细胞生物学综合性实验
1-细胞生物学实验
如镜台测微尺1mm处(全长)与目镜测微尺75 刻度(150小格)重合，则:
目镜测微尺每小格的实际长度=
1 150
mm
=0.0067mm=6.7μm
④同样的方法标定高倍镜下目镜测微尺 每小格的实际长度
计算公式如下:
目镜测微尺每小格的实际长度
镜台测微尺长度 ＝
目镜测微尺格数
＝ 30×10μm 200
(4)测量细胞并计算核质比
五、实验操作
1. 取猪肝1g，放入小烧杯中，加4ml 0.25M蔗糖缓冲液， 将组织剪成约1mm立方的小块。
2. 将剪碎的组织移入匀浆器的外管中，再将内管（带柄 的活塞）插入外管中，缓慢而均匀地施力，上下旋转拉 动，匀浆7-10分钟，然后用六层纱布过滤回洗净的原烧 杯中。（这两步操作略）
3. 每组取1个5ml离心管，加入匀浆液2ml，2000rpm离 心10分钟。（每组1管）
许多酸性染料不易穿过活细胞的质 膜进入细胞内，却能渗入死亡的细胞 内，使其着色，以此来鉴别死活细胞。
2.方法 取酵母悬液一滴于洁净玻片上，滴一滴0.2％亚甲基
蓝染液，加盖片，2分钟后于显微镜下观察细胞。
3.结果 死细胞被染成蓝色，活细胞不着色。
实验作业
画图记录细胞吞噬实验所见结果
实验三
细胞核与线粒体的 分级分离
实验内容
实验一、细胞的形态结构与显微测量 实验二、细胞生理活动的实验观察 实验三、细胞核与线粒体的分级分离 实验四、细胞分裂的形态观察 实验五、细胞原代培养 实验六、细胞计数及死活细胞的鉴定 实验七、综合设计性实验
实验一
细胞的形态结构与显微测量
实验目的
(一) 观察并了解细胞的基本形态。 (二)掌握临时制片和显微绘图的方法。 (三)了解显微测微尺的原理及使用方法
细胞生物学综合实验报告
本科学生实验报告姓名学院＿生命科学学院＿专业＿班级＿10B班＿实验课程名称＿人类淋巴细胞株的培养＿指导教师及职称许琳峰＿开课时间2012 至＿2013 学年＿上学期云南师范大学教务处编印实验名称：人类淋巴细胞株的培养实验时间：2012.3——2012.4 实验室：睿智楼3栋424小组合作：第四小组实验主要内容：1、细胞培养准备工作（清洗、消毒、灭菌）2、培养基的配制3、细胞传代培养4、死活细胞的鉴别一、实验目的1、能独立地进行用于细胞培养的个中器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。
2、熟练掌握RPMI 1640培养基的配制方法。
3、熟练掌握细胞传代培养的操作方法，观察外培细胞在不同时期的形态变化及生长状况。
4、掌握死活细胞的鉴别原理及方法。
二、实验原理1、细胞培养准备工作（清洗、消毒、灭菌）(1)、清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。
(2)、体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌操作的要求程度很高。
细胞培养不好与清洗不彻底有很大关系。
(3)、灭菌手段的选择也十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
2、培养基的配制细胞培养使用的培养基一般是由合成培养基和小牛血清配制而成。
合成培养基有商品出售，它是根据细胞生长的需要按一定配方制成的粉状物质。
其主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子和其他辅助物质。
