物的近交系数（Inbreeding Coefficient）应大于99%。
近交系动物的特点：1．基因纯合性和同基因性2．各品系均具有独特的特性3．研究结果的一致性4．可作为有价值的动物模型5．具有标准实验材料特性6. 遗传背景清楚通过实验手段将新的遗传物质(外源性的基因片段)导入到动物的胚细胞中，并能稳定的遗传，由此获得的动物称为转基因动物。
常用的方法有显微注射法、逆转录病毒载体法、胚胎干细胞介导法、精子载体法、电转移法、基因直接导入法等。
屏障环境：与外界隔离，是饲养清洁级动物和SPF级动物的设施。
进入实验动物生存环境的空气须经过滤净化处理，其洁净度相对于10000级，进入屏障内的人、动物和物品如饲料、水、垫料及实验用品等均需有严格的微生物控制。
二、实验动物环境设施分类实验动物设施是指实验动物和动物实验设施的总和。
一个设施可以大到动物中心或生产繁殖机构，小至某一实验动物室。
总体的原则是提供实验动物最适宜的环境，保障实验动物的质量和为动物实验的准确性提供可靠保障。
（一）、按其功能分类1．动物生产设施（Animal Production Facility）指用于实验动物的饲育繁殖、生产的建筑物、设备以及运营管理在内的总和。
小鼠转基因实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景随着生物技术的飞速发展，转基因技术在医学、农业等领域发挥着越来越重要的作用。
小鼠作为生物医学研究中常用的实验动物，其基因编辑技术的应用为疾病模型构建、药物筛选和基因功能研究提供了有力工具。
本实验旨在通过基因编辑技术构建转基因小鼠模型，研究特定基因在小鼠体内的表达和功能。
二、实验材料1. 实验动物：C57BL/6小鼠，雄性，8周龄。
2. 基因构建材料：目的基因（GFP基因）、启动子（CMV启动子）、荧光素酶报告基因（Luc基因）、pEGFP-C1质粒载体、pGL3-Basic质粒载体。
3. 实验试剂：限制性内切酶、DNA连接酶、T4 DNA连接酶、DNA聚合酶、PCR引物、Trizol试剂、RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒、细胞培养试剂等。
4. 仪器设备：PCR仪、凝胶成像系统、实时荧光定量PCR仪、细胞培养箱、显微镜等。
三、实验方法1. 目的基因构建：将GFP基因和Luc基因分别插入到pEGFP-C1和pGL3-Basic质粒载体中，构建重组质粒。
2. 重组质粒转染：将构建好的重组质粒通过脂质体转染法转染C57BL/6小鼠胚胎干细胞（ES细胞）。
3. 转基因小鼠胚胎细胞筛选：通过GFP荧光筛选，得到阳性细胞克隆。
4. 胚胎细胞传代培养：将阳性细胞克隆进行传代培养，筛选出稳定表达的细胞系。
5. 胚胎细胞冻存：将稳定表达的细胞系进行冻存，以备后续实验使用。
6. 胚胎移植：将冻存后的胚胎细胞进行移植，获得转基因小鼠。
7. 转基因小鼠表型鉴定：通过GFP荧光显微镜观察转基因小鼠体内GFP表达情况，并通过实时荧光定量PCR检测GFP基因在转基因小鼠体内的表达水平。
四、实验结果1. 重组质粒构建：成功构建了含有GFP基因和Luc基因的重组质粒。
2. 转基因小鼠胚胎细胞筛选：通过GFP荧光筛选，得到阳性细胞克隆。
3. 胚胎细胞传代培养：成功传代培养出稳定表达的细胞系。
4. 胚胎移植：成功获得转基因小鼠。
转基因动物的概念、原理及应用
转基因动物的概念、原理及应用引言转基因动物技术是一种将外源基因植入到一个物种基因组中的技术，使得其宿主物种具有外来基因中的特性，这些特性可能是有利的、有害的或不变的。
转基因动物在过去几十年得到了广泛的应用，它在各个领域，如医学、物理、化学、生物等发挥了重要作用。
本文将详细阐述转基因动物的概念、原理及应用。
概念转基因动物也被称为转基因实验动物，是指通过基因工程技术，将一种特定的外源基因植入到动物本身基因组中的一种特殊的动物。
转基因实验动物里散发出的基因表达形式或者特性可以延长它们的寿命，或者对它们的生理功能有所改变。
转基因动物可以研究到一些没有被发现的关于物种的特性，还可以用来研究人体某些疾病的发生机制。
原理转基因动物的基本原理是利用基因工程技术将外源基因植入到动物基因组中，使得动物具有外源基因中的特性，以达到我们想要的目的。
首先，转基因动物的研究者需要先从某种物种中取出我们所需要的基因，然后把它们植入到动物本身的基因组中，最后生成一只新的转基因动物。
一般来说，转基因动物会将基因植入到它们的胚胎细胞中或者胚胎内，通过易位器和基因载体等手段使得其他基因能够被引入。
应用转基因动物在医学上有着重要的应用。
例如，经过转基因的小鼠，可以用于研究癌症，心脏病，糖尿病等疾病的形成机制和治疗方法。
除此之外，转基因动物在药物研究方面也有着重要的作用。
它可以用来测试药物的毒性，实验在药物发现和开发过程中发挥着至关重要的作用。
