XX生物科技公司ABI7500荧光定量PCR仪标准操作规程
ABI 7500 FAST荧光定量PCR仪 操作规程
ABI 7500 FAST荧光定量PCR仪简明操作规程1.双击桌面图标，或从 Start >All Programs > Applied Biosystems >7500 Software > 7500 V2.0 开启软件。
进入主界面后选择Advanced Setup 。
2.默认进入 Setup 下的Experiment Properties 界面2.1输入实验名称（Experiment Name）2.2确认仪器型号2.3在实验类型中，选择 Quantitation-Comparative CT (△△CT)2.4选择试剂种类2.5确认运行模式3.进入 Setup 下的Plate Setup 界面，编辑基因（Target）及样本（Sample）；3.1在“define targets and samples”界面中设置基因3.2在“assign targets and samples”中进行样品板的排布。
4.在“Select relative quantitation setting”中设置内参基因及对照样本。
5.进入 Run Method 界面，设定反应条件及反应体积。
6.点击“save”按钮，文件储存成 Experiment Document Single Files（*.eds）格式，然后在 Run 界面按下按钮，反应即开始进行。
7.实验结束后，点击界面右上角的 Analyze 按钮，软件将会显示实验结果：7.1在扩增图中（见上图），可通过更改Plot Settings 来改变扩增图的显示方式。
如果想查看阈值线或基线，请将Threshold 及Baseline 打勾。
7.2查看相对表达量结果时，利用Plot Settings 选项，可以以不同方式显示相对表达量的结果。
7.3对于 SYBR Green 法实验，可以在Melt Curve 界面中查看熔解曲线。
7.4检测 QC Summary 结果，可以快速查看实验中是否有反应孔存在异常情况。
PCR实验室7500SOP
PCR实验室7500SOP【】ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使⽤、维护、校准程序-LAB-SOP-FZSW-0111.⽬的：确保ABI7500仪器的正确使⽤及正常运⾏2.适⽤范围：美国应⽤⽣物系统公司⽣产的ABI7500实时荧光定量PCR仪3.运⾏环境：电源：推荐配备合适的UPS或稳压器。
通风：仪器的通风应该没有阻挡。
温度：推荐实验室配备空调，温度应该控制在10～30℃之间。
湿度：20-80%；对于潮湿的省份，推荐实验室配备除湿机。
空间：易于操作，安全。
4.操作程序：4.1开关机程序：开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机⾯板上的绿灯亮后即可打开ABI7500系统软件，进⾏实验。
关机顺序：确认实验已经结束后，⾸先关闭ABI7500系统软件，然后关掉定量PCR仪主机的电源，最后关闭电脑。
4.2 创建绝对定量反应板⽂件：4.2.1依次选择 Start > Programs > Applied Biosystems 7500 >Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )，以启动 SDS 软件;或在桌⾯双击Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )图标。
4.2.2选择 File （⽂件） > New （新建）。
4.2.3在 New Document Wizard （新建⽂件向导）窗⼝中，从 Assay （实验）下拉列表中选择Absolute Quantification (Standard Curve)（绝对定量，标准曲线）。
接受 Container （反应板类型）和 Template （模板）字段中的默认设置（即分别为 96-Well Clear（空⽩96 孔板）和 Blank Document（空⽩反应板））。
4.2.4在 Default Plate Name （默认反应板名）字段中输⼊反应板⽂件名，或接受默认⽂件名。
ABI7500实时跟踪荧光PCR仪使用操作规程
ABI7500实时跟踪荧光PCR仪使用操作规程1. 目的：使ABI 7500 型核酸扩增荧光检测仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。
2. 范围：适用于ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使用操作。
3. 职责：操作人按照规程进行仪器的操作使用。
4. 程序：4.1 开机。
连接好所有连线，打开接线板开关，然后依次打开主机开关（在主机侧面），电脑显示器开关（按屏幕下方开关按钮），电脑开关（主机前面按钮）。
