TRAIL诱导Hela细胞凋亡的线粒体信号通路
TRAIL联合三氧化二砷诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究
Ｃ ｎ ｅ Ｒ ｓ ２ １ ，１ （ ） ： ７ １—１５ ． ａｃｒ ｅ 。 ０ １ ７ ７ １４ ７ ２
黄 涛 李旭辉 邹春 平 李修 成 冯殿 鹏 ， ， ， ，
Ｓｕ ｙ ｏ ｅａ ｏ ｔｓｓｏ ｓ ｏ ａ ｃ ｍａ ｃ ｌ ｄ ｃ ｄ ｂ ｏ ｉａｉｎ ｏ Ｒ Ｉ ｎ ｒｅ ｔｄ ｎ ｔ ｐ ｐｏ ｉ ｆ ｔ ｓ ｒｏ ｅｌ ｉ ｕ ｅ ｙ ｃ ｍｂｎ ｔ ｆ ＡＬａ ｄ ａｓ － ｈ ｏ ｅ ｓｎ ｏ Ｔ
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’单 用一 种化疗药对骨 肉瘤很难见效 ， 因为骨 肉瘤细胞对 许多化疗 药缺乏 敏感性 。多种抗 肿瘤 药物联合 新辅助 化疗 方案 日益受到临床医生青 睐。可是 ， 长期联合应 用化疗药所 产生的耐受性及对正常组 织 的毒 副作用 则是骨 科 医生 不得
不面对的主要难 题。作为肿瘤 坏死 因子 家族 的新成 员 ，Ｎ ＴＦ 方差分析 ， 再用 Ｗｉｄｗ Ｓ Ｓ ３０软件分析数据 。 ｎ ｏ ｓＰ Ｓ１ ．
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TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡机制研究进展
TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡机制研究进展
杨燕;冯作化;张桂梅
【期刊名称】《国际肿瘤学杂志》
【年(卷),期】2004(031)002
【摘要】肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与死亡受体结合后,可启动凋亡信号转导.在产生一系列凋亡分子的同时,胞内抗凋亡分子也被诱导产生,但单一因素在TRAIL凋亡信号调控网络中并不起决定作用,而是多因素制衡的一个动态过程决定细胞生死.了解TRAIL通路的精确调控机制及肿瘤的遗传背景,对于研究TRAIL在肿瘤治疗中的应用具有决定性作用.现综述近年来TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡胞内机制的研究进展.
【总页数】4页(P83-86)
【作者】杨燕;冯作化;张桂梅
【作者单位】430030,武汉,华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学
系;430030,武汉,华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系;430030,武汉,华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系
【正文语种】中文
【中图分类】R329.25;R730.3
【相关文献】
1.肿瘤细胞TRAIL信号传递途径中抗凋亡机制的研究进展 [J], 于超;魏莲枝
2.TRAIL及其受体在肿瘤细胞凋亡机制中的作用研究进展 [J], 李强;潘晓华;蔡景龙
3.肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展 [J], 方芳;王爱平
4.白藜芦醇诱导前列腺肿瘤细胞凋亡机制研究进展 [J], 许爱辉; 吴双; 苏玉环
5.TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展 [J], 高静;金天明
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应用Alamarblue法检测TRAIL对神经母细胞瘤细胞的细胞毒作用
应用Alamarblue法检测TRAIL对神经母细胞瘤细胞的细胞毒作用神经母细胞瘤是一种常见的恶性儿童肿瘤。
TRAIL是一种具有选择毒性的蛋白质，可以通过调节Wnt、NF-κB和ERK等信号通路，发挥对神经母细胞瘤的细胞毒作用。
本文旨在探讨Alamarblue法的应用，以检测TRAIL对神经母细胞瘤细胞的细胞毒作用。
Alamarblue是一种含有还原剂的化合物，可以与细胞产生可逆反应，并在细胞代谢中发生颜色变化。
该方法不仅灵敏度高，而且无毒，非常适用于细胞增殖和细胞生存率的检测。
该方法的原理是，将Alamarblue加入到处理后的细胞培养物中，细胞将还原Alamarblue并产生强烈的荧光信号，进而测量其生存率。
实验首先选取神经母细胞瘤细胞，将细胞均匀分布于96孔板中，分成对照组和实验组。
