α-淀粉酶活性的测定呢
α–淀粉酶活力测定[辅导]
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α–淀粉酶活力测定----目视碘比色法一实验目的1. 了解α–淀粉酶酶活力测定原理。
2．掌握α–淀粉酶酶活力测定的方法步骤。
二、实验原理比色法作为一种定量分析的方法，是以生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。
常用的比色法有两种：目视比色法和光电比色法，两种方法都是以朗伯比尔定律 (A＝kLC)为基础。
酶活力的大小、即酶量的多少用酶活力单位（U）（active unit）表示。
1961年国际生物化学学会酶学委员会提出采用统一的“国际单位”（IU）来表示酶的活力，规定为：在最适条件（25℃）下，每分钟内催化1微摩尔（μmol）底物转化为产物所需的酶量定为一个活力单位，即1IU = 1μmol /min。
这样酶的含量就可用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少酶活力单位来表示（U/g或U/ml）。
淀粉（紫蓝色，30分子以上）红色糊精（红棕色，7-30分子）无色糊精（7分子以下）、麦芽糖不显色。
通过测定酶促反应分解一定量淀粉的时间，以标准糊精（红色糊精）和碘反应的颜色作为终点指示（所给定的淀粉都已转化为糊精的时间）。
碘比色法酶活力规定：在60℃条件下，1小时转化1g 淀粉变为糊精的酶量定义为1个酶活力单位。
三、实验操作1．取试管1支，加入1ml标准糊精和3ml 标准稀碘液。
2．取锥形瓶一个，加入2%淀粉20ml和Ph6.0的缓冲液5ml。
3．将锥形瓶置于60℃水浴中，保温5分钟。
4．在比色盘中加入比色碘液，每穴2滴。
5．在锥形瓶中加入淀粉酶溶液2 ml，摇匀，开始计时。
6．在反应的前4分钟，每隔1分钟从锥形瓶中取1滴液体，与比色稀碘液混合，而后，每隔30秒从锥形瓶中取1滴液体与稀碘液混合，直至呈色与终点色一致。
四、酶活性计算实验注意事项：（1）测定酶促反应在锥形瓶中进行，标准反应在试管中进行。
（2）比色盘第1号位加入标准糊精和2滴标准碘液。
（3）应时间大约在10-15分钟。
可见分光光度法测定α-淀粉酶活力
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化 学 与 生 物 工 程 ２０２０,Vol．３７No．０３ www．
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张雪娇,田欢,刘春叶,等 ．可见分光光度法测定 α
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实验一 α-淀粉酶活力的测定
颜色变化终点要照像，并多媒体型实验结果 单独标注班级和小组名提交或图片型实验结果 直接写入在实验报告书里。
[实验报告书书写要求]
1. 实验报告书的编写要参考教师提出的写作格式规范。 2. 即：题目、作者（包括同组成员）、单位（班级和组别）、
酶活力单位（g/ml）=(60/T×20×2%×N)÷0.5
60 —酶活定义中反应时间为60min； T —反应时间（min）； 20 —可溶性淀粉的毫升数； 2% —可溶性淀粉浓度； N —酶液稀释倍数； 0.5 —测定时所用的稀酶液量（ml）。
表 1 α-淀粉酶活力测定结果
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[实验结果处理要求]
酶活力单位gml60t202n05实验结果计算实验结果计算重复数反应时间min酶活力gmlmin要求实验过程中淀粉的颜色变化过程录像或颜色变化终点要照像并多媒体型实验结果单独标注班级和小组名提交或图片型实验结果直接写入在实验报告书里
实验一 α-淀粉酶活力的测定
[实验性质] 验证性实验 [实验学时] 2学时 [实验目的] (1) 掌握淀粉酶糖化淀粉的原理；
[实验步骤]
