微生物实验 图片和说明
微生物学实验一 微生物制片及形态观察
实验一微生物制片及形态观察一、显微镜油镜的使用显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。
显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
1. 结构光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。
光学系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和底座等（图1－1）。
图1－1 光学显微镜结构图标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短。
焦距越小，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也小。
油镜的工作距离很短，使用时需格外注意。
目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是十倍。
聚光镜能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。
聚光镜可以上下移动，以调节光的明暗，可变光栏可以调节入射光束的大小。
显微镜用光源，自然光和灯光都可以，以灯光较好，因光色和强度都容易控制。
一般的显微镜可用普通的灯光，质量高的显微镜要用显微镜灯，才能充分发挥其性能。
有些需要很强照明，如暗视野照明、摄影等，常常使用卤素灯作为光源。
2. 原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。
所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。
要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。
显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。
3. 使用方法1）低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。
微生物学实验七
（2）镜检：
• 菌丝体经制片后可用低倍或高倍镜观察。 在观察时要注意菌丝直径的大小，菌丝 体有无隔膜，营养菌丝有无假根，无性 繁殖或有性繁殖时形成的孢子种类及着 生方式。各种霉菌都有其特征性的特化 结构。
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注意事项
• 取菌丝或孢子等样品时应小心操作，尽量减少菌 丝断裂及形态破坏。
• 盖盖玻片时尽量避免产生气泡。 • 注意无菌操作，取样量不宜太大。 • 孢子数量巨大，请小心操作，皿盖敞开时间尽可
• 2）曲霉的分生孢子的形状、大小、顶囊 的形状、小梗排列、隔膜。
• 3）青霉的分生孢子的形状、大小、小梗 的排列方式，菌丝的隔膜。
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（三）制作霉菌装片并观察其 个体形态。
• 1.直接制片法观察 （1）制片：在干净的载玻片上加一滴乳 酸石炭酸棉蓝染液，用解剖针从菌落边缘
处取小量带有孢子的菌丝置于液体中， 再小心地把菌丝放开，去掉培养基，然 后用盖玻片盖上，注意不要产生气泡。 （省略酒精和水浸润，洗涤）
枯草杆菌吕氏美蓝 染色图片
枯草杆菌石炭酸复红 染色图片
1
实验 7 放线菌的形态观察 霉菌的 形态观察
2
一 实验目的
1、学习并掌握观察放线菌、霉菌形态 的基本方法
2、初步了解放线菌、霉菌的形态特征
3
4
一 实验目的
5
背景知识