它的酸碱度和渗透压与活体内细胞外液相似。
3、细胞传代培养当原代培养细胞或细胞系细胞增殖达到一定的密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，以适当比例转移到另一个或几个容器中扩大培养，此过程为传代培养。
一般将传代培养的累积次数作为传代细胞的代数。
4、死活细胞的鉴别细胞的存活率是反映细胞群体生活状态的重要指标。
《细胞生物学实验》教学大纲
《细胞生物学实验》教学大纲课程名称：细胞生物学实验课程编号：12030037课程类别：专业基础课/必修课学时/学分： 24/0.75开设学期：第四学期说明一、课程性质细胞生物学实验是生物科学和生物工程专业一门重要的必修基础课程，在生命学科的本科教学中有着十分重要的地位。
通过实验，不仅使学生加深对细胞生物学理论知识的理解和认证，同时通过对细胞生命现象的观察和亲手操作，使学生获得有关细胞生命活动的感性知识，有效地提高理论课的教学效果，并使学生掌握细胞生物学实验的基本原理、方法和技能，培养和提高学生实验设计和应用各种实验技术的能力，培养和训练学生的创新意识和创新能力，培养严谨的科学态度和实事求是的作风，提高发现问题、分析问题和解决问题的能力，为今后独立从事教学或科学研究打下坚实的基础。
二、教学目标通过细胞生物学实验，使学生们更加牢固地掌握细胞生物学基本知识和基本理论，对细胞的结构和功能有全面、真实的认识，使学生们掌握细胞生物学的基本实验方法和技能。
三、学时分配表序号实验项目实验时数实验类型内容与要求小计实验1细胞膜的渗透性及细胞凝集反应4设计性了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度，掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝集的原理实验2叶绿体的分离与荧光观察3验证性掌握荧光显微镜的原理和使用方法；观察叶绿体的自发荧光与次生荧光；通过对植物叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法实验3植物细胞骨架的观察4验证性掌握光学显微镜观察植物细胞骨架的原理和方法实验4鸡血细胞的体外融合6综合性了解PEG诱导细胞融合的基本原理，通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合技术实验5巨噬细胞吞噬现象的观察7综合性通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞的活动观察，加深理解细胞吞噬作用的过程和意义；掌握小白鼠腹腔注射给药方法和颈椎脱臼处死法合计24四、实验方法与要求建议本课程采用传统的实验教学方法，2人一组操作，结合多媒体、小组讨论与集体讨论、实验设计、教学录像、细胞生物学小知识和小技巧介绍等多种教学手段，帮助学生通过本课程的学习全面地掌握细胞生物学的基本实验方法与技能以及实验设计的思路，以提高学生从事教学和科学研究的综合素质。
细胞生物学综合性、设计性实验教学改革探讨
独 立 分 析 解 决 实 验 中遇 到 的 问 题 ， 实验 结 果 是 否 详 实 、 确 ， 准
科 学 论 文 是 否 书写 规 范 、 理 清 楚 、 达 准 确 。 条 表
１ 课 题 的选 择