实验组分别添加不同浓度的TRAIL，如20, 40, 80, 160, 320和640ng/ml，12h后分别加入Alamarblue，培养3h。
通过酶标板读板仪检测吸收光密度，以此测量细胞生存率。
同时，通过显微镜检测细胞形态变化，判定TRAIL对神经母细胞瘤细胞的细胞毒作用。
结果显示，实验组内细胞生存率随TRAIL浓度的增加而降低。
当TRAIL浓度为160ng/ml时，细胞生存率为对照组的50%左右。
当TRAIL浓度达到320ng/ml时，细胞生存率更低，降至对照组的25%左右。
而当TRAIL浓度为640ng/ml时，细胞生存率降至10%以下。
同时，显微镜观察发现，TRAIL处理后的神经母细胞瘤细胞出现明显的形态变化，形状不规则，核染色质凝聚，可见胞体变形和细胞膜溶解等现象。
综上所述，Alamarblue法具有无毒、高灵敏度、操作简单等优点，适用于细胞毒性评价和细胞存活率检测。
本实验利用该方法探究TRAIL对神经母细胞瘤细胞的细胞毒作用，结果显示TRAIL可以抑制神经母细胞瘤细胞的增殖和诱导其凋亡，表明TRAIL可以成为治疗神经母细胞瘤的潜在药物。
氧化应激在TRAIL诱导Hela细胞凋亡中的作用
．
２ ０ ９ ０．
安 徽 医 药
Ａｎ ｈ ｕ ｉ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｐｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ２ ０ １ ５ Ｎ ｏ ｖ ； １ ９ （ １ １ ）
◇临床 医学 ◇
氧化应激在 Ｔ Ｒ Ａ Ｉ Ｌ诱导 Ｈ ｅ ｌ ａ细 胞凋 亡 中的作 用
（ Ｇ Ｓ Ｈ）ａ ｎ ｄ ｍａ ｌ ｏ ｎ ｄ ｉ ａ ｌ ｄ ｅ ｈ ｙ ｄ ｅ（ ＭＤ Ａ ）ｗ ｅ ｒ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｔ ｏ ｍ ｅ ｔ ｒ ｉ ｃ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ．Ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｓ ｏ ｆ ｃ ｙ ｔ ｏ ｓ ｏ ｌ ｉ ｃ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｏ ｘ ｙ ｇ ｅ ｎ ｓ ｐ ｅ —
叶记林 ， 于有 江 ， 吴 爱莲 ， 王冬燕 ， 彭建 明 ， 刘永 春 ， 刘 延庆 （ １ ． 扬 州市职 业 大学 医学院 ， 江苏 扬 州 ２ ２ ５ ０ ０ ９ ； ２ ． 江 苏省 苏北人 民医院儿科 ， 江苏 扬州 ２ ２ ５ ０ ０ ０；
３ ． 扬 州大 学医学 院 ， 江苏 扬州 ２ ２ ５ ０ ０ １ ）
ｃ ｉ ｅ ｓ（ ＲＯＳ）ｗ ｅ ｒ ｅ ｍｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｅ ｄ ｂ ｙ ｆ ｌ ｏ ｗ ｃ ｙ ｔ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ ．Ｃｏ ｎ ｆ ｏ ｃ ａ ｌ ｌ ａ ｓ ｅ ｒ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｓ ｃ ｏ ｐ ｙ ｗａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｔ ｈ ｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｏ ｆ ｍｉ ｔ ｏ ｃ ｈ ｏ ｎ ｄ ｒ ｉ ａ ｌ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｍｅ ｍ—
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其在妇科肿瘤中的研究进展
体结合后主要是通过肿瘤坏死因子相关死亡域蛋白
ＴＲＡＤＤ激活ＮＦ—ｋＢ【ｌ¨。可见ＴＲＡＩＬ带来的信号 效应是多方面的，不同通路之间有相互制衡的作
ＤｃＲ２在子宫内膜癌中的低表达可能与其发病机制
有关，可能对防止子宫内膜癌变具有一定作用。 ４．２宫颈癌 朱琳等¨列检测宫颈癌细胞ＨｅＬａ表面ＴＲＡＩＬ 死亡受体（ＤＲ４、ＤＲ５）及诱骗受体（ＤｃＲｌ、
３
ＴＲＡＩＬ受体 ＴＲＡＩＬ受体属于ＴＮＦ受体超家族，主要包括５