使用鼠标双击桌面上一体化仪3.2图标，连机后打开应用程序。
4.2 编辑样品板。
在区域选择界面中进行样品板编辑，同时输入待检样品的相关信息。
4.3 编辑实验程序。
在温度控制界面中进行程序编辑。
4.4 进行实验。
设定完成样品板和实验程序后，将实验样品按样品板设定的位置放入样品槽内，然后将样品槽放入主机内，在程序主界面下点击开始读图标开始运行实验。
实验过程中屏幕的下半部分同步显示实验的运行状态。
4.5 实验中仪器将实时显示每次的样品检测结果：在实验进行中间或实验结束后，均可组合界面中查看实时的检测结果：4.6 定量分析：实验结束后，可以点击定量图标进入定量分析功能。
4.7 打印报告单：定量完毕后，用鼠标单击文件（F）菜单中的刷新病历数据信息，用鼠标单击文件（F）菜单中的打印，系统将自动生成检测报告单，并进行打印。
4.8 关机。
实验全部结束后，可先点击Files菜单Save Data File保存实验结果，然后关闭Opticon Monitor。
依次关闭计算机主机，显示器，ABI 7500主机。
5. 相关文件：无6.相关记录：仪器设备使用、维护保养和清洁记录。
ABI7500荧光定量PCR仪标准操作规程
1. 目的为规范使用人正确和正常的使用ABI 7500型核酸扩增荧光定量检测仪，保证扩增及结果分析的标准化、规范化，特制定本规程。
2. 适用范围适用于本公司ABI7500荧光定量PCR仪的操作。
3. 职责3.1使用人员负责本规程的实施。
3.2 设备使用人负责设备维护保养工作；设备责任人负责设备的定期维护保养工作。
3.3 质量监督员负责监督本规程的实施。
4.内容4.1 程序设置4.1.1 打开电脑及仪器电源，待仪器电源项显示power绿色状态。
4.1.2 双击电脑桌面上的7500 software V2.3 图标打开程序，打开程序单击OK，待软件连接仪器并测试校准状态后（若有出现连接失败可尝试重启电脑，检查USB线接口），出现如下界面，单击Design Wizard选项，红色箭头指示位置有个下拉菜单，如下图所示。
下拉菜单中有一个Advanced Setup（高级设置）选项，如箭头所示：点击这个选项，可以进入下面这个界面，①②③如上图所示，红色箭头从上到下指示的分别是①实验名称、②仪器型号和③反应程序类型。
（带*号的必需填）此图是上面图的延续（自己电脑显示不完全），红色箭头从上到下指示的分别是①Plate Setup 选项、②探针类型和③程序应用速度类型，一般使用的探针就是TaqMan 探针，速度类型选择默认就可以了（如果是7500fast 的话则有快速模式可以选择）。
下一步我们可以看到左上角的红色箭头指示的一个Plate Setup 选项，点击这个选项，就可以进入下一个设置界面。
红色箭头①和②指的是设定反应探针和反应样品名称，箭头③处可以填写反应探针名称（如P1,HBV ,HCV ）。
箭头⑤是选择报告荧光，一般使用的发光基团是FAM ，箭头⑥是选择粹灭荧光，达安现在使用的是TAMRA 荧光，科华现在使用的是BHQ ，在这个仪器中无此选择项，那么就选择none 。
箭头⑧处可以填写样品名称。
点击箭头④和箭头⑨处可以添加反应探针体系名称和样品名称。
7500荧光定量PCR仪使用说明
7500荧光定量PCR 仪使用说明注意事项：●实验过程必须戴干净的一次性乳胶手套进行操作。
● PCR 反应所用的96孔板、8联管或单管必须为ABI7500专用，凸盖PCR 管禁止使用。
● 使用8联管两侧需用空管支撑，使用单管四角需用空管支撑，以防止板槽受力不均。
● 实验数据用光盘刻录，禁止U 盘拷取，数据可暂存于本机电脑硬盘中，各实验室D 盘中有指定文件夹，中心外部人员数据存于FUWU 文件夹下的子文件夹中。
操作步骤➢开机➢ 放入反应板注：关闭仪器托盘时，应按一个角度推压托盘的右侧。
（以下过程按字母顺序a →q 进行操作）➢ 创建反应板文件双击电脑桌面上SDS 软件图标打开SDS 软件；a. 从 Assay 下拉列表中选择反应板类型c. 单击Next 反应板文件类型有以下几种：1. Relative Quantification (ddCt) Plate （相对定量）2. Absolute Quantification (Standard Curve)（绝对定量，标准曲线）3. Allelic Discrimination （等位基因鉴别）4. Plus/Minus （阳性/ 阴性实验）d. 选择要添加到反应板文件的探针（引物），单击Add 添加选中探针e. 如果在列表中未列出所需探针，请单击New Detector 创建新探针f. 单击Nextb. 为反应板文件命名➢为反应孔设置样品名g.选取探针相同的反应孔h.点击反应孔对应的探针。
i.单击Task栏的下边指定探针任务。
j.选择Use （使用）。
k.单击Finish （完成）。