此外，转基因动物还可以用来研究人类疾病的致病机制。
结论转基因动物是一种新兴的技术，它可以用来解决许多医学上的疑难问题，在药物研究方面也发挥着重要的作用。
它不仅可以提高动物的发育能力，而且可以改变动物本身的一些特性，为科学家们的研究提供了丰富的资源，为人类的健康作出了重要的贡献。
实验动物使用和养护
狗
忠诚度高，与人类生理机能相 似，适用于心血管、代谢等方 面研究。
小鼠
繁殖能力强，生长周期短，常 用于遗传学、药理学等研究。
兔子
易于饲养管理，对某些疾病敏 感，常用于免疫学、眼科学等 研究。
猴子
高级灵长类动物，与人类基因 相似度高，用于神经科学、行 为学等领域。
各类实验动物特点
小鼠和大鼠
体型小，易于饲养管理，繁殖 能力强，生长周期短，适用于
尸体处理
03
对于因病死亡的实验动物，应按照相关规定进行尸体处理，如
深埋、焚烧等，以防止病原菌的传播和污染环境。
05 实验动物使用伦 理与法规
使用伦理原则及规范
尊重生命
实验动物作为生命体，应受到充分的尊重和重视，避免不必要的 痛苦和伤害。
替代、减少和精细化
在实验中，应优先考虑使用替代方法，减少实验动物的使用数量 ，同时提高实验方法的精细度和准确性。
如注射器、针头、棉球等，应按照 医疗废弃物处理标准，使用专用容 器收集并交由专业机构处理。
环保法规政策解读
国家层面
我国已出台《实验动物管理条例 》等法规，对实验动物废弃物处 理提出明确要求，强调无害化处 理和资源化利用。
地方层面
各地也相继出台相关实施细则和 规范性文件，进一步规范实验动 物废弃物的处理和环保要求。
考虑动物福利和伦理
在选择实验动物时，应尽量减少动物 的痛苦和不适，遵循动物福利和伦理 原则。
评估实验可行性
在选择实验动物前，应对实验条件、 饲养管理、经费等方面进行充分评估 ，确保实验的可行性。
了解相关法规和规定
在选择和使用实验动物时，应遵守国 家和地方相关法规和规定，确保实验 的合法性和规范性。
第二章实验动物的饲养与培育
实验动物的饲养与培育
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
第一节
实验动物的分类
实验动物是指经人工培育、对其携带的微生 物实行控制、遗传学背景明确或来源清楚， 用于科学研究、教学、生物制品或药品鉴定 以及其他科学实验的动物。(狭义) 实验用动物泛指所有用于科学实验的动物。 （广义 ）
实验动物的微生物学控制分类
普通级动物 (Conventional animal，CV)： 不携带所规定的人兽共患病病原和动物 烈性传染病病原动物。 清洁级动物 (Clean animal，CL)：除普 通动物应排除的病原外，不携带对动物 危害大和对科学研究干扰大的病原。
封闭群（远交群） （closed colony or outbred stock） 以非近亲交配方式进行繁殖生产的一 个实验动物种群，在不从其外部引入新个 体的条件下，至少连续繁殖4代以上。
杂交群 由不同品系或种群之间杂交产生的后代称 为杂交群。用于实验研究的杂交群是指两个近 交系之间交配所繁殖的子一代动物，简称F1动 物。
3. 支系（ subline）：近交系或亚系经人为技术处置 后称为支系，如卵子移植、胚胎冷冻、种群转移。通过 实验手段获得的遗传工程小鼠也称之为支系。
重组近交系(recombinant inbred strain) 和重组同类系(recombinant congenic strain)
（1）重组近交系(RI)：由两个近交系杂 交后， F2 代重新编组，并连续 20 代以上兄 妹交配育成的近交系。 （ 2 ）重组同类系（ RC）：由两个近交 系杂交后，子代与两个亲代近交系中的一个 近交系进行数次回交 ( 通常回交 2 次 ) ，再经 过对特殊基因选择的近亲交配而育成的近交 系。
悉生动物（ Gnotobiotic animals， GN）也称已知菌动物或已知菌丛动 物，是指在无菌动物体内植入已知 微生物的动物。必须饲养于隔离系 统。
实验动物2
实验动物按遗传特点分类近交系(Inbred Strain ) 封闭群(Closed Colony or Outbred Stock ) 杂交群(Hybrids) 1909年，莱托最早培育的近交系小鼠有DBA，DBA的名称取自淡化（dilute，d）、褐色化（Brown，b）、去杂色化（nonagouti, a)三种变异毛色的缩写。
C57 、C58,分别从编号为57、58的雌鼠培育而来。
1911年育成远交Wistar大鼠1918年以后，SD大鼠、Lewis大鼠、Long-Evans大鼠近交系( inbred strain)定义经至少连续20代的全同胞兄妹交配或亲子交配，近交系数(inbreeding coefficient)达到99%，品系内所有个体都可追溯到第20代或以后代数的一对共同祖先。
近交系数：群体中某个体通过遗传携带两个同源等位基因的概率。
