硫氧还蛋白氧化还原酶(thioredoxin reductase, TrxR)试剂盒说明书
硫氧还蛋白_Trx_的研究进展
分子植物育种，２００６年，第４卷，第６（Ｓ）期，第７８－８２页ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＢｒｅｅｄｉｎｇ，２００６，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．６（Ｓ），７８－８２专题介绍Ｒｅｖｉｅｗ硫氧还蛋白（Ｔｒｘ）的研究进展郑琼马旭俊杨传平＊教育部林木遗传育种与生物技术重点实验室，东北林业大学林木遗传育种省级重点实验室，东北林业大学林学院，哈尔滨，１５００４０＊通讯作者，ｙａｎｇｃｐ＠ｎｅｆｕ．ｅｄｕ．ｃｎ摘要硫氧还蛋白Ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ）是一类高度保守的低分子量蛋白质。
Ｔｒｘ广泛分布于植物、细菌、酵母和动物中。
根据氨基酸序列的不同，Ｔｒｘ分为家族Ⅰ和家族Ⅱ２个家族。
根据最初结构的不同，Ｔｒｘ家族Ⅰ又被分为６大类型：ｈ，ｆ，ｍ，ｏ，ｘ和ｙ。
不同类型的Ｔｒｘ在不同生物以及细胞内的不同区域分布不同。
硫氧还蛋白具有多种生物学功能，对维持体内稳定的氧化还原状态具有重要的作用。
Ｔｒｘ具有调节细胞生长、抑制凋亡、调节基因转录等功能。
Ｔｒｘ还与植物抗逆性相关，如参与植物抗旱、耐热和抗氧化胁迫过程，调节抗逆基因的表达。
因此，我们可以将硫氧还蛋白基因通过转基因技术导入植物体中，在植物遗传性状改良等方面具有广泛的应用前景。
本文综述了硫氧还蛋白的类型、组织分布、生物学功能以及与植物抗逆性的关系。
关键词硫氧还蛋白（Ｔｒｘ），氧化还原，抗逆性ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＲｏｌｅｓｏｆＴｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ）ＺｈｅｎｇＱｉｏｎｇＭａＸｕｊｕｎＹａｎｇＣｈｕａｎｐｉｎｇ＊ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇａｎｄＢｉｏ－ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＴｈｅＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙＬａｂｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙＧｅ－ｎｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ，１５００４０＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，ｙａｎｇｃｐ＠ｎｅｆｕ．ｅｄｕ．ｃｎＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ）ｉｓａｓｍａｌｌａｎｄｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｒｘｉｓｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓｌｙｆｏｕｎｄｉｎｐｌａｎｔｓ，ｂａｃｔｅｒｉａ，ｙｅａｓｔｓａｎｄａｎｉｍａｌｓ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ＴｒｘｉｓｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｆａｍｉｌｙⅠａｎｄｆａｍｉｌｙⅡ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｆｔｈｅｉｎｉｔｉａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ＴｒｘｆａｍｉｌｙⅠｉｓｃｌａｓｓｉｆｉｅｄｉｎｔｏ６ｇｒｏｕｐｓ：ｈ，ｆ，ｍ，ｏ，ｘａｎｄｙ．ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｇｒｏｕｐｓｏｆＴｒｘｅｘｉｓｔｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｏｒｇａｎｉｓｍｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｐａｒｔｍｅｎｔｓｏｆａｃｅｌｌ．Ｔｒｘｈａｓｖａｒｉｏｕｓｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓｉｎｋｅｅｐｉｎｇｓｔａｂｌｅｒｅｄｏｘｓｔａｔｕｓｏｆｃｅｌｌｓ．Ｔｒｘｐｌａｙｓｃｒｕｃｉａｌｒｏｌｅｓｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｇｅｎｅｔｒａｎｓｃｒｉｐ－ｔｉｏｎ．Ｉｔｉｓａｌｓｏｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｐｌａｎｔｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅａｎｄｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｓｔｒｅｓｓｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓ．Ｔｈｅｓｔｒｅｓｓｅｓｉｎ－ｃｌｕｄｅｄｒｏｕｇｈｔ，ｈｅａｔａｎｄｏｔｈｅｒｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｔｒｅｓｓｅｓ．ＳｏｗｅｅｘｐｅｃｔＴｒｘｇｅｎｅｃａｎｂｅｆｕｒｔｈｅｒｕｓｅｄｉｎｐｌａｎｔｔｒａｉｔｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｂｙｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇｔｈｉｓｇｅｎｅｉｎｔｏｐｌａｎｔｓ．Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈｅｔｙｐｅ，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃ－ｔｉｏｎｓｏｆＴｒｘａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｐｌａｎｔｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＴｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ），Ｒｅｄｏｘ，Ｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅ硫氧还蛋白（ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ，Ｔｒｘ）是一类分布广泛的低分子量的蛋白质，它们在进化上相当保守，有一个二硫化物活性中心Ｔｒｐ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（ＣＧＰＣ），ＣＧＰＣ中的２个Ｃｙｓ分别为Ｃｙｓ３２和Ｃｙｓ３５，人和其它哺乳动物Ｔｒｘ还含有另外３个Ｃｙｓ残基，即Ｃｙｓ６２、Ｃｙｓ６９和Ｃｙｓ７３，这些Ｃｙｓ残基能可逆地催化许多氧化还原反应，赋予Ｔｒｘ独特的生物学特性。
硫氧还蛋白还原酶活性在肺癌患者化疗前后的变化
硫氧还蛋白还原酶活性在肺癌患者化疗前后的变化彭传真;宋兆录;赵永利;李贵新;冷宁;李方超;李碧蓉【摘要】目的：探讨肺癌病人的血浆硫氧还蛋白还原酶( TR)活性及化疗前后的变化。
方法收集2012年10月至2013年1月本院49例肺癌病人化疗前后的血浆和同期49例健康查体人员的血浆,进行硫氧还蛋白还原酶活性检测。
结果49例肺癌病人化疗前血浆TR活性值为4.34±6.52 U/mL,化疗后为3.93±6.30 U/mL,健康查体人员为－5.61±7.39 U/mL,数据均采用LOG(X＋4IQR)转换,并经t检验,结果显示,化疗前、后TR活性与健康查体组(对照组)相比较,P均<0.05。
化疗前、后TR活性的变化,有统计学差异。
结论肺癌病人的TR活性高；肺癌病人化疗前后血浆TR活性随疾病好转有降低。
%Objective To investigate the activity of thioredoxin reductase ( TR ) in lung cancer patients and the change before and after chemotherapy. Methods 49 patients with lung cancer were enrolled in the study,49 healthy sub￣jects served as control.The activity of TR in plasma was assayed. Results TR activity in the plasma of 49 patients with lung cancer before and aftrer chemotherapy is 4. 34 ± 6. 52U/mL, and 3. 93 ± 6. 30U/mL, respectively. While the healthy subjects is -5.61±7.39U/e LOG(X+4IQR) transform and by group t test,result showed the activity of TR between before chemotherapy and healthy group ( control group) ,and between after chemotherapy and healthy group were significant difference,( P<0. 05 ) . By paired t test, the change of the TR activity before and after chemotherapy was significant difference( P<0.05) . Conclusion Lung cancer patients have high TR activity,the plasma TRactivity decreased with the improvement of the disease in the lung cancer patients before and after chemotherapy.【期刊名称】《中南医学科学杂志》【年(卷),期】2016(044)004【总页数】3页(P425-427)【关键词】肺癌;硫氧还蛋白还原酶;化疗;活性【作者】彭传真;宋兆录;赵永利;李贵新;冷宁;李方超;李碧蓉【作者单位】青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;邵阳医学高等专科学校生理教研室【正文语种】中文【中图分类】R734.2在恶性肿瘤中，肺癌的发病率及死亡率居首位[1]。
Thioredoxin Redox State Determination：硫氧还蛋白的氧化还原状态的确定
Hong Nguyen Mentor: Dr. Gary Merrill
Thioredoxin
protein essential for life in mammals acts as an antioxidant to prevent oxidative stress acts as an electron donor in a variety of cellular
IAA/IAM
IAA IAM
urea PAGE
0
-
-1 -2 -3 -4 -5 + -6
SASASASASASA-
SM
SM or SA-
SM
SM or SA-
SM
SM or SA-
SM
SM or SA-
SM
SM or SA-
SM
SM or SA-
1
2
3
4
TrxSS TrΒιβλιοθήκη SHRepresentative results
Acknowledgement
Dr. Gary Merrill
