乙型脑炎病毒E蛋白结构域抗原表位鉴定
检测乙型脑炎病毒中和抗体的简化试验
检测乙型脑炎病毒中和抗体的简化试验摘要：在亚洲，乙型脑炎病毒是病毒性脑炎的常见病因，据统计，每年大约有45000例病例。
它导致显着的发病率和死亡率。
乙型脑炎病毒主要通过库蚊在鸟类和动物之间传播，而人类被认为是其终末宿主。
由于登革热在乙型脑炎流行地区也很普遍，因此必须通过检测乙型脑炎病毒特异性中和抗体来证实乙型脑炎阳性血清。
噬斑减少中和试验是检测以及量化乙型脑炎病毒中和抗体的黄金标准。
然而，噬斑减少中和试验大约需要一个星期，并且在在6个或24孔板中进行，这对于大规模筛选具有局限性。
因此有必要开发一种可用于检测和定量乙型脑炎病毒中和抗体的简化方案。
该法在96孔板中进行，将适合用于大规模筛查人群的免疫水平以及疫苗的免疫效力研究。
关键词：乙型脑炎病毒；中和抗体；酶联免疫引言在亚洲，主要由节肢动物传播的乙型脑炎病毒是病毒性脑炎的常见病原。
据统计，每年大约有45000个病例，死亡率为25%;并且有高达50％的患者留有神经系统后遗症（世界卫生组织，1996年）。
乙型脑炎病毒为RNA正链病毒，属于黄病毒科。
病毒发生表现有地方性周期性特点，库蚊和猪为其主要的宿主，病毒在其体内大量复制。
然而，人类被认为是其终末宿主。
（Sabchareon和Yoksan，1998）在亚洲许多地方乙型脑炎病毒都有流行，往往在这些地方都伴随有登革热病毒流行。
因此，为了与登革热区分，就必须通过检测乙型脑炎病毒特异性中和抗体来证实其确为乙型脑炎病毒阳性血清。
此外，检测中和抗体也可作为检测乙型脑炎疫苗效力的合理的替代措施。
（Markofff L.，2000）。
“斑减少中和试验是检测和量化乙型脑炎病毒中和抗体的标准方法（Shyu等.1997）。
然而，斑减少中和试验需要一周才能完成并且仅在6或24孔板中进行，从而对于大规模的筛选表现出一定的局限性，在疫苗的效力学研究以及血清流行病学调查方面其局限性表现得更加突出。
结果通过肉眼计数斑块的数量来获得，而这，也有一定的主观偏差。
微生物检验技术中级《基础知识》(题库)模拟试卷二
微生物检验技术中级《基础知识》（题库）模拟试卷二[单选题]1.《突发公共卫生事件应急条例》规定突（江南博哥）发事件责任报告人是指A.疾病预防控制中心B.卫生行政部门C.医疗卫生机构和有关单位D.各级地方人民政府E.突发事件监测机构、医疗卫生机构和有关单位参考答案：E参考解析：《突发公共卫生事件应急条例》第二十条规定：突发事件监测机构、医疗卫生机构和有关单位发现有本条例第十九条规定情形之一的，应当在2h内向所在地县级人民政府卫生行政主管部门报告。
所以突发事件责任报告人是指突发事件监测机构、医疗卫生机构和有关单位。
[单选题]2.用酶联免疫吸附试验（ELISA）最早检出SARS冠状病毒抗体的时间为A.1dB.7dC.10dD.15dE.28d参考答案：B参考解析：非典"病人发病后，最早的抗体IgM出现要在7d左右，10d时达到高峰，15d左右下降，抗体IgG10d后产生，20d左右达到高峰。
[单选题]4.抗原抗体的结合力最重要的是A.范德华引力B.氢键C.静电引力D.共价结合力E.疏水作用力参考答案：E参考解析：抗原抗体是一种非共价的结合，不形成共价键，需要四种分子间引力参与。
1.静电引力又称库伦引力，是因抗原、抗体带有相反电荷的氨基与羧基基团间相互吸引的能力，这种吸引力的大小和两个电荷间的距离平方成反比。
两个电荷距离越近，静电引力越大。
2.范德华引力这是原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化作用发生的一种吸引力，是抗原、抗体两个大分子外层轨道上电子相互作用时，两者电子云中的偶极摆动而产生的引力。
这种引力的能量小于静电引力。
3.氢键结合力是供氢体上的氢原子与受氢体上氢原子间的引力。
其结合力较强于范德华引力。
4.疏水作用力水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。
当抗原表位和抗体超变区靠近时，相互间正负极性消失，周围亲水层也立即消失，从而排斥两者间的水分子，使抗原抗体进一步吸引和结合。
