2012 胡萝卜组织培养
高中生物实验：胡萝卜的组织培养
高中生物实验：胡萝卜的组织培养一、实验目的：胡萝卜是细胞和组织培养中常用的经典材料，是教学实验的良好材料。
通过本实验实训，要求学生熟悉胡萝卜离体根培养的基本方法和步骤，掌握愈伤组织诱导的基本技能。
二、实验原理：植物体的茎，根，叶细胞一般都具有全能性，在一定条件的营养和激素等条件下，可以脱分化形成愈伤组织。
将愈伤组织转接到含有不同激素成分的培养基上，就可以诱导其再分化生成胚状体或丛芽，进而发育成完整的小植株。
植物组织培养的全过程，证明了分化的植物细胞，仍具有形成完整植株所需要的全部基因。
三、实验用具：超净台解剖刀刮皮刀不锈钢打孔器培养皿温箱四、方法步骤：1. 将胡萝卜用自来水冲洗干净，用刮皮刀除去表皮1-2mm，横切成大约10mm厚的切片。
以下步骤均在无菌条件下进行。
2. 胡萝卜片经70%乙醇处理30秒钟后，用无菌水冲洗一遍，再用、2%的次氯酸钠溶液浸泡10分钟，无菌水冲洗3~4次。
3. 将胡萝卜片放入培养皿中，一手用镊子固定胡萝卜片，一手用打孔器垂直打孔，每个小孔打在靠近维管形成层的区域，务必打穿组织。
然后从组织片中抽出打孔器，将胡萝卜组织片收集在装有无菌水的培养皿。
重复打孔步骤，直至收集到足够数量的组织圆片。
4. 用镊子取出组织圆片，放入培养皿中，用刀片将组织圆片切成2mm长的小块，放入装有无菌水的培养皿中。
在整个操作过程中镊子和解剖刀要多次火焰消毒，冷却后再使用。
5、将胡萝卜组织小块放到灭过菌的滤纸上，吸干水分后接种到培养基表面。
注意接种时培养瓶要有一定倾斜度，接种过程中镊子不要直接在培养基上方完成，以减少污染机会。
6、将培养物一部分置于25。
C温箱中暗培养，另一部分到光照培养室中进行培养，以比较光照和暗培养对愈伤组织诱导的反应。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计背景介绍：胡萝卜是一种常见的蔬菜，富含多种维生素和营养物质，对人体健康有益。
为了提高学生对胡萝卜的认识和了解，培养学生对胡萝卜的种植和养护技能，本次教学设计旨在通过胡萝卜组织培养的实践活动，引导学生了解胡萝卜的生长过程和培养技术。
教学目标：1. 知识目标：了解胡萝卜的生长过程和培养技术。
2. 技能目标：掌握胡萝卜组织培养的操作步骤和技巧。
3. 情感目标：培养学生对农业和植物生长的兴趣，增强学生的实践动手能力。
教学内容：1. 胡萝卜的生长过程介绍：播种、发芽、生长、收获。
2. 胡萝卜组织培养的原理和意义。
3. 胡萝卜组织培养的操作步骤和技巧。
教学步骤：步骤一：胡萝卜的生长过程介绍（10分钟）1. 教师通过图片或视频展示胡萝卜的生长过程，介绍播种、发芽、生长和收获的各个阶段。
2. 引导学生观察和描述胡萝卜在不同生长阶段的外观特征和变化。
步骤二：胡萝卜组织培养的原理和意义（15分钟）1. 教师简要介绍胡萝卜组织培养的原理，即通过培养胡萝卜的细胞和组织，在无土条件下实现胡萝卜的生长。
2. 引导学生思考和讨论胡萝卜组织培养的意义，如提高胡萝卜的产量和品质，减少土壤污染等。
步骤三：胡萝卜组织培养的操作步骤和技巧（40分钟）1. 教师向学生介绍胡萝卜组织培养的操作步骤，包括材料准备、组织分离、培养基配制、组织培养和转移等。
2. 演示胡萝卜组织培养的操作过程，并解释每个步骤的目的和注意事项。
3. 学生分组进行实践操作，按照教师的指导完成胡萝卜组织培养的实验。
4. 教师巡回指导学生操作，并及时纠正错误和解答疑惑。
步骤四：实验结果观察和总结（15分钟）1. 学生观察和记录胡萝卜组织培养的实验结果，包括组织生长情况和细胞形态等。
2. 学生根据观察结果，总结胡萝卜组织培养的效果和影响因素。