• （一）放线菌的菌落形态 放线菌的菌落由菌丝体组成。放线菌菌丝纤细，
并根据下列要求对每种霉菌的菌落特征加以描述。 • 1.菌落的大小：局限生长或蔓延生长，菌落的直
径和高度。 • 2.菌落的颜色：正面和背面的颜色，培养基的颜
色变化。 • 3.菌落的形态：” 绒毛状”、”棉絮状”、”网
状”、疏松或紧密、同心轮纹、放线状的皱褶等。
微生物学实验ppt课件
器材与试剂的选用原则
03
如无菌操作、适用性、经济性等
02
细菌形态与结构观察
细菌培养及形态特征
01
02
03
细菌培养方法
包括需氧培养、厌氧培养 和兼性厌氧培养等，不同 种类的细菌需要不同的培 养条件。
细菌菌落特征
观察细菌在固体培养基上 形成的菌落，了解其形状、 大小、颜色、透明度等特 征。
细菌细胞形态
05
微生物代谢活性测定
生长曲线测定方法
直接计数法
通过显微镜直接观察并计数微生物数量，适用于较大微生物如细 菌、酵母菌等。
比浊法
利用微生物生长引起培养液浊度变化来测定生长曲线，操作简便 但易受杂质干扰。
平板菌落计数法
将待测样品稀释后涂布于固体培养基表面，培养后计数形成的菌 落数，适用于可形成菌落的微生物。
原理
病毒必须寄生在活细胞内才能增 殖，通过提供适宜的细胞环境， 使病毒在细胞内复制并产生子代
病毒。
病毒检测技术及应用
免疫学方法
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过酶联免疫吸附试验 （ELISA）、免疫荧光技术等检测病毒抗原或抗体。
分子生物学方法
基于病毒核酸的特异性，利用PCR、实时荧光定量PCR等技术扩增 并检测病毒核酸。
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contents
目录
• 实验基础知识 • 细菌形态与结构观察 • 真菌形态与结构观察 • 病毒培养与检测技术 • 微生物代谢活性测定 • 微生物遗传与变异研究 • 微生物生态学及环境因子影响研究
01
实验基础知识
微生物学概述
类生活中的作用：如 生态平衡、发酵工业 等
生理生化鉴定
利用真菌的生理生化特性，如营养需 求、代谢产物等，进行进一步的分类 鉴定。
实验四-微生物的菌落形态观察、平板菌落计数及菌种保藏(张理珉)
四、菌种衰退的原因
▪ 基因突变－－主要原因 ▪ 1、有关基因发生负突变导致菌种衰退 ▪ 2、表型延迟造成菌种衰退 ▪ 3、质粒脱落导致菌种衰退 ▪ 连续传代－－加速衰退 ▪ 不适宜的培养和保藏条件－－加速衰退
五、菌种衰退的防止
▪ 控制传代次数 ▪ 创造良好的培养条件 ▪ 利用不易衰退的细胞移种传代 ▪ 采用有效的菌种保藏方法 ▪ 讲究菌种选育技术 ▪ 定期进行分离纯化，测试性能
干燥或较干燥 小而紧密
丝状交织，紧密 细而均匀
干燥 大而疏松或大而致密
丝状交织 粗而分化
菌落透明度
菌落与培养 基结合程度
菌落颜色 参 考 菌落正反面 特 颜色的差别 征
菌落边缘
细胞生长速度
气味
透明或稍透明 不结合 多样 相同
一般看不到细胞 一般很快
一般有臭味
稍透明
不透明
不结合
牢固结合
单调，一般呈乳脂或矿 烛色，少数红色或黑色
实验四 微生物的菌落形态观察、 平板菌落计数及菌种保藏
目的要求
1、观察细菌、放线菌、霉菌的菌落形态 特征，并加以区分。
2、掌握平板菌落计数的原则和方法。 3、掌握三种类群微生物的单菌落挑取，
并接种于斜面，进一步加强无菌操作技 术。 4、了解菌种保藏的原理、重要性及常见 方法。
实验内容
▪ 微生物菌落形态观察及区分（细菌、放线菌、 霉菌、酵母菌——放在后面介绍）
做培养基的时间。主要用于细菌总数检测。 （4）其它：如Simplate即用胶，改良MPN产
品。
螺旋平板法
DWS螺旋平板接种仪
aColyte自动菌落计数仪
螺旋平板原理
接种针往外移