抗原表位的分类和特征
抗原表位的分类和特征
抗原表位是指能够与抗原结合并引发免疫反应的特定区域，它可以分为以下几类：
1. 连续性表位（Continuous epitopes）：连续性表位是指抗原蛋白上具有一定连续氨基酸序列的区域，也称为线性表位。
这种表位通常出现在蛋白的螺旋、折叠或延伸区域。
连续性表位多数由线性的氨基酸序列组成，相对容易识别和结合。
2. 不连续性表位（Discontinuous epitopes）：不连续性表位是指抗原蛋白上的表位不是由连续的氨基酸序列组成，而是由分散的氨基酸残基组成。
这种表位通常由蛋白质在三维结构中相对靠近的氨基酸组成。
不连续性表位通常构成抗原蛋白的特定结构域，如折叠或结构域的交界处。
3. 表面表位（Surface epitopes）：表面表位是指位于抗原蛋白的表面上的表位，易于抗体发现并与其结合。
表面表位通常通过与抗体的可变区域相互作用引发免疫反应。
特征方面，抗原表位具有以下特点：
1. 特异性：抗原表位具有特异性，即只与特定的抗体结合。
它们能够唯一识别并结合与其相互作用的抗体分子。
2. 变异性：抗原表位的变异性表示它们在不同的抗原中可能会发生变化。
这意味着同一个表位可能在不同的抗原中具有不同的氨基酸序列。
3. 免疫原性：抗原表位能够引发免疫反应，激发机体产生特异性抗体，以及效应性T细胞等免疫细胞的免疫应答。
4. 重复性：某些抗原表位可能在同一个抗原中重复出现，从而增加免疫系统检测和识别的机会。
总的来说，抗原表位的分类和特征对于了解免疫反应的机制、抗原-抗体相互作用的基础和免疫诊断等方面具有重要意义。
流行性乙型脑炎
4. 后遗症期
神神经症状者称后遗症。约 5% ～ 20% 的重
症病人可有后遗症。主要有意识障碍、痴
呆、失语、肢体瘫痪、扭转痉挛和精神失
常等，经积极治疗可有不同程度的恢复。
流行性乙型脑炎
临床表现
乙脑恢复期患儿智力障碍
流行性乙型脑炎
临床表现
（二）临床类型
分型 体温 神志 抽搐 脑膜刺激征 呼衰 病程
流行性乙型脑炎
实验室检查
（三）血清学检查
特异性 IgM 抗体测定： IgM 抗体一般在病
后3～4d即可出现，脑脊液中最早在病程第2 天测到，两周达高峰，可早期诊断。轻、中
型乙脑病人检出率高（ 95.4% ），重型和极
重型病人中检出率较低。
流行性乙型脑炎
流行性乙型脑炎
并发症
发生率约 10%，以支气管肺炎最常见， 多因昏迷患者呼吸道分泌物不易咳出，或
血清免疫学检查和病毒分离。
流行性乙型脑炎
流行性乙型脑炎
预后
病死率在10%以下，轻型和普通型患者 多能顺利恢复。但重型和暴发型患者的病
死率可高达 20% ～ 50% 。死亡病例多发生在
极期，主要因中枢性呼吸衰竭所致。存活 者可有程度不等的后遗症。
流行性乙型脑炎
流行性乙型脑炎
治疗
（一）一般治疗
病人应住院隔离，昏迷病人要注意
流行性乙型脑炎
治疗
4.恢复期及后遗症处理
要注意进行
功能训练 (包括吞咽、语言和肢体功能
锻炼)，可用理疗、针灸、按摩、体疗、
高压氧治疗等对恢复有较好疗效。
流行性乙型脑炎
流行性乙型脑炎
预防
（一） 控制传染源
包括隔离病人至体温正常，但主要传
流行性乙型脑炎研究进展
大多数是ｌ型，０９ ｌ ２０ 年相陕西省发现 Ｉ Ｉ 型乙脑病毒 。
２流行 病 学
自然 界约 ６ ０多种 动 物可 感染 乙脑 病 毒 ，包括
马、 、 、 、 、 驴 牛 狗 鸭 鹅及 各 种 鸟类 ， 中猪是 主要 的 其
２０ ０ ８马雅 等报 道 了西 藏 首例 输入 性 乙 型脑 炎
病 例 。福 建 、 东 等地 区从 台湾蠛蠓 和库 蠓 中分 离 广 出 乙脑 病 毒 ，其 能 否作 为 乙脑 的媒 介 ，还 有 待 证
实 。研 究 表 明猪是 乙型脑 炎 的主要储 存 宿 主 ， 人 与
基 金 项 目： 南 省 教 育 厅 一般 项 目（７ ３ ６ 湖 ０Ｃ ５）
一