步骤五：教学反思和讨论（10分钟）1. 教师引导学生回顾整个教学过程，让学生表达对本次教学的感受和收获。
2. 学生提出问题和困惑，教师进行解答和讨论，帮助学生进一步理解和巩固所学知识。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计一、背景介绍胡萝卜是一种常见的蔬菜，富含维生素和纤维素，对人体健康有很多好处。
为了提高学生对胡萝卜的了解和培养他们的兴趣，本教学设计旨在通过多种教学方法和活动，帮助学生全面了解胡萝卜的生长过程和营养价值，并培养学生的观察力、思考能力和动手能力。
二、教学目标1. 知识目标：a. 了解胡萝卜的外观特征和生长环境。
b. 了解胡萝卜的营养成分和对人体健康的好处。
2. 能力目标：a. 培养学生的观察力和描述能力。
b. 培养学生的思考能力和问题解决能力。
c. 培养学生的动手能力和团队合作精神。
3. 情感目标：a. 培养学生对胡萝卜的兴趣和喜爱。
b. 培养学生的环保意识和对自然的敬畏心。
三、教学内容和步骤1. 教学内容：a. 胡萝卜的外观特征和生长环境。
b. 胡萝卜的营养成分和对人体健康的好处。
c. 胡萝卜的种植和生长过程。
2. 教学步骤：步骤一：导入通过展示一些胡萝卜的图片，引起学生对胡萝卜的兴趣，并提问学生对胡萝卜的了解程度。
步骤二：胡萝卜的外观特征和生长环境a. 教师通过图片和文字介绍胡萝卜的外观特征和生长环境。
b. 学生观察并描述胡萝卜的外观特征，教师引导学生进行讨论和总结。
步骤三：胡萝卜的营养成分和对人体健康的好处a. 教师通过图片和文字介绍胡萝卜的营养成分和对人体健康的好处。
b. 学生分组进行小组讨论，总结胡萝卜的营养成分和对人体健康的好处。
步骤四：胡萝卜的种植和生长过程a. 教师通过图片和文字介绍胡萝卜的种植和生长过程。
b. 学生观察并描述胡萝卜的种植和生长过程，教师引导学生进行讨论和总结。
步骤五：实践活动a. 学生分组进行胡萝卜的种植实验，每个小组负责一盆胡萝卜的种植。
b. 学生记录胡萝卜的生长过程，并定期观察和测量胡萝卜的生长情况。
步骤六：总结和展示a. 学生小组展示他们种植的胡萝卜，并分享他们的观察和体验。
b. 教师引导学生总结本次教学的重点和收获，鼓励学生提出问题和思考。
胡萝卜愈伤组织培养论文
胡萝卜愈伤组织的诱导摘要:植物组织培养的基础是利用细胞的全能性即指已经分化了的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能，植物组织培养不仅能使处于分生状态的细胞继续保持分生能力,同时也可以使成熟组织中的细胞恢复分裂能力。
了解胡萝卜的植物组织培养的基本概念、基本原理和操作方法知道分化的植物细胞仍具有形成完整植株所需要的全部基因。
胡萝卜的植物组织培养主要研究不同的植物生长调节剂(2,4-D、6-BA)对胡萝卜脱分化形成愈伤组织速度的影响。
实验表明在母液中加入6-BA(0.5mg/L)+ 2,4-D(1.0mg/L)的不如单独加入2,4-D(2.2 mg/L)形成愈伤组织的速度快,效果好。
关键词：胡萝卜；分化；愈伤组织；诱导一、引言植物组织培养新技术在快繁脱毒、育种、种质资源保存、次生代谢物提取、基因转化等方面有着良好的前景以及研究热点。
在植物育种上的应用：单倍体育种，离体胚培养和体外受精，细胞融合，基因转化，培养细胞突变体、在植物脱毒和快速繁殖上、在人工种子和种质保存方面、在提取植物次生产物生产上、在植物免疫方面的皆能有其应用。
在组织培养过程中，常会遇到一些问题使实验无法进行下去，甚至导致整个实验的失败，给科研和生产造成损失。
如培养过程中的污染，褐变和玻璃化是组织培养中公认的三大难题。
