细胞培养基本操作技能
细胞培养注意事项大全
细胞培养注意事项大全一、细胞培养实验室的基本要求细胞培养实验室必须具备以下设施和基本条件，以确保实验的准确性和可靠性，同时为研究人员提供一个安全、舒适的工作环境。
1.实验室布局：实验室应合理布局，功能明确，便于清洁和消毒。
室内布局包括细胞培养区、仪器设备区、试剂储存区、清洗区、办公区等。
各区域应相对独立，避免交叉污染。
2.实验室温度和湿度：实验室应保持恒定的温度和湿度，通常温度为20-26℃，湿度为40%-60%。
3.空气洁净度：细胞培养对空气洁净度要求较高，建议配备高效空气过滤器（HEPA），确保室内空气洁净。
4.光照和空气流通：实验室应有良好的自然光照或人工照明，同时具备良好的空气流通性。
5.电源和插座：实验室应提供稳定的电源和充足的插座，以满足各种仪器设备的需要。
6.实验台和储存柜：实验台应具备防震、防腐、防火等功能，储存柜应具备防潮、防尘、防霉等功能。
7.清洁和消毒设施：实验室应配备适当的清洁和消毒设施，如紫外线灯、酒精灯、灭菌器等。
8.防护设备：实验员应佩戴防护设备，如实验服、一次性手套、口罩等，以防止细胞培养过程中的污染和交叉污染。
二、细胞培养的基本操作细胞培养是一项技术性很强的工作，需要掌握各种基本操作技能，以保证实验的准确性和可靠性。
以下是细胞培养的一些基本操作。
1.细胞复苏：将冷冻保存的细胞从液氮中取出，迅速放入37℃水浴中融化，然后离心洗涤、消化，最后加入新鲜的细胞培养基中。
2.细胞传代：当细胞密度达到一定程度时，将细胞从培养瓶中取出，消化成单个细胞，然后分种到新的培养瓶中继续培养。
3.细胞冻存：将处于对数生长期的细胞消化成单个细胞，然后与冷冻保护剂混合后放入低温冰箱中冷冻保存。
4.细胞观察：定期观察细胞的生长状况，包括生长速度、形态、颜色等方面。
5.细胞计数：通过显微镜或细胞计数仪对细胞数量进行计数，以评估细胞的生长速度和密度。
6.细胞分离：根据细胞的密度、大小、表面电荷等特性，通过离心、过滤等方法将不同细胞分离出来。
细胞实验报告反思总结(3篇)
第1篇一、前言细胞实验作为生物学研究的重要手段，在揭示生命现象、探索疾病机制、开发新型药物等方面发挥着至关重要的作用。
本次实验报告针对我所参与的细胞实验进行反思总结，旨在提高实验技能、优化实验设计、提升实验结果的可信度。
二、实验目的本次实验旨在：1. 掌握细胞培养的基本操作技能，包括细胞传代、细胞接种、细胞计数等。
2. 熟悉细胞实验所需的器材和试剂，了解其作用和用途。
3. 分析实验结果，探讨实验现象背后的生物学机制。
三、实验过程1. 细胞传代：在实验过程中，我们严格按照细胞传代操作规程进行，确保细胞在适宜的培养条件下生长。
通过观察细胞生长状态、调整传代比例，保证了细胞的活力和数量。
2. 细胞接种：在细胞接种过程中，我们遵循无菌操作原则，确保细胞在无菌条件下生长。
同时，根据实验需求调整接种密度，为后续实验提供充足细胞资源。
3. 细胞计数：在细胞计数实验中，我们熟练运用血球计数板进行细胞计数，并对计数结果进行统计分析。
通过对比不同处理组的细胞数量，分析实验现象背后的生物学机制。
4. 实验数据分析：在实验数据分析过程中，我们运用统计学方法对实验数据进行分析，探讨实验现象背后的生物学机制。
同时，对实验结果进行合理的解释和推断。
四、实验反思1. 实验操作方面：（1）在细胞传代过程中，我们应严格按照操作规程进行，避免细胞污染和传代失败。
（2）在细胞接种过程中，应注意无菌操作，防止细胞污染。
（3）在细胞计数过程中，应保证计数准确，避免人为误差。
2. 实验设计方面：（1）在实验设计过程中，应充分考虑实验目的和实验条件，确保实验结果具有可重复性和可靠性。
（2）在实验过程中，应密切关注实验现象，及时调整实验参数，优化实验设计。
（3）在实验结果分析过程中，应运用多种统计学方法，提高实验结果的可信度。
3. 实验结果分析方面：（1）在实验结果分析过程中，应充分挖掘实验数据，探讨实验现象背后的生物学机制。
（2）在实验结果解释过程中，应结合相关文献，对实验结果进行合理的解释和推断。
细胞培养的操作步骤