近交系命名：一般以大写英文字母或大写英文字母加阿拉伯数字命名。
BALB ,DBA,TA1, C3H等。
一些历史较长，已经广泛使用并获得认可的品系除外，如129等。
亚系（Substrain)定义由同一个近交系分离出来的有不同特性的分支，这些分支间有遗传差异，称为该品系的亚系。
形成㈠在兄妹交配20-40代时形成的分支；主要原因是残留杂合（Residual heterozygosity）；㈡某分支与其它分支分开繁殖超过100代。
主要原因是突变㈢发现一个分支与其它分支的差异。
原因为残留杂合、突变或遗传污染（Genetic contamination）。
命名在品系名称后加一道斜线（/），斜线后标明亚系的符号，亚系的符号可以是以下三种a) 数字，如DBA/1、DBA/2等b) 培育或产生亚系单位或人的缩写英文名称，第一个字母用大写，以后的字母用小写。
使用缩写文名称应注意不要和已公布过的名称重复。
例如：A/He，表示A近交系的Heston 亚系；CBA/J，表示由Jackson保持的CBA近交系的亚系c) 当一个保持者保持的一个近交系具有两个以上的亚系时，可在数字后再加保持者的缩写英文名称来表示亚系。
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动物转基因技术
Animal transgenic technique
二、实验动物设施
实验动物设施：指与实验动物和动物实验 有关的实验动物的保种维持、生产、实验、 研究等所需的建筑物和设备的总称。
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1、实验动物设施的一般组成
饲育室、实验室、检疫室、洗刷消毒间、废 物处理设施、办公室、机房、库房等。
1、气候因素
（1）温度 18℃- 29℃ ● 影响生长发育和繁殖 ● 影响代谢 ● 激发应激反应 ● 影响试验结果。
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温度与毒性的关系
温度对3种药物LD50的影响
药物 苯异丙胺
LD50（mg/kg）
15.5℃ 26.7℃
197.0
90.0
盐酸脱氧麻黄碱 111.0
33.2
麻黄碱
477.1
565.0
特点： 1）保持一定的杂合性 2）保持相对稳定的遗传 特征 3）繁殖力、抗病力强、 生产成本低
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二、按微生物学控制原理分类
按照对微生物净化的程度，实验动物在我国分为四类: 普通级动物(CV) 清洁动物(CL级) 无特定病原体动物(SPF) 无菌动物（包括悉生动物、GF/GA)
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1、无菌动物
概念：机体内、外不带有任何现有方法可检测 出微生物和寄生虫的动物。 应用：（1）用于微生物学和寄生虫学研究
实验；（2）各种疫苗生产 。
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3．清洁动物
概念：指来自屏障系统的SPF动物，而饲育在半屏障 环境设施系统中的动物。 应用：一般用于短期、中期对带菌要求不严格的实 验研究。
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4. 普通动物
概念：是未经积极的微生物学控制，普遍地 饲养在开放卫生环境里的动物。 应用：教学、一般性实验、预实验
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动物转基因技术
肥胖小鼠
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3．杂交群动物
概念：是两个近交品系动物间有计划进行交配获 得的第一代动物，亦称杂交一代，简称Fl动物。
特点：F1动物基因型相同，个体基本相同，表现 型变异低，适应性强，反应敏感及分布广等特点，并 具有双亲共有的遗传特性。
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4．封闭群动物
概念：指一个动物种群在5年以上未从外部引进 其它任何新血缘品系，是由同一血缘品系进行随 意交配，并在固定场所保存繁殖的动物群。
（2）免疫学功能的研究 （3）用于老年病学研究
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悉生动物
概念：指在无菌动物体内植入已知微生物的动物。 应用： （1）微生物学研究
（2）免疫学研究 （3）抗体制备研究
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2．无特定病原体动物