Biochemistry & Biophysics Lab
Dr. Kevin Ahern Howard Hughes Medical Institute Undergraduate, Research, Innovation, Scholarship &
HH SS
RNR reduced
SS
reduced Trx
oxidized Trx
Thioredoxin reductase & thioredoxin
硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现及抗肿瘤机制探讨
硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现及抗肿瘤机制探讨硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现及抗肿瘤机制探讨概述：肿瘤是全球范围内的主要致死疾病之一，因此，研究肿瘤的发生机制及开发新的治疗方法一直是科学家们的重要任务。
近年来，对肿瘤细胞内还原酶的研究表明，硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase, TrxR）在肿瘤细胞中起着重要的作用。
本文将介绍硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现以及其在抗肿瘤机制方面的探讨。
硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现：硫氧还蛋白还原酶是一种钴卟啉依赖的酶，可以将还原型硫氧还蛋白还原酶（Trx）重新还原为活性的二硫键形式。
研究表明，TrxR在许多肿瘤细胞中高度表达，并且与肿瘤细胞的增殖、转移和抗药性密切相关。
因此，开发高选择性的TrxR抑制剂成为治疗肿瘤的潜在策略。
研究人员通过化学合成和药物筛选等方法发现了许多TrxR抑制剂。
其中，一些小分子化合物显示出很高的抑制活性，并且被证实对多种肿瘤细胞有显著的抗肿瘤作用。
通过结构活性关系研究，研究人员发现这些抑制剂能够与TrxR活性中心的蛋白质残基形成稳定的非共价连接，从而抑制其催化活性。
在抗肿瘤机制方面：通过研究，发现TrxR抑制剂能够通过多种途径发挥抗肿瘤作用。
首先，抑制TrxR可以干扰细胞内的氧化还原平衡，导致细胞内氧化应激增加，从而减少肿瘤细胞的生存能力。
其次，TrxR抑制剂还可以通过抑制肿瘤细胞的增殖和诱导细胞凋亡来发挥抗肿瘤作用。
最后，一些研究表明TrxR抑制剂还具有抑制肿瘤细胞迁移和侵袭的能力。
此外，一些研究还发现TrxR抑制剂可以增强化疗药物对肿瘤细胞的敏感性，并减少肿瘤细胞对药物的耐药性。
这一发现为联合应用TrxR抑制剂和化疗药物提供了新的治疗策略。
结论：硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现为肿瘤治疗提供了新的方向，其抗肿瘤机制主要通过干扰细胞内的氧化还原平衡、抑制肿瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡等方式实现。
硫氧还蛋白_Trx_的研究进展
分子植物育种，２００６年，第４卷，第６（Ｓ）期，第７８－８２页ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＢｒｅｅｄｉｎｇ，２００６，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．６（Ｓ），７８－８２专题介绍Ｒｅｖｉｅｗ硫氧还蛋白（Ｔｒｘ）的研究进展郑琼马旭俊杨传平＊教育部林木遗传育种与生物技术重点实验室，东北林业大学林木遗传育种省级重点实验室，东北林业大学林学院，哈尔滨，１５００４０＊通讯作者，ｙａｎｇｃｐ＠ｎｅｆｕ．ｅｄｕ．ｃｎ摘要硫氧还蛋白Ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ）是一类高度保守的低分子量蛋白质。
Ｔｒｘ广泛分布于植物、细菌、酵母和动物中。
根据氨基酸序列的不同，Ｔｒｘ分为家族Ⅰ和家族Ⅱ２个家族。
根据最初结构的不同，Ｔｒｘ家族Ⅰ又被分为６大类型：ｈ，ｆ，ｍ，ｏ，ｘ和ｙ。
不同类型的Ｔｒｘ在不同生物以及细胞内的不同区域分布不同。
硫氧还蛋白具有多种生物学功能，对维持体内稳定的氧化还原状态具有重要的作用。
Ｔｒｘ具有调节细胞生长、抑制凋亡、调节基因转录等功能。
Ｔｒｘ还与植物抗逆性相关，如参与植物抗旱、耐热和抗氧化胁迫过程，调节抗逆基因的表达。
因此，我们可以将硫氧还蛋白基因通过转基因技术导入植物体中，在植物遗传性状改良等方面具有广泛的应用前景。
本文综述了硫氧还蛋白的类型、组织分布、生物学功能以及与植物抗逆性的关系。
关键词硫氧还蛋白（Ｔｒｘ），氧化还原，抗逆性ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＲｏｌｅｓｏｆＴｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ）ＺｈｅｎｇＱｉｏｎｇＭａＸｕｊｕｎＹａｎｇＣｈｕａｎｐｉｎｇ＊ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇａｎｄＢｉｏ－ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＴｈｅＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙＬａｂｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙＧｅ－ｎｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ，１５００４０＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，ｙａｎｇｃｐ＠ｎｅｆｕ．ｅｄｕ．ｃｎＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ）ｉｓａｓｍａｌｌａｎｄｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｒｘｉｓｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓｌｙｆｏｕｎｄｉｎｐｌａｎｔｓ，ｂａｃｔｅｒｉａ，ｙｅａｓｔｓａｎｄａｎｉｍａｌｓ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ＴｒｘｉｓｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｆａｍｉｌｙⅠａｎｄｆａｍｉｌｙⅡ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｆｔｈｅｉｎｉｔｉａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ＴｒｘｆａｍｉｌｙⅠｉｓｃｌａｓｓｉｆｉｅｄｉｎｔｏ６ｇｒｏｕｐｓ：ｈ，ｆ，ｍ，ｏ，ｘａｎｄｙ．ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｇｒｏｕｐｓｏｆＴｒｘｅｘｉｓｔｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｏｒｇａｎｉｓｍｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｐａｒｔｍｅｎｔｓｏｆａｃｅｌｌ．Ｔｒｘｈａｓｖａｒｉｏｕｓｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓｉｎｋｅｅｐｉｎｇｓｔａｂｌｅｒｅｄｏｘｓｔａｔｕｓｏｆｃｅｌｌｓ．Ｔｒｘｐｌａｙｓｃｒｕｃｉａｌｒｏｌｅｓｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｇｅｎｅｔｒａｎｓｃｒｉｐ－ｔｉｏｎ．Ｉｔｉｓａｌｓｏｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｐｌａｎｔｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅａｎｄｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｓｔｒｅｓｓｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓ．Ｔｈｅｓｔｒｅｓｓｅｓｉｎ－ｃｌｕｄｅｄｒｏｕｇｈｔ，ｈｅａｔａｎｄｏｔｈｅｒｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｔｒｅｓｓｅｓ．ＳｏｗｅｅｘｐｅｃｔＴｒｘｇｅｎｅｃａｎｂｅｆｕｒｔｈｅｒｕｓｅｄｉｎｐｌａｎｔｔｒａｉｔｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｂｙｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇｔｈｉｓｇｅｎｅｉｎｔｏｐｌａｎｔｓ．Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈｅｔｙｐｅ，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃ－ｔｉｏｎｓｏｆＴｒｘａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｐｌａｎｔｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＴｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ），Ｒｅｄｏｘ，Ｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅ硫氧还蛋白（ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ，Ｔｒｘ）是一类分布广泛的低分子量的蛋白质，它们在进化上相当保守，有一个二硫化物活性中心Ｔｒｐ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（ＣＧＰＣ），ＣＧＰＣ中的２个Ｃｙｓ分别为Ｃｙｓ３２和Ｃｙｓ３５，人和其它哺乳动物Ｔｒｘ还含有另外３个Ｃｙｓ残基，即Ｃｙｓ６２、Ｃｙｓ６９和Ｃｙｓ７３，这些Ｃｙｓ残基能可逆地催化许多氧化还原反应，赋予Ｔｒｘ独特的生物学特性。
硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase, TPX)活性测定试
货号：QS1203 规格：50管/24样硫氧还蛋白过氧化物酶（thioredoxin peroxidase,TPX）试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：TPX属于过氧化物酶家族，在体内主要通过还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化作用，功能与GPX类似，也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。
TPX普遍存在于各种生物体内，如酵母、植物、动物、原生动物、寄生虫、细菌和古细菌，在进化上高度保守。
TPX与细胞增殖、分化、细胞凋亡及肿瘤发生调控密切相关。
TPX的主要功能包括细胞脱毒、抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应。
测定原理：TPX催化H2O2氧化二硫苏糖醇（DTT），H2O2的吸收波长为240nm，通过测定240nm吸光度的下降速率，通过对照减去过氧化氢酶（CAT）催化分解的H2O2，即可计算出TPX活性。
因此，本试剂盒可以同时测定样品TPX和CAT活性。
自备实验用品及仪器:紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水试剂组成和配制:试剂一：液体×1瓶，室温保存。
试剂二：液体×1瓶，- 20℃保存。
试剂三：液体×1瓶，4℃。
粗酶液提取：1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。