传染源。蝙蝠 、 鹭鸟类特别是夜鹭和亚洲牛背鹭在 乙脑 病 毒 自然 循 环 中具 有 重 要 的 流 行 病 学 意 义 。 国内学者从 ４ ３只棕果蝠脑 组织 中分离 出三株 乙脑 ５ 病毒， 并在金管鼻蝠体内分离出乙脑病毒。从台湾 ２ 种 蝙蝠［ ｉｐ ｓ ｅａ Ａ ｔｒｓｎ ｉ 和 Ｍｉｉ ｔｒｓ ） Ｈ ｐ ａｉ ｒｓ（）ｅａｅ ｓ ｄ ｓ ｎｏ ｅｕ （ ｐ Ｓ ｆｌ ｉａｕ］ ｕｉ ｎｓｓ中也 分 离 到 ３株 乙脑 病 毒 。三 带 喙 库 ｇ 蚊 为 主要媒 介 ，用 实验 感 染 的方 法对 致 倦库 蚊 进 行 了敏 感性 测 定 和评 价 ，该蚊 同样对 乙脑病 毒 易 感 ， 他 如 白纹伊 蚊 、 方 伊 蚊 、 其 东 白霜 检测 了 １９ ｉ ｉ ９９年 ４月 ～ ００年 ３ ２０ 月湖北 、 河南 、 南等 七 个 省份 １０个 猪 场送 检 猪 湖 ２ 血清 １ １ 份 ， ３ ６ 乙脑抗体平均 阳性 率较高 ， 且各省 份都有一定 比例 的阳性率 ，表明猪 乙脑分布较广 泛 。余 波 等对 贵州 省农 村 散 养户 和 规模 化 养 猪 场 的 猪血 清样 本 检测 了 Ｊ Ｖ抗体 水平 ，结 果显 示 未 Ｅ 免 疫猪 群 血 清抗 体 阳性 率 远 低 于免 疫 猪群 的血 清 抗 体 阳性 率 。
乙型脑炎的检查
乙型脑炎的检查1.血象：白细胞计数一般在10～30×109/L，中粒细胞增至80%以上，核左移，嗜酸粒细胞可减少。
2.脑脊液检查：外观澄清或微混，白细胞计数增加，多数在0.05～0.5×109/L之间，个别病人可达1×109/L以上，或始终正常；在病初以中性粒细胞占多数，以后逐渐以淋巴细胞为多。
蛋白稍增加，糖定量正常或偏高，氯化物正常。
脑脊液中免疫球蛋白的测定对鉴别诊断有帮助。
化脓性脑膜炎患者脑脊液中的IgM明显升高，结核性脑膜炎患者则IgA、IgG升高显著，而病毒性脑膜炎患者在后期时IgG可有升高。
3.血清学检查：（1）血凝抑制试验：可测定IgM抗体及IgG抗体，敏感性高，方法简便快速，但试验要求严格，偶见假阳性反应。
双份血清效价增长4倍以上可确诊，单份血清抗体效价1：100为可疑，1：320可作诊断、1：640可确诊。
（2）二巯基乙醇（2ME）：耐性试验检测IgM抗体，患者血清标本在2ME处理前、后分别作血凝抑制试验，如处理后血凝抑制抗体效价下降1/2～3/4，表示特异性Ig M已被2ME裂解，即为试验阳性。
本法可在起病第4～8天即呈阳性，且由于单份血清即有辅助价值，故可对乙脑进行早期诊断。
（3）补体结合试验：特异性较高，但其阳性大都出现在第4～7周，双份血清抗体效价有4倍或以上的增长即可诊断。
若仅单份血清，1：2为可疑，1：4以上有助诊断。
（4）中和试验：病后一周血中出现中和抗体，效价增长4倍以上可确诊。
早期为IgM，后期为IgG.此法特异性及敏感性均较高，抗体持续终生。
一般用于流行病学调查。
（5）免疫荧光试验：发病初1～2天的血液或发热第2～4天的脑脊液及发热全程的脑室内的脑脊液，均可采用本法检测乙脑病毒抗原，方法快速，阳性率高，有早期诊断价值。
酶联免疫吸附试验（ELISA）：一般用于测定血清中的乙脑抗体，比较灵敏、特异。
4.病毒分离：病初可取血清或脑脊液接种乳鼠以分离病毒，但阳性率较低。
抗原表位
研究方法
2.2 基因工程法（噬菌体随机肽筛选法）
该法先利用基因克隆技术将合成的 一组寡核苷酸混合物（小肽基因混 合物）克隆至线性噬菌体基因组中 ，使之以融合蛋白的形式在噬菌体 的外壳蛋白的氨基端表达。再利用 生物素或酶标记的抗体筛出特异的 噬菌体，并进行扩增，再筛选，从 结合特异抗体的噬菌体DNA序列推 断出氨基酸序列，并合成相应的短 肽，验证筛选结果。
从软件预测出的抗原表位须用实验来进一步验证。
以往合成的序列肽仅模拟蛋白质的线性表位，这无疑会遗漏众 多的构象性表位信息。近些年来,随着生物信息学和分子生物 学技术的飞速发展，采用计算机预测和试验相结合的方法进行 构象性表位分析和定位得到了迅速发展，一些可用的基于Web 的预测软件已经公布，如 CEP软件、DiscTope 软件和 MEPS软 件。
缺点是其所用的数据库有限，并且连续位点内的残基被认为 是同等重要的。显然那些不重要的残基归入计算会明显降低 相关性。
(4)可塑性方案(Flexibility)
指蛋白抗原构象不是刚性不变的，其多肽链骨架有一定程度 的活动性，活动性强的氨基酸残基即可塑性大的位点，易形 成抗原表位。Karplas 和Schulz基于已知结构的31个蛋白 质，发展了一种预测蛋白质片段活动性的方法。