综 合 性 、 计 性 实 验 课 题 的 选 择 ， 在 考 虑 实 验 室 现 有 ５ 实 验 的 效 果 设 要
前 其 实 验 教 学 还 存 在 着 种 种 缺 陷 ： 验 教 学 模 式 单 调 ， 以 论 。在 实 践 中 我们 发 现 ， 多 数 学 生 对 如 何 写 科 学 论 文 感 到 实 难 大
激 发 学 生 积 极 性 和 主 动 性 ； 验 内 容 多 是 验 证 性 实 验 ， 以 无 从 下手 ， 此 教 师 应 该 对 他 们 进 行 必 要 的 指 导 。首 先 ， 实 难 因 教
关键词 ： 胞生物学 ； 细 综合 性 实验 ； 计 性 实验 设
中 图分 类 号 ： ６ ２ ０ Ｇ ４ ．
文献标识码 ： Ａ
文 章 编 号 ：６ １ ２ ８ ２ ０ ４ １６ １ １７ —４ ８ （０ ８ ０ —０ ４ 一Ｏ Ｊ
众 所 周 知 ， 胞 生 物 学 是 一 门 实 验 性 很 强 的学 科 ， 目 者 要 求 不 同 ， 学 论 文 更 注 重 对 实 验 结 果 的 总 结 、 析 和讨 细 但 科 分
． 在 实 践 中 ， 们 一 般 将 综 合 性 、 计 性 实 验 分 四 个 阶 段 ６ １ 学 生 方 面 我 设
来 实 施 ： 一 阶段 ， 生 根 据 选 题 ， 阅 文 献 、 析 汇 总 资 料 ， 第 学 查 分
教 学 中我 们 发 现 ， 分 学 生 思 维 还 停 留 在 传 统 实 验 模 式 部
细胞生物学实验讲义
细胞⽣物学实验讲义细胞⽣物学实验⼀细胞分裂相的观察（综合性，3学时，⽣技、⽣⼯专业必修）⼀、实验⽬的1.掌握减数分裂标本的制备⽅法；2.掌握⽣殖细胞减数分裂发⽣过程及各个时期的染⾊体和细胞变化特点；3.了解植物⽣殖细胞的形成过程。
⼆、实验原理减数分裂是⽣殖细胞发⽣的⼀种特殊细胞分裂⽅式，特点是染⾊体复制⼀次，细胞分裂两次，形成4个⼦细胞，每个⼦细胞染⾊体数⽬减半。
经过受精作⽤后，染⾊体数⽬恢复，这样在物种延续过程中保证了遗传的相对稳定性和基因的多样性。
三、实验仪器、材料和试剂1.仪器、⽤具：眼科镊⼦、解剖针、⼑⽚、吸⽔纸、显微镜、载玻⽚、盖玻⽚；2.材料：普通⼩麦(Triticum aestivum，2n=2x=42)或⿊麦（Secale cereale，2n=2x=14）、⼤麦(Hordeumsativum，2n=2x=14)的幼穗（旗叶叶枕与幼穗顶部距离3～5cm，穗长约6～8cm）；或⼤葱（Alliumfistolosum，2n=2x=16）花序（外包绿⾊总苞者，长2～3cm）；或⽟⽶(Zea mays，2n=2x=20)幼穗（雄穗）。
3.试剂：苯酚品红、醋酸洋红。
注：以下染⾊剂的配制① 1％醋酸洋红（aceto carmine）：酸性染料，适⽤于压碎涂抹制⽚，能使染⾊体染成深红⾊，细胞质成浅红⾊。
配⽅：洋红1g ； 45％醋酸100ml。
煮沸2h左右，并随时注意补充加⼊蒸馏⽔到原含量，然后冷却过滤，加⼊4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发⽣沉淀），放⼊棕⾊瓶中备⽤。
②改良苯芬品红染⾊液（Carbol fuchsine）核染⾊剂。
配制步骤：先配成三种原液，再配成染⾊液。
原液A：3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中。
原液B：取原A液10ml加⼊到90ml 5％⽯炭酸⽔溶液中。
