平板菌落计数法ppt课件
菌落总数测定原理完整版PPT
平即食平即知平即情知平 即知知知食情食情食知知知食食食知平即食知知平即 统情食食情食情知食平即知情食知食 食食知食食食知食食情平即食知食平即食知食知平即平即 情食知情食情平即情情平即食知知食统食食知平即情平即平即食知食知情平即平即食 平即食食食食食平即平即平即食情食知食知 平即情知平即平即知情食统平即情知知知食平即食平即知食平即平即情情知情情食平即知食知情平即食板一品板一识板一境识板一识识识品境品境品识识识品品品识板一品识识板一计境品品境品境识品板一识境品识品品品识品品品识品品境板一品识品板一品识品识板一板一境品识境品境板一境境板一品识识品计品品识板一境板一板一品识品识境板一板一品板一品品品品品板一板一板一品境品识品识板一境识板一板一识境品计板一境识识识品板一品板一识品板一板一境境识境境品板一识品识境板一品菌 个 检 菌 个 点 菌 个 六 点 菌个 点 点 点 检 六 检 六 检 点 点 点 检 检 检 点 菌 个 检 点 点 菌 个菌 六 检 检 六 检 六 点 检 菌 个 点 六 检 点 检检 检 点 检 检 检 点 检 检 六 菌 个 检 点 检 菌 个 检 点 检 点 菌 个 菌 个六 检 点 六 检 六 菌 个 六 六 菌 个 检 点 点 检 菌 检 检 点 菌 个 六 菌 个 菌 个 检 点 检 点 六 菌 个 菌 个 检菌 个 检 检 检 检 检 个 菌 个 菌 个 检 六 检 点 检 点菌 个 六 点 菌 个 菌 个 点 六 检 菌 个 六 点 点 点 检 菌 个 检 菌 个 点 检 菌 个 菌 个 六 六 点 六 六 检 菌 个 点 检 点 六 菌 个 检落单样落单：落单：：落 单：：：样：样：样：：：样样样：落单样：落单 落样样：样：样落单：：样：样 样样：样样样：样样：落单样：样落单样：样：落单落单 ：样：：样：落单：：落单样：：样落样样：落单落单落单样样：：落
细菌菌落总数的测定ppt课件
食品中细菌菌落总数越多，则食品含有致病菌的可能性越大，食品质量越差； 菌落总数越小，则食品含有致病菌的可能性越小。须配合大肠菌群和致病菌的检 验，才能对食品做出较全面的评价。
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2、细菌总数 指一定数量或面积的食品样品．经过适当的处理后，在显微镜下对细菌进行直 接计数。其中包括各种活菌数和尚未消失的死菌数。细菌总数也称细菌直接显微 镜数。通常以1 g或1 mL样品中的细菌总数来表示。
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五、 步骤 (一) 取样、稀释和培养
1、 以无菌操作取检样25g（mL），放于225mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液 的 灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振荡或研磨制成 1:10的均匀稀释液。
固体和半固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000～10000r/min的 速度处理1～2min，制成1:10的均匀稀释液。
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10-3，10-4
48
10-3，10-4
4
284
152
37
10-2，10-3
5
26
12
5
10-2
6
无法计数 568
312
10-4
菌量/(个 /g或mL)
5.2x104 2.6x105 3.5x105
9.0x104
2.6x103 3.1x106
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2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按如下公式计算： N=∑C/（n1+0.1n2）d…………（1 ) 式中： N ― 样品中菌落数； ∑C ― 平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； nl ― 第一个适宜稀释度平板数； n2 ― 第二个适宜稀释度平板数； d ― 稀释因子（第一稀释度）。
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平板菌落计数法
平板菌落计数法（一）目标请求进修平板菌落计数的基起源基础理和办法.（二）基起源基础理平板菌落计数法是将待测样品经恰当稀释之后,个中的微生物充分疏散成单个细胞,取必定量的稀释样液接种到平板上,经由造就,由每个单细胞发展滋生而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞.统计菌落数,依据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数.但是,因为待测样品往往不轻易完整疏散成单个细胞,所以,长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞.是以平板菌落计数的成果往往偏低.为了清晰地阐述平板菌落计数的成果,如今已偏向应用菌落形成单位(colony-forming units,cfu)而不以绝对菌落数来暗示样品的活菌含量.平板菌落计数法固然操纵较繁,成果须要造就一段时光才干取得,并且测定成果易受多种身分的影响,但是,因为该计数办法的最大长处是可以获得活菌的信息,所以被普遍用于生物成品磨练(如活菌制剂),以及食物.