可预测蛋白质β转角的有Chou-Fasman，Garnier，Cohen 等方法。其中各种方法预测的成功率均不超过65%。一般认 为Cohen方法对转角的预测正确率很高，对于已知折叠类型 的蛋白质(αα类，ββ类，α/β类)正确率高达95%，对于未知 结构类型的蛋白质，可用3种类型分别预测，3类预测一致 的转角对预测表位有帮助。
抗原表位鉴定与作图
抗原表位，又称抗原决定簇，是抗原分子抗原性的基础。正确而详细地绘制抗原表位图谱对疾病地诊断、设计无毒副作用地多表位疫苗以及免疫治疗试剂等具有积极的意义。因此目前在预防医学领域许多关于以表位为基础的，如表位疫苗和特异性诊断试剂等的研究也就成了热点。
而噬菌体展示技术作为近年来新兴起的研究蛋白质抗原表位的有利工具，已经成功地鉴定出了多种病原微生物地抗原表位。
这就为揭示一些病原体未知地抗原表位，从而进一步达到预防和控制疾病地发生提供了条件。表位作图可用于检测免疫反应特异性或不同抗体的鉴别以及蛋白质在细胞中的定位。
表位可根据其功能的不同分为两种不同类型：①线性表位(1inear)：为小的线状肽链序列，约为5～20个氨基酸；②构象表位(conformational)：由蛋白折叠而形成的较大的区域。抗原—抗体结合晶体结构研究表明存在两种类型的表位。
④筛选基于表位基序的疾病、肿瘤等新的特异诊断标志物；
⑤高通量发现同源蛋白中全部保守性和特异性表位
⑥筛选功能性抗体表位或者抗体中和性及可及性表位；
⑦为表位水平分析病毒遗传进化和变异，提供抗原漂移和转移的直接证据。
线性表位的抗体结合位点与其氨基酸侧链骨架之间形成了较强的多样性结构，并与相邻的肽链序列连接在一起，这些表位也被称为连续性表位。事实上线性表位需要某些局部的结构变形或为紧密的、但并非连续的氨基酸序列，如那些兼性。螺旋结构。因此，所谓线性表位的描述是不够确切的。所有与抗体结合位点功能相关的结构，均位于一个肽链片段之中。而来自于该片段之外的其他序列，对于抗体结合位点的构成并非重要。
通过新型生物合成肽法进能鉴定多抗表位，且能获知靶蛋白上全部且精细线性B细胞表位。
目前的表位鉴定技术能够实现：
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Abs tract: In order to map the antigenic epitopes domain Ⅰ , Ⅱ of the envelope (E) protein of Japanese encephalitis virus (JEV), a set of partially overlapping fragments spanning the E protein were fused with GST and expressed. The reactivity of the fusion proteins was detected by western blot and ELISA. Five linear antigenic epitopes, E1 (1FNCLGMGNRDFIEGAS16), E10-4 (77TGEA HNEK84), E11-2 (83EKRADSSYVCKQ94), E19 (145GTTTSENHGNYSAQVG160) and E33 (257SQEGGLHHALAGAIVV272) were identified. Immunization of mice with the fusion proteins revealed that all five proteins could elicit short peptide specific antisera. These results provided important basis for study of the structure and function of domain I, II of the JEV E protein, and development of diagnostic techniques.