细胞培养的操作步骤细胞培养是一种在体外培养和繁殖细胞的方法，广泛应用于医学、生物学和生物工程等领域。
下面是细胞培养的操作步骤，包括细胞的收获、传代和检测。
1.材料准备：- 细胞培养基：选择适合细胞类型和培养要求的培养基，常用的包括DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）和RPMI（Roswell Park Memorial Institute）等。
-细胞：选择合适的细胞系，如人类胚胎肺成纤维细胞（HELF）和小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）等。
-细胞培养器具：包括培养皿、细胞培养瓶、细胞离心管等。
2.细胞收获：-细胞培养器具消毒：用70%乙醇或其他消毒剂将培养器具进行消毒。
-细胞培养基预热：将所需的培养基预先加热至37摄氏度。
-细胞培养皿涂覆：将培养皿或瓶子内壁涂覆一层细胞黏附物，如明胶或聚-卵氨酸等，以增加细胞附着。
3.细胞传代：-培养基预热：将所需的培养基预先加热至37摄氏度。
-细胞收获：将细胞培养瓶中的培养基倒掉，用生理盐水等缓冲液洗涤细胞。
- 细胞分离：使用胰酶（Trypsin）或胰蛋白酶（Trypsin-EDTA）将细胞从细胞培养瓶上析离下来。
-细胞计数：使用显微镜和细胞计数板对细胞进行计数，以确定细胞的密度。
-细胞培养：将细胞培养在新的细胞培养瓶中，加入适量的预热培养基。
4.细胞检测：-细胞形态观察：使用倒置显微镜或显微摄像系统观察细胞的形态变化和增殖情况。
- 细胞活力检测：使用细胞活力检测试剂，如MTT（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）或CCK-8（Cell Counting Kit-8）等，评估细胞的存活率和代谢活力。
- 细胞凋亡检测：使用凋亡检测试剂盒，如Annexin V-FITC和PI （Propidium Iodide）等，评估细胞凋亡的程度。
细胞传代培养的原理及操作步骤细胞冻存细胞复苏
细胞传代培养的原理及操作步骤细胞冻存细胞复苏1.准备培养器具和试剂：清洁并消毒培养器具，准备好所需的培养基、培养皿、细胞传代液等。
2.涂覆培养皿：将培养皿内涂覆一层适宜的基质（如凝胶、基质蛋白等）使细胞黏附在培养皿表面。
3.移植细胞：将细胞传代液中的细胞取出，经过适当的处理（如洗涤），将其转移到新的培养皿中。
可选择不同的分离方法，如以胰酶来切割细胞聚集物或以细胞转染剂来解离细胞。
4.培养细胞：将新的培养皿放入恒温培养箱中，提供适宜的培养基和环境条件（如温度、湿度、CO2浓度等），使细胞可以继续增殖和生长。
5.观察细胞生长：每天观察细胞的形态、数量和健康状况，记录细胞的生长曲线和其他相关信息。
6.传代细胞：当细胞生长到达一定程度（一般为80-90%的密度）时，可将细胞传代到新的培养皿中。
首先将细胞培养液抽吸并丢弃，并用适当的缓冲液（如PBS）洗涤细胞数次，以去除细胞培养液中的残留物。
接着加入胰酶等酶消化液，使细胞分离，并加入培养基将细胞转入新的培养皿中。
7.重复培养：重复以上步骤，使细胞不断地进行传代培养。
细胞冻存及复苏：细胞冻存是将细胞在低温条件下保存，以便长期保持细胞的活力和功能。
细胞冻存可避免细胞在传代培养中的漂变和突变，并保持细胞库的物种多样性。
而细胞复苏则是指将冻存的细胞重新从冷冻状态回复到活跃状态，以供进一步的研究或应用。
细胞冻存及复苏的步骤如下：1.准备培养器具和试剂：清洁并消毒培养器具，准备好所需的培养基和冻存液。
2.预培养：将要冻存的细胞在新鲜的培养基中进行预培养，以使细胞处于最佳的生长状态。
3.细胞冻存液配制：根据细胞的特性和需要，配制适宜的冻存液。
一般来说，冻存液中含有维持细胞生存的缓冲剂、保护剂（如DMSO）、营养物质和蛋白质（如血清）等。
4.细胞冻存：将细胞培养液去掉，并用PBS洗涤细胞数次，以去除细胞培养液中的残留物。
然后加入适量的冻存液，使细胞和冻存液混合均匀。
最后将混合物分装到试管或冷冻管中，并迅速放入低温处。
细胞培养室操作规程
