2019最新版高效液相色谱法操作规程
液相色谱操作规程
液相色谱操作规程液相色谱操作规程液相色谱（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于制药、化学、食品、环境等领域。
为了确保实验结果的准确性和实验室安全，以下是液相色谱操作的一般规程，供参考。
1. 实验前准备- 检查液相色谱仪的状态，确保仪器正常运行。
检查流动相、样品、色谱柱等试剂和设备的有效性和存放条件。
- 清洗和准备色谱柱。
按照柱内包装说明进行操作，如需更换柱，要将原柱溶液彻底洗净，并严格按照规程存储。
2. 样品准备- 准备样品溶液，注意选用适合的溶剂，并控制样品的浓度在色谱柱适用范围内。
- 对于固体样品，要将其溶解在适当的溶剂中，使用滤膜过滤以除去杂质。
3. 仪器启动和操作- 打开液相色谱仪，确保仪器连接正常并处于待机状态。
- 打开软件，设置操作参数，如流速、检测波长、温度等，并校准仪器。
- 检查进样器和检测器的运行情况，确保它们的正常工作。
- 启动柱温箱并设置温度。
4. 进样和分离- 使用适当的方式进样，如自动进样器或手动进样器，并确保进样量适当。
- 设置适当的流速和柱温，开始分离实验。
- 注意记录实时的色谱图和数据。
5. 后处理和结果解释- 完成分离后，关闭液相色谱仪。
- 分析数据，包括峰面积、保留时间和峰高等，与标准曲线或其他样品对照进行比较。
- 解释和记录实验结果。
6. 清洗和保养- 分离结束后，进行色谱柱的清洗和保养。
根据柱的材质和要求，选择适当的清洗方法和溶剂，彻底清洗柱内的杂质，避免污染或损坏柱。
- 清洗完毕后，根据柱的要求存储或封存，以确保柱的使用寿命。
7. 实验室安全- 在实验过程中，注意个人防护措施，戴上实验手套、护目镜等。
尽量避免将试剂接触皮肤和眼睛，如不慎溅到眼睛或皮肤上应立即用大量清水冲洗。
- 坚持实验室清洁和卫生，在实验后及时清理实验台面、器材和废弃物，保持良好的工作环境。
液相色谱是一项繁琐的实验技术，需要严格遵守操作规程和实验室安全要求。
以上规程仅供参考，具体操作还需根据实验目的、仪器型号和试剂要求进行调整。
高效液相色谱仪使用与操作规程学生用
水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。 5、 色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存； 6、 不要高压冲洗柱子； 7、 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；
使用过程中注意轻拿轻放。
2 、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以进 样了。
3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少注样2次 。
五）谱图的判断及结果计算
1、系统适用性实验：
①分离度：一般应≥1.5。 ②重复性：两次谱图的峰面积应相差不的过1%。 ③理论塔板数：应≥规定的理论塔板数目。 ④拖尾因子：0.95＜T＜1.05 ⑤保留时间：对照与样品的主成分保留时间应大致一致。 ⑥RSD： 精密度＜3% 。
4.柱内烧结不锈钢失效 5.柱塌陷或形成短路通道 6.死体积或柱外体积过大
7.柱效下降
1.降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相 2.清洁样品,调整流动相 3.加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度
降低流动相PH值,钝化样品 4.更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 5.更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件 6.连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可
3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他 人的方法及实验结果；
4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒， 洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针 筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；
5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过 滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗 涤；
高效液相色谱法标准操作规程
高效液相色谱法标准操作规程1. 目的建立高效液相色谱法标准操作规程，规范高效液相色谱法检验操作，保证检验操作规范化。
2. 范围适用于高效液相色谱法检验操作。
3. 术语或定义N/A4. 职责质量控制部对本规程的实施负责。
5. 程序5.1依据《中国药典》2020年四部及2019年版《中国药品检验标准操作规范》。
5.2 简述高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
5.3 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局“液相色谱仪检定规程”定期检定并符合有关规定。
5.3.1色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。
反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等) 也有使用。
正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。
离子交换色谱系统使用离子交换填充剂; 分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。