E12 89SYVCKQGFTDRGWGNG104 E30 233WRNRELLMEFEGAHAT248
E13 97TDRGWGNGCGFFGKGS112 E31 241EFEGAHATKQSVVALG256
E14 105CGFFGKGSIDTCAKFS120 E32 249KQSVVALGSQEGGLHH264
为了进一步确定 E 蛋白的抗原表位，本研究设 计了一组覆盖 E 蛋白 I、II 结构区域的部分重叠短 肽，基因合成后克隆于原核表达载体进行融合蛋白 表 达 。 通 过 对 表 达 融 合 多 肽 进 行 western blot 和 ELISA 反应性筛选，鉴定线性抗原表位为针对 JE 建 立基于抗原表位水平的特异性诊断方法奠定了基础。
Key words : Japanese encephalitis virus; envelope protein; epitope
流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis，JE)，是 由 JE 病毒(JEV)引起的一种人与动物共同感染的蚊
媒病毒性疾病。JEV 主 要 侵 害 人 的 中 枢 神 经 系 统 ， 引起急性病毒性脑炎，导致高病死率(25 %)，或神经
第 32 卷 第 1 期 2010 年 1 月
中国预防兽医学报
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine
Vol. 32，No.1 Jan. 2010
乙型脑炎病毒 E 蛋白Ⅰ、Ⅱ结构域抗原表位鉴定
闫丽萍 1，华荣虹 2，亓文宝 3，周艳君 1，李国新 1， 于 海 1，姜一峰 1，田志军 2，童光志 1*
E6 41LDVRMINIEASQLAEV56 E24 185EVTLDCEPRSGLNTEA200
E7 49EASQLAEVRSYCYHAS64 E25 193RSGLNTEAFYVMTVGS208
E8 57RSYCYHASVTDISTVA72 E26 201FYVMTVGSKSFLVHRE216
57
- 精神后遗症[1]；JEV 感染猪可引起其繁殖障碍，给养 猪业造成巨大的经济损失[2]。JEV 主要流行于亚洲[3-4]， 在南半球亦有报道[5-6]。
E 蛋白是 JEV 的主要结构蛋白，由 500 个氨基 酸组成，它在病毒的吸附、融合、血凝、细胞趋向 性、病毒毒力和诱导保护性免疫反应中起重要作 用。Kolaskar 等认为 E 蛋白的三维结构域Ⅲ(292 aa ～402 aa)，集中许多抗原中和表位[7]。Seif 等通过分 段表达 E 蛋白，证明了中和表位存在于 E373～399 位的 27 个氨基酸序列内[8]。Wu 等发现 JEV 的 中和 位 点 主 要 集 中 在 E Ⅲ 的 E307 ～309、 E327 ～333、 E386～390 这 3 个区域内[9]。本研究通过截短表达鉴 定 出 JEV E Ⅲ 的 线 性 抗 原 表 位 E39 (305 ～320)、 E45-1 (355 ～366)、 E48-1 (377 ～384) 和 E49 (385 ～ 400)，经体外病毒中和试验表 明，E39 为具有病毒 中和活性的抗原表位 。 [10]
*Corresponding author
收稿日期：2009-09-24 基金项目：院所长基金(2006-A-02) 作者简介：闫丽萍(1977-)，女，黑龙江双鸭山人，助理研究员，博士，主要从事动物病毒分子生物学研究. * 通信作者：E-mail：gztong@
第1期
闫丽萍，等. 乙型脑炎病毒 E 蛋白Ⅰ、Ⅱ结构域抗原表位鉴定
1 材料和方法