胡萝卜营养价值高,及其适于生食、加工、烹调等多种用途,在世界范围内广泛栽培。
从20世纪初到近几年，胡萝卜一直是科研人员的主要研究对象。
20世纪50年代末Saward等人从胡萝卜根的韧皮部取下一块组织，并将它置于液体培养基中进行培养，使它分化出愈伤组织，然后把从愈伤组织所得到的胚状体转移到固体培养基上继续培养，获得了完整的胡萝卜试管植株。
同一基因型的不同外植体其愈伤组织的发生能力有明显差异，这与不同外植体的分化程度和脱分化能力不同有关。
近年来的研究表明，以胡萝卜下胚轴为外植体出愈率要高于子叶和贮藏根。
培养方法:1、非试管微组织快繁非试管微组织快繁技术是将外植体（一般要求带一叶一芽）放置在室内外普通沙子培养基上进行培养，利用植物腋芽自然倍增达到快速繁殖的目的。
胡萝卜的组织培养
胡萝卜的组织培养（一）组织培养1．准备（1）器具准备：①高压蒸汽灭菌锅：培养基，接种工具，蒸馏水的消毒。
手持喷雾器：装70%的酒精，用于外植体，接种工具，操作人员的消毒。
②超净工作台：用于无菌操作。
③设备：培养架，温度控制器，摇床，光照培养箱，烘干器，蒸馏水器，冰箱，电炉，天平，温度计，酸度计，显微镜，分注器，移液器，磁力搅拌器，④常用玻璃器具：量筒，培养皿，烧杯，50ml锥形瓶，容量瓶，广口瓶，滴管，移液管，试管，酒精灯，玻璃棒，⑤常用金属仪器：镊子，剪刀，解剖刀，解剖针，接种针，刀架⑥其他用品：滤纸，标签，消毒酒精棉球，封口用品（2）试剂：MS基本培养基2,4-D：生长素类似物NAA：生长素类似物6-BA：细胞分裂素类似物酒精（体积分数70%）：消毒次氯酸钠（体积分数20%）：消毒无菌水A.MS基本培养基配方：上述4种储备液+30g蔗糖+8g琼脂+蒸馏水定容至1000mL（pH5.6~5.8）B.分别向MS基本培养基中加入植物激素：（pH5.6~5.8）诱导愈伤组织形成培养基：MS+0.5mg/L 6-BA+0.125 mg/L2,4-D诱导分化芽的培养基：MS+1.0mg/L 6-BA + 0.1 mg/LNAA诱导生根的培养基：MS+0.1 mg/L NAA3.灭菌：灭菌后冷却置于常温下观察3天，检查灭菌是否彻底。
4.取材接种：a．将萝卜洗净削皮切段，擦手消毒。
b．在超净工作台上将萝卜用酒精消毒30秒，用无菌水清洗两到三次，用次氯酸钠溶液处理30min，用无菌水清洗两到三次。
c．用无菌滤纸吸取水分，在培养皿上用无菌刀将萝卜切成1cm厚的横切片，选取有形成层的部位，切取1cm2的小块。
d．将组织块接种到培养基上，封口。
贴上标签，写明材料、日期、编号。
e．将培养基放在23-26°C的恒温箱培养。
4天后观察材料污染情况，14天后，观察愈伤组织生长情况。
5观察记录：每天观察外植体的生长情况，记录愈伤组织的大小、质地、颜色等情况。
胡萝卜愈伤组织培养及继代培养要点
本科学生综合性实验报告
学号：104120265 姓名：段昌福
学院：生命科学学院专业、班级：10应用生物教育B班实验课程名称：胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞悬浮及体细胞胚胎发生培养实验
教师：杨世忠
开课学期：2013 至2014 学年第二学期填报时间：2013 年 6 月日
云南师范大学教务处编印
）无菌操作流程：
二．实验报告
书中横卧着整个过去的灵魂——卡莱尔
人的影响短暂而微弱，书的影响则广泛而深远——普希金
人离开了书，如同离开空气一样不能生活——科洛廖夫
书不仅是生活，而且是现在、过去和未来文化生活的源泉——库法耶夫
书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者———史美尔斯