原液C：取原B液 55ml，加⼊6ml冰醋酸和6ml福尔马林（38％的甲醛）。
（原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使⽤）染⾊液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加⼭梨醇1～1.8g，配成10％～20％浓度的⽯炭酸品红液，放臵两周后使⽤，效果显著（若⽴即⽤，则着⾊能⼒差）。
医学细胞生物学综合性实验教学的设计与实施
践， 我们逐 渐建立 一套综 合性实 验的教学 体 系 ， 并在 实践 中取得 了较 好 的教 学 效果 。开 展 综合 性 实 验 ， 可 以更 好地发 挥学 生 的主 体 意识 ， 学 生 自主 进行 使 综合性 实验 的前期 准备 、 实施 、 果 及评 价 ， 有效 结 能
提高学 生的综 合实验 能 力 ， 高学 生 解决 问题 的实 提
何 志颖 ， 訾晓 渊 ， 朱 海英 ， 谢 东甫 ， 苏 娟 ， 胡 以平 ’第二军医大学细胞生物学教研室， 上海 ２０３ ） （ ０４ ３
摘要 ： 在 实验课教 学中开展 综合性 实验是 医学细胞生物 学实验课 教 学改革的重要 内容。介绍的综合性 实验 以小鼠胚胎干 细胞的培养和基 因转染为主线 ， 穿插细胞的基本特征 、 细胞增 殖动力 学、 细胞 骨架、 细胞 融合及 染 色体的制备 等教 学 内容 ， 基
取 １． ３ ５天孕龄 的小 鼠胚 胎 原 代 培养 制 备饲 养层 细
传至第 三代
时 ＭＥ Ｆ细胞趋 于均一 ， 用丝裂 霉素 Ｃ或 ＾射线处理 ｙ
抑 制 Ｍ Ｆ细胞 的增殖 能力 ， 理后 的饲养 层细 胞种 Ｅ 处
胞， 基本 步骤包 括 ： 取胚 胎 、 剪去头 去脏器 、 修 胰酶 消
・
１ ８・ ０８
山 西 医科 大学 学 报 ： 础 医学 教 育 版 ，０ ０年 １ 基 ２１ １月 ，２ １ １（１
Ｄ ： ０ ３ ６ ／ ． Ｓ Ｎ． ０ ８—７ ４ ． ０ ０． ． ７ ＯＩ １ ． ９ ９ Ｊ Ｉ Ｓ １ ０ ２ ９ ２ １ １ ０１ １
医 学 细 胞 生 物 学 综 合 性 实 验 教 学 的 设 计 与 实 施
际能力 。
该综 合性实验 以小 鼠胚 胎 干 细胞 （ Ｓ细胞 ） Ｅ 的 培养 和基 因转 染为 主线 ， 插细胞 的基本 特征 、 穿 细胞 增殖 动力学 、 细胞骨架 、 细胞 融合及染 色体 的制备 等
细胞生物学实验报告(3篇)
细胞生物学实验报告（3篇）细胞生物学实验报告（精选3篇）细胞生物学实验报告篇1一、实验目的：1、掌握显示细胞中过氧化物酶反应的原理和方法。
2.了解细胞凋亡的生物学意义3、掌握凋亡细胞的形态学检测方法二、实验原理：1、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物，用联苯胺处理标本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。
中间产物蓝色联苯胺是不稳定的，无需酶的参加即可氧化为棕色化合物。
2、细胞凋亡是指细胞在生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。
它是一个主动的、高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。