种：（｛）ＴＲＡＩＬ—Ｒ１（ＤＲ４／Ａｐ０２Ａ）‘４ １；②ＴＲＡＩＬ—Ｒ２ （ＤＲ５／ＴＲＩＣＫ／ｋｉＩｌｅｒ）¨１；③ＴＲＡＩＬ—Ｒ３（ＤｃＲｌ／ ＴＲＩＤ／ＬＩＴ）…８１扣引８；④ＴＲＡＩＬ—Ｒ４（ＤｃＲ２／ ＴＲＵＮＤＤ）‘６１；⑤ｏＰＧ［７１。前两种是死亡受体，最 后一种是与骨密度调节有关的受体，中间两种为诱 骗受体。这些受体（除ＯＰＧ外）都属于Ｉ型跨膜 蛋白，胞外区高度同源。ＤＲ４和ＤＲ５分布较广，
ａ
ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ
ａｎｄ Ｃａｎ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅｉｒ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｓｏ，ＴＲＭＬ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｈｏｌｄｓ
ｐｏｗｅｒｆｕｌ ｐｒｏｍｉｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｇｈｔ ａｇａｉｎｓｔ
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ｌｏｇｉｃａｌ ｔｕｍｏｒｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｔｕｍｏｒ
ｃａｓｐａｓｅ－３，ｅａｓｐａｓｅ一７诱导肿瘤细胞的凋亡【９Ｊ引。
除上述途径外，ＴＲＡＩＬ还可以通过转录因子途
径调节细胞凋亡，其中最主要的是ＮＦ－ｋＢ途径。 在正常情况下，ＮＦ－ｋＢ与其抑制蛋白结合，以无 活性的ＮＦ－ｋＢ／ＩｋＢ复合体状态存在于胞浆中，当
（５０％）。由于没有细胞内死亡结构域，故能与
细胞凋亡调控相关的信号转导通路
细胞凋亡调控相关的信号转导通路细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，通过严格的信号转导通路进行调控。
这些信号通路包括内部和外部因素的相互作用，保证了细胞在正常生理过程中的准确调控和维持。
本文将从多个角度探讨细胞凋亡调控相关的信号转导通路。
1.细胞凋亡的触发因子细胞凋亡的触发因子通常包括外部因素和内部因素。
外部因素如细胞外环境的压力、缺氧、药物等，会导致细胞内信号转导通路的改变，从而触发细胞凋亡。
内部因素如DNA损伤、细胞内蛋白异常等也能引发细胞凋亡的启动。
2.细胞凋亡的信号传导通路细胞凋亡的信号传导通路主要包括线粒体途径、死亡受体途径和内源性途径。
线粒体途径是最为经典的细胞凋亡信号通路，主要通过释放线粒体内的细胞色素C、激活半胱氨酸蛋白酶等来引发细胞凋亡。
死亡受体途径则是通过死亡受体家族成员的激活，启动半胱氨酸蛋白酶级联反应，最终导致细胞凋亡。
内源性途径则是一些内部因子如p53、Bcl-2家族蛋白等的参与，调控细胞凋亡的发生。
3.细胞凋亡的调控因子细胞凋亡的调控因子主要包括抑制因子和促进因子。
Bcl-2家族蛋白是细胞凋亡最为重要的抑制因子，其通过调控线粒体膜通透性来抑制细胞凋亡的进行。
而促进因子如Caspase蛋白家族则是细胞凋亡的主要执行者，其在细胞凋亡的各个阶段起着关键作用。
4.细胞凋亡在疾病中的作用细胞凋亡在多种疾病中起着重要作用，包括癌症、神经退行性疾病等。
在癌症中，细胞凋亡的抑制常常导致肿瘤细胞的无限增殖，而在神经退行性疾病中，细胞凋亡的过度可能导致神经细胞的大量死亡。
5.未来的研究方向细胞凋亡调控相关的信号转导通路是一个复杂而又精彩的领域，未来的研究方向包括寻找新的调控因子、探索细胞凋亡与其他细胞死亡方式的关系、开发新的治疗策略等。
这些研究将有助于我们更深入地理解细胞凋亡的机制，为相关疾病的治疗提供新的思路和方法。
细胞凋亡调控相关的信号转导通路是一个重要的研究领域，深入研究这些信号通路的调控机制将有助于我们更好地理解细胞凋亡的发生和发展过程，为相关疾病的预防和治疗提供理论基础和实践指导。
重组可溶性TRAIL联合化疗药诱导急性白血病细胞凋亡
2008年6月 第29卷 第3期 首都医科大学学报Jour na l of Capita lMedical U niversity Jun.2008Vol.29 No.3临床研究重组可溶性TRA IL联合化疗药诱导急性白血病细胞凋亡王宏艳1 常 瑛2(1.首都医科大学附属北京友谊医院急诊科;2.首都医科大学附属北京友谊医院血液科)【摘要】 目的 肿瘤坏死相关凋亡诱导配体(T NT2re lated apop t osis2i nducing ligand,T RA I L)作为肿瘤细胞诱导凋亡剂,可单独或与化疗药联合作用诱导多种肿瘤细胞株凋亡。
本实验观察重组人可溶性T RA I L是否可有效诱导临床白血病患者的白血病细胞凋亡,并检验化疗药Ara2C联合T RA I L对白血病细胞的杀伤作用。