概念：指实验动物体内不存在特定病原微生物和 寄生虫的动物，简称SPF动物。 应用：（1）国际上公认SPF动物适用于所有科研
2、繁殖原则
封闭群应足够大，并尽量避免近亲交配。
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四、杂交群的培育
采用两个近交系进行杂交而形成。
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动物转基因技术
Animal transgenic technique
一、鼠的准备与要求
第四节 超排卵与取卵
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二、超排卵与取卵
1、排卵程序： (1) 第一日中午先向小鼠腹腔内注入5一l0单位的PMS； (2) 过48小时腹腔内注入5—10单位的人hCG(注射后11—13 小时后排卵)； (3) 令雌雄动物一对一的合笼交配； (4) 检查阴栓(第四日晨)；检查阴栓可判定是否受精；如已 受精则出现阴栓。
—犬种
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二、按遗传学控制原理分类
1．近交系动物
概念：是采用兄妹交配或亲子交配，连续繁殖20代以上 培育而成的纯品系动物。
特点： ① 具有相同的基因型，表现型也一致
② 遗传背景明确 ③ 长期遗传稳定性
C57BL
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2．突变系动物
突变系动物是指正常染色体的基因发生了变异的， 形成具有各种遗传缺陷的动物。
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（3）亚屏障系统（Sub-Barrier system）
介于屏障系统和开放系统的中间状态的设施， 其构造和设备均基本上按屏障设施的标准要求， 空气经亚高效过滤，在管理上没有屏障系统那么 严格，用于清洁级动物的生产和实验。
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（4）隔离系统（Isolator system）
饲养无菌动物及悉生动物所使用的方式，它 能保证动物处于完全无菌的环境下，主要设备是 隔离器，可以放在普通环境中。
门窗：门应坚固、气密性好、耐腐蚀、易清洗， 开闭形式顺应气流密封，门下端设连动装置，关 闭时门底不留缝隙，门宽不少于1.0m，门上可留 玻璃观察窗。
走廊：宽度一般为1.5～2.0m。 房间：为节约能源，饲mal transgenic technique
2、实验动物设施的等级
开放系统 亚屏障系统 屏障系统 隔离系统
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（1）开放系统（Open system）：饲养普通动物的 设施，在某种程度上对卫生有要求。
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（2）屏障系统（Barrier system）： 为努力避免与病原微生物接触和传染的机会而设计
的封闭设施，适合饲养清洁动物或SPF动物。
实验用动物
指一切用于科学实验的动物。
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一、在动物学上的分类 人为分类法 自然分类法
界（Kingdom）
动物界
—门（Phylum）
—脊椎动物门
—纲（Class） —目（Order） —科（Family） —属（Genus） —种（Species）
—哺乳纲 —真兽亚纲 —食肉目 —肢脚亚目 —犬科 —犬属
Animal transgenic technique
第二节 实验动物的饲养条件与环境控制
实验动物环境
外环境 内环境
大环境 小环境
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实验动物环境控制与动物实验结果的关系
基因型
发育环境
周围环境
表现型
演出型
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动物转基因技术
Animal transgenic technique
一、影响实验动物环境的因素
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2 受精卵的收集
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46
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缺点：选择范围小，由于只有单线的仔代，有断 代的危险。