细胞培养室操作规程1. 引言在细胞培养室进行实验时，需要遵循一定的操作规程，以确保实验的顺利进行并保护实验人员和细胞的安全。
本文档旨在提供详细的细胞培养室操作规程。
2. 实验前准备在进行细胞培养室实验前，需要做好以下准备工作：- 穿戴实验室制定的个人防护装备，如实验服、手套、口罩和护目镜。
- 检查实验室设备和操作台的清洁度，并确保工作区域整洁无杂物。
- 准备实验所需的培养基、细胞培养物和实验器材，并进行必要的消毒处理。
- 检查培养器具和实验器材的完整性和干净程度。
3. 实验操作在进行细胞培养室实验时，需按照以下操作规程进行：- 打开细胞培养室的门时，先用消毒剂擦拭手部，然后使用洗手液洗手并彻底冲洗干净。
- 进入细胞培养室后，先进行操作台和培养器具的消毒处理，使用消毒剂彻底擦拭工作面和器具表面。
- 进行各项实验操作前，务必佩戴好手套，勿将裸露的手部接触培养物或实验器材。
- 操作过程中，避免发生剧烈动作和摇动，以防止细胞培养物的污染。
- 操作完成后，彻底清洁和消毒操作台、培养器具和实验器材，确保无残留。
4. 废弃物处理细胞培养室中产生的废弃物需按照以下要求进行处理：- 生物废弃物和污染物应放入专用的标有生物危险标志的中，严禁随意丢弃。
- 已消毒处理的实验器皿和培养器具应单独收集，放入装有消毒液的中浸泡，待处理完毕后进行干燥和垃圾分类处理。
5. 安全措施在细胞培养室实验中，请注意以下安全措施：- 不得在实验室内饮食、吸烟或使用化妆品。
- 注意保持良好的个人卫生，经常洗手、勤换手套，避免感染的交叉传播。
- 遇到实验室事故或异常情况时，应立即向负责人报告，并按照相关应急预案进行处理。
6. 总结细胞培养室操作规程的遵守对于实验的成功和细胞的安全至关重要。
在进行实验前准备、实验操作、废弃物处理和安全措施等方面都需要严格按照规程执行。
保持实验室整洁和个人卫生，是保证实验可靠性和重复性的基础。
动物细胞培养方法
动物细胞培养方法
动物细胞培养是一种常用的实验手段，广泛应用于细胞生物学、药物研发、生物医学研究等领域。
以下是一般性的动物细胞培养方法：
1.细胞系的选择：选择合适的动物细胞系是动物细胞培养的第一步。
细胞系的选择要考虑细胞类型、来源、生长特性和用途等因素。
2.细胞培养基的准备：准备适用于所选细胞系的培养基。
培养基包括基本培养基和补充物，如生长因子、抗生素等。
不同的细胞系需要不同的培养基。
3.细胞的解冻：从冷冻保存的细胞库中取出细胞，进行解冻。
解冻过程要尽可能快速，以减少细胞对冷冻损伤的敏感性。
4.细胞传代：当细胞达到一定的密度时，需要将其传代，以维持细胞的生长状态。
传代过程包括细胞的分离、计数和重新接种。
5.细胞培养条件的控制：控制培养条件，包括温度、湿度、CO2浓度等。
通常细胞培养箱会提供稳定的培养环境。
6.细胞的观察和检测：定期观察细胞的形态、生长状态，并进行必要的细胞检测，如细胞计数、细胞周期分析等。
7.防止细胞污染：严格遵循无菌操作规程，防止培养物受到细菌、真菌、支原体等的污染。
使用无菌操作室和经过无菌处理的实验器材。
8.制备细胞冻存物：定期制备细胞冻存物，以备将来使用。
冻存物的制备需要使用适当的冻存液和合适的冷冻保存温度。
9.特殊操作：针对具体实验需求，可能需要进行细胞转染、感染、药物处理等特殊操作。
在进行动物细胞培养时，实验者需具备丰富的培养经验和相关技能，同时需按照实验室的标准操作规程进行操作，以确保实验的准确
性和可重复性。
细胞培养技术教案
细胞培养技术教案
一、课程名称：细胞培养技术
二、教学目标：
1. 了解细胞培养的基本原理和方法。
2. 掌握细胞培养的操作技能和注意事项。
3. 了解细胞培养在生物医学研究中的应用。
三、教学内容：
1. 细胞培养的基本原理和方法
- 细胞培养的定义和意义。
- 细胞培养的基本条件：培养基、血清、细胞因子等。
- 细胞培养的方法：原代培养、传代培养、细胞系建立等。
2. 细胞培养的操作技能和注意事项
- 细胞培养的基本操作：细胞接种、细胞传代、细胞冻存等。
- 细胞培养的注意事项：无菌操作、培养环境、细胞状态等。
3. 细胞培养在生物医学研究中的应用