孔径在15nm(lnm=10A)以下的填料适于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。
除另有规定外，分析柱的填充剂粒径一般在3～10μm之间。
粒径更小(约2μm)的填充剂常用于填装微径柱（内径约2mm) 。
使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。
当对其测定结果产生争议时，应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。
HPLC操作规程
HPLC高效液相色谱操作规程
1、仪器操作前应仔细阅读操作手册，并在专人指导下进行。
2、打开电源前，检测仪器与电脑的电源线，数据线以及输液管道
是否连接正常。
3、打开电源，在仪器通过自检后，打开操作软件，选择合适的检
测器，建立仪器方法，设定实验方法。
4、将处理好的样品注入样品瓶，封好杯口，将样品瓶按顺序放入
样品盘中。
5、实验结束后，根据色谱柱类型用相应的流动相清洗柱30分钟，
若使用过缓冲液，应该用不少于10%的甲醇或者乙腈水溶液冲洗系统，以防堵塞。
冲洗完成后要用规定的液体保存色谱柱，长期不用要将柱子取下，两端拧紧，密封保存。
6、退出色谱工作站，关闭各模块电源开关，清洁实验工作面。
7、关闭仪器总电源开关，结束实验, 填写仪器使用记录。
注意事项：
1、所使用的流动相、缓冲溶液在使用前需经膜过滤、超声脱气，
样品经针头过滤器（0.02um）过滤。
2、流动相过滤时应注意用相应的有机膜或无机膜，不能混用。
3、停泵时应将泵的流量设置为0，使泵缓慢停止工作。
4、拆装柱时应注意柱子的方向。
高效液相色谱仪使用与操作规程
4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正
常。
第二步、开 机
接通电源，依次开启不间断电源、四 元泵、自动进样器、柱温箱、检测器，待 泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、
主机，最后打开色谱工作站。
一）参数设定
1、 波长设定： 2 、流速设定： 3 、流动相规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积
的流动相。
检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。
观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如
超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操
作。
观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声
二、样品
1、采用过滤或离心方法处理样品，
确保样品中不含固体颗粒； 2、用流动相或比流动相弱（若为反
相柱，则极性比流动相大；若为
正相柱，则极性比流动相小）的 溶剂制备样品溶液，尽量用流动
相制备样品液；
3、手动进样时，进样量尽量小，使 用定量管定量时，进样体积应为 定量管的3～5倍；
第四步、注意事项
人的方法及实验结果；
3、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒， 洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针
筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；
4、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过 滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用 5%稀硝酸溶液浸泡后再洗
四、出现肩峰或分叉
1.样品体积过大
1.用流动相配样,总的样品体积小于第一峰 的15% 2.样品溶剂过强 3.柱塌陷或形成短路通道 4.柱内烧结不锈钢失效 2.采用较弱的样品溶剂 3.更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
hplc操作规程
hplc操作规程HPLC（高效液相色谱）是一种高效、准确、灵敏的分析技术，广泛应用于化学、生物、药物等领域。
为了确保HPLC分析的准确性和可靠性，有必要制定一份详细的HPLC操作规程。
以下是一个HPLC操作规程的示例，共计1200字。
HPLC操作规程1. 实验前准备工作(1) 确保仪器处于正常工作状态。
检查HPLC系统的压力、流速、温度等参数，确保所有泵、检测器和采样器都能正常工作。
(2) 根据实验的需求，准备好HPLC色谱柱和色谱柱保护柱。
(3) 检查溶液的pH值、浓度等参数，确保样品溶液的配制准确无误。
2. 样品制备(1) 根据实验需求，准确称取适量的样品，并将其溶解于适量的溶剂中。
(2) 需要注意的是，溶解样品时要完全溶解，避免残留物对HPLC柱造成损害。
(3) 使用过滤器或离心机去除样品中的杂质和固体颗粒。
3. 系统平衡(1) 打开HPLC系统的所有阀门，确保流路畅通。
(2) 开始系统平衡前，关闭检测器和采样器，以避免样品流入检测器和采样器。
(3) 启动系统，调整流速至实验所需的流速。
通常流速为0.2-2 mL/min。
(4) 进行15-30分钟的系统平衡，确保系统稳定。
4. 校正和质量控制(1) 定期校正流速、温度和检测器灵敏度等参数，确保实验结果的准确性。
(2) 进行质量控制，包括运行标准曲线、检测器灵敏度和峰面积的稳定性等测试，以确保分析结果的可靠性。
5. 样品注射(1) 将样品以合适的方式注入采样环或自动采样器中。
(2) 确保注射量适当，一般不超过色谱柱的容量的10%。
(3) 使用空白样品作为对照，进行注射前和注射后的检测，以排除注射器、柱等可能引起的峰偏移或异常的情况。
6. 数据采集和分析(1) 设置合适的检测波长和积分时间，以获得准确的检测结果。
(2) 在实验过程中定期检查系统的稳定性和峰形。