第一步：待测酶液的配制； 第二步：标准色的配制； 第三步：样品的酶解反应； 第四步：计算。
1. 待测酶液的制备
α-淀粉酶
1.000 g
①
50 mL
2. 标准色的配制
150mL
60℃,30 min
250 mL
③可溶性淀粉 2.0g
酶液
2%淀粉液
A液
②
B液
8.0 mL 1.0 mL
3. 样品测定步骤
中文摘要、中文关键词、英文摘要、英文关键词、前言、材 料与方法、结果与讨论、结论、参考文献等顺序。 2. 报告书的篇幅要求2000字以上。 3. 参考文献必须5篇以上，并至少有一篇英文。 4. 提交时间限为每周一 下午3点。先交到课代表，由课代表汇 总之后按时送到任课老师办公室。 5. 领取的报告书要妥善保管，期末考试时作参考。
二、α-淀粉酶活力的测定2010(精)
根据吸光度表C1，查得所测酶液的酶活力
5.1.3 计算酶活力
X=c×n
其中：X—样品的酶活力，单位为u/g c—测试酶液的酶活力，单位为u/g n—样品的稀释倍数
5.3 注意事项
✓ 酶反应时间应准确计算。 ✓ 试剂加入按规定顺序进行。
6.实验报告
✓ 记时器
每组 1台
3.2 器材（每组）
✓ 15ml大试管10支 ✓ 5ml移液管10支 ✓ 1ml移液管5支 ✓ 10ml移液管10支 ✓ 比色皿1套（4个） ✓ 双蒸水1瓶（50ml） ✓ 洗瓶1个 ✓ 玻璃平皿1套 ✓ 50ml小广口瓶（棕色）2个 ✓ 50ml 容量瓶 1个 ✓ 100ml 容量瓶 1个 ✓ 500ml 试剂瓶2个 ✓ 100ml 试剂瓶2个 ✓ 250ml 三角瓶2个 ✓ 200ml烧杯2个 ✓ 500ml烧杯1个 ✓ 记号笔1支、吸耳球、称量纸、药勺、试管架、
生物技术专业系统实验（四）
——酶（蛋白质）工程实验II
二、α-淀粉酶活力的测定
--国家标准GB 8275-2009
1.目的意义 2.实验原理 3.试剂和溶液 4.仪器和器材 5.实验方法 6.实验报告 7.思考题
1.目的意义
➢ 淀粉是葡萄糖以α-1,4糖苷键及α-1，6糖 苷键连结的高分子多糖，是人类和动物的 主要食物，也是食品、发酵、酿造、医药、 纺织工业的基本原料。
➢ 例如，生产葡萄糖需要葡萄糖淀粉酶，但 仅有葡萄糖淀粉酶作用，不能液化淀粉溶 液，葡萄糖的生成速度非常慢。此时，α淀粉酶的使用就成为必要条件。
➢ α-淀粉酶的活性测定，在理论 研究和实际应用中具有重要的 意义。
➢ 通过本实验，学习一种测定α淀粉酶酶活力的方法，巩固并 熟练分光光度计的使用方法。
α-淀粉酶测定的操作规程
α-淀粉酶测定的操作规程1、用途：测定人血清中或尿液中α-淀粉酶的酶活浓度。
2、原理：α-淀粉酶与α-葡萄糖苷酶偶联，水解特异性底物4,6-亚乙基-4-硝基苯酚-α-庚糖，产生对-硝基苯酚，对-硝基苯酚生成速率与α-淀粉酶的活性成正比，在405nm波长下用速率法检测。
3、适用仪器：奥林巴斯AU480型全自动生化分析仪.4、样本要求：4.1、样本种类：新鲜无溶血血清或尿液。
4.2、样本采集：常规静脉采血约2ml，不抗凝。
置普通管中，或采用含有分离胶的真空采血管。
尿液保存时应将pH值调节至7.0。
4.3、样本干扰：对反映吸光度有干扰的样本，包括溶血和浑浊的样本都可能影响检测结果遇上述情况建议重新采集标本。
4.4、样本保存：血清样本2℃—8℃可稳定7天，-20℃可保存一个月，忌反复冻融。
尿液样本2℃—8℃可稳定10天.5、检测方法：5.1、试剂的准备：试剂开瓶即可使用。
5.2、检测步骤：2、动生化分析仪操作步骤：参数设置→试剂装载→校准→质控→样品加载→测定→结果审核→报告。
5.3、校准：用K因素进行试剂空白校准，也可使用Diazyme公司校准品进行校准操作，当试剂更换批号、出现质控漂移、仪器做完保养后及重要零件更换时，须重新校准。
5.4、结果计算：全自动生化分析仪会自动给出检测结果。
3、6、参考范围：(各医院应根据本地区实际情况建立自己的参考范围。
）7、注意事项：7.1、试剂具有一定的酸碱性，避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。