ghijkl.选取反应孔，直接输入相应样品名（也可右键，调出反Well Inspector对话框，在Sample Name中进行修改）设定PCR循环参数、运行程序1.实验结束后关闭软件。
（确认反应板文件数据已保存）2.打开拖盘，将反应板取出，关闭拖盘。
3.按下7500仪器电源开关关闭机器。
ABI7500 Fast PCR作业指导书
1、目的规范该型号ABI7500Fast荧光定量PCR仪操作程序，正确使用和维护仪器，保证检测工作顺利进行，操作人员人身安全和设备安全。
2、适用范围适用于ABI7500Fast荧光定量PCR仪的使用操作与维护。
3、职责3.1 操作人员按照本规程使用仪器，对仪器进行日常维护。
3.2 保管人员负责对仪器进行定期维护、保养。
3.3 科室负责人监督检查本操作程序的执行。
4、操作程序4.1启动笔记本电脑，进入Windows XP系统。
4.2待电脑桌面图标出现后，打开ABI7500Fast荧光定量PCR仪主机电源。
4.3待主机电源指示灯亮后，双击电脑桌面7500 SDS图标，打开软件。
4.4新建文件：在Quick Startup document窗口点击Create New Document 按钮，出现New Document Wizard窗口，在Assay菜单中选择Standard Curve （Absolute Quantification），点击Finish按钮后打开一个空白96孔板文件。
4．5探针设置：双击任意一个孔打开Well Inspector窗口。
4．6点击Add Detector按钮，打开Detector Manager窗口，选择Detector List中的探针，例如用的是TaqMan-FAM标记探针，在列表中选择Reporter：FAM，Quencher：TAMRA；如果用的是SYBR Green I，则在列表中选择Reporter：SYBR，Quencher：（none）。
选择所需探针，按住Ctrl键可选择多个探针，再点击Add To Plate Document 按钮，最后点击Done按钮关闭Detector Manager窗口。
此时Well Inspector窗口仍然是打开的。
填样品表：在96孔表中选择有样品的一个或者多个孔，然后在Well Inspector窗口的Sample Name输入样品的名称，在探针列表中的Use项下的方框中打钩选择要用的探针，在Task栏中选择指定样品类型：未知样品选择Unknown，阴性对照选择NTC，标准品选择Standard。
ABI7500型荧光定量PCR仪标准操作及维护保养规程
●目的建立ABI7500型荧光定量PCR仪的标准操作及维护保养规程，为本设备的操作提供标准依据。
●适用范围ABI7500型荧荧光定量PCR仪的操作、维护保养、清洁过程。
●责任与要求质量部人员必须遵照本规程。
●培训对象质量部●内容1.设备信息2.操作流程示意图3.3.1 开机自检3.1.1 按下配套电脑的开机键打开电脑。
3.1.2 按下ABI7500开关，打开仪器，仪器自动进行自检。
待仅有“power”指示灯（绿色）亮时，自检结束。
3.2 样品上机3.2.1 按下托盘按钮，弹出96孔管架托盘，确定所需的96孔管架。
3.2.2 将加好样品的八连管或96孔板放入相应的孔位。
3.2.3 将托盘推入原来位置。
3.3 编辑运行参数3.3.1 双击桌面上7500 Software v2.3软件图标，打开7500 Software v2.3软件。
3.3.2 在弹出的窗口点击“New Experiment”新建实验程序，并对实验参数进行设置：3.3.2.1 在Experiment Name（实验名称）字段中，可以自定义实验名称。
3.3.2.2 在Barcode（条形码）字段中，输入反应板条码。
3.3.2.3 在User Name（使用者姓名）字段中，输入您的姓名。
3.3.2.4 在Comments（备注）字段中，输入您想保存到文件中的任何附加信息。
3.3.2.5 默认选择instrument（仪器）-----7500(96 wells)。
3.3.2.6 默认选择Experiment type（实验类型）----- Quantitation-Standard Curve。
3.3.2.7 默认选择Reagents （试剂）----- TaqMan® Reagents（TaqMan® 试剂）。
3.3.2.8 默认选择Ramp speed（升降温速度）-----Standard（～2 hours to complete a run）。
荧光定量PCR仪（ABI7500）操作规程及日常维护
荧光定量PCR仪（ABI7500）操作规程及日常维护曹蕾马扬光施小明【摘要】介绍了荧光定量PCR仪（ABI7500）操作规程，总结了其日常维护和注意事项，为其使用提供指导。
【关键词】荧光定量PCR仪操作规程维护荧光定量PCR仪将PCR热循环，荧光检测和各种应用分析软件结合在一起，可以动态观察PCR每一循环各反应管中PCR扩增产物逐渐增加的情况。