动同时自动将 样品稀释1000 倍。
微生物实验设计-产蛋白酶菌株的筛选
微生物实验设计-产蛋白酶菌株的筛选产蛋白酶菌株的筛选级分离一、实验原理自能够产生胞外蛋白酶的菌株在牛奶平板上生长后，其菌落周围可形成明显的蛋白水解圈，水解圈与菌落直径的比值，常被作为判断该菌株蛋白酶产生能力的初筛依据。
将腐烂的大豆浸泡液中的细菌接种在含有酪素的培养基上进行培养。
由于产蛋白酶菌株能在干酪素的培养基上形成无色透明圈，因此能将产蛋白菌株分离出来，分离出来的菌株经再次培养，就可获得纯种产蛋白酶的菌株。
二、实验器材1.菌种：从大豆浸泡液中获得2.培养基:(1)PDA斜面培养基：马铃薯200g，蔗糖20g,琼脂20g,水1000ml.马铃薯去皮，切成块，煮沸半小时后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补水至1000ml，121℃灭菌30min备用。
（2）干酪素琼脂培养基：干酪素4.0g，用20ml 0.1mol/L NaOH溶液溶解后再加20g琼脂，加蒸馏水煮沸加水至1000ml 121℃灭菌30min备用。
3.试剂：无菌水。
4.仪器：天平，电磁炉，烧杯，无菌试管，无菌培养皿，高压灭菌锅，锥形瓶，接种环，涂布棒，酒精灯，恒温培养箱。
三、实验步骤1.将腐烂的大豆放入无菌水中浸泡，制成细菌悬浮液。
2.用涂布棒蘸取菌液接种于PAD培养基中，26℃培养48h。
3.倒置于酪素琼脂培养基平板上，37℃培养24h。
4.挑取培养好的菌落接种于平板上，28℃培养48h。
5.观察各菌落周围形成的透明圈的情况。
6.选取透明圈较大的三个菌落分别接种在干酪素琼脂培养基上，28℃培养48h。
7.观察受否为单菌落，若为单菌落且有透明圈，则为纯种产蛋白酶菌株。
若有杂菌，则需要重复步骤6，直到培养出纯菌为止。
参考文献[1]代玉梅.蛋白酶高产菌株的筛选鉴定及酶学性质研究[D].青岛:青岛大学,2008.[2]黄志强,林白雪,谢联辉.产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选与鉴定[J].福建农林大学学报:自然科学版,2006,35(4):416-420.。
微生物大小的测定实验报告
微生物大小的测定实验报告
实验四、微生物大小的测定
一、目的
学习并掌握测定微生物大小的原理和方法
二、材料
1、仪器：显微镜、测微尺、挑针、装有蒸馏水的滴瓶
2、菌种：青霉、镰刀菌
三、步骤
1、目镜测微尺的标定
○
1放置目镜测微尺：取出目镜，将透镜旋下，把目镜测微尺放在目镜镜筒内，注意刻度面朝下，旋紧透镜，施加镜筒。
○
2放置镜台测微尺：将镜台测微尺放在载物台上，刻度面朝上，并对准聚光器。
○
3标定目镜测微尺：先用低倍镜（4×）调焦，看清镜台测微台刻度后，转动目镜，使其目尺刻度线与镜台尺的刻度线平行，用推进器调动镜台尺，使镜台尺与目尺的某一刻度重合。
然后找另外一条线重合线，分别数出并记录两者重合线间台尺与目尺各自的格数。
○
4计算：两重合线间目尺格数
两重合线间台尺格数目尺每格长度＝10 台尺每格10μm 用相同方法计算出不同倍数（4×,10×,40×）目尺每格代表的实际长度
2、微生物大小测定
标定好后，移去台尺，换上待测微生物玻片，分别在10倍和40倍镜下测出待测微生物的大小。
微生物实际大小＝所测格数×目尺每格代表长度
四、实训报告
表1 台尺校正表
物镜目镜格数台尺格数校正值（μm ／格）10×
40× 表2 微生物大小测定记录表放大倍数
微生物的实际大小=
五、思考题：为何当目镜不变，目镜测微尺也不变，而改变物镜后，目镜测微尺所测定的微生物长度不同？。
医学微生实验 本科实验三细菌致病性及病原性球菌-PPT文档
平板划线分离及菌落观察
菌落形态观察： 菌落的色泽、大小; 表面光滑或粗糙、边缘整齐否; 隆起度、透明度等 不同形态菌落代表不同的细菌