书籍便是这种改造灵魂的工具。
人类所需要的，是富有启发性的养料。
而阅读，则正是这种养料———雨果。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计背景介绍：胡萝卜是一种常见的蔬菜，富含多种维生素和矿物质，对人体健康非常有益。
为了促进胡萝卜的种植和消费，我们计划开展一项胡萝卜组织培养教学活动。
通过该活动，我们希望能够向学生们介绍胡萝卜的生长过程和培养技术，提高他们对胡萝卜的认识和兴趣。
活动目标：1. 了解胡萝卜的生长过程和培养技术。
2. 培养学生对胡萝卜的兴趣和意识。
3. 培养学生的观察、实验和团队合作能力。
活动内容：1. 胡萝卜生长过程介绍：通过幻灯片或视频展示，向学生们介绍胡萝卜的生长过程，包括种子发芽、幼苗生长、根茎形成等。
2. 胡萝卜培养实验：将学生分成小组，每个小组提供一盆胡萝卜种子和土壤。
指导学生按照正确的方法进行胡萝卜的种植和培养，包括选择适宜的土壤、浇水、施肥等。
3. 观察和记录：学生们每天观察胡萝卜的生长情况，并记录下来。
可以使用相机或绘图的方式记录胡萝卜的不同生长阶段。
4. 团队合作：学生们在小组中共同合作，分工合作，互相帮助，共同完成胡萝卜的培养过程。
鼓励学生们分享经验和交流学习成果。
5. 结果展示：活动结束后，学生们将展示他们培养的胡萝卜植株，并分享他们的观察和记录。
可以组织一个胡萝卜品尝会，让学生们亲自品尝自己培养的胡萝卜。
活动时间安排：1. 第一周：介绍胡萝卜的生长过程和培养技术，并分组进行胡萝卜种植。
2. 第二周至第六周：学生们观察和记录胡萝卜的生长情况，并进行必要的护理工作。
3. 第七周：学生们展示他们培养的胡萝卜植株，并进行品尝会。
活动评估：1. 观察记录评估：根据学生们的观察记录，评估他们对胡萝卜生长过程的理解和观察能力。
2. 团队合作评估：评估学生们在小组合作中的表现，包括分工合作、互相帮助等。
3. 结果展示评估：评估学生们对胡萝卜培养结果的展示和分享能力。
活动资源准备：1. 幻灯片或视频介绍胡萝卜的生长过程。
2. 胡萝卜种子和土壤。
3. 相机或绘图工具用于记录胡萝卜的生长情况。
4. 活动展示和品尝会所需的场地和设备。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计背景介绍：胡萝卜是一种常见的蔬菜，富含多种维生素和矿物质，对人体健康具有重要的保健作用。
为了提高人们对胡萝卜的认识和培养胡萝卜的种植技能，我们计划开展一项胡萝卜组织培养教学活动。
活动目标：1. 培养学生对胡萝卜的兴趣和认识；2. 培养学生的观察和实践能力；3. 培养学生的合作意识和团队精神；4. 培养学生的种植技能和绿色环保意识。
活动内容：1. 胡萝卜的介绍：通过讲解胡萝卜的起源、营养价值、种类等方面的知识，引发学生对胡萝卜的兴趣和好奇心。
2. 胡萝卜的观察：组织学生观察不同种类的胡萝卜，了解其形状、颜色、大小等特点，并让学生用手触摸胡萝卜的表面，感受其质地。
3. 胡萝卜的种植：向学生介绍胡萝卜的种植方法和技巧，包括土壤准备、播种、浇水、施肥等环节。
然后，分成小组，每个小组分配一块土地，让学生亲自动手进行胡萝卜的种植实践。
4. 胡萝卜的生长观察：学生定期观察胡萝卜的生长情况，记录胡萝卜的高度、叶子的颜色、根部的形状等信息，并与其他小组的观察结果进行比较，探讨影响胡萝卜生长的因素。
5. 胡萝卜的采摘和品尝：当胡萝卜生长到一定程度时，学生可以亲自采摘胡萝卜，并进行清洗和处理。
然后，组织学生品尝胡萝卜，了解其口感和味道，并讨论胡萝卜对健康的益处。
6. 胡萝卜的创意应用：鼓励学生发挥创造力，将胡萝卜应用于烹饪、制作美食或制作手工艺品等方面，展示胡萝卜的多样性和可塑性。