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3、优选法
在基础群中，每代有5 对，繁殖过程中，每一代均 保持5对向下传递，当某对 不孕或生产能力降低时，可 从另一对所生的后代中选择 优良者代替。它兼有以上两 个方法的优点。
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动物转基因技术
Animal transgenic technique
转基因动物第二章实验动物的饲 养与培育分析
1 实验动物的分类
主
要
2 实验动物的饲养条件与环境控制
内
容
3 实验动物的育种
4 超排卵与取卵
2
动物转基因技术
Animal transgenic technique
第一节 实验动物的分类
实验动物
经人工培育，遗传背景明确，来源清楚，对其携带微生 物和寄生虫实行监控，应用于生命科学研究，药品、生 物制品的生产和检定，以及其它科学研究的动物。
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（2）湿 度 40%-70% （3）风速 0.1-0.25m/s
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2. 理化因素
（1）粉尘：粉尘的标准，以净化的洁净度分为 清洁级动物为100000级，SPF动物为10000级，无 菌动物为100级。
（2）有害气体：主要有氨、甲基硫醇、硫化氢 等。氨控制在14 mg/m3以下。 （3）噪音：≤60 db
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3、实验动物设施的基本要求
（1）区域的设置
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（2）对部分建筑部位的要求
地面：应防滑、耐磨、耐清洗消毒、无渗漏。 地漏：屏障区内地漏应防堵、防回水回气，采用
特制盖、可水封。 墙面：应光滑平整，阴阳角为圆弧形，墙面应采
用不易脱落、耐腐蚀、无反光、耐冲击、无缝隙 的材料。
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天花板：应采用耐水洗、耐腐蚀、气密性好、坚 固、无毒、阻燃的材料。
二、突变系的培育
■ 通过培育近交系的方法使突变基因保存下来
35
■ 将突变基因导入近交系
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三、封闭群的培育
封闭群动物的繁殖是尽量保持封闭群动物基 因异质性及多态性，避免随繁殖代数增加，导致 近交系数的过快上升。
1、随机交配的方法 （1）按随机数表配对法
将断奶后的实验动物编号，按随机数表组 成配种对。
第三节
一、近交系的培育
实验动物的育种
1、平行线法
由5个家系组成基础繁殖群， 从每个家系中选出一对兄妹进 行全同胞交配，以此类推，最 后有可能育成5个亚系。
缺点：个体不太均一、易发生分化
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2、单线法
以某个家系为基础繁 殖对，在其后代中一 般选留3-5对兄妹，但 仅有1对向下传递，生 产的个体均一，最后 形成单一的品系。
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（2） 分组交叉交配法
雄鼠组号
1 2 3 4
子代组号
A B C D
雌鼠组号
1 2 3 4
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（3）循环配对法
n 代 公1 母 公 2 母 公 3 母 公 4 母 公 5 母 n＋1代 公 1 母 公 2 母 公 3 母 公 4 母 公 5 母
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2、封闭群的维持与生产 （1）引种原则
① 遗传背景明确，来源清楚，有完整资料。 ② 引种动物数量要足够多。
（4）光照：明暗交替时间为12:12或10:14
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3. 生物因素
（1）饲养密度和社会因素 大约是每平方米小鼠100只、大鼠50只、豚鼠20
只、兔4只、狗1只、猴1只。
饲养空间狭小
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（2）空气中的微生物
常常以空气落下菌数表示，普通环境小于 或等于30个/皿，屏障环境小于或等于3个/皿， 隔离环境无检出。