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番茄SlMYB48_基因生物信息学及表达分析

番茄SlMYB48_基因生物信息学及表达分析

中国瓜菜2024,37(4):27-35收稿日期:2023-10-10;修回日期:2023-12-20基金项目:烟台市科技计划项目(2022XCZX091);国家现代农业产业技术体系专项(CARS-23-G11);重庆市巫山县科技项目(wskjdx-bxm2023004);国家自然科学基金面上项目(32372737);西南作物基因资源发掘与利用国家重点实验室开放课题(SKL-KF202224)作者简介:刘佳凤,女,在读硕士研究生,研究方向为番茄抗逆基因的验证。

E-mail :*******************通信作者:李涛,男,正高级农艺师,研究方向为蔬菜育种及分子生物学。

E-mail :****************DOI :10.16861/ki.zggc.202423.0652番茄SlMYB48基因生物信息学及表达分析刘佳凤1,郭晓青2,王桂强3,王虹云4,朱桐1,曹守军4,姚建刚4,张丽莉4,张瑞清4,赵婧1,李涛1,4(1.烟台大学生命与科学学院山东烟台264000 2.烟台市农业技术推广中心山东烟台2654993.招远市张星镇农业综合服务中心山东招远2654034.山东省烟台市农业科学研究院山东烟台264500)摘要:MYB 转录因子是植物转录因子家族中数量最多、用途最广的成员之一,为挖掘更多番茄(Solanum lycopersi-cum )MYB 转录因子家族成员信息,初步探究其表达模式及功能,以番茄Ailsa Craig 为试材,采用RT-PCR 的方法克隆SlMYB48基因,并对其进行生物信息学及表达、定位分析。

结果表明,番茄SlMYB48基因的开放阅读框(ORF )长度为708bp ,编码235个氨基酸,在番茄的根中表达量最高,叶中次之。

SlMYB48蛋白含有保守的MYB 结构域,定位于细胞核中,属于不稳定、亲水性蛋白。

对SlMYB48启动子分析,发现其含有大量的逆境响应元件,qRT-PCR 及RNA-seq 数据库分析结果表明,高盐、生物逆境胁迫条件下,SlMYB48基因表达量均随处理时间延长而升高,干旱胁迫条件下表达量下降,推测其可能参与番茄生物及非生物逆境胁迫反应。

利用VBA查找核酸数据库DNA保守序列

利用VBA查找核酸数据库DNA保守序列

第9卷第4期2011年12月生物信息学China Journal of Bioinformatics Vol.9No.4Dec.,2011收稿日期:2010-01-06;修回日期:2010-05-30.基金项目:安徽高校省级自然科学研究重点项目资助(KJ2008A089).作者简介:詹少华,男,教授,博士,研究方向:生物信息学与分子育种,E -mail :zhansh@wxc.edu.cn.*通讯作者:林毅,教授,博士生导师,E -mail :linyiahau@126.com.doi :10.3969/j.issn.1672-5565.2011.04.08利用VBA 查找核酸数据库DNA 保守序列詹少华1,尹艺林1,蔡永萍2,樊洪泓2,林毅2*(1.皖西学院生物与制药工程学院,六安237012;2.安徽农业大学生命科学学院,合肥230036)摘要:采用VBA 编写了查找核酸数据库保守序列的四个相关程序,“导入DNA 序列”程序可以将Fasta 格式的DNA 序列文本文件存放到Excel Sheet1的A 列中,保留每个序列的Gi 号,删除多余的注释部分;“整理DNA 序列”程序可以将DNA 序列Gi 号存放到A 列中,B 列为对应Gi 号的完整序列;“DNA 随机序列”程序可以产生DNA 随机序列;“发现DNA 保守序列”程序可以将随机序列与下载的DNA 序列比对,查找每一种随机序列的出现频率。

以大豆基因组序列为实例,说明了这些程序的应用方法。

该程序弥补了流行序列比对软件的不足,为PCR 设计引物、分析基因功能以及种质资源鉴定等方面提供新的工具。

关键词:VBA ;序列比对;保守序列;核酸数据库;大豆中图分类号:Q518.2文献标识码:A文章编号:1672-5565(2011)-04-299-04Searching conservative sequences in nuclear acid database by VBA programsZHAN Shao-Hua 1,YIN Yi-lin 1,CAI Yong-Ping 2,FAN Hong-Hong 2,LIN Yi 2*(1.Biological and Pharmacological Engineering Department ,West Anhui University ,Lu ’an ,Anhui 237012,China ;2.Life Science School ,Anhui Agricultural University ,Hefei Anhui 230036,China )Abstract :The four VBA (visual basic for application )programs were written for searching conservative sequences in nuclear acid database.The programs included importing -DNA -sequence ,sorting -DNA -sequence ,DNA -random -sequence and finding -DNA -conservative -sequence.The DNA sequences saved as fasta format in text file could be imported into column A of Excel Sheet1by the program of importing -DNA -sequence ,at same time ,the Gi numbers were reserved and the redundant notes were deleted.Then ,the Gi numbers were sorted into column A and corresponding DNA integrate sequences were arranged into column B by the program of sorting -DNA -se-quence.DNA random sequences could be made by the program of DNA -random -sequence.The program of find-ing -DNA -conservative -sequence could help us searching conservative sequences in DNA databases by align-ment with the DNA random sequences.As an example of the programs application ,the conservative sequences of soybean genome survey sequences were searched.The programs were the supplementary tools of prevalent sequence alignment software ,could contribute to design PCR primers ,to analyze the genes function ,and to identify breeding resource.Key words :Visual Basic for Application (VBA );Sequence alignment ;Conservative sequence ;Nuclear acid data-base ;Soybean序列比对是分子生物学中重要的分析方法,可用于探测新序列与已知序列的同源性,分析物种之间的亲缘关系[1],可以在此基础上设计引物进行PCR 扩增、预测新序列高级结构、功能和基因电子克隆。

自噬双标腺病毒(mrfpgfplc3)使用指南1404知识讲解

自噬双标腺病毒(mrfpgfplc3)使用指南1404知识讲解

自噬双标腺病毒( mRFP-GFP-LC3 )使用指南背景:自噬是细胞内的一种“自食(Self-eating )”的现象,凋亡是“自杀( Self-killing )”的现象,二者共用相同的刺激因素和调节蛋白,但是诱发阈值和门槛不同,如何转换和协调目前还不清楚. 自噬是指膜(目前来源还有争议,大部分表现为双层膜,有时多层或单层)包裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等形成自噬体,最后与溶酶体融合形成自噬溶酶体,降解其所包裹的内容物,以实现细胞稳态和细胞器的更新。