斜面移种法及色素观察
观察细菌在斜面上所形成的菌苔。 绿脓杆菌产生水溶性色素，使整个培养基变绿。 金葡菌产生脂溶性色素，培养基不变色。
存在部位
细胞壁成分、细菌裂解释出
活菌分泌或细菌溶解散出
化学成分
脂多糖
蛋白质
稳定性
好、160℃ 2-4h 破坏
差、60-80℃ 30min 破坏
毒性作用
弱、各种内毒素作用大致相同，引起休克，发热，等
强、对机体组织器官有选择性， 引起特殊临床表现
抗原性
弱，能刺激机体形成抗体， 但无中和作用。 甲醛处理后不能形成类毒素
链球菌 G+链状 甲链 不完全溶血 条件致病菌 乙链 完全溶血 致病菌 丙链 不溶血 不致病
肺炎球菌 G+成双 不完全溶血 胆汁溶菌试验 胞外 、荚膜
镜下 培养 毒力及鉴别实验
脑膜炎 G-成双 巧克力平板 球菌 胞内 CO2
细菌生化反应结果分析
H2S产生试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
硫酸亚铁半固体
乙型副伤寒
黑色沉淀物
细菌生化反应结果分析
葡萄糖发酵试验 乙型副伤寒（产酸产气） 培养基红→黄色，有气泡 史氏痢菌（产酸不产气） 培养基红→黄色，无气泡
细菌生化反应结果分析
吲哚试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
内毒素检测方法——鲎试验
试剂：鲎试剂 内毒素、生理盐水 试验结果观察： 鲎试验(+)：出现凝固
外毒素的毒性作用
实验试剂：破伤风杆菌培养物 破伤风抗毒素 实验动物：小白鼠 试验结果观察： 细菌培养物→小鼠强直性痉挛
医学微生物实验图谱
1、小吞噬细胞：即中性粒细胞。
胞内富含溶酶体酶等杀菌物质，是血液中数量最多、具有吞噬功能的细胞。
可随血流迅速动员至感染部位，在机体抗感染中发挥重要作用。
吞噬化脓球菌等。
革兰染色呈红色。
圆，体积小于单核细胞。
核呈分叶状，2、3叶居多。
2、大吞噬细胞：单核巨噬细胞。
包括大单核细胞和巨噬细胞。
吞噬病原体、凋亡的细胞和异物。
革兰染色呈蓝色。
圆，体积大，核偏大偏向一侧。
两图见于报告。
3、吞噬百分率：计数100个中性粒细胞中具有吞噬作用的细胞数。
即为吞噬百分率。
吞噬指数：观察100个中性粒细胞，计算被吞噬的细菌的总数，求平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。
4、淋巴细胞转化实验原理：淋巴细胞在体外培养时，受到刺激物的刺激后可表现为体积增大、代谢物旺盛、蛋白质和核酸合成增加，即向淋巴母细胞转化和增殖。
此现象称为淋巴细胞的转化现象。
分型：小淋巴细胞、过渡型、淋巴母细胞、染色体型意义：淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的免疫水平，因此可作为测定机体细胞免疫状态的指标之一。
图见于报告。
5、E花环形成实验原理：T细胞表面有绵羊红细胞的受体，可在自然情况下于绵羊红细胞结合，形成E玫瑰花环。
结果判定：淋巴细胞呈蓝紫色或淡蓝色，绵羊红细胞不着色，凡结合3个绵羊红细胞或以上者为E花环形成细胞即是阳行反应。
计数200个淋巴细胞，求出E花环形成率(%)。
意义：根据花环形成的多少，可测知T细胞的数目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态。
图见于报告6、血清学反应：是指相应的抗原和抗体在体外进行的结合反应。
由于抗体主要存在于血清中，进行这类反应时一般都要用含有抗体的血清作为实验材料，所以把体外的抗原、抗体反应称为血清学反应。
这类反应是根据抗原、抗体具有高度特异性的原理来进行实验的，即用已知的一方来检测另一方的存在。
特点：特异性、可逆性、可见性影响因素：浓度比例、电解质、温度、酸碱度。