7.2、使用后的器具应按照规定处理，扔入指定的垃圾箱内，不可随处乱扔，防止环境污染和二次使用。
7.3、由于运输过程产生渗液或漏夜的产品，或在运输贮存中没有按照说明书要求进行维护的试剂，不可使用。
7.4、试剂只用于体外诊断。
8、参考文献：中华人民共和国卫生部医政司，全国临床检验操作规程（第三版），东南大学出版社，2006。
王惠萱、李雪梅、王冈，临床检验操作手册，云南科技出版社，2008.陆永绥、李清华、张伟民主编，临床检验自动化仪器分析标准操作规程，浙江大学出版社，2006.。
α-淀粉酶amy检测原理麦芽庚糖苷法
α-淀粉酶amy检测原理麦芽庚糖苷法α-淀粉酶是一种能够分解淀粉为较小的糖分子的酶类。
它是一种广泛存在于生物体中的酶，包括人类、动物和植物。
淀粉是由α-葡聚糖链构成的多糖，而α-淀粉酶能够通过水解反应将淀粉分子切割成糊精（dextrin）和葡萄糖单糖。
麦芽庚糖苷法是一种常用的测定α-淀粉酶活性的方法。
该方法的原理是利用α-淀粉酶将庚糖苷（G7）中的庚糖分子逐个水解成葡萄糖分子，并且测定庚糖苷水解的速率来间接测定α-淀粉酶的活性。
具体的操作步骤如下：首先，准备一定浓度的庚糖苷溶液作为底物。
然后，在一定温度和pH条件下，将α-淀粉酶加入到庚糖苷溶液中，使其开始催化反应。
随着时间的推移，庚糖苷逐渐被水解成葡萄糖，反应体系中葡萄糖的浓度逐渐增加。
最后，通过测定葡萄糖浓度的变化，可以计算出α-淀粉酶的活性。
麦芽庚糖苷法具有以下优点：首先，该方法操作简单，不需要复杂的仪器设备，只需要常见的化学试剂即可。
其次，该方法对α-淀粉酶具有较高的灵敏度和特异性，可以准确地测定α-淀粉酶的活性。
此外，该方法还可以用于测定不同来源的α-淀粉酶的活性差异。
麦芽庚糖苷法在许多领域都有广泛的应用。
首先，在食品工业中，该方法可以用于测定食品中的淀粉含量和淀粉降解的速率，从而评估食品的品质和保存性。
其次，在生物制药工业中，该方法可以用于监测发酵过程中淀粉酶的活性，以确保产品的质量和产量。
此外，该方法还可以用于医学研究中，例如测定血液或尿液中α-淀粉酶的活性，以辅助诊断某些疾病。
α-淀粉酶检测原理麦芽庚糖苷法是一种简单可靠的方法，广泛应用于食品工业、生物制药工业和医学研究等领域。
通过测定庚糖苷的水解速率来间接测定α-淀粉酶的活性，该方法具有操作简单、灵敏度高和特异性强的特点，为相关领域的研究和应用提供了有力的工具。
测定α淀粉酶活性
测定α-淀粉酶活性的两种方法的比较研究发布时间：2009-09-27来源：生物网文章标签：α-淀粉酶酶活性生物论坛2009-2012年中国α-淀粉酶市场调研及投细菌α-淀粉酶产生菌种筛选α-淀粉酶的活性测定及比活计算摘要α－淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标，为此提出了对小麦α－淀粉酶活性的快速测定方法的研究。
α－淀粉酶活性的测定方法有多种，本文仅探讨了常用的3.5－二硝基水杨酸法和凝胶扩散法。
结果表明，两种方法的测定结果差异不显著，而且两者呈显著正相关；从变异系数上看，后者的变异程度较低，其精度较高；从误差来源上看，前者引起误差的因素较后者多；后者较为简便快速，准确度较高，重复性较好，可用于大批量样品的分析。
关键词小麦α－淀粉酶活性 3.5－二硝基水杨酸法凝胶扩散法１材料和方法1.1 材料和试剂①萌芽的小麦取当年小麦种子，按小麦萌发试验培养，２天后用于测验。
②１％淀粉溶液。
③ 0.40ＮＮａＯＨ。
④ＰＨ5.60的柠檬酸缓冲液Ａ．称取柠檬酸20.01ｇ，溶解后稀释至１Ｌ；Ｂ．称取柠檬酸钠29.41ｇ，溶解后稀释至１Ｌ。
取Ａ液13.70ｍｌ与Ｂ液26.30ｍｌ混匀，即为ｐＨ5.60的缓冲液。
⑤3.5－二硝基水杨酸精确称取3.5－二硝基水杨酸１ｇ溶于２０ｍｌ１ＮａＯＨ中，加入５０ｍｌ蒸馏水，再加入３０ｇ酒石酸钾钠，待溶解后，用蒸馏水稀释至１００ｍｌ，盖紧瓶塞，勿使二氧化碳进入。