活动评估：1. 观察记录：通过学生的观察记录，评估学生对胡萝卜的观察能力和记录能力。
2. 口头表达：组织学生进行小组讨论，让学生分享自己的观察结果和体会，评估学生的口头表达能力和团队合作能力。
3. 作品展示：学生可以展示自己制作的胡萝卜相关作品，如烹饪成果、手工艺品等，评估学生的创意能力和实践能力。
活动时间安排：本次活动预计在一个月内完成，具体时间安排如下：- 第一周：胡萝卜的介绍和观察；- 第二周：胡萝卜的种植和生长观察；- 第三周：胡萝卜的采摘和品尝；- 第四周：胡萝卜的创意应用和活动总结。
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• 切材料时下面没垫滤纸。
• 镊子、刀在酒精灯上烧过立即放到盛酒精的烧杯里。 • 操作时，手、三角烧瓶在盛材料的培养皿上方活动， 容易把菌带到材料上。 • 把接种的切块压入培养基里面。
• 接种时瓶口垂直向上，手、镊子上的脏物掉到瓶里。
• 升汞回收倒入酒精桶里。
一、组织培养基本原理
• 全能性
植物体的每一个完整的细胞都拥有 形成完整植株的全部遗传信息，在一定 的条件下都具有产生一株完整个体的潜 在能力。
• 去分化 去除外植体原有的分化性状，重新进入新 的发育分化状态。
二、组织培养的方法和步骤
1、培养材料的采集
• 选择原则： 根据培养目的、易于诱导、带菌少。 生理状态：幼嫩的组织 取材季节：易成活，生长旺盛 植物的长势：生长健壮的组织 外植体大小：应根据培养目的而定 胚胎培养或脱除病毒，则外植体宜小； 快速繁殖，外植体宜大。 一般外植体大小在0.5～1.0 cm为宜。
2、外植体的表面消毒处理
• 外植体的表面清洗：洗衣粉清洗，吐温。 • 外植体表面灭菌（一般采用2次灭菌法）
先用70%酒精浸10～30s；
转到其它消毒溶液，灭菌液要充分浸没材料。
• 无菌水涮洗
涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类， 涮洗3-l0次左右。
灭菌剂 酒精 氯化汞 漂白粉 次氯酸钙
使用浓度 （%） 70-75 0.1-0.2 饱和溶液 9-10
消毒难易 易 较难 易 易
灭菌时间 0.1-3 2-10 5-30 5-30
灭菌效果 好 最好 很好 很好
次氯酸钠
过氧化氢 抗菌素
2（活性氧）
10-12 4-50mg/L
易
最易 中
5-30
5-15 30-60
很好
好 较好
3、制备外植体与接种
• 将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊子等，在 无菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和 种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。在操作中严禁 用手接触材料。
四、本实验—胡萝卜的接种培养
1、胡萝卜的切块处理
• • • • 2人/组，8瓶/组，留2瓶下次用； 把胡萝卜切成约4cm的段，怎么切呢？ 去除表皮，去除木质部和髓； 切成约40×20×10 mm的条状，共切4块。
皮层 形成层
木质部
韧皮部
2、消毒和清洗
• • •
把切好的材料，放在100 mL的烧杯里，加入75％ 酒精（现配100mL ），浸泡30秒； 然后将外植体转入0.2％升汞中（250mL烧杯装 100mL升汞），浸泡25－30分钟； 把带有升汞的烧杯拿到超净工作台，取出材料， 放入培养皿，用无菌水洗4－5分钟，重复3次。
植物的组织培养
第二节 胡萝卜的组织培养
预备任务
• 2人/组， 2组/1个无菌操作台。