3、凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体;根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种直观、可靠的方法。
三、实验步骤：细胞中过氧化物酶的显示1、在载片上滴一滴PBS缓冲液；2、取骨髓细胞：用断颈法处死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剥出后肢股骨，剪开股骨一端，用牙签尖的一端插入剪开的小孔中，抠取少许骨髓细胞置滴有PBS的载片上；3、涂片：用另一玻片将骨髓细胞沿一个方向涂布推开，室温晾干；4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸铜液，以盖满涂片为宜，处理30秒-1分钟。
5、倾去硫酸铜液，直接滴入联苯胺混合液反应6分钟（以盖满涂片为宜）6、清水冲洗，番红复染2min。
7、镜检：清水冲洗，室温晾干，先低倍镜下观察，后换高倍镜下观察（油镜100_）细胞凋亡的形态学检测与观察吉姆萨染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、95%乙醇固定5min4、PBS缓冲液洗2次5、吉姆萨染色液染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液7、普通光学显微镜下观察。
吖啶橙染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min4、PBS缓冲液洗2次每次1min5、0.01%吖啶橙染色液在避光环境下染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液6、选用蓝光激发滤片在荧光显微镜下观察。
细胞生物学综合性实验的设计
（ 开大 学 生命科 学学 院 ，天津 ３ ０ ７ ） 南 ０ ０ １ 摘 要 ： 基础 实验 课程 基础 上 ， 在 开设 综合 性 实验 ， 实验课 教 学改 革 的一 项 内容 。所设 计 实施 的微 管 是
相 关的综 合性 实验 内容 ， 既是 当前的研 究热 点 ， 又是 学 生较 熟 悉的细胞 结构 ， 学生在 完成 的过程 中 ， 实践
性实 验 为主 ， 而综合 性 、 计 性 实验 内容 少 ， 利 于 学 设 不
时， 能够 了解 实验设 计 思 路 ， 析 实 验 结 果 ， 系 实 际 分 联 问题 认识 到实 验 的重要 性 ， 强独 立解 决 问题 的能力 。 增 现有 的基 础实 验课对 学 生 的培养很 有 限 。在 基本 细胞
Ｄｅ ｉｎ ｏ ｙ ｔ ｅ ｉａ ｌ Ｂｉｌｇ ｘ ｅ ｉ ｎ ｓｇ ｆＳ ｎ ｈ ｔ ｌ ｃ Ｃｅｌ ｏｏ ｙ Ｅ ｐ ｒ ｍｅ ｔ
Ｌ ｎ — ｅｔ ＺＨＯＵ Ｊ ｎ ＩＤｅ ｇ ｗ ｆ， ｕ
（ ｏｌ ｅｏ ｉ ｃｅｃｓ Ｎ ｎ ａ Ｕ ｉ ｒ ｔ Ｔａｊ ０ ０ １ Ｃ ｉ ） Ｃ ｌ ｇ ｆ ｆ Ｓ ｉ ｅ ， ａ Ｋ ｉ ｎｖ ｓ ｙ ｉ ｉ ３ ０ ７ ， ｈｎ ｅ Ｌｅ ｎ ｅ ｉ ｎ ｎ ａ
实验 技术 培训 的基 础上 ， 增加 综合 性实 验 内容 ， 以充 可
分 发 挥实验 教学 的作 用 ， 使学 生在 实验 教学 过程 中 ， 养 成 良好 的创新 思维 习惯 ， 而 提高 分 析 问题 和解 决 问 从