饮料和水(包含水源水)等的含菌指数或污染程度的检测.（三）器材1．菌种大肠杆菌菌悬液.2．造就基牛肉膏蛋白陈造就基.3．仪器或其他器具1mL无菌吸管,无菌平皿,盛有4.5ml无菌水的试管,试管架,恒温造就箱等.（四）操纵步调l．编号取无菌平皿9套,分离用记号笔标明10-4.10-5.10-6.(稀释度)各3套.另取6支盛有4.5mL无菌水的试管,依次标是10-1.10-2.10-3.10-4.10-5.10-6.2．稀释用lmL无菌吸管汲取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品),准确地放0.5mL至10-1的试管中,此即为10倍稀释.将过剩的菌液放回原菌液中.将10-1试管置试管振荡器上振荡,使菌液充分混匀.另取一支lml吸管拔出10 1试管中往返吹吸菌悬液三次,进一步将菌体疏散.混匀.吹吸菌液时不要太猛太快,吸时吸管伸人管底,吹时分开液面,以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢.用此吸管汲取10-1菌液lmL,准确地放0.5mL至10-2试管中,此即为100倍稀释.其余依次类推.放菌液时吸管尖不要碰着液面,即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液,不然稀释不准确,成果误差较大.3．取样用三支1mL无菌吸管分离汲取10-4.10-5和10-6的稀释菌悬液各lmL,对号放入编好号的无菌平皿中,每个平皿放0.2mL.不要用lmL吸管每次只靠吸管尖部吸0.2mL稀释菌液放入平皿臼,如许轻易加大统一稀释度几个反复平板间的操纵误差.4．倒平板尽快向上述盛有不合稀释度菌液的平皿中倒入熔化后冷却至45℃阁下的牛肉膏蛋白胨造就基约15mL/平皿,置程度地位敏捷旋动平皿,使造就基与菌液混杂平均,而又不使造就基荡出平皿或溅到平皿盖上.因为细菌易吸附到玻璃器皿概况,所以菌液参加到造就皿后,应尽快倒入熔化并于已冷却至45℃阁下的造就基,立刻摇匀,不然细菌将不轻易疏散或长成的菌落连在一路,影响计数.待造就基凝固后,将平板倒置于37℃恒温造就箱中造就.5．计数造就48h后,掏出造就平板,算出统一稀释度三个平板上的菌落平均数,并按下列公式进行盘算,每毫升中菌落形成单位(cfu)=统一稀释度三次反复的平均菌落数×稀释倍数×5一般选择每个平板上长有30~300个菌落的稀释度盘算每毫升的含菌量较为适合.统一稀释度的三个反复对比的菌落数不该相差很大,不然暗示实验不准确.现实工作中统一稀释度反复对比平板不克不及少于三个,如许便于数据统计,削减误差.由10-4.10-5.10-6三个稀释度盘算出的每毫升菌液中菌落形成单位数也不该相差太大.平板菌落计数法,所选择倒平板的稀释度是很主要的.一般以三个持续稀释度中的第二个稀释度倒平板造就后所消失的平均菌落数在50个阁下为好,不然要恰当增长或削减稀释度加以调剂.平板菌落计数法的操纵除上述倾泻倒平板的方法以外,还可以用涂布平板的方法进行.二者操纵基底细同,所不合的是后者先将牛肉膏蛋白胨造就基熔化后倒平板,待凝固后编号,并于37℃阁下的温箱中烘烤30min,或在超静工作台上恰当吹干,然后用无菌吸管汲取稀释好的菌液对号接种于不合稀释度编号的平板上,并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布平均,平放于实验台上20～30min,使菌液渗入造就基表层内,然后倒置37℃的恒温箱中造就24～48h.涂布平板用的菌悬液量一般以0.1mL较为合适,假如过少菌液不轻易涂布开,过多则在涂布完后或在造就时菌液仍会在平板概况流淌,不轻易形成单菌落.。
细菌数量测定---标准平板计数法
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样 接种量即可换算出样品中的含菌数。由 于待测样品往往不易完全分散成单个细 胞。所以平板菌落计数法结果往往偏低。 现在常使用菌落形成单位。
三、实训仪器和材料
1、仪器：恒温培养箱。高压蒸汽灭菌锅，
电热套、托盘天平 吸量管、烧杯、三角瓶、培养皿、试管、 试管架、酒精灯 2试剂：大肠杆菌悬液、牛肉膏蛋白胨培 养基（营养琼脂培养基），生理盐水、盐 酸、氢氧化钠、蒸馏水
2、倒平板：在上述平皿中倒入熔化并冷 却至50℃左右的琼脂培养基约15~20 mL，置 水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，于37℃ 培养箱中倒置培养24h。
（五）计数
取出平皿，观察并计算菌落数。一般 选择平皿上长有30~300个菌落的稀释度 计算每毫升的菌落数最合适。
算出同一稀释度2个平皿上的菌落平 均数，并按下列公式计算： 活菌落数/mL=同一稀释度2个平皿上 的菌落平均数×稀释倍数×5
检验结果
稀释度
10-4
1 2 平均 1
10-5
2 平均 1
10-6
2 平均Biblioteka 菌落数活菌数 /mL
活菌落数/mL=同一稀释度2个平皿上的菌落平均数×稀释倍数×5
在上述平皿中倒入熔化并冷却至50左右的琼脂培养基约1520ml置水平位置迅速旋动混匀待凝固后于37培养箱中倒置培养24h
细菌数量测定---标准 平板计数法
一、实训目的
1、掌握菌液稀释的方法和步骤。
2、掌握浇混接种的操作步骤。 3、掌握菌落计数的原理与方法
二、实训原理