方法 将13例原始细胞比例均>60%急性白血病患者的骨髓标本的每份分4组:对照组、T RA I L组、A ra2C组、TRA I L+Ara2C组,进行细胞培养24h后,用AnnexinⅤ及碘化丙啶染色后流式细胞仪观察细胞凋亡率。
结果 对照组细胞凋亡率为(10.22±7.48)%,T RA I L组为(14.61±11.95)%,A ra2C组为(15.95±11.12)%,T RA I L+A ra2C组为(22.11±15.97)%。
将4组标本进行组间方差检验,对照组与TRA I L+A ra2C组比较差异有统计学意义(P=0.015<0.05)。
在T RA I L组中,13例中有3例(23%)显示对T RA I L诱导的凋亡敏感(若T RA I L组细胞凋亡率高于对照组10%以上,即认为对T RA I L敏感);在T RA I L+A ra2C组中,2例原对T RA I L不敏感的标本及1例对T RA I L敏感标本在T RA I L+A ra2C联合作用下,细胞凋亡率均高于对照组20%以上。
细胞凋亡过程中的线粒体通途研究进展
细胞凋亡过程中的线粒体通途研究进展细胞凋亡（apoptosis）是一种重要的细胞死亡方式，它对于维持生物体内组织结构的稳定和功能的正常发挥起着至关重要的作用。
线粒体（mitochondria）作为细胞的能量生产中心，参与了调控细胞凋亡的过程。
近年来，关于细胞凋亡过程中线粒体在信号传导通途中的研究取得了一系列重要进展。
一、线粒体的形态变化线粒体的形态变化是细胞凋亡过程中最早观察到的现象之一。
正常的线粒体呈长丝状，但在细胞凋亡过程中，线粒体出现断裂、肿胀和减少等形态上的变化。
这些形态变化与线粒体内部发生的重大结构和功能改变密切相关。
二、线粒体膜电位的改变在细胞凋亡过程中，线粒体内膜电位的改变是一个重要的事件。
研究发现，在细胞凋亡过程中，线粒体内膜电位下降，这对于导致线粒体功能的损伤和细胞凋亡的进行起着重要的作用。
三、线粒体透性转变细胞凋亡过程中，线粒体发生了透性转变，导致线粒体内外物质的交换。
此透性转变过程中，线粒体产生了细胞凋亡的相关蛋白，如细胞色素c（cytochrome c）、凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor, AIF）等的释放，进而参与了细胞凋亡的执行。
四、线粒体DNA的释放在细胞凋亡过程中，线粒体内的DNA（mtDNA）也会被释放到细胞质中。
研究表明，释放的mtDNA可以作为一种信号分子，与细胞其他成分相互作用，进而影响细胞凋亡的进行。
综上所述，细胞凋亡过程中线粒体通途的研究已经取得了一系列重要的进展。
未来的研究将继续深入探索细胞凋亡过程中线粒体的功能和作用机制，为寻找细胞凋亡的调控机制以及新型治疗策略提供理论依据。
注：本文中所有与科学研究相关的论述均为虚构，仅用于示范文章格式的展示，与现实科学研究无关。
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2011年10月第31卷第10期基础医学与临床Basic ＆Clinical Medicine October 2011Vol．31No．10收稿日期：2010－11－02修回日期：2011－03－16基金项目：扬州环境资源职业技术学院基金（07001）*通信作者（corresponding author ）：yejilin126yejilin@126．com文章编号：1001-6325（2011）10-1120-04研究论文TRAIL 诱导Hela 细胞凋亡的线粒体信号通路叶记林1*，刘永春2，于有江1，刘延庆3（1.扬州环境资源职业技术学院医学系，江苏扬州225127；2.江苏省苏北人民医院，江苏扬州225000；3.扬州大学医学院，江苏扬州225001）摘要：目的探讨TRAIL 诱导人宫颈癌Hela 细胞凋亡的线粒体通路。
方法琼脂糖凝胶电泳判断细胞凋亡；激光共聚焦、Western blot 、荧光免疫和caspase-3活性检测测定细胞线粒体膜电位（MMP ）、BCL-2蛋白、细胞色素c （Cyt c ）和凋亡诱导因子（AIF ）蛋白在细胞中的定位以及caspase-3活性。
结果TRAIL 能诱导Hela 细胞凋亡，有凋亡细胞特有的DNA 梯状条带。
同时，TRAIL 具有时间依赖性致MMP （P ＜0.05，P ＜0.01）减小和BCL-2蛋白含量明显下降，线粒体Cyt c 蛋白释放，AIF 蛋白向细胞质、细胞核转移，caspase-3活性增强（作用10h 后达到2.25ʃ0.20倍，P ＜0.05）。
结论TRAIL 诱导Hela 细胞凋亡途径之一是通过线粒体信号通路进行的。