目前文献对自噬过程进行观察和检测常用的策略和手段有:通过western blot检测LC3勺剪切;通过电镜观测自噬体的形成;在荧光显微镜下采用GFP(-RFP) -LC3等融合蛋白来示踪自噬体形成以及降解。

近几年对自噬流的研究日趋增多,针对于此我们汉恒生物科技(上海)有限公司自主研发了用于实时监测自噬( 流)的mRFP-GFP-LC腺病毒,mRFP用于标记及追踪LC3, GF啲减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体,即由于GF荧光蛋白对酸性敏感,当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭, 此时只能检测到红色荧光。

这种串联的荧光蛋白表达载体系统直观清晰的指示了细胞自噬流的水平,是我们自噬研究尤其是自噬流研究不可或缺的利器。

mRFP-GFP-LC3 腺病毒的操作收到病毒后的处理(一)、腺病毒的储存1、腺病毒采用冰袋运输。

(1)、收到病毒液后如未融化请置于-80 C冰箱,下次使用时再进行分装;(2)、如客户收到时腺病毒已融化,请直接分装后置于-80 C冰箱保存;若短期内用于实验,可分装部分于4C保存(尽量一周内用完)。

2、尽量避免反复冻融,否则会降低病毒滴度(每次冻融会降低病毒滴度10%)。

建议不要在-20 C下长期保存。

如果病毒储存时间超过6个月,应该重新测定病毒滴度。

3、建议收到病毒产品后根据实验需求自行分装或购买经过分装的小包装病毒产品(购买时请提出)。

蛋白质结构预测和序列分析软件

蛋白质结构预测和序列分析软件
如果能够利用结构数据,对于序列比对无疑有很大帮助。不幸的是,与大量的序列数据相比,实验测得的蛋白质三维结构数据实在少得可怜。在大多数情况下,并没有结构数据可以利用,我们只能依靠序列的相似性和一些生物化学特性建立一个比较满意的多序列比对模型。
多序列比对的定义
为了便于描述,对多序列比对过程给出下面的定义。把多序列比对看作一张二维表,表中每一行代表一个序列,每一列代表一个残基的位置。将序列依照下列规则填入表中:
4、 ExPASy数据库:
目前,瑞士生物信息学研究所(Swiss Institute of Bioinformatics, SIB)创建了蛋白质分析专家系统(Expert protein analysis system, ExPASy )。涵盖了上述所有的数据库。
网址:
4、 SCOP数据库:
要想了解对已知结构蛋白质进行等级分类的情况可利用SCOP(Structural classification of proteins)数据库,在该库中可以比较某一蛋白质与已知结构蛋白的结构相似性。
5、 CATH 数据库:
CATH(Class, Architecture, Topology and Homologous superfamily)是与SCOP类似的一个数据库。
SWISS-PROT数据库包括了从EMBL翻译而来的蛋白质序列,这些序列经过检验和注释。该数据库主要由日内瓦大学医学生物化学系和欧洲生物信息学研究所(EBI)合作维护。SWISS-PROT的序列数量呈直线增长。
2、TrEMBL数据库:
SWISS-PROT的数据存在一个滞后问题,即把EMBL的DNA序列准确地翻译成蛋白质序列并进行注释需要时间。一大批含有开放阅读框(ORF) 的DNA序列尚未列入SWISS-PROT。为了解决这一问题,TrEMBL(Translated EMBL) 数据库被建立了起来。TrEMBL也是一个蛋白质数据库,它包括了所有EMBL库中的蛋白质编码区序列,提供了一个非常全面的蛋白质序列数据源,但这势必导致其注释质量的下降。

苹果B型细胞分裂素响应因子MdARR11对干旱胁迫的抗性分析

苹果B型细胞分裂素响应因子MdARR11对干旱胁迫的抗性分析

核农学报2024,38(2):0226~0234Journal of Nuclear Agricultural Sciences苹果B型细胞分裂素响应因子MdARR11对干旱胁迫的抗性分析徐苏蕊1, 2赵文哲1, 2巩星遥1, 2李玲1, 2, *肖伟1, 2, *(1山东农业大学园艺科学与工程学院,山东泰安271018;2山东果蔬优质高效生产协同创新中心,山东泰安271018)摘要:B型反应调节因子(ARRs)作为细胞分裂素的正响应因子在植物生长发育中发挥重要作用。

为探究ARR11在应对苹果干旱胁迫过程中的功能,本研究以嘎拉3苹果(Malus domestica Borkh. cv. Gala 3)为试验材料,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增技术,获得了B型细胞分裂素响应因子MdARR11。

该序列全长2 248 bp,编码613个氨基酸,包含type-B-REC结构域,C端含有一个MYB-like的DNA结合域。

组织特异性表达分析显示该基因在茎中表达量最高。

实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析结果表明,干旱胁迫抑制MdARR11的表达。

为进一步研究MdARR11在干旱胁迫中的功能,获得了过表达MdARR11苹果愈伤组织。

使用6%聚乙二醇6000(PEG6000)模拟干旱处理野生型及过表达愈伤组织,观察愈伤组织生长速率、大小并检测鲜重、相对电导率、丙二醛(MDA)、脯氨酸(Pro)、可溶性蛋白积累量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性。

结果表明,过表达MdARR11提高了愈伤组织细胞膜的脂膜过氧化程度、降低了渗透调节物质的积累及抗氧化酶活性。

综上所述,MdARR11降低了苹果愈伤组织对干旱胁迫的耐受性。

本研究为进一步探索MdARR11基因的生物学功能及作用机理奠定了基础。

关键词:苹果;MdARR11; B型ARRs;干旱胁迫DOI:10.11869/j.issn.1000‑8551.2024.02.0226细胞分裂素(cytokinin,CTK)作为植物生长发育过程中不可或缺的经典激素之一,在植物中的信号传导由双组分系统(two-component system,TCS)介导[1]。