(3) 根据实验要求，对分析结果进行计算和解释，包括峰高、峰面积、保留时间等指标。
(4) 记录得到的数据和结果，保存实验记录和报告。
高效液相色谱仪的基本操作和使用
高效液相色谱仪的基本操作和使用1.准备工作：-确保高效液相色谱仪的设备和耗材齐全。
-检查色谱柱，确保色谱柱选择正确并在有效使用期内。
-检查溶剂的质量和纯度，确保溶剂无杂质。
-设置所需的操作温度。
2.连接高效液相色谱仪：-将进样器连接到色谱柱，并将进样针座固定住。
- 将固相柱插入色谱柱座，然后将电导/ UV-Vis检测器连接到色谱柱座。
3.样品制备：-将待测样品溶解于合适的溶剂中，并进行必要的前处理步骤（如过滤、稀释等）。
-对于固体样品，可以采用适当的溶解方法，如超声波处理等。
4.设置色谱仪参数：-开启电源，等待色谱仪预热稳定。
- 打开色谱仪的软件，并设置所需的参数，包括流速、波长（对于UV-Vis检测器）、进样量、运行时间等。
5.校准仪器和程序：-制备标准品溶液，并用标准曲线法对色谱仪进行校准，以确保仪器输出的结果准确可靠。
-确认色谱仪的波长和检测器的线性范围，并根据需要进行修正。
6.进样：-打开进样器盖，用吸尘器吸出残液，然后用纯溶剂将针清洗干净。
-分别进行空白样品和待测样品的进样，保证进样量准确。
7.开始运行：-在软件界面上点击“开始运行”，观察色谱图输出的曲线形状和峰的出现。
-根据需要，可以进行多次重复运行。
8.结果分析：-对于定性分析，根据色谱图的特征峰形状、保留时间和波长，进行物质的鉴别。
-对于定量分析，根据标准曲线和色谱图的峰面积，计算出待测样品中目标物质的浓度。
9.清洗仪器：-运行结束后，关闭仪器，并将进样器和色谱柱进行清洗。
10.维护：-定期检查仪器的性能和功能是否正常。
-及时更换色谱柱、固相柱和检测器，确保仪器的正常运行。
-做好仪器维护和维修记录。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程
《高效液相色谱仪操作规程》
一、实验目的
本实验旨在通过高效液相色谱仪分析样品，准确测定目标化合物的含量，并学习高效液相色谱仪的操作方法和技巧。
二、实验设备
1. 高效液相色谱仪
2. 注射器
3. 色谱柱
4. 移液管
5. 色谱仪软件
三、操作步骤
1. 打开高效液相色谱仪的电源并进行系统初始化，启动色谱仪软件。
2. 调整流速，进样量等参数，使得实验条件符合要求。
3. 将样品通过移液管注入色谱柱中，注意避免样品泡沫和气泡的产生。
4. 设置色谱条件，如梯度洗脱，流速等，启动色谱分析。
5. 记录实验数据和结果，并进行数据处理和分析。
6. 清洗色谱仪，保持设备清洁。
四、实验注意事项
1. 在操作色谱仪时，要严格按照操作步骤进行，严禁随意更改参数。
2. 在进行样品进样时，要小心操作，避免产生气泡和样品泡沫。
3. 在进行色谱分析时，注意梯度洗脱条件的设置，保证分析结果准确。
4. 在实验结束后，及时清洗色谱仪，保持设备干净。
五、实验结果
根据实验数据和结果，可以得出目标化合物的含量和纯度，并进行结果的解释和分析。
通过《高效液相色谱仪操作规程》的学习，使我们更加熟悉高效液相色谱仪的操作方法和技巧，能够准确进行样品分析，为科研工作的开展提供了重要的技术支持。
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药品生产质量管理体系
质量控制文件
2019年最新版
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审核: 日期:
批准: 日期:
发放范围：公司各部门 2020年01月01日生效
目录
目的： (3)
范围： (3)
责任： (3)
依据： (3)
内容： (3)
对仪器的一般要求 (3)
系统适用性试验 (3)
测定法 (5)
文件更改履历 (8)
目的：建立一个相对高效液相色谱法操作规程。
范围：物料检验。
责任：检验员、质检科长、质保科长、质量总监。
依据：《中华人民共和国药典》2000年版
内容：
高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。
1、对仪器的一般要求
所用的仪器为高效液相色谱仪。
色谱柱的填充剂和流动相的组分应按各品种项下的规定。
常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。
后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用；离子交换填料，用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等，用于分子排阻色谱等。
注样量一般为数微升。
除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。
在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法（附录ⅣA）项下对溶剂的要求。
正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。
一般色谱图约于20分钟内记录完毕。
2、系统适用性试验
按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度重复性和拖尾因子。
（1）色谱柱的理论板数（n）在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t R（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半高峰宽（W h/2），按n=5.54(t R/ W h/2)2计算色谱柱的理论板数，如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。
（2）分离度定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分
离度。
分离度（R）的计算公式为：
式中t R2为相邻两峰中后一峰的保留时间；
t R1为相邻两峰中前一峰的保留时间；
W1及W2为此相邻两峰的峰宽.