- 细胞培养在药物筛选中的应用。
- 细胞培养在疾病模型建立中的应用。
- 细胞培养在基因工程中的应用。
四、教学方法：
1. 课堂讲授。
2. 实验操作演示。
3. 小组讨论和案例分析。
五、教学要求：
1. 掌握细胞培养的基本原理和方法。
2. 掌握细胞培养的操作技能和注意事项。
3. 了解细胞培养在生物医学研究中的应用。
六、教学评价：
1. 课堂测试。
2. 实验操作考核。
3. 课程论文。
七、教学材料：
1. 教材：《细胞培养技术》。
2. 实验材料：培养基、血清、细胞株等。
3. 参考资料：相关研究论文、学术期刊等。
细胞生物学的实验方法与技巧
细胞生物学的实验方法与技巧细胞生物学是研究细胞结构和功能的科学领域。
在细胞生物学中，实验方法和技巧是非常关键的。
细胞生物学的实验技术涉及到多种技术和方法，包括细胞培养、细胞分离、荧光显微镜、分子生物学等等。
在本文中，我们将会详细讨论细胞生物学中的实验方法和技巧。
一、细胞培养技术细胞培养技术是研究细胞生长、增殖、衰老等生理状态的一种重要的实验技术。
细胞培养技术通常需要使用一个适宜的培养基，该培养基还需要添加适当的营养物质和培养物质。
在培养细胞时，需要注意适宜的温度、湿度、和二氧化碳含量等因素，这些因素可以影响细胞的状态和生命活动。
另外，在细胞培养中，不可避免地会遇到一些问题，例如细胞的寿命、细胞的死亡、菌污染等问题。
为避免这些问题，需要在实验中采取一些必要的预防措施。
例如，可以使用无菌操作技术，采用CDMF等杀菌剂消毒培养器、培养器中的培养物料，这样可以有效防止细胞因菌污染而死亡。
二、细胞分离技术细胞分离技术是研究细胞的单个特性、形态和功能的一种技术。
在实验中需要利用细胞分离技术来获得一定数量的单个细胞。
细胞分离技术有多种方法，包括分离器分离、离心分离、胶体分离和酶消化等，每种方法都有其优缺点。
其中，酶消化是一种比较常见的细胞分离方法，通过加入一定量的酶，将组织内的胶原纤维、纤维素及其他基质物质消化掉，从而获得单个细胞。
在酶消化实验中，需要根据不同细胞类型、不同组织、不同生长状态等因素进行调整，以获得最佳效果。
三、荧光显微镜技术荧光显微镜技术是一种广泛用于生物学和生命科学中的高级显微镜技术。
在细胞生物学研究中，荧光显微镜技术是最常用的技术之一，因为它可以用来标记和检测细胞内的各种生物大分子，如蛋白质、核酸、酶等。
在荧光显微镜实验中，使用的荧光探针要与待检测的细胞相匹配，例如，使用荧光染料DPH来探测细胞内外膜分子的相互作用。
同时，还需注意荧光显微镜的光源选择、荧光图像的采集和分析等问题，以获得高质量的研究数据。
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细胞培养基本操作技能无菌操作基本技术1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。
操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。
5. 定期检测下列项目：5.1. CO2 钢瓶之CO2 压力5.2. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。
5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300 小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。
实验用品1. 种类︰1.1. 细胞培养实验用品均为无菌，除了玻璃容器与pasteur pipet 外，其它均为塑料无菌制品。
1.2. TC 级培养盘表面均有coating 高分子物质以让细胞吸附，培养容器种类有Tflask, plates, dishes, roller bottle 等，依实验需要使用。
1.3. plastic sterile pipet: 1 ml, 2 ml,5 ml, 10 ml, 25 ml1.4. 塑料离心管: 15 ml, 50 ml，均有2 种不同材质，其中polypropylene (PP) 为不透明材质，polystyrene (PS) 为透明材质，可依实验需要而选择适合材质之离心管。