红树莓CPP_转录因子家族的生物信息学及表达分析

红树莓CPP_转录因子家族的生物信息学及表达分析

第46卷第6期2023年11月河北农业大学学报JOURNAL OF HEBEI AGRICULTURAL UNIVERSITYVol.46 No.6Nov.2023红树莓CPP转录因子家族的生物信息学及表达分析郑奕宸1,李 明1,李 闯1,吴菁菁1,李 寒2,顾玉红1(1.河北农业大学 生命科学学院,河北 保定 071001;2.河北农业大学 林学院,河北 保定 071001)摘要:为探索CPP转录因子家族在红树莓果实中的功能,本研究通过生物信息学技术与表达分析结合的方法,在‘海尔特兹’红树莓转录组数据库中检索到的CPP转录因子家族进行生物信息学分析、转录表达量分析和qRT-PCR表达分析。

结果表明:红树莓CPP基因家族包括4个成员,相对分子质量在47175.57~86763.46 kD之间,等电点在5.83~9.20之间,为不稳定、亲水性的蛋白质,无信号肽,定位于细胞核,无跨膜结构,含有2个CXC保守结构域,结构主要由无规则卷曲构成,含有8~12个外显子,7~8个保守基序,与拟南芥的CPP基因亲缘关系较近,含有生长素、脱落酸、赤霉素、水杨酸、防御和应激、干旱诱导等顺式作用元件,转录表达和qRT-PCR表达均分析发现RuCPP-1和RuCPP-4基因在青果时期的表达量最高,RuCPP-2和RuCPP-3基因分别在红果和深红果时期的表达量最高,推测RuCPP基因家族可能参与调控生长素、脱落酸、赤霉素、水杨酸等反应。

关 键 词:红树莓;CPP转录因子家族;生物信息学分析;表达分析中图分类号:Q781;S663.2开放科学(资源服务)标识码(OSID):文献标志码:ABioinformatics and expression analysis of CPP transcription factorfamily of red raspberryZHENG Yichen1, LI Ming1, LI Chuang1, WU Jingjing1, LI Han2, GU Yuhong1(1. College of Life Science, Hebei Agricultural University , Baoding 071001, China; 2. College of Foresty, HebeiAgricultural University , Baoding 071001, China)Abstract: In order to explore the function of CPP transcription factor family in red raspberry fruits, this studyconducted bioinformatics analysis, transcriptional expression analysis and qRT-PCR expression analysis of CPPtranscription factor family retrieved from the ‘Heritage’ red raspberry transcriptome database. The results showedthat the red raspberry CPP gene family consisted of 4 members, whose relative molecular weight ranged from47 175.57 to 86 763.46 kD and isoelectric point ranged from 5.83 to 9.20. They were unstable, hydrophilic proteinswithout signal peptides, and localized on the nucleus without transmembrane structure. The CPP proteins contained2 CXC conserved domains and the structure were mainly composed of random crimp. The CPP genes contained8~12 exons and 7~8 conserved motifs. They were closely related to the CPP gene of Arabidopsis thaliana.Cis-acting elements were identified including auxin, abscisic acid, gibberellin, salicylic acid, drought induction,defense and stress responsive elements. Expression analysis showed that the expression levels of RuCPP-1 andRuCPP-4 were the higher in the green fruit stage, and the expression levels of RuCPP-2 and RuCPP -3 were the收稿日期:2023-07-26基金项目:河北省重点研发计划项目(20326338D).第一作者:郑奕宸(1999-),女,河北邢台人,硕士研究生,从事植物发育生物学研究.E-mail:**********************通信作者:顾玉红(1977—),女,河北昌黎人,博士,教授,从事植物发育生物学研究.E-mail:******************本刊网址:文章编号:1000-1573(2023)06-0058-08DOI:10.13320/ki.jauh.2023.009359第6期higher in the red and deep red fruit stages. It was speculated that RuCPP gene family might be involved in the response of auxin, abscisic acid, gibberellin and salicylic acid.Keywords: red raspberry; CPP transcription factor family; bioinformatics analysis; expression analysis红树莓(Rubus idaeus L.)又名覆盆子、悬钩子、托盘等,属于蔷薇科悬钩子属,在寒带和温带各地均有分布[1]。