Ａｂｓｒ ｃ ｔ ａ ｔ：Ｔｈ ｙ ｔ ｅｉ ａ ｅｌ ｂｏ ｏ ｙ ｅ ｐｅ ｉ ｅ ｔ ｉ ｗ ｏ ｄ ｎ ｕ ｒｃ ｌ ｍ ｂ ｓ ｄ ｎ ｒ ｇ ｌｒ ｃ ｌ ｂｉｌｇ ｘ ｅ ｉ ｅ ｓ ｎ ｈ ｔｃ ｌｃ ｌ ｉｌｇ ｘ ｒｍ ｎ ｓ ａ ｎｅ ｆｕｎ ｉ ｇ ｃ ｒｉｕ ｕ ａ ｅ ｏ ｅ ｕ ａ ｅｌ ｏ ｏ ｙ ｅ ｐ ｒ— ｍｅ ｔ ａ ｄ ｉ ｉ ｌｏ ａ ｐ ｒ ｆｅ ｐ ｒｍ ｅ ｔｒ ｆ ｒ ａ ｉｎ Ｔｈ ｘ ｒｍ ｅ ｔ ｌｃ ｎ ｅ ｔｆ ｃ ｓ ｓｏ ｉｒ ｔ ｂ ｌ ｎ ， ｎ ｔ ｓａｓ ａ ｔｏ ｘ ｅ ｉ ｎ ｅｏ ｍ ｔｏ ． ｅ ｅ ｐｅ ｉ ｎ ａ ｏ ｔ ｎ ｏ ｕ ｅ ｎ ｍ ｃ ｏ ｕ ｕ ｅ，ｃ ｎｓｄ ｒｎ ｔｉ ｏ ｉｅｉｇｉ ｓ ｎ ｔｏ ｌ ｅ ｅ ｒ ｈ ｈ ｔｐ ｉ ｕｔａ ｓ ｎ ｉ ｏ ｎ ｙ ａ ｒ ｓ ａ ｃ ｏ ｏｎｔｂ ｌｏ ａ ｍｐｏ ｔｎ ｙｏ ｋｅｅｏ ｎ ｃ ｌ． Ｔｈ ｏ ｇ ｈｅ ｅ ｐ ｒｍ ｅ ｔ ｓｕ ｅ ｔ ａ ｒ ｃ ｉｅ ｒａ ｔｃ ｔ ｓ ｌ ｔｎ ｉ ｅ１ ｒ ｕ ｈ ｔ ｘ ｅ ｉ ｎ ， ｔ ｄ ｎ ｓ ｃ ｎ ｐ ａ ｔｃ ｍｕｌ ｐ ｅ ｔｃ ｎ ｑ ｅ ， ｏ ｅ ｐ ｒｍ ｅ ｔ ｌｐ ｅ ｒ ｔｏ ｎｄ ｐ ｏ ｅ ｕ ｅ ｄ ｓｇ ｔ ｌ ｅ ｈ ｉ ｕ ｓ ｄ ｘ ｅ ｉ ｎ ａ ｒ ｐａ ａｉｎ ａ ｒ ｃ ｄ ｒ ｅ ｉｎ． Ｔｈ ｎｅ ｒ ｔ ｄ ｓｕ ｙ ｉ ｍ ｕ ｄ ｆｓｅ ｔ ｄ ｎ ｓ ｉ ｅ ｉｔ ｇ ａｅ ｔ ｄ ｔ ｅ ｗｏ ｌ ｏ ｔｒｓｕ ｅ ｔ ’ ｒ ｓ ａ ｃ ｎ ｅ ｅ ｔｎ ｎ ｃ ｌ ｂｏ ｏ ｙ ａ ｄ ｉ ｒ ｖ ｈ ｉ ｎ ｏ ａｏ ｙ ａ ｉ ｔ ． ｅ ｅ ｒ ｈ ｉ ｔｒ ｓｉ ｇ ｏ ｅ ｌ ｉｌ ｇ ｎ ｍｐ ｏ ｅ ｔ ｅｒ ｉ ｎ ｖ ｔｒ ｂｌ ｙ ｉ Ｋｅ ｏ ｄ ｙ ｗ ｒ ｓ：ｃ ｌ ｉｌ ｇ ｅｌｂ ｏｏ ｙ；ｓ ｎｈｅｉａ ｘ ｅ ｉ ｎ ； ｍｉｒ ｔ ｂｕ ｅ；ｔ ａ ｈ ｎ ｅｏ ｍ ｙ ｔ ｔｃ ｌｅ ｐ ｒｍｅ ｔ ｃ ｏｕ ｌ ｅ ｃ ｉ ｇ ｒ ｆｒ
细胞生物学综合性实验的教学设计与应用
2016年第12期总第430期自然科学细胞生物学综合性实验的教学设计与应用覃永华徐鑫余光辉唐仙英程旺元（中南民族大学生命科学学院国家民族药学实验教学中心，湖北武汉430070）摘要：细胞生物学是生命科学类的核心专业基础课程，实验教学是培养学生基本实验技能和创新思维的重要平台。
本文立足于提高细胞生物学实验教学质量和效果，针对现行实验教学的弊端，从教学内容、教学模式等方面探索开放式、研究型的综合性实验教学，引导学生进行探究性学习，激发学生自主学习和探索的动机来调动学生自身参与知识建构的主动性和创新性。
关键词：细胞生物学实验；综合性实验；研究性实验；开放教学细胞生物学作为生命科学中的一门重点学科，其实验教学在课程教学中起着举足轻重的作用，不仅有助于学生对细胞生物学中重要知识点的学习和理解，同时对培养学生的细胞学实验技能与创新思维起至关重要的作用。
但现行的实验教学由于诸多因素很难行之有效，主要表现在以下两点：第一，单一的实验教学枯燥，很难让学生积极主动地去学习；第二，实验内容简单过时，基本上是验证性实验，缺乏综合性、设计性。