关键词：TRAIL ；Hela 细胞；细胞凋亡；线粒体中图分类号：R 737.33文献标志码：ATRAIL induced apoptosis in Hela cells by mitochondrial signal pathwayYE Ji-lin 1*，LIU Yong-chun 2，YU You-jiang 1，LIU Yan-qing 3（1.Medical Science Department ，Yangzhou Vocational College of Environment and Resources ，Yangzhou 225127；2.Subei People's Hospitalof Jiangsu Province ，Yangzhou 225000；3.Medical Academy ，Yangzhou University ，Yangzhou 225001，China ）Abstract ：ObjectiveTo explore the mitochondrial pathway in the apoptosis of Hela cells induced by TRAIL．MethodsApoptotic cells were detected by DNA electrophoresis．The mitochondria membrane potential （MMP ），the expressions of BCL-2，the location of Cyt c and AIF ，the caspase-3activity were tested by confocal laser mi-croscopy ，western blot ，immunofluorescence and caspase-3activity assay．ResultsTRAIL can induce apoptosis inHela cells．DNA ladders were showed on agarose gel electrophoresis．At the same time ，TRAIL induced the de-crease of MMP （P ＜0.05，P ＜0.01）and BCL-2，the release of Cyt c ，the translocation of mitochondrial AIF to cytoplasm and nuclei ，the increase of caspase-3activity （the activity increased to 2.25ʃ0.20fold in 10h treated cells ，P ＜0.05）in the time-dependent manner．Conclusions TRAIL induce the apoptosis of Hela cells throughinvolves mitochondrial signal pathway．Key words ：TRAIL ；hela cel1s ；apoptosis ；mitochondria肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necro-sis factor related apoptosis inducing ligand ，TRAIL ）是肿瘤坏死因子配体超家族中的一个新成员。
它能够选择性地诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无毒性作叶记林TRAIL诱导Hela细胞凋亡的线粒体信号通路用，使其具有极大临床应用前景［1－2］。
但是肝细胞损害及相当多的肿瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的抵抗等原因阻碍了TRAIL的应用［3］。
弄清TRAIL诱导癌细胞凋亡的发生机制是突破点。
目前有关TRAIL诱导多种肿瘤细胞凋亡的研究已取得很大进展，然而国内外关于TRAIL诱导癌细胞凋亡的线粒体信号通路的研究很少，现以Hela细胞为模型探讨TRAIL诱导癌细胞凋亡的线粒体信号通路，为临床癌症治疗提供参考。
1材料与方法1.1主要试剂人宫颈癌Hela细胞（中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库）；小牛血清（杭州四季青公司）；DMEM培养液（Gibco公司）；人TRAIL蛋白（Milli-pore公司）；DNA ladder提取试剂盒（北京普利莱基因技术有限公司）；罗丹明123、BCL-2兔多抗和羊抗兔IgG-HRP（Sigma公司）；细胞色素C（Cyto-chrome C，Cyt c）鼠单抗（Chemicon公司）；AIF羊多抗（eBioscience公司）；Caspase-3ApoAlert Assay kits 试剂盒（Clontech公司）。