1原理介绍实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法[1]。
荧光染料法：荧光染料能特异性掺人DNA双链，发出荧光信号，而不掺入双链中的染料分子不发出荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物增加完全同步[1]。
荧光探针法：探针的5端标记荧光报告基团（reporter R）3端标记淬灭基团（quencher Q），探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5-3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步[1][2]。
通常，荧光擴增曲线可分为三个阶段，即荧光背景信号阶段、荧光信号指数扩增阶段和平台期。
在荧光信号指数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，因此可以在该阶段进行定量分析。
为了便于对所检测样本进行比较，在指数期需要设定一个荧光信号的阈值。
荧光信号由本底进入指数增长阶段的阈值所对应的循环次数称为ct值。
模板的ct值与其起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，则ct值越小。
利用已知起始拷贝数的标准品及其相应的ct值可绘制出标准曲线，测得未知样品的Ct值后，根据标准曲线便可准确计算出该样品的起始拷贝数[3]。
2操作规程2.1开机2.1.1依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入Windows界面。
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4.1.4 点击 Plate Setup，点击 Define Targets as Samples。设定 Target Name 的 Reporter 为 FAM。
4.1.5 点击 Assign Targets and Samples。设定 96 孔板。
4.2 ABI7500 荧光定量 PCR 仪使用及维护注意事项 4.2.1 实验室的环境：
ห้องสมุดไป่ตู้
a.电源：UPS 或稳压器。 b.通风：仪器的通风应该没有阻挡。 c.温度：实验室应该配有空调。 d.湿度：20-80%。 e.空间：易于操作，安全。 4.2.2 关闭并打开计算机和仪器电源开关: 如果主机和计算机一直在开机使用，每周应该进行一次以下操作：关闭主机电源开关，关闭 计算机，然后重新打开计算机和仪器电源开关。 4.2.3 使用不脱毛的布块擦拭仪器表面:重要！切勿使用有机溶剂清洁 ABI7500 荧光定量 PCR 仪。每周一次。 4.2.4 执行背景校正（Background calibration）:使用背景校正板。每月一次。 4.2.5 执行纯荧光校正（Pure Dye Calibration）:使用纯荧光反应板。每半年一次。 4.2.6 执行目标区（ROI）校正:使用 ROI 校正反应板。每半年一次。 4.2.7 去除样本块中的污染物（需要时）：当一个或多个反应孔连续显示出不正常的高信号， 并表明可能存在荧光污染物时，可执行此步骤。 4.2.8 确认已去除样本块中的污染物:运行背景校正板，确认污染已除去，并使用最新的背景 校正。清洗样本块后。 4.2.9 更换卤素灯:重要！当您拿取卤素灯时，需要时请戴上无粉手套。
1. 目的 规范 ABI 7500 荧光定量 PCR 仪操作，保证安全操作，延长仪器寿命
2. 范围 适用于 ABI 7500 荧光定量 PCR 仪
3. 职责 操作人负责本规程实施，部门负责人监督实施。
4. 规程 4.1 实验程序运行： 4.1.1 首先打开电脑，进入操作系统后，打开 ABI 7500 荧光定量 PCR 仪电源。双击桌面上 7500 software V2.0.6。弹出 Login 对话框，默认的 User Name 为 GUEST，点击 Login as GUEST， 点击 OK 运行软件。 4.1.2 进入界面，选择 Advanced Setup。
5. 相关文件：无
6．记录：
6.1《设备使用记录》
FSD-ER-003
6.2《设备仪器维修保养记录》
FSD-ER-021
4.1.5 点击 Run Method。设定反应程序。 4.1.6 点击 Reaction Setup 设定反应体系。
4.1.7 点击 Run 菜单，点击 START RUN。开始运行 PCR 反应。 4.1.8 点击 Analysis 开始分析实验数据。点击 Amplification Plot，可以看到扩增曲线。点 击 Plate Layout 的 View Well Table 可以看到 CT 值。