小麦DREB4蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

小麦DREB4蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

㊀山东农业科学㊀2023ꎬ55(3):9~14ShandongAgriculturalSciences㊀DOI:10.14083/j.issn.1001-4942.2023.03.002收稿日期:2022-06-28基金项目:山东省农业良种工程项目(2019LZGC01702)ꎻ山东省自然科学基金青年项目(ZR2020QC114)ꎻ国家自然科学基金青年项目(32001542)ꎻ山东省农业良种工程项目(2021LZGC013)ꎻ小麦玉米国家工程实验室开放课题(2018LYZWS06)作者简介:李永波(1986 )ꎬ男ꎬ博士ꎬ助理研究员ꎬ主要从事小麦新品种培育研究ꎮE-mail:lyb920327@sina.com通信作者:樊庆琦(1980 )ꎬ男ꎬ博士ꎬ副研究员ꎬ主要从事小麦新品种培育研究ꎮE-mail:fanqingqi@163.com楚秀生(1963 )ꎬ男ꎬ博士ꎬ研究员ꎬ主要从事小麦新品种培育研究ꎮE-mail:xschu2007@sina.com小麦DREB4蛋白的原核表达及多克隆抗体制备李永波1ꎬ鲁琳1ꎬ方会见2ꎬ崔德周1ꎬ孟福燕3ꎬ黄琛1ꎬ隋新霞1ꎬ樊庆琦1ꎬ楚秀生1ꎬ4(1.山东省农业科学院作物研究所/黄淮北部小麦生物学与遗传育种重点实验室/山东省小麦技术创新中心/济南市小麦遗传改良重点实验室ꎬ山东济南㊀250100ꎻ2.山东鲁研良种有限公司ꎬ山东济南㊀250100ꎻ3.郓城县种子公司ꎬ山东郓城㊀274700ꎻ4.烟台大学生命科学学院ꎬ山东烟台㊀264000)㊀㊀摘要:DREB(dehydrationresponsiveelementbinding)转录因子在小麦非生物胁迫中起着非常重要的作用ꎬ但由于目前缺乏可识别小麦内源性DREB蛋白的抗体ꎬ导致其在蛋白水平上的研究进展非常缓慢ꎮ本研究通过分析DREB4A㊁4B和4C三种蛋白序列ꎬ将DREB4A在大肠杆菌中进行表达ꎬ并利用纯化后的蛋白作为抗原免疫兔子ꎬ在国内外首次获得小麦DREB4的多克隆抗体ꎮWesternblot结果证明ꎬ该抗体可特异性识别小麦内源性DREB4蛋白ꎮ该抗体介导的免疫组织化学结果显示ꎬDREB4蛋白定位于细胞核内ꎮ本研究为深入研究植物DREB信号通路提供了有力的检测工具ꎮ关键词:小麦ꎻ非生物胁迫ꎻDREB4转录因子ꎻ多克隆抗体中图分类号:S512.1:Q786㊀㊀文献标识号:A㊀㊀文章编号:1001-4942(2023)03-0009-06ProkaryoticExpressionandPolyclonalAntibodyPreparationofWheatDREB4ProteinLiYongbo1ꎬLuLin1ꎬFangHuijian2ꎬCuiDezhou1ꎬMengFuyan3ꎬHuangChen1ꎬSuiXinxia1ꎬFanQingqi1ꎬChuXiusheng1ꎬ4(1.CropResearchInstituteꎬShandongAcademyofAgriculturalSciences/KeyLaboratoryofWheatBiologyandGeneticsandBreedinginNorthernHuang ̄HuaiRiverPlainꎬMinistryofAgricultureandRuralAffairs/ShandongTechnologyInnovationCenterofWheat/JinanKeyLaboratoryofWheatGeneticImprovementꎬJinan250100ꎬChinaꎻ2.ShandongLuyanSeedCo.ꎬLtd.ꎬJinan250100ꎬChinaꎻ3.YunchengCountrySeedCompanyꎬYuncheng274700ꎬChinaꎻ4.CollegeofLifeSciencesꎬYantaiUniversityꎬYantai264000ꎬChina)Abstract㊀DREB(dehydration ̄responsiveelement ̄binding)transcriptionfactorplaysaveryimportantroleinwheatabioticstress.HoweverꎬduetothelackofantibodiesthatcanrecognizewheatendogenousDREBproteinꎬitsresearchprogressatproteinlevelisveryslow.InthisstudyꎬbyanalyzingthreeproteinsequencesofDREB4Aꎬ4Band4CꎬtheDREB4AwasselectedtoexpressinEscherichiacoliꎬandthepurifiedproteinwasusedasanantigentoimmunizerabbitsꎬthenthepolyclonalantibodyofwheatDREB4wasobtainedforthefirsttimeathomeandabroad.TheWesternblotresultsshowedthattheantibodycouldspecificallyrecognizewheatendogenousDREB4protein.Theantibody ̄mediatedimmunohistochemicalresultsshowedthatDREB4proteinwaslocalizedinthenucleus.Thisstudycouldprovideapowerfuldetectiontoolforin ̄depthresearchofplantDREBsignalingpathway.Keywords㊀WheatꎻAbioticstressꎻDREB4transcriptionfactorꎻPolyclonalantibody㊀㊀干旱㊁盐㊁高温㊁冷等各种非生物胁迫会严重影响小麦产量ꎮDREB蛋白含有一个保守的AP2结构域ꎬ可以和顺式作用元件DRE核心序列(A/GCCGAC)发生特异性结合ꎬ通过在转录水平上调控下游基因的表达[1]ꎬ进而应对各种非生物胁迫ꎮ到目前为止ꎬDREB转录因子在拟南芥[2]㊁大豆[3]㊁水稻[4]㊁玉米[5]㊁大麦[6]和小麦[7]等多种植物中被鉴定出来ꎮDREB分为六大类(DREB1~6)[8]ꎬ其中ꎬDREB1在拟南芥㊁水稻㊁玉米中主要应答冷胁迫[4]ꎬDREB2主要应答干旱㊁盐胁迫[9]ꎬDREB3参与ABA和糖信号途径[10]ꎬDREB4应答干旱㊁冷胁迫及在乙烯与茉莉酸途径中起作用[11]ꎬDREB5参与应答干旱㊁冷胁迫[12]ꎬDREB6应答干旱㊁盐胁迫[13]ꎮ大量研究已验证了DREB在植物应