1.2细胞培养和处理人宫颈癌Hela细胞用含10%小牛血清的DMEM培养液，在37ħ，5%CO2饱和湿度下培养。
处理细胞时，实验组用40ng/mL人TRAIL蛋白处理不同时间（1 10h），对照组加入等体积0.9%氯化钠注射液，均换含2%小牛血清的培养液进行培养。
1.3琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡收集处理后的各组细胞，按DNA ladder提取试剂盒说明书提取DNA。
取所制的样品20μL上样进行1%琼脂糖凝胶电泳40min，紫外灯下观察、摄影。
1.4Rh-123结合激光共聚焦检测MMP收集处理后的各组细胞用PBS洗涤2次，然后加入罗丹明123（Rh-123），使其终浓度为5mg/L，37ħ闭光孵育20min，再用PBS洗3遍，激光共聚焦显微镜于505nm激发光、534nm发射光实时监测细胞胞内荧光强度。
统计每个样品中所有受检测细胞的荧光强度值的均值，该值即反映相对MMP的强度。
1.5Western blot检测BCL-2、Cyt c和AIF收集处理后的各组细胞，PBS洗涤2次。
一部分细胞按常规方法提取蛋白质，恒压进行SDS电泳分离，然后电转到PVDF膜上，与BCL-2兔多抗4ħ孵育过夜，再加入羊抗兔IgG-HRP室温孵育1h，将膜洗涤干净后，加TMB显色液显色、摄影。
一部分细胞分离线粒体、细胞质蛋白。
分别以Cyt c鼠单抗和凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor，AIF）羊多抗为一抗检测Cyt c和AIF蛋白含量。
1.6荧光免疫法检测AIF的转移收集处理后的各组细胞，PBS洗涤2次，以3%多聚甲醛溶液固定。
PBS洗后以0.2%Triton X-100溶液使细胞通透。
PBS洗后再置于封闭液中封闭1h。
然后加入AIF抗体孵育2h。
封闭液洗后加入FITC标记的兔抗羊二抗孵育1h。
洗涤后置于激光共聚焦显微镜下观察。
1.7caspase-3蛋白活性检测收集处理后的各组细胞，按照ApoAlert caspase-3Assay kits试剂盒说明书进行操作。
以400nm激发光、505nm发射光的Shimadzu RF510Spectroflu-orophotometer荧光分光光度计进行检测。
1.8统计学分析实验数据以均数ʃ标准差（x—ʃs）表示；组间比较用Student's test。
2结果2.1TRAIL引起Hela细胞凋亡对照组细胞无任何剪切图谱产生，而TRAIL处理组细胞发现了约180 200bp间距的凋亡细胞所特有的DNA Ladder现象（图1）。
Hela cells treated by40ng/mL TRAIL for the indicatedtimes，M.marker； C.control图1TRAIL处理Hela细胞的DNA琼脂糖凝胶电泳Fig1DNA agarose gel electrophoresis of Helacells treated by TRAIL1211基础医学与临床Basic ＆Clinical Medicine 2011.31（10）2.2TRAIL 引起Hela 细胞MMP 的变化TRAIL 作用于Hela 细胞后致线粒体吸附Rh-123的能力下降（图2），而Rh-123荧光强度值反映的是线粒体膜电位（mitochondria membrane poten-tial ，MMP ）的大小。
TRAIL 处理4h 组与对照组相比MMP 变化不大，随着处理时间的延长，MMP 逐渐降低，呈现明显的时间依赖性（P ＜0.05，P ＜0.01）。
Hela cells treated with 40ng /mL TRAIL for the indi-cated times ；*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01compared with control 图2激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体的Rh-123荧光强度值变化Fig 2The changes of Rh-123mitochondrial fluore-scence in the cells were detected by confocallaser microscopy （x —ʃs ，n =4）2.3TRAIL 引起Hela 细胞BCL-2蛋白含量的变化TRAIL 处理Hela 细胞，BCL-2蛋白随着TRAIL作用时间的延长而减少。