1.5. glass pastuer pipet: 9 inch，用以抽掉废弃培养液等。
1.6. 玻璃血清瓶(Pyrex or Duran glassware)：100 ml, 250 ml,500 ml,1000 ml2. 清洗︰2.1. 新购玻璃血清瓶先以0.1~0.05 N HCl 浸泡数小时，洗净后才开始使用。
2.2. 用过之玻璃血清瓶，以高压蒸汽灭菌，洗净后分别用一次与二次去离子水冲洗干净，勿加清洁剂清洗。
3. 灭菌︰3.1. 实验用玻璃血清瓶以铝箔纸包覆瓶盖，高压蒸汽灭菌121 oC, 15 lb, 20 分钟，置于oven 中烘干。
3.2. 实验用玻璃pasteur pipet 以干热灭菌170 oC, 4 小时。
3.3. 液体或是固体废弃物可用10 % hypochloride 溶液(次氯酸，即漂白水) 或是蒸汽高压灭菌121 oC, 15 lb, 20 分钟处理。
培养基1. 液体培养基贮存于4 oC 冰箱，避免光照，实验进行前放在37 oC 水槽中温热。
2. 液体培养基(加血清) 存放期为六个月，期间glutamine 可能会分解，若细胞生长不佳，可以再添加适量glutamine。
3. 粉末培养基配制(以1 升为例)：3.1. 细胞培养基通常须添加10 % 血清，因此粉末培养基之配制体积为900 ml，pH 为7.2 - 7.4。
NaHCO3 为另外添加，若将NaHCO3 粉末直接加入液体培养基中会造成pH 之误差，或局部过碱。
因此粉末培养基及NaHCO3 粉末应分别溶解后才混合，然后用CO2 气体调整pH，而非用强酸(HCl)或强碱(NaOH)，因为氯离子对细胞生长可能有影响，且贮存时培养基的pH 易发生改变。
3.2. 材料：3.2.1. 纯水(milli-Q 水或二次至三次蒸馏水，水品质非常重要)3.2.2. 粉末培养基3.2.3. NaHCO3 (Sigma S-4019)3.2.4. 电磁搅拌器3.2.5. 无菌血清瓶3.2.6. 0.1 或0.2 mm无菌过滤膜3.2.7. pH meter3.2.8. 真空帮浦3.2.9. CO2 气体3.3. 步骤：3.3.1. 取粉末培养基溶于700 ml milli-Q 水中，搅拌使其溶解。
3.3.2. 称取适量之NaHCO3 粉末(数量依培养基种类而异，表一)溶于200mlmilli-Q 水中，搅拌使其溶解，然后通入CO2 气体至饱和，约3-5 分钟。
3.3.3. 将溶解且含饱和CO2 之NaHCO3 溶液加入溶解之液体培养基中混合。
混后溶液之pH 应为7.2-7.4，除非pH 值偏差太大，否则不需用酸碱再调整之。
若为太碱，可再通入CO2 气体调整pH。
培养基以真空帮浦通过过滤膜时，pH 会升高0.1-0.2。
3.3.4. 以0.1 或0.2 mm 无菌过滤膜过滤灭菌，同时分装至无菌容器中，标示培养基种类、日期、瓶号等，贮存于4 oC。
(血清亦可加入培养基中一起过滤)3.3.5. 配制之培养基配制须作生长试验与污染测试。
4. 配制培养基之生长测试4.1. 材料：4.1.1. MDCK cell (A TCC CCL-34 或CCRC 60004)4.1.2. 6-well TC plate (or 35 mm TC dish)4.1.3. methanol4.1.4. glacial acetic acid4.1.5. 10 % Giemsa solution (GibcoBRL 10092-013)4.2. 步骤：4.2.1. 以待测试培养基培养MDCK cell，接种MDCK 细胞于6-well plate (或35mm TC dish) 中，每个well 接种1 ×102 活细胞，同时作对照组实验。
4.2.2. 接种5～7 天后，在100 倍倒立显微镜作观察细胞群落之生长，待细胞群落大到可以肉眼观察，而群落间不互相接触时即可。
4.2.3. 去除培养基，加入1 ml Carnoy’s 固定液(甲醇：冰醋酸﹦3:1)，室温下静置10 min。