TPX测定操作：1. 分光光度计预热30min，调节波长到240 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂一和试剂二置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴预热30 min。
硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)活性检测试剂盒说明书 微量法
硫氧还蛋白氧化还原酶（TrxR）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC1155规格：100T/96S产品内容：试剂一：液体120mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入2mL蒸馏水溶解。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入2mL蒸馏水溶解。
试剂四：液体×1支，-20℃避光保存。
产品说明：TrxR是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统。
TrxR与GR活性类似，催化GSSG还原生成GSH，是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。
TrxR催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP+，TNB在412nm有特征吸收峰，通过测定412nm波长处TNB 的增加速率，即可计算TrxR活性。
自备仪器和用品：低温离心机、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取：1、称约0.1g样品，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清液待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min），然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定前将上清液与试剂四以50：1的体积比混匀（即取100μL上清液加入2μL试剂四混合）37℃水浴30min后至冰上。
二、TrxR测定操作：1.分光光度计或酶标仪预热30min后，调节波长到412nm，用蒸馏水调零。
2.试剂一在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）预热30min。
3.空白管：取微量玻璃比色皿或96孔板，加入20μL试剂二，20μL试剂三，160μL试剂一，迅速混匀后于412nm测定10s时的吸光度，37℃水浴5min迅速拿出测量412nm下的吸光度记为A1和A2。
硫氧还蛋白还原酶1及其相关信号通路研究进展
硫氧还蛋白还原酶1及其相关信号通路研究进展李宝荣;熊咏民【摘要】硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TrxR1)是维持机体稳态重要屏障的抗氧化系统成员.近年来,TrxR1相关信号通路的研究逐步受到关注.因此,本文将从硫氧还蛋白系统着手,对TrxR1及其相关信号通路的研究进展进行阐述,以期为TrxR1在疾病中的作用机制阐明提供新思路.【期刊名称】《国外医学（医学地理分册）》【年(卷),期】2018(039)003【总页数】4页(P272-275)【关键词】硫氧还蛋白还原酶1;核因子E2相关因子-2;c-Jun N-端激酶;κ基因结合核因【作者】李宝荣;熊咏民【作者单位】西安交通大学医学部公共卫生学院地方病研究所,国家卫计委微量元素与地方病重点实验室,陕西西安710061;西安交通大学医学部公共卫生学院地方病研究所,国家卫计委微量元素与地方病重点实验室,陕西西安710061【正文语种】中文【中图分类】R684人体抗氧化系统是机体应对各种内外环境刺激以及维持机体代谢平衡的重要屏障，其可分为酶性抗氧化系统和非酶性抗氧化系统。
前者主要由硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)等组成；后者主要包括具有氧化还原活性的非酶性物质(例如：谷胱甘肽、硫氧还蛋白(Trx)、维生素E、维生素C等)。
硫氧还蛋白系统是机体酶性抗氧化系统的重要组成部分，主要通过信号通路的转导参与细胞呼吸、代谢、免疫及其目标信号蛋白活性和功能的调节等生物学过程，进而在维持机体稳态以及调节氧化还原信号等过程中发挥至关重要的作用。
1 硫氧还蛋白系统TrxR、Trx和还原型辅酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH)共同构成了硫氧还蛋白系统，是细胞内重要的抗氧化系统之一。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
货号：MS1110 规格：100管/96样
硫氧还蛋白氧化还原酶
（thioredoxin reductase,TrxR）试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
TrxR是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及 NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。
TrxR与GR活性类似，催化GSSG还原生成GSH，是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。
测定原理：
TrxR催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP+，TNB在412nm有特征吸收峰，通过测定412nm波长处TNB的增加速率，即可计算TrxR活性。
自备仪器和用品：
低温离心机、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。
临用前加入 2mL 蒸馏水溶解。