• 每组取如下工具放于无菌操作台上先行灭菌 从306取培养皿、镊子； 从316室取1瓶无菌水和8瓶培养基； 带1个500 mL的烧杯，作废液缸；1个500 mL的烧杯装工业 酒精100mL。 • 注意 放置物品时，先关灭紫外灯，放好后，关上门，再开启紫 外灯； 托盘不能放到无菌操作台里，要带回来。
3、接种与培养
• 把洗净的材料用烧过的镊子夹到盛有滤纸的 培养皿里，去除表面一层，然后切成约 8×8×5 mm的块； 把切好的材料，用烧过的镊子夹到锥形瓶里， 2~3块/瓶，包好封口膜和牛皮纸； 将培养基放回316原位，在23~28℃恒温避光 条件下培养。
• •
五、注意事项
• 防火
实验中要常用酒精消毒、用酒精灯烧镊子、刀具， 注意安全；手上涂酒精，要干后才能接近火源。
七、课后作业及预习
• 课后作业
有几种常用的外植体消毒液？主要原理是什 么？效果如何？
• 预习
根癌农杆菌转化的原理及方法。
实 验
•
步
骤
材料处理 安全第一 1）配75%酒精，倒升汞； 2）把胡萝卜切成约4cm的段； 3）去除表皮、木质部和髓，切成约40×20×10 mm方块，4条。 • 消毒和清洗 4）把切好的材料，放在100 mL的烧杯里，加入75％酒精，浸 泡30秒； 5）然后将外植体转入0.2％升汞中，浸泡25~30分钟，不能超 过30分钟； 6）把带有升汞和组织材料的烧杯拿到超净工作台，取出材料， 放入培养皿，用灭菌水洗4~5分钟，重复3次，用滤纸吸干。 • 接种与培养 7）把洗净的材料用烧过的镊子夹到盛有滤纸的培养皿中，去 除表面一层，然后切成约8×8×5 mm的块； 8）用烧过的镊子将外植体放到培养基上，3块/瓶； 9） 盖好封口膜和牛皮纸，放回316，23~28℃，避光培养。
• 在无菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养 基上，每瓶接种2~4个，防止交叉污染。
• 接种后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养皿 用无菌胶带封口。
三、无菌操作步骤
• 接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开紫外线 灯进行杀菌； • 接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯； • 接种员洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，换穿拖鞋等； • 上工作台后，用酒精棉球搽拭双手（特别是指甲处）和工作 台面； • 用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一 遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干； • 接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳 嗽等； • 接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭菌30分钟， 若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。
• 无菌操作
材料经升汞消毒后，还需严格进行无菌操作；为防 止染菌，手要用酒精擦干净，镊子和刀经常在火焰 上烧，锥形瓶、手不要放在盛材料的培养皿上方。
• 废液处理 实验完后，75%酒精和工业酒精，均应倒回到工业 酒精的罐中 ；升汞有剧毒，小心不要溅出，废液倒 回原处；酒精和升汞千万别搞混。
六、常见错误举例