4.2.4. 去除固定液，水洗二次。
4.2.5. 加入1 ml 10 % Giemsa solution，，室温下静置染色2-3 min。
4.2.6. 去除染液，水洗二次。
4.2.7. 以肉眼计数群落数，并比较之，若新配制或新批号的培养基对细胞生长不佳，则丢弃之。
抗生素1. 细胞库之细胞培养基不加抗生素1.1. 培养自A TCC 引进之细胞株，培养基中不加抗生素。
1.2. 培养自其它实验室引进之细胞株，制作token freeze 前培养基须添加抗生素，待token freeze 通过污染测试后，大量培养时则不加抗生素。
2. 寄送活细胞时，须将培养液充满整个flask 时，则须添加抗生素(penicillin 100 units/ml +streptomycin 100 ug/ml)。
3. 若要检测mycoplasma，则培养基内不可添加gentamicin，因gentamicin 会抑制mycoplasma 生长。
4. 去除细菌污染之抗生素混合配方: penicillin 250 units/ml, streptomycin 250 ug/ml, neomycin250 ug/ml, bacitracin 2.5 units/ml，注意混合使用后药物毒性会增强。
5. 抗生素使用种类与浓度：工作浓度. 储存温度. 杀灭细菌penicillin 100 units/ml -20℃G(+) bacteriastreptomycin 100 ug/ml -20℃G(+) and G(-) bacteriachlotetracycline 50 ug/ml -20℃G(+) and G(-) bacteriagentamicin 50 ug/ml -20℃G(+) and G(-) bacteria, mycoplasmaamphotericin B 2.5 ug/ml -20℃yeast and moldsnystatin 50 ug/ml -20℃yeast and moldsfungizone 2.5ug/ml -20℃yeast and molds血清1. 血清必须贮存于–20 ～-70 oC，若存放于4 oC，请勿超过一个月。
如果一次无法用完一瓶，可将40～45 ml 分装于无菌50 ml 离心管中，由于血清结冻时体积会增加约10 %，必须预留此膨胀体积之空间，否则易发生污染或容器冻裂之情形。
2. 一般厂商提供之血清为无菌，不需再无菌过滤。
若发现血清有许多悬浮物，则可将血清加入培养基内一起过滤，勿直接过滤血清。
3. 瓶装(500ml) 血清解冻步骤(逐步解冻法): -20 oC 或–70 oC 至4 oC 冰箱溶解一天，至室温下全溶后再分装，一般以50 ml 无菌离心管可分装40～45 ml。
在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沈淀的发生。
勿直接由–20 oC 直接至37 oC 解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沈淀。
4. heat-inactivation 是指56 oC, 30 分钟加热已完全解冻之血清。
加热过程中须规则摇晃均匀。
此热处理之目的是使血清中之补体成份(complement) 去活化。
除非必须，一般不建议作此热处理，因为会造成沈淀物之显著增多，且会影响血清之品质。
补体参与之反应有：cytolytic activities, contraction of smooth muscle, release of histamine from mast cells and platelets, enhanced phagocytosis, chemotaxis and activation of lymphocytic and macrophage celltype。
5. 勿将血清置于37 oC 太久，若在37 oC 放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定之成份亦会因此受到破坏，而影响血清之品质。