对非生物胁迫中的功能ꎮ如在小麦中过表达拟南芥DREB1A㊁大豆GmDREB1或棉花GhDREB基因ꎬ可通过提高根系活力㊁光合作用及渗透调节能力提高小麦的抗旱性[14-16]ꎻ在拟南芥中过表达大豆GmDREB2㊁GmDREB3或小麦TaDREB3基因ꎬ可提高拟南芥抗旱㊁耐盐㊁耐高温及抗冻性[1ꎬ17ꎬ18]ꎻ过表达GmDREB6基因ꎬ可增强大豆的耐盐能力[19]ꎮ然而ꎬ目前几乎所有关于DREB的研究是集中在转录水平上的调控ꎬ缺乏蛋白质水平上的调控研究ꎬ且DREB蛋白发挥生物学功能是否通过磷酸化㊁乙酰化等蛋白水平上的调控尚未可知ꎬ因此ꎬ研究识别内源性DREB蛋白的特异性多克隆抗体ꎬ对于DREB在蛋白水平的调控研究具有非常重要的意义ꎮ本研究通过对小麦中已有的DREB4A㊁4B和4C进行序列分析ꎬ选取DREB4A进行原核表达㊁纯化ꎬ并以其作为抗原ꎬ首次制备出可识别小麦内源DREB4蛋白的多克隆抗体ꎬ以期为进一步研究植物DREB4在蛋白水平上的调控机理提供方法学基础ꎮ1㊀材料与方法1.1㊀试验材料供试小麦品种为济麦379ꎬ由山东省审定(鲁审麦20210017)ꎮ取其幼苗期根㊁叶为材料进行试验ꎮ1.2㊀DREB4序列分析与合成本研究通过DNAMAN8软件对NCBI中提交的DREB4A(AY781354.1)㊁4B(AY781355.1)和4C(AY781356.1)序列进行分析ꎻDREB4A序列的合成由北京擎科生物科技有限公司进行ꎮ1.3㊀DREB4A载体构建、原核表达及纯化将上述合成的DREB4A序列与大肠杆菌表达载体PET30a通过同源重组的方法(pEASY®-BasicSeamlessCloningandAssemblyKitꎬCU201-02ꎬ北京全式金生物技术股份有限公司)连接ꎬ将连接产物转入DH5α(北京擎科生物科技有限公司)感受态细胞中ꎬ冰上放置15minꎬ42ħ水浴热激90sꎬ再冰上放置2minꎬ加入1mL无任何抗生素的LB液体培养基ꎬ37ħ㊁210r/min水平摇1hꎬ然后取100μL菌液ꎬ涂于含有卡那霉素的LB固体培养基上ꎬ37ħ过夜培养ꎮ挑取10个单克隆进行PCR检测ꎬ选取2个阳性信号最强的单克隆由北京擎科生物科技有限公司进行测序ꎬ对测序正确的单克隆进行摇菌㊁质粒提取(质粒小提试剂盒ꎬDP103ꎬ北京天根生化科技有限公司)ꎮ将提取好的质粒转入BL21(DE3)感受态细胞(CD701-02ꎬ北京全式金生物技术股份有限公司)中ꎬ剩余步骤同DH5α感受态细胞转化ꎮ挑单克隆ꎬ置于5mLLB液体培养基中ꎬ37ħ过夜培养ꎬ然后吸取1mL菌液ꎬ加入到300mLLB液体培养基中进行扩大培养ꎬ待菌液OD值为0.6~0.8时ꎬ加入终浓度为50mmol/L的IPTG(G5042-1Gꎬ武汉塞维尔生物科技有限公司)进行诱导表达ꎬ28ħ过夜培养ꎻ菌液于6000r/min离心10minꎬ收集菌体沉淀ꎬ用1ˑPBS(phosphatebuffersaline)清洗沉淀1次ꎬ然后加入40mL1ˑPBS重悬ꎬ超声破碎(开3sꎬ关3sꎻ共计30min)ꎬ6000r/min离心10minꎬ分别将沉淀㊁上清液进行SDS电泳检测ꎮ利用His标签蛋白纯化试剂盒(P2226ꎬ上海碧云天生物技术有限公司)对上清液进行纯化ꎬ然后置于透析袋中4ħ过夜透析ꎬ将透析后的蛋白置于01山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第55卷㊀-20ħ保存备用ꎮ1.4㊀小麦DREB4多克隆抗体制备选取实验级日本大耳白兔和新西兰大白兔各1只ꎬ饲养体重至1~2kg时ꎬ用注射器将充分混匀的1mL完全弗氏佐剂(液体石蜡ʒ羊毛脂=2ʒ1)和0.3mgDREB4A融合蛋白对每只兔子进行皮下注射第1针ꎬ标记为第1天ꎻ第12天ꎬ将充分混匀的1mL不完全弗氏佐剂(完全弗氏佐剂+终浓度20mg/mL的卡介苗)和0.15mg融合蛋白对每只兔子进行皮下注射第2针ꎻ第26天ꎬ将充分混匀的1mL不完全弗氏佐剂和0.15mg融合蛋白对每只兔子进行肌肉注射第3针ꎻ第40天ꎬ将充分混匀的1mL不完全弗氏佐剂和0.15mg融合蛋白对每只兔子进行肌肉注射第4针ꎻ第53天ꎬ取兔子血清进行Westernblot验证ꎮ1.5㊀Westernblot分析利用植物组织蛋白裂解液提取小麦幼苗期根㊁叶部的总蛋白(植物蛋白提取试剂盒ꎬCW0885ꎬ康为世纪生物技术有限公司)ꎬ配制15%的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳ꎻ通过湿法转膜ꎬ将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素薄膜上ꎬ然后将膜放入含有2%脱脂奶粉的TBS(25mmol/LTris-HClꎬ137mmol/LNaCl)中ꎬ封闭1hꎻ加入DREB4多克隆抗体(1ʒ1000稀释于2%脱脂奶粉中)ꎬ4ħ过夜ꎻ用TBST(TBS+20%吐温-20)洗涤3次后ꎬ向封闭液中加入碱性磷酸酶(alkalinephosphataseꎬAP)标记的二抗ꎬ缓慢摇动24hꎬ然后TBST洗涤3次ꎬ每次10minꎻ最后用发色液(TBS10mLꎬ5%NBT45μLꎬ5%BCIP35μL)进行发色ꎮ1.6㊀免疫组织化学法进行亚细胞定位将小麦叶片下表皮撕下ꎬ置于4%多聚甲醛中ꎬ室温放置24hꎬ弃掉多聚甲醛ꎬ用1ˑPBS清洗3次ꎬ加入2%脱脂奶粉于37ħ封闭30minꎬ然后在4ħ下加入DREB4多克隆抗体(1ʒ200稀释于2%脱脂奶粉中)过夜ꎻ用PBS洗涤3次后ꎬ加入1μL二抗(山羊抗兔-AlexaFluor555抗体)和10mLBSAꎬ37ħ继续孵育1hꎬ然后用TBS清洗3次ꎬ在室温下用4ᶄꎬ6-二脒基-2-苯基吲哚(DA ̄PIꎬAnaSpecInc.ꎬSanJoseꎬCAꎬUSA)染色10minꎬ然后用TBS清洗3次ꎬ置于荧光显微镜(HT7700ꎬHitachiꎬTokyoꎬJapan)下观察并拍照ꎮ2㊀结果与分析2.1㊀小麦DREB4序列分析在普通小麦中ꎬDREB4存在DREB4A㊁4B㊁4C三种转录本ꎬ其中ꎬDREB4A编码394个氨基酸ꎬ分子量为42.8kDaꎻDREB4B编码346个氨基酸ꎬ分子量为37.7kDaꎻDREB4C编码68个氨基酸ꎬ分子量为7.1kDa(图1)ꎮ三个蛋白氨基酸序列的保守性为61.28%ꎬ第1~25位的氨基酸完全一致ꎬ其中ꎬDREB4B除第26~73位氨基酸缺失外ꎬ其它位置的氨基酸与DREB4A完全一致ꎮDREB4A㊁4B和4C存在序列间的差异ꎬ可能是应对不同非生物胁迫产生的可变剪切所致ꎮ图中深蓝色区域为保守区域ꎮ图1㊀普通小麦DREB4A、4B和4C的氨基酸序列分析2.2㊀小麦DREB4A的原核表达鉴于DREB4A的氨基酸序列最长ꎬ选其进行后续分析ꎮ首先ꎬ将人工合成的DREB4A序列与表达载体PET30a连接后ꎬ在大肠杆菌中进行表达ꎬ上清液中的蛋白纯化后进行SDS-PAGE检测ꎮ结果显示ꎬ在大约50kDa处出现清晰的蛋白条带(图2)ꎬ与