⑥麦芽糖标准液称取麦芽糖0.10ｇ溶于少量蒸馏水中，仔细移入100ｍｌ容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。
⑦α－淀粉酶提取缓冲液２０ｍｍｏｌ／Ｌ醋酸钠（2.7216ｇ／Ｌ） １ｍｍｏｌ／Ｌ氯化钙（0.11099ｇ／Ｌ） ｐＨ5.5。
⑧５％（Ｖ／Ｖ）碘—碘化钾溶液 1.95ｇＫＩ＋0.65ｇＩ２溶解在100ｍｌ蒸馏水中。
⑨α－淀粉酶36.18ｕ／ｍｇ Ｓｉｇｍａ公司逐级稀释10, 2.50，0.625,0.15625, 0.03906,0.009765ｍｇ／ｍＬ系列标准液。
血清α-淀粉酶活性的测定(迈克)
三、参考值： 参考值：
血清：60~180U苏氏单位 血清：60~180U苏氏单位 尿液：100 1200U苏氏单位 尿液：100 ~ 1200U苏氏单位
四、临床意义： 临床意义：
淀粉酶主要由胰腺和唾液腺分泌，肺、 肝、甲状腺、脂肪等组织亦含有此酶。血 清淀粉酶测定主要用于急性胰腺炎的诊断。 一般于发病后6~12h开始升高，12~24h达 一般于发病后6~12h开始升高，12~24h达 峰值，2~5d恢复正常，因此血清淀粉酶活 峰值，2~5d恢复正常，因此血清淀粉酶活 性显著升高对急性胰腺炎的早期诊断价值 较大。淀粉酶可通过肾小球滤过，尿淀粉 酶于发病后12~24h开始升高，持续时间长， 酶于发病后12~24h开始升高，持续时间长， 下降比血清淀粉酶慢，故胰腺炎后期测尿 淀粉酶更有价值。
2、计算： 计算：
注：淀粉浓度 0.4g/L 样品AMY活力（苏氏单位）= 样品AMY活力（苏氏单位）=
AB AU 0.4 15 100 × × × AB 5 7.5 0.02
AB AU 样品AMY活力（苏氏单位)= 样品AMY活力（苏氏单位)= × 800 AB
注解
①0.4——淀粉浓度 0.4——淀粉浓度 ②5.0—— 1单位定义消耗淀粉mg数 5.0—— 单位定义消耗淀粉mg数 ③15 —— 1单位定义反应时间 ④7.5 —— 酶的实际作用时间 ⑤100—— 1单位定义用血清 100—— ⑥0.02—— 样品取量 0.02——
血清α 淀粉酶（AMS或AMY） 血清α-淀粉酶（AMS或AMY）活性 的测定 Reagent for α- Amylase Test α一、原理 二、测定方法 三、参考值 四、临床意义 五、注意事项 六、方法学评价
一、原理： 原理：ห้องสมุดไป่ตู้
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1.α-淀粉酶抑制剂对PPA 活性的抑制作用
分别取浓度为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL 的柚皮素溶液0.05mL
（溶于水）与0.2 mL PPA 溶液（0.33 U/mL，溶于pH 6.8 磷酸盐缓
冲液）混匀在37 ℃水浴反应20 min。
对照组溶液则以0.05 mL水与0.2
mL PPA 溶液进行反应。
在反应液中加入1mL 1 %可溶性淀粉溶液，继
续37 ℃水浴10 min 后，加入1.5 mL DNS 显色剂，混匀，置于沸水
浴中5 min。
然后，冷却至室温，定容至25 mL，540 nm 下测定吸光。
空白是1.25ml水加上1.5mlDNS，定容至25ml，在A540nm下测吸光值根
据下式计算柚皮素对PPA 活性的抑制率：抑制率（%）=[（ΔA 对照-
ΔA 样品）/ΔA 对照]×100%注：ΔA 对照=A 对照-A 对照空白，
ΔA 样品=A 样品-A 样品空白
反应液中加入 1.5mL
1 %可溶性淀粉溶液
继续37 ℃水浴10
min 后，加入 1.5
mlDNS 显色剂，混匀，置于沸水浴中5 min。
然后，冷却至室温，定
容至25 mL，540 nm 下测定吸光。
空白是1.25ml水加上1.5mlDNS，
定容至25ml，在A540nm下测吸光值
一、实验步骤：取试管5个，并分别编号，按下表加入药品
再从标准曲线中查出还原糖的含量，以1/V为纵轴，1/S为横轴做直
角坐标。