除另有规定外,分离度应大于1.5。
（3）重复性取各品种项下的对照溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对偏差应不大于2.0%。
也可按各品种校正因子测定项下，配制相当于80％、100％和120％的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平均校正因子，其相对标准偏差也应不大于2.0%。
（4）拖尾因子为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子（T）是否符合各品种项下的规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。
拖尾因子计算公式为：
W0.05h
T＝＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿
2d1
式中W0.05h为0.05峰高处的峰宽;
d1为峰极大至峰前沿之间的距离.
除另有规定外,T应在0.95-1.05之间.
3．测定法
定量测定时，可根据供试品的具体情况采用峰面积法或峰高法。
测定杂质含量时，须采用峰面积法。
（1）内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量
按各品种项下的规定，精密量取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。
取本品一定量注入仪器，记录色谱图。
测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子：
A S/ C s
校正因子(f)＝＿＿＿＿＿＿＿
A R/C R
式中A S为内标物质的峰面积或峰高;
A R为对照品的峰面积或峰高;
C s为内标物质的浓度；
C R为对照品的浓度。
再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：
A X
含量（C X）＝f×＿＿＿＿＿＿＿＿
A R/C R
式中A X为供试品（或其杂质）峰面积或峰高；
C X为供试品（或其杂质）的浓度。
其余同上。
（2）外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量
按各品种项下的规定，精密量取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积或峰高，按下式计算含量：
A X
含量（C X）＝C R×＿＿＿＿＿＿＿＿
A R
式中各式符号意义同上。
（3）加校正因子的主成分自身对照法
测定杂质含量时，可采用加校正因子的主成分自身对照法。
在建立方法以时，按各品种项下的规定，精密称（量）取杂质对照品和待测成分对照品各适量，配制测定杂质校正因子的溶液，进样，记录色谱图，按上述（1）法计算杂质的校正因子。
在校正因子可直接载入各品种正文中，用于校正杂质的实测峰面积。
测定杂质含量时，按各品种项下规定的杂质限度，将供试品溶液稀释成与杂质限度相当的溶液作为对照溶液，进样，调节仪器灵敏度（以噪音水平可接受为限）或进样量（以柱子不过载为限），使对照溶液的主成分色谱峰高约达满量程的10％～25％或其峰面积能准确积分（面积约为通常条件下满量程峰积分值的10％）。
然后，取供试品溶液和对照品溶液适量，分别进样，供试品溶液的记录时间除另有规定外，应为主成分保留时间的若干倍，测量供试品溶液图上各杂质的峰面积，分别乘以相应的校
正因子后与对照溶液主成分的峰面积比较，依法计算各杂质含量。
（4）不加校正因子的主成分自身对照法
当没有杂质对照品时，可采用不加校正因子的主成分自身对照法。
同上述（3）法配制对照溶液并调节仪器灵敏度后，取供试品溶液和对照溶液适量，分别进样，前者的记录时间除另有规定外，应为主成分保留时间的若干倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积并与对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质含量。
若供试品所含的部分杂质未经与溶剂峰完全分离，则按规定先记录供试品溶液的色谱图Ⅰ，再记录等体积纯溶剂的色谱图Ⅱ。
色谱图Ⅰ上杂质峰的总面积（包括溶剂峰），减去色谱图Ⅱ上的溶剂峰面积，即为总杂质峰的校正面积。
然后依法计算。
（5）面积归一法
由于峰面积归一化法测定误差大，因此，本法通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。
除另有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。
方法是测量杂质峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积占总峰面积的百分率，即得。
由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中某杂质或主成分含量时，以定量环进样为好。
文件更改履历
文件更改履历。