平板菌落计数法是将待测样品经适当 稀释后，其中的微生物充分分散为单个 细胞，取一定量的稀释液接种到平板上， 经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形 成的肉眼可见的菌落，即代表原样品中 的一个单细胞。
《细菌菌落计数》PPT课件
（2）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标 准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数， 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应 以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状 菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀， 即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
细菌菌落计数
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▪直接法
✓血球记数板 ✓活菌染色：美蓝、吖啶橙、TTC
▪间接法
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直接法—血球记数板
细菌计数板和血球计数板都用来侧微生物的总菌数。血球计数板用来测
较大微生物如酵母菌和霉菌孢子的总数，细菌计数板用来测细菌的总菌
数。两种计数板的构造相似，不同的是细菌计数板的深度仅为血球计数
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• 适用领域：
1.广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料 和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。 2.疾病诊断
*泌尿系感染性疾病的诊断------尿培养 3.细菌感染及药物治疗效果
*临床病人 *实验动物
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3、灭菌吸管取2～3个适宜稀释度的稀释菌 液0.1ml，分别注入灭菌平皿内，每个稀 释度重复做两个平板，涂布均匀后，置 37℃，培养24-48h。
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3
4
5
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0.1ml
1
样本
0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml
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实验十二 平板菌落计数法和光电比浊计数法
三、水产养殖水质净化、水产养殖水环境净化和水 产养殖池底净化处理处恶臭等。 功效：
• 1、快速分解水体中的残饵，粪便，死藻等，维护水质，有效 预防泛塘和鱼虾病害，减少换水量。 • 2、降解形成的小分子有机物及矿物质能促进藻类、原生动物 等的生长，为鱼虾提供活体饵料。 • 3、在水体中形成有益菌优势群种，抑制有害细菌的繁殖，维 持水体中的微生态环境平衡。 • 4、枯草芽孢杆菌本身是安全，有益的微生物，动物食入适量 菌体后，能减少鱼虾病害，提高鱼虾对饵料的消化吸收效率。 • 5、增强鱼虾的消化吸收功能，使其充分吸收利用饲料中营养 成分及天然色素，增强其天然着色度和使用风味，使鱼虾色泽 鲜亮。
二、基本原理——光电比浊计数法
当光线通过微生物菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用 使光线的透过量降低。在一定的范围内，微生物细胞浓度 不透光度成反比，不光密度成正比，而光密度或透光度可 以由光电池精确测出。 用一系列已知菌数的菌悬液测定光密度，作出光密度—— 菌数标准曲线。然后，就可以以样品液所测得的光密度， 从标准曲线中查出对应的菌数。 制作标准曲线时，菌体计数可采用血细胞计数板计数、平 板菌落计数或细胞干重测定等方法。本实验采用平板菌落 计数法。
2、平板菌落计数：
（1）编号：取无菌平皿9套，分别标明为10-4、10-5、10-6各三套， 另取6支无菌试管，装入4.5mL无菌水，依次标记为10-1、10-2、 10-3、10-4、10-5、10-6； （2）稀释：任选一支上述盛有已测OD值的菌悬液的试管，如1号试 管，精确地取0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释。将10-1的 试管振荡混匀。另换一支吸头插入10-1试管中来回吹吸菌液三次， 进一步将菌体分散、混匀。再用此吸管精确吸取10-1菌液0.5mL至 10-2试管中，此即为100倍稀释，依次类推； （3）取样：用移液器分别吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌悬液各 0.2mL ，对号放入编好号的无菌平皿中； （4）倒平板：尽快向上述盛有丌同稀释菌液的平皿中倒入融化后 冷却至45℃的牛肉膏蛋白胨培养基约20mL，置水平位置迅速旋动 平皿，使培养基不菌液混合均匀； （5）培养：待培养基凝固后，平板倒置于37℃培养箱中培养48h；
平板菌落计数法