预期的蛋白分子量相符ꎬ表明DREB4A成功表达ꎮ11㊀第3期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀李永波ꎬ等:小麦DREB4蛋白的原核表达及多克隆抗体制备图2㊀小麦DREB4A的原核表达及纯化2.3㊀DREB4多克隆抗体的制备本研究以上述获得的纯化DREB4A融合蛋白为抗原免疫兔子ꎬ从兔血清中获取了DREB4多克隆抗体ꎮWesternblot结果显示ꎬ该抗体在目的蛋白位置清楚地识别到DREB4A蛋白(图3)ꎮ图3㊀DREB4多克隆抗体对DREB4A融合蛋白的识别2.4㊀DREB4多克隆抗体对小麦内源性DREB4蛋白的识别及特异性检测为了进一步验证该抗体能否识别小麦内源性DREB4蛋白ꎬ分别提取小麦苗期根㊁叶总蛋白进行免疫识别ꎮWesternblot结果显示ꎬ仅在37kDa处检测到清晰的蛋白条带ꎬ这与预测的DREB4B蛋白分子量一致(图4)ꎮ表明该抗体可以识别小麦内源性DREB4B蛋白ꎬ而且特异性好ꎬ可以用于后续植物DREB分子机理的相关研究ꎮ图4㊀小麦内源性DREB4蛋白检测2.5㊀DREB4亚细胞定位分析DREB4定位于细胞核中(图5)ꎬ与前人报道的DREB转录因子核定位的结果一致[20]ꎬ进一步证实了该抗体特异性较好ꎬ可用于开展免疫组织或细胞化学研究的可行性ꎮ对照为前血清ꎮ图5㊀利用免疫组织化学法进行的㊀㊀㊀DREB4亚细胞定位分析结果3㊀讨论与结论DREB是一类抗非生物胁迫的转录因子ꎬ目前主要用于抗逆转基因植物的培育及相关分子机理的解析[21]ꎮ小麦DREB4蛋白是一种对动物和人类无危害的蛋白ꎬ将其用于粮食作物抗逆性转基因改良有着广阔的市场前景[22]ꎮDREB4在小麦中存在三种转录形式(DREB4A㊁4B和4C)[23]ꎬ其中ꎬDREB4A编码的多肽链最长ꎬ涵盖的蛋白信21山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第55卷㊀息最丰富ꎬ推测由此蛋白作为抗原产生的抗体可识别DREB4的所有三种形式ꎬ因此本研究利用DREB4A蛋白作为抗原ꎬ进行了DREB4多克隆抗体的制备ꎮ经过抗原上清蛋白的纯化㊁免疫注射ꎬ最终研制出能识别小麦内源性DREB4蛋白的多克隆抗体ꎮ尽管从植物中已克隆出多种类型的DREB基因ꎬ但由于其抗体类型匮乏以及识别内源性蛋白抗体的空白ꎬ导致有关DREB在蛋白水平上的调控机理研究进展相对缓慢ꎮ目前ꎬ只有拟南芥DREB1A的抗体制备成功ꎬ且仅对大肠杆菌中表达的拟南芥DREB1A融合蛋白进行了检测[24]ꎮ本研究首次开发了特异性识别小麦内源DREB4蛋白的多克隆抗体ꎬ既丰富了植物DREB的抗体类型ꎬ也为进一步推动DREB在蛋白水平上的研究提供了方法学基础ꎮ利用本研究制备的DREB4多克隆抗体检测小麦苗期根㊁叶内源性DREB4蛋白时ꎬ仅识别到了DREB4B蛋白条带ꎬ与预测的该抗体能识别小麦中DREB4三种蛋白形式的结果不一致ꎬ这可能是因为DREB4具有组织器官以及不同发育阶段表达特异性ꎬ在小麦苗期根㊁叶中主要以DREB4B的形式表达ꎬ而在花㊁籽粒等其它组织器官以及不同发育阶段中则以其它形式表达ꎻ另外ꎬDREB4在不同小麦品种中的表达形式也可能存在一定的差异ꎬ本研究所用小麦品种济麦379为抗旱节水型品种ꎬ在其苗期根㊁叶中主要以DREB4B的形式表达ꎬ但在其它类型的小麦品种中以哪种形式表达还有待进一步研究ꎮ传统DREB基因亚细胞定位是采用构建DREB-GFP过表达载体转入组织或细胞中的方法进行定位[20]ꎬ而本研究是利用该抗体对内源DREB4进行免疫定位ꎬ与传统方法相比可避免因过表达造成目的蛋白移位的现象ꎮ综上所述ꎬ本研究通过对DREB4A进行大肠杆菌表达㊁纯化ꎬ并以此作为抗原成功制备出可识别小麦内源性DREB4蛋白的高度特异性多克隆抗体ꎬ可为深入研究植物DREB4在蛋白水平上参与非生物胁迫的调控机理奠定方法学基础ꎮ参㊀考㊀文㊀献:[1]㊀NiuXꎬLuoTꎬZhaoHꎬetal.IdentificationofwheatDREBgenesandfunctionalcharacterizationofTaDREB3inresponsetoabioticstresses[J].Geneꎬ2020ꎬ740:144514. [2]㊀StockingerEJꎬGilmourSJꎬThomashowMF.ArabidopsisthalianaCBF1encodesanAP2domain ̄containingtranscrip ̄tionalactivatorthatbindstotheC ̄repeat/DREꎬacis ̄actingDNAregulatoryelementthatstimulatestranscriptioninre ̄sponsetolowtemperatureandwaterdeficit[J].Proc.Natl.Acad.Sci.USAꎬ1997ꎬ94(3):1035-1040. [3]㊀MizoiJꎬOhoriTꎬMoriwakiTꎬetal.GmDREB2Aꎻ2ꎬacanonicalDEHYDRATION ̄RESPONSIVEELEMENT ̄BINDINGPROTEIN2 ̄typetranscriptionfactorinsoybeanꎬisposttranslationallyregu ̄latedandmediatesdehydration ̄responsiveelement ̄dependentgeneexpression[J].PlantPhysiol.ꎬ2013ꎬ161(1):346-361.[4]㊀DubouzetJGꎬSakumaYꎬItoYꎬetal.OsDREBgenesinriceꎬOryzasativaL.ꎬencodetranscriptionactivatorsthatfunctionindrought ̄ꎬhigh ̄salt ̄andcold ̄responsivegeneexpression[J].PlantJ.ꎬ2003ꎬ33(4):751-763.[5]㊀QinFꎬKakimotoMꎬSakumaYꎬetal.Regulationandfunction ̄alanalysisofZmDREB2AinresponsetodroughtandheatstressesinZeamaysL.[J].PlantJ.ꎬ2007ꎬ50(1):54-69. [6]㊀XueGP.AnAP2domaintranscriptionfactorHvCBF1acti ̄vatesexpressionofcold ̄responsivegenesinbarleythroughin ̄teractionwitha(G/a)(C/t)CGACmotif[J].Biochim.Bio ̄phys.Actaꎬ2002ꎬ1577(1):63-72.