1.1 质粒、阳性血清及实验动物 质粒 pGEX-6P1、E.coli DH5α 及 BL21 均为本实验室保存。兔抗 JEV SA14-14-2 疫苗株阳性血清由第四军医大学马文 煜教授 惠 赠 。BALB/c 小 鼠 为 中 国 农 业 科 学 院 哈 尔 滨兽医研究所实验动物中心提供。 1.2 酶与标记物 限制性内切酶及 T4 DNA 连接酶 均为 TaRaKa 公司产品；红外荧光标记(IRDye700)的 抗兔 IgG 抗体、红外荧光标记(IRDye700)的抗鼠 IgG 抗体购自 Rockland 化学免疫试剂公司；IPTG、凝胶 回收试剂盒为上海华舜生物工程有限公司产品。合 成短肽由南京博亚生物有限公司合成。 1.3 短肽融合蛋白的设计 对 E 蛋白 I、II 结构区 域(1 aa～296 aa)进行抗原表位作图，设计了一套覆 盖全部 E 蛋白 I、II 结构区域的 36 个短肽 E1～E36。 这些短肽长为 16 aa，部分重叠，各肽序列及位置如 表 1 所示。并设计合成了 36 对寡核苷酸链。在编码 区的 5' 端引入 BamH I 位点，3' 端引入 Xho I 位点。
结构域(1 aa～296 aa)部分重叠短肽，分别进行 GST 融合表达，用 JEV 阳性血清进行 western blot 和 ELISA 反应性
筛选，获得了 5 个线性抗原表位分别为：E1(1FNCLGMGNRDFIEGAS16)、E10-4(77TGEAHNEK84)、E11-2(83EKRADSS
E3 17GATWVDLVLEGDSCLT32 E21 161ASQAAKFTVTPNAPSV176
E4 25LEGDSCLTIMANDKPT40 E22 169VTPNAPSVALKLGDYG184
E5 33IMANDKPTLDVRMINI48 E23 177ALKLGDYGEVTLDCEP192
(1. 中国农业科学院 上海兽医研究所，上海 200241；2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点 实验室 / 猪传染病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001；3. 华南农业大学 兽医学院，广东 广州 510642)
摘 要：为鉴定乙型脑炎病毒(JEV) E 蛋白 I，II 结构域抗原表位，本研究设计了一系列针对 E 蛋白的 I、II
E9 65VTDISTVARCPTTGEA80
E27 209KSFLVHREWFHDLALP224
E10 73RCPTTGEAHNEKRADS88 E28 217WFHDLALPWTSPSSTA232
E11 81HNEKRADSSYVCKQGF96 E29 225WTSPSSTAWRNRELLM240
寡核苷酸由北京英骏生物技术有限公司合成。
1.4 短肽的融合表达与纯化 pGEX-6P-1 经 BamH
I、Xho I 双酶切回收后分别与退火的各双链寡核苷
酸 连 接 ， 重 组 子 经 酶 切 鉴 定 后 命 名 为 pGEX-E1 至
pGEX-E36，由北京英骏生物技术有限公司测序验证。
将重组质粒转化感受态大肠杆菌 BL21，进行表达。
关键词： 乙型脑炎病毒；E 蛋白；抗原表位
中图分类号： S852.65
文献标识码： A
文章编号：1008-0589(2010)01-0056-05
Antige nic e pitope s ma pping of doma in I, II of J a pa ne s e e nce pha litis virus e nve lope prote in
E15 113IDTCAKFSCTSKAIGR128 E33 257SQEGGLHHALAGAIVV272
E16 121CTSKAIGRTIQPENIK136
E34 265ALAGAIVVEYSSSVML280
YVCKQ94)、E19(145GTTTSENHGNYSAQVG160)和 E33(257SQEGGLHHALAGAIVV272)。除 E10 和 E19 外 ，其它 表 位 均
为第一次通过实验方法确定的。将这 5 个融合蛋白对小鼠进行免疫，获得了高滴度的针对 5 个融合短肽的抗血清，
研究证明了这些表位具有良好的免疫原性。本研究为乙型脑炎特异性诊断试剂及表位疫苗的开发奠定了基础。
将表达产物超声波况。可溶性短肽融合蛋白用谷胱甘肽 Sepharose
4B RediPack 亲和层析柱(Pharmacia Biotech)纯化，操
作步骤按说明进行，纯化后测定蛋白质含量。不溶