在实验教学中开展综合性实验内容、实行开放式管理的创新实验教学模式是高等教育培养创新人才、实现素质教育目标的重要途径，也是为学科专业竞赛提供人才、为教师科研提供助手的重要途径。
为了更好地发挥综合性实验的教学特色，教师要以培养学生的创新意识为主，鼓励学生探索知识，提高学生的整体素质。
笔者针对细胞生物学综合性实验的安排和实施、存在的问题和解决方案等环节进行一定的探索，以期探索一套开放式、研究型的综合性实验教学模式。
一、开放式、研究型的综合性实验教学模式1．研究型教学内容的安排细胞生物学作为生物学的专业基础课，实验教学的开设与之相辅相成，是对理论教学的重要补充和巩固。
在以往的教学中，由于实验条件等硬件设备的限制，实验课程的开设局限于显微观察等较为简单的内容。
对于那些推动细胞生物学快速发展的新技术、新方法，特别是在现今实验室广泛采用的实验技术等，由于实验教学平台的不足而导致综合性实验无法开设，客观上造成了学生在实验课堂上仅能学到较为简单的实验操作，而对先进技术方法的认识和理解停留在书面上，造成实验教学与理论教学的脱节。
细胞生物学实验
细胞生物学实验
一、细胞培养
1、细胞复苏
将冻存有细胞的冻存管从－70ºC 冰箱中取出，迅速置于已预热37ºC的水浴箱中不断摇动使冻存液在1 min 内解冻。
在超净工作台内吸出细胞悬液并滴加在含6 ml DMEM 培养基的离心管中，放入离心机1 000 rpm 离心6 min, 弃上清液，向离心管中加入DMEM 培养基6 ml 吹打混匀制成细胞悬液种于培养瓶中, 放入37ºC 5%CO2培养箱中继续培养，24 h 内换液，以除去残存冻存液和未贴壁细胞。
2、细胞培养与传代
当细胞长满培养瓶底约85%～90%时弃去原培养液，用PBS 轻洗2～3 次，弃去PBS，加入适量胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察，若胞质回缩，细胞间不再连接成片时，吸弃胰蛋白酶液，加入DMEM 培养基终止消化，轻轻吹打直至细胞全部脱落悬浮，将细胞悬液吸出分装至2~3 个培养瓶中，再加入适量DMEM 培养基和胎牛血清，血清浓度为10%，放入培养箱中静置培养。
传代第2 天吸出原培养
液，加入新培养液。
细胞约2~3 天传代1 次。
3、细胞冻存
细胞冻存前一天更换培养基，观察细胞生长情况，使细胞处于指数生长期。
按照细胞传代的方法收集，去少量细胞悬液在倒置显微镜下进行细胞计数。
然后将细胞悬液吸入离心管，1000 rpm 离心6min，弃上清，吸取细胞冻存液，吹打混匀细胞，使细胞密度为1×107个/ml，将细胞悬液吸入冻存管中严密封口，冻存管做标记。
先将冻存管放入4ºC 冰箱30 min，接着置于-20ºC 冰箱1 h，再移入超低温冰箱中保存。
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实验结果
若染色适中，间期核及染色体为金黄色，油镜 观察，可在某些染色体上看到成对的黑色小点， 此即为银染NOR（Ag- NOR）。
若整张片子色淡，间期核及染色体都不易看清， 为染色时间不足，在未滴过香柏油的情况下， 可重新续染。
若染色时间偏长，则染色体为棕色，此时，仍 可看到黑色的NOR，只是NOR与染色体间的反差 较低。染色严重过度时，整张片子都布满黑色 沉淀，这样的标本一般都丢弃不用。若标本珍 贵，也可采用特殊方法褪色后重新染色。
试剂2
50%硝酸银溶液 氨银溶液：
4g硝酸银溶于5ml蒸馏水，再加入5ml浓氨 水