分类：凝集反应、沉淀反应、补体结合试验、中和反应、免疫标记技术。
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1. 1. 葡萄球菌
标本来源：脓汁、血液、脑脊液、食物、呕吐物、粪便染色：直接涂片革兰染色（G+）
镜下描述：球形、G+、呈葡萄串状排列。
名称：G+葡萄球菌（注意只能定属、不能定种）
意义（结合标本来源）：
脓汁----化脓性感染；
血液----菌血症、败血症；（特殊名字：脓毒败血症）
脑脊液----化脓性脑膜炎；
1. 2. 链球菌
标本来源：脓汁（呼吸道）、咽拭子、痰、炎症渗出物、脑脊液、血液、尿液（Ⅲ超敏）染色：革兰染色，G+
镜下描述：球形、G+，呈链状排列。
名称：G+链球菌
意义（结合标本来源）（同葡萄球菌）：
脓汁----化脓性感染；
血液----菌血症、败血症；
脑脊液----化脓性脑膜炎；
1. 3. 肺炎双球菌
标本来源：痰（铁锈色痰）、脓汁、血液、脑脊液
染色：革兰染色G+
镜下描述：G+、成双排列、呈矛头状、钝端相对、有透明荚膜
名称（结论）：找到G+双球菌，疑似肺炎双球菌
意义：铁锈色痰----大叶性肺炎
脓汁----化脓性感染；
血液----菌血症、败血症；
脑脊液----化脓性脑膜炎；
1. 4. 脑膜炎奈瑟菌
标本来源：脑脊液鼻咽分泌物
染色：革兰染色
镜下描述：G- 成双排列、位于中心粒细胞内（外）
名称；脑膜炎奈瑟菌
意义：（脑膜炎奈瑟菌）诊断流脑（流行性脑脊膜炎）
1. 5. 淋病奈瑟菌
标本来源：泌尿生殖道分泌物眼分泌物
染色：革兰染色
镜下描述：G- 成双排列、位于中心粒细胞内（外）
名称：淋病奈瑟菌
意义：初步诊断为淋病[泌尿生殖道分泌物] 脓漏眼[眼分泌物]
1. 6. 肠道杆菌、G-杆菌
标本来源：粪便、血液、尿液、脓液等
染色：革兰G-
镜下描述：G- 杆状、不规则排列
名称：（来源于粪）肠杆菌科，不能定属（来源于血液-其他）G- 杆菌
意义：（粪）无意义（血）败血症 (CSF)脑膜炎
7. 破伤风梭菌（有芽胞）
标本来源：伤口分泌物、化脓物、坏死组织
染色：革兰Ｇ+
镜下描述：G+ 、细长、杆状、有芽孢、正圆形、位于菌体顶端、直径比菌体大、形似鼓槌
名称：破伤风梭菌
意义：标本中发现此菌，无诊断意义。
8. 肉毒梭菌
标本来源：（及时采集）可疑食品、（早期患者）呕吐物、（婴儿）粪便
染色：革兰G+
镜下描述：G+ 粗大杆菌、芽孢卵圆形、位于次极端、（直径）比菌体大，呈网球拍状名称：肉毒梭菌
意义：无意义
9. 产气荚膜梭菌
标本来源：创伤深处脓汁、分泌液及坏死组织
染色：革兰G+
镜下描述：G+ 粗大杆菌芽孢,卵圆形,位于次极端,比菌体小（在体内有明显的透明荚膜）
名称：产气荚膜梭菌
意义：初步诊断：气性坏疽、坏疽病、食物中毒
注:看到芽孢描述芽孢,看到荚膜描述荚膜
11. 结核分枝杆菌
标本来源：胸水、腹水、痰、粪、尿（广泛）
染色：抗酸染色（红色）
镜下描述：抗酸染色阳性、细长（或略带弯曲）的杆菌，单个（或平行、相聚）排列，有的呈分枝状
名称：找到抗酸染色阳性杆菌（注意：不直接写“结核杆菌”）
意义：痰----协助诊断（开放性）肺结核
**-----协助诊断**结核（如肾结核、肠结核、结合性腹膜炎等）
12. 白喉棒状杆菌
标本来源：咽拭子、假膜、痰
染色：革兰或美兰染色
镜下描述：G+ 细长杆状、呈栅栏状排列、可见深染的异染颗粒名称：找到棒状杆菌，并有异染颗粒，疑为白喉棒状杆菌
意义：协助诊断白喉病
13. 新生隐球菌
标本来源：脑脊液
染色：墨汁染色（负染）
镜下描述：圆形菌体，无菌丝，外周有一层宽厚荚膜，有芽生孢子名称：新生隐球菌
意义：脑脊液----隐脑（隐球菌性脑膜炎）
14. 钩端螺旋体
标本来源：血液、尿液
染色：渡银染色
镜下描述：棕褐色，螺旋极其规则、一端或两端呈钩状
名称：钩体螺旋体
意义：钩体病。