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（二）基本原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。
（三）器材1．菌种大肠杆菌菌悬液。
2．培养基牛肉膏蛋白陈培养基。
3．仪器或其他用具1mL无菌吸管，无菌平皿，盛有4.5ml无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。
（四）操作步骤l．编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。
(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5mL无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2．稀释用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释。
平板菌落计数法和显微镜直接计数法
步骤
1. 制备酵母菌的菌悬液：酿酒酵母菌PDA斜面菌种一支，用无菌生理盐水，将菌苔洗
下，倒入装有玻璃珠的无菌三角瓶中，制成50 mL菌悬液。震荡，混匀。
2. 清洁血球计数板：镜检计数板，计数室内干净后才可以使用。如果有污物，先用自来
水冲洗血球计数板（切勿用硬毛刷刷洗），再用95%的酒精棉球轻轻擦拭，晾干后再次镜检。 盖玻片同样清洗和检查。
10-2
10-3
稀释度 菌落数之比
结果（菌落总 数，CFU/mL）
备注
1
1 365
164
2
2 760
295
3
2 890
271
4
150
30
5 多不可计 1 650
6
27ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
11
7 多不可计 305
20
—
1.6 ˣ 104（或
）
46 1.6(460/295)＜2 3.8 ˣ 104（或16 400） 两位以
思考题
1．测定时，融化后的固体培养基如果在40 ℃、45 ℃、55 ℃和60 ℃保温，测定结果和 50 ℃保温有何区别？ 2．本实验测定方法是十倍稀释，各梯度分别取样1 mL进行测定。如果只稀释至10-1，取 样1 mL、0.1 mL和0.01 mL进行测定，对结果有哪些影响？
原理
显微镜直接计数法：借助显微镜
谢谢
步骤
3. 加菌悬液：将盖玻片盖在计数室的上面，用细口滴管吹打菌悬液，充分混匀。然后吸
菌悬液，滴在计数室和盖玻片的边缘上，菌悬液自然渗入盖玻片和计数板间缝隙中。再用镊 子或接种环柄等轻压盖玻片，去除过多的菌悬液，以免实际的计数室体积变大。静置片刻， 待菌体自然沉降后，计数。
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三.实验步骤
3．加样倒平板：
方法一：用不同的灭菌吸管分别吸取10-4、105、10-6稀释液1ml，分别注入3个灭菌培养皿 中。分别立即倾注约15ml已熔化并冷却到 45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基，并立即在 桌面上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀 （每稀释度做3个）。另取一空的灭菌培养皿， 倾注牛肉膏蛋白胨培养基15ml，做空白对照。 培养基凝固后，倒置于37℃温箱中培养。
三.实验步骤
方法二：取0.2ml一定稀释度的样品，加 至冷却的平板中，用涂布器涂匀后，于 37℃温箱中培养。取10-4、10-5、10-6稀 释液，每个稀释度作三个，培养24-48h后，取出培养平板，并按下列 公式进行计算： 方法一：每毫升中菌落形成单位（cfu）=同 一稀释度的平均菌落数x稀释倍数 方法二：每毫升中菌落形成单位（cfu）=同 一稀释度的平均菌落数x稀释倍数x5 注： 一般选择每个平板上长有30-300个菌落 的稀释度计算每毫升的含菌量较适宜。
三．作业： 计算菌体含量(单位:cfu/mL)。
平板菌落计数法
实验目的 学习平板菌落计数法。
实验原理
微生物的计数方法分为直接计数和间接计数。 直接计数是通过血球计数板将微量体积样品中 的微生物在显微镜下数出（详见实验三）。直 接计数所计为微生物总数（包括死细胞和活细 胞），而且适用于体积较大的微生物如酵母、 霉菌的孢子等。
实验原理
平板菌落计数法是一种典型的间接计数法。将 一定稀释度的样品均匀接种到固体平板培养基 中，培养长出单菌落后，可认为每个单菌落由 一个微生物长出，根据稀释倍数可计算样品中 的微生物浓度。该方法不受微生物的大小的限 制，所计的只是活的可培养微生物，而且可用 于混合微生物样品的计数。
三.实验步骤
1．编号 取无菌平皿9个，分别用记号笔标 明10-4、10-5、10-6（稀释度）各三 套。另取6支试管，加入9ml无菌水， 依次标明10-1 、 10-2、10-3、10-4、 10-5、10-6。
三.实验步骤
2．稀释 水样：用无菌吸管取1ml样品加入含9ml无菌水的10-1试管中， 此即为10倍稀释。将10-1试管振荡，充分混匀。用另一吸管吸 取10-1菌液1ml，加至含有9ml无菌水的10-2试管中，此即为100 倍稀释。其余10-3、10-4、10-5、10-6稀释依次类推。 固体样品：准确称取10g样品，加入90ml无菌水中，充分混匀 后即为10倍稀释。将10-1试管振荡，使其充分混匀。用另一吸 管吸取10-1菌液1ml，加至含有9ml无菌水的10-2试管中，此即为 100倍稀释。其余10-3、10-4、10-5、10-6依次类推。