3%甲醛溶液：3ml36%甲醛液，加蒸馏 水97ml，用4g无水醋酸钠调节pH7， 4℃保存。使用前用甲酸调pH4.5
动物染色体制备方法和步骤
秋水仙素处理
实验前3~4h，按动物每克体重2~4μg的剂 量，腹腔注射秋水仙素
实验材料
小白鼠或青蛙
实验仪器、用具
天平 离心机 温箱（或水浴锅） 显微镜 酒精灯
注射器（1ml） 解剖盘 解剖剪 刀片 离心管 吸管 烧杯 冰冻载玻片
试剂1
C理盐水 0.1%秋水仙素溶液
用生理盐水配制
1/15 mol/L磷酸缓冲液（pH7.4） Giemsa染液
固定
沿管壁逐滴加入固定液600ul，吹打成悬 液，室温固定20min，离心。重复此操作 一次。最后用500ul固定液将沉淀悬浮。
动物染色体制备方法和步骤
滴片
用镊子取预先冰冻的干净载玻片，迅速滴 上2~3滴细胞悬液，立即用嘴向同一方向 吹气，使细胞分散均匀，然后置酒精灯上 微微加热干燥
Giemsa染液染色30min，镜检
注意事项
硝酸银现配现用 银染液可使衣服、皮肤染色，小心操作 3%甲醛工作液pH必须为4.5
作业
在油镜下绘制一中期分裂相图 （Ag-NOR的位置、数目和形态）。
思考题
分析你做的标本的优劣，并分析要使实 验中的成功应注意哪些问题
注意事项
低渗处理是实验成败的关键 处理和操作过程中注意要有利于细胞完
整和染色体的伸展、分散
作业
绘出骨髓细胞分裂中期染色体核型图 指出染色体数目（2n）
NOR的显示实验步骤
快速银染法(可选）：
在染色体标本上滴加含1%甲酸的2%明 胶水溶液3滴，再加50%硝酸银3滴，混合 后盖上盖片，将标本置于60℃恒温台上处 理至液体为棕黄色为止，自来水冲洗，空 气干燥，镜检。
NOR的显示实验步骤
氨银染色法（建议）
标本上滴加4-8滴50%硝酸银溶液，立即覆以盖玻 片，放入潮湿密封的培养皿中，37℃温箱中2448h，或50℃2-5h
流水冲去盖玻片，蒸馏水洗2次，室温晾干 加4d氨银溶液和4d3%甲醛溶液（pH4.5）于染色
体标本上，立即覆以盖玻片，室温12min 流水冲去盖玻片，蒸馏水洗净 2%Giemsa染色10-15min 水洗，空气干燥，镜检。
细胞生物学综合性实验
细胞生物学综合性实验
动物骨髓细胞染色体标本的制备及 NOR的观察
骨髓细胞具有丰富的细胞 质和高度分裂能力，可直接观 察到分裂细胞，是研究动物细 胞遗传学的好材料。
实验目的
掌握动物骨髓细胞染色体标本的制备技 术
观察染色体的数目以及形态特征 熟悉银染法显示动物细胞NOR的原理和
方法，并了解NOR在细胞中分布情况
实验原理
经秋水仙素处理后，分裂的骨髓细胞被阻断在有丝 分裂中期，再经离心、低渗、固定、滴片等步骤， 便可制作出理想的染色体标本。
银染法可以显示中期染色体上的核仁组织区 （NOR）。当NOR在间期转录时，产生一种与转录 活动有关的酸性蛋白，此蛋白可保留至中期并能将 染液中的银离子还原为金属银而显现为黑色。所以 银染法可在中期染色体上显示具有转录活性的NOR 数目。而且，染色的深黑程度，还可以反应出基因 的活性高低。
收集骨髓细胞
处死动物后，立即取出股骨，用刀片剔掉 肌肉，切开股骨两端，用吸有生理盐水的 注射器插入股骨的上端，冲出骨髓细胞至 离心管中，直至股骨变白色为止。
将收集的骨髓细胞于1000rpm离心10min
动物染色体制备方法和步骤
低渗处理
离心后加入600ul蒸馏水，用吸管轻轻吹 打成细胞悬液，置37℃低渗20min