试剂三：粉剂×1 管，4℃保存。
临用前加入 2mL 蒸馏水溶解。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加
入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500
万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；
然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。
TrxR 测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到412nm，用蒸馏水调零。
2. 试剂一在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）预热30min。
3. 空白管：取微量玻璃比色皿或96孔板，加入20μL试剂二，20μL试剂三，160μL试剂一，
迅速混匀后于412nm 测定10s和310s吸光度，记为A1和A2。
△A空白管=A2-A1。
4. 测定管：取微量玻璃比色皿或96孔板，加入20μL试剂二，20μL试剂三，140μL试剂一，
20μL上清液，迅速混匀后于412nm测定10s和310s吸光度，记为A3和A4。
△A 测定管=A4-A3。
注意：空白管只需测定一次。
TrxR 活性计算公式：
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min/mg prot）=（△A测定管-△A空白管）÷ε÷d×V反总÷(Cpr×V样)÷T
= 147×（△A 测定管-△A 空白管）÷Cpr
第1页，共2页
(2). 按样本质量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每克样本每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min/g）=（△A测定管-△A空白管）÷ε÷d×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 147×（△A 测定管-△A 空白管）÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每104个细胞每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min/104cell）=（△A测定管-△A空白管）÷ε÷d×V反总÷(细胞数量×V样÷V
样总)÷T= 147×（△A 测定管-△A 空白管）÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫升液体每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min /mL）=（△A 测定管-△A 空白管）÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T
= 147×（△A 测定管-△A 空白管）
ε：TNB 在412nm处的微摩尔消光系数，0.0136 L/μmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），20μL=0.02 mL；V 样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间（min），5 min。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min/mg prot）=（△A测定管-△A空白管）÷ε÷d×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T
= 294×（△A 测定管-△A 空白管）÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每克样本每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min/g）=（△A测定管-△A空白管）÷ε÷d×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 294×（△A 测定管-△A 空白管）÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每104个细胞每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min/104cell）=（△A测定管-△A空白管）÷ε÷d×V 反总÷(细胞数量×V样÷V
样总)÷T= 294×（△A 测定管-△A 空白管）÷细胞数量（4）按液体体积计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫升液体每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min/mL）=（△A测定管-△A空白管）÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T
= 294×（△A 测定管-△A 空白管）
ε：TNB 在412nm处的微摩尔消光系数，0.0136 L/μ mol/cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10-4L；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），20μL=0.02 mL；V 样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间（min），5 min。
注意事项：
1. 测定前须先取 1～2 个样做预实验，使得吸光值在 5min 内程线性变化。
哺乳动物组织及血液制品 TrxR 活力测定时，一般须用蒸馏水稀释 5 倍左右；测定过程操作须迅速。
2. 试剂二和试剂三配制好后 3 天内使用完。
第2页，共2页。