[7]㊀ShenYGꎬZhangWKꎬHeSJꎬetal.AnEREBP/AP2 ̄typeproteininTriticumaestivumwasaDRE ̄bindingtranscriptionfactorinducedbycoldꎬdehydrationandABAstress[J].Theor.Appl.Genet.ꎬ2003ꎬ106(5):923-930.[8]㊀SakumaYꎬLiuQꎬDubouzetJG.DNA ̄bindingspecificityoftheERF/AP2domainofArabidopsisDREBsꎬtranscriptionfac ̄torsinvolvedindehydration ̄andcold ̄induciblegeneexpres ̄sion[J].Biochem.Biophys.Res.Commun.ꎬ2002ꎬ290(3):998-1009.[9]㊀ChenHꎬLiuLꎬWangLꎬetal.VrDREB2AꎬaDREB ̄bindingtranscriptionfactorfromVignaradiataꎬincreaseddroughtandhigh ̄salttoleranceintransgenicArabidopsisthaliana[J].J.PlantRes.ꎬ2016ꎬ129(2):263-273.[10]NiuXꎬHelentjarisTꎬBateNJ.MaizeABI4bindscouplingel ̄ement1inabscisicacidandsugarresponsegenes[J].PlantCellꎬ2002ꎬ14(10):2565-2575.[11]SunSꎬYuJPꎬChenFꎬetal.TINYꎬadehydration ̄responsiveelement(DRE) ̄bindingprotein ̄liketranscriptionfactorcon ̄nectingtheDRE ̄andethylene ̄responsiveelement ̄mediatedsignalingpathwaysinArabidopsis[J].J.Biol.Chem.ꎬ2008ꎬ283(10):6261-6271.[12]DongCJꎬLiuJY.TheArabidopsisEAR ̄motif ̄containingpro ̄teinRAP2.1functionsasanactivetranscriptionalrepressortokeepstressresponsesundertightcontrol[J].BMCPlantBiol.ꎬ2010ꎬ10:47.31㊀第3期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀李永波ꎬ等:小麦DREB4蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[13]LinRCꎬParkHJꎬWangHY.RoleofArabidopsisRAP2.4inregulatinglight ̄andethylene ̄mediateddevelopmentalproces ̄sesanddroughtstresstolerance[J].Mol.Plantꎬ2008ꎬ1(1):42-57.[14]PellegrineschiAꎬReynoldsMꎬPachecoMꎬetal.Stress ̄in ̄ducedexpressioninwheatoftheArabidopsisthalianaDREB1Agenedelayswaterstresssymptomsundergreenhouseconditions[J].Genomeꎬ2004ꎬ47(3):493-500.[15]ZhouYꎬChenMꎬGuoJꎬetal.OverexpressionofsoybeanDREB1enhancesdroughtstresstoleranceoftransgenicwheatinthefield[J].J.Exp.Bot.ꎬ2020ꎬ71(6):1842-1857. [16]刘洋洋ꎬ郭栋ꎬ楚秀生ꎬ等.转DREB基因小麦新品系抗旱生理指标测定[J].山东农业科学ꎬ2013ꎬ45(3):38-41. [17]ChenMꎬXuZꎬXiaLꎬetal.Cold ̄inducedmodulationandfunctionalanalysesoftheDRE ̄bindingtranscriptionfactorgeneꎬGmDREB3ꎬinsoybean(GlycinemaxL.)[J].J.Exp.Bot.ꎬ2009ꎬ60(1):121-135.[18]ChenMꎬWangQYꎬChengXGꎬetal.GmDREB2ꎬasoybeanDRE ̄bindingtranscriptionfactorꎬconferreddroughtandhigh ̄salttoleranceintransgenicplants[J].Biochem.Biophys.Res.Commun.ꎬ2007ꎬ353(2):299-305.[19]TuTQꎬVaciaxaPꎬLoTTMꎬetal.GmDREB6ꎬasoybeantranscriptionfactorꎬnotablyaffectsthetranscriptionoftheNtP5CSandNtCLCgenesintransgenictobaccoundersaltstressconditions[J].Saudi.J.Biol.Sci.ꎬ2021ꎬ28(12):7175-7181.[20]倪志勇.小麦DREB转录因子的分子生物学特性分析及功能鉴定[D].杨凌:西北农林科技大学ꎬ2008.[21]SarkarTꎬThankappanRꎬMishraGPꎬetal.AdvancesinthedevelopmentanduseofDREBforimprovedabioticstresstoler ̄anceintransgeniccropplants[J].PhysiologyandMolecularBiologyofPlantsꎬ2019ꎬ25(6):1323-1334.[22]CaoBꎬHeXꎬLuoYꎬetal.Safetyassessmentofdehydration ̄responsiveelement ̄binding(DREB)4proteinexpressedinE.coli[J].FoodandChemicalToxicologyꎬ2012ꎬ50(11):4077-4084.[23]徐兆师.小麦抗逆相关转录因子基因的克隆与鉴定[D].北京:中国农业科学院ꎬ2005.[24]范玉清ꎬ刘恒ꎬ任伟.拟南芥DREB1A转录因子的原核表达和多克隆抗体制备[J].植物生理学通讯ꎬ2007ꎬ43(3):533-537.41山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第55卷㊀。

毕赤酵母多拷贝表达载体试剂盒

毕赤酵母多拷贝表达载体试剂盒

毕赤酵母多拷贝表达载体试剂盒三叶虫(2007-4-25 13:59:55) 点击:75 回复:0 IP:60.216.104.*制作者:陈苗商汉桥毕赤酵母多拷贝表达载体试剂盒用于在含多拷贝基因的毕赤酵母菌中表达并分离重组蛋白综述:基本特征:作为真核生物,毕赤酵母具有高等真核表达系统的许多优点:如蛋白加工、折叠、翻译后修饰等。

不仅如此,操作时与E.coli及酿酒酵母同样简单。

它比杆状病毒或哺乳动物组织培养等其它真核表达系统更快捷、简单、廉价,且表达水平更高。

同为酵母,毕赤酵母具有与酿酒酵母相似的分子及遗传操作优点,且它的外源蛋白表达水平是后者的十倍以至百倍。

这些使得毕赤酵母成为非常有用的蛋白表达系统。

与酿酒酵母相似技术:许多技术可以通用:互补转化基因置换基因破坏另外,在酿酒酵母中应用的术语也可用于毕赤酵母。

例如:HIS4 基因都编码组氨酸脱氢酶;两者中基因产物有交叉互补;酿酒酵母中的一些野生型基因与毕赤酵母中的突变基因相互补,如HIS4、LEU2、ARG4、TR11、URA3 等基因在毕赤酵母中都有各自相互补的突变基因。

毕赤酵母是甲醇营养型酵母:毕赤酵母是甲醇营养型酵母,可利用甲醇作为其唯一碳源。

甲醇代谢的第一步是:醇氧化酶利用氧分子将甲醇氧化为甲醛,还有过氧化氢。

为避免过氧化氢的毒性,甲醛代谢主要在一个特殊的细胞器-过氧化物酶体-里进行,使得有毒的副产物远离细胞其余组分。

由于醇氧化酶与O2 的结合率较低,因而毕赤酵母代偿性地产生大量的酶。

而调控产生醇过氧化物酶的启动子也正是驱动外源基因在毕赤酵母中表达的启动子。

两种醇氧化酶蛋白:毕赤酵母中有两个基因编码醇氧化酶-AOX1 及AOX2。

细胞中大多数的醇氧化酶是AOX1 基因产物。

甲醇可紧密调节、诱导AOX1 基因的高水平表达,较典型的是占可溶性蛋白的30%以上。

AOX1 基因已被分离,含AOX1 启动子的质粒可用来促进编码外源蛋白的目的基因的表达。

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AP® Macroeconomics2011 Free-Response QuestionsForm BAbout the College BoardThe College Board is a mission-driven not-for-profit organization that connects students to college success and opportunity.Founded in 1900, the College Board was created to expand access to higher education. Today, the membership association is made up of more than 5,900 of the world’s leading educational institutions and is dedicated to promoting excellence and equity ineducation. Each year, the College Board helps more than seven million students prepare for a successful transition to collegethrough programs and services in college readiness and college success — including the SAT® and the AdvancedPlacement Program®. The organization also serves the education community through research and advocacy on behalf ofstudents, educators and schools.© 2011 The College Board. College Board, Advanced Placement Program, AP, AP Central, SAT and the acorn logo are registeredtrademarks of the College Board. 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Include correctly labeled diagrams, if useful or required, in explaining your answers. A correctly labeled diagram must have all axes and curves clearly labeled and must show directional changes. Use a pen with black or dark blue ink.1. Assume that the economy of Meekland is in a long-run equilibrium with a balanced government budget. (a) Using a correctly labeled graph of aggregate supply and aggregate demand, show each of the following. (i) Long-run aggregate supply(ii) The output level, labeled Y E , and the price level, labeled PL E(b) Assume consumer confidence falls. Show on your graph in part (a) the short-run impact of the change in consumer confidence and label the new equilibrium price level and output Y 1 and PL 1, respectively.(c) Using a correctly labeled graph of the short-run and long-run Phillips curves, show the effect of the fall in consumer confidence on inflation. Label the initial long-run equilibrium point A and the new short-run equilibrium point B.(d) If the government and the central bank do not pursue any discretionary policy change, how does the fall in consumer confidence affect government transfer payments in Meekland? Explain.(e) Draw a correctly labeled graph of the loanable funds market in Meekland and show the effect of the change in government transfer payments you identified in part (d) on the real interest rate.(f) In the absence of any changes in fiscal and monetary policies, in the long run will the short-run aggregatesupply curve shift to the left, shift to the right, or remain unchanged as a result of the fall in consumerconfidence? Explain.2. Assume that yesterday the exchange rate between the euro and the Singaporean dollar was 1 euro = 0.58 Singaporean dollars. Assume that today the euro is trading at 1 euro = 0.60 Singaporean dollars.(a) How will the change in the exchange rate affect each of the following in Singapore in the short run?(i) Aggregate demand. Explain.(ii) The level of employment. Explain.(b) Suppose that Singapore wants to return the exchange rate to 1 euro = 0.58 Singaporean dollars.(i) Should the Singaporean central bank buy or sell euros in the foreign exchange market?(ii) Instead of buying or selling euros, what domestic open-market operation can the Singaporean centralbank use to achieve the same result? Explain.© 2011 The College Board. Visit the College Board on the Web: .-3-2009 Quantity 2009 Price (base year) 2010 Quantity 2010 Price Food6 $2.5 8 $ 2.5 Clothes 5 $6 10 $10Entertainment 2 $4 5 $ 53. (a) The outputs and prices of goods and services in Country X are shown in the table above. Assuming that2009 is the base year, calculate each of the following.(i) The nominal gross domestic product (GDP) in 2010(ii) The real GDP in 2010(b) If in one year the price index is 50 and in the next year the price index is 55, what is the rate of inflation from one year to the next?(c) Assume that next year’s wage rate will be 3 percent higher than this year’s because of inflationary expectations. The actual inflation rate is 4 percent. At the beginning of next year, will the real wage be higher, lower, or the same as today?(d) Assume that Sara gets a fixed-rate loan from a bank when the expected inflation rate is 3 percent. If the actual inflation rate turns out to be 4 percent, who benefits from the unexpected inflation: Sara, the bank, neither, or both? Explain.STOPEND OF EXAM。

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