(四)放线菌和真菌形态的观察.
实验4放线菌、酵母菌、霉菌形态观察.
实验4放线菌、酵母菌、霉菌形态观察.实验四放线菌、酵母菌、霉菌形态观察（一）放线菌的形态观察1 目的观察放线菌的基本形态特征掌握培养放线菌的几种方法2 原理放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。
放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。
孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。
孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。
它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。
放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。
3 材料3.1 菌种灰色链霉菌(Str. griseus),天蓝色链霉菌(Str. coelicolor),细黄链霉菌（Str.microflavus）。
3.2 培养基高氏1号培养基。
3.3 器皿培养皿，载玻片、盖玻片、无菌滴管、镊子、接种环、小刀(或刀片)、水浴锅，显微镜，超净工作台，恒温培养箱。
4 流程4.1插片法: 倒平板→插片→接种→培养→镜检→记录绘图4.2压印法: 倒平板→划线接种→挑取菌落→加盖玻片→镜检→记录绘图4.3埋片法: 倒琼脂→切槽→接种→培养→镜检→记录绘图5 步骤5.1插片法5.1.1倒平板将高氏1号培养基熔化后，倒10~12毫升左右于灭菌培养皿内，凝固后使用.5.1.2插片将灭菌的盖玻片以45度角插入培养皿内的培养基中，插入深约为1/2或1/3(图5-1)。
5.1.3接种与培养用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置28℃培养3～7天。
5.1.4观察培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压放于载玻片上。
直接在显微镜下观察。
5.2压印法5.2.1制备放线菌平板同5.1.1。
在凝固的高氏1号培养基平板上用划线分离法得到单一的放线菌菌落。
实验五-放线菌与真菌形态结构观察
实验五-放线菌与真菌形态结构观察实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：放线菌与真菌形态结构观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年10月16日一、实验目的和要求1.学习并掌握放线菌(链霉菌)，真菌(酵母、霉菌)形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。
2.熟练掌握显微镜的使用。
二、实验内容和原理1.放线菌放线菌，是一类主要呈菌丝状生长和以孢子繁殖的陆生性较强大的原核生物。
因在固体培养基上呈辐射状生长而得名。
大多数有发达的分枝菌丝。
菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约0.5～1微米。
可分为：营养菌丝，又称基内菌丝，主要功能是吸收营养物质，有的可产生不同的色素，是菌种鉴定的重要依据；气生菌丝，叠生于营养菌丝上，又称二级菌丝。
2.真菌[1]酵母菌：为单细胞真核生物。
呈圆形、卵形、椭圆形或柠檬型。
各体直径比细菌大几倍到几十倍。
菌落大而厚，湿润光华，颜色多为乳白色、灰白色、似细菌落。
繁殖方式包含无性繁殖(芽殖或裂殖)与有性繁殖(形成子囊与子囊孢子)。
[2]酵母菌的出芽生殖：在细胞的一端初生小突起，如芽状，逐渐增大。
细胞核一分为二，其中一个进入小突起，经细胞壁缢缩。
芽体与母细胞脱离，形成新个体。
若芽体不脱离母体而有继续生出新芽，而芽细胞聚集形成芽簇，芽簇细胞伸长呈丝状或藕节状，称做假菌丝。
[3]美兰染色法：美兰是一种无毒性染料，氧化型呈蓝色，还原型呈无色。
活细胞具有较强还原能力，使美兰由蓝色变成无色。
染色后，酵母活细胞无色，死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞呈蓝色或淡蓝色。
[4]酵母菌肝糖粒碘液染色：肝糖粒是酵母细胞的内含物，属于碳源及能源性贮藏物。
用碘液染色，菌体呈淡黄色，肝糖粒呈红褐色。
[5]霉菌：由菌丝体构成，分为基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝长到一定阶段分化产生繁殖菌丝。
由繁殖菌丝产生孢子。
菌丝和孢子的宽度比细菌和放线菌大几倍到几十倍。
细菌、酵母菌、放线菌、霉菌四大菌落形态观察
一、实验目的
1.熟悉各大类微生物群体类微生物
二、基本原理
区分和鉴别各大类微生物通常不外乎包括群体形 态和个体形态两方面的观察，而在一般条件下，特别 是在菌种筛选和菌种辨别等方面，多半首先采用观察 群体形态基本特征的方法来区分各大类微生物。这种 方法简便快速，应用非常广泛。
四、实验结果
微生物 菌落 特性
大肠 杆菌
干湿
啤酒 酵母
放线菌
曲霉
根霉
青霉
厚薄
松紧
大小 结果
微生物
菌落 特征
细菌
酵母
霉菌
放线菌
干湿 厚薄 松紧 大小
很湿或较湿 较湿
干燥
干燥或较干燥
透明或 稍透明
稍透明
不透明
不透明
松
松
小而突起或 大而平坦
大而突起
很紧 小而紧密
较紧
大而疏松或 大而致密
青霉（Penicillium Sp.）
菌丝较粗壮，形成的 菌落较疏松，呈绒毛 状、絮状或蜘蛛状， 菌落大。
曲霉（Aspergillus Sp.）
曲霉菌是一种典型的丝状 菌，菌落生长较快，结构 疏松，表面灰绿色，背面 无色或略呈褐色。菌体有 许多复杂的分枝菌丝构成。
根霉（Phizopus Sp.）
大肠杆菌（Escherichia coli）
啤酒酵母 （Saccharomyces cereuisiae）
大多数酵母菌的 菌落特征与细菌 相似，但比细菌 菌落大而厚，菌 落表面光滑、湿 润、粘稠，容易 挑起，菌落质地 均匀，正反面和 边缘、中央部位 的颜色均一，菌 落多为乳白色。
放线菌5406 （Streptomyces microflavus）
实验四放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别
实验四放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别一、实验目的：1.了解放线菌和酵母菌的形态特征。
2.学习区分细胞的死活状态。
二、实验原理：1.放线菌的形态特征：放线菌属于细菌的一种，具有很大的细胞大小差异，通常为革兰氏阳性菌。
放线菌的形态特征包括菌落形态、细胞形态、颜色、菌丝特征等。
放线菌的菌落形态多呈现出有规则的褶皱或丝状结构。
2.酵母菌的形态特征：酵母菌属于真菌的一种，单细胞有丝分裂生殖的真菌。
酵母菌的形态特征包括细胞形态、菌落形态、颜色等。
酵母菌的细胞呈球形或卵圆形，常以单细胞或成链形式存在。
3.死活细胞鉴别：通过酵母菌培养基中的亚甲基蓝染色来判断细胞的存活状态，活细胞吸收染料颜色比较浅，死细胞吸收染料颜色比较深。
三、实验材料与方法：1.材料：-放线菌菌种：已提前分离培养好的放线菌-放线菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-培养皿、显微镜、镰刀、牛津杯、显微镜载玻片-无菌移液器、无菌吸管、火焰灭菌器-酵母菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-亚甲基蓝染液：浓度为1%2.方法：a.取一小块放线菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的放线菌菌落。
b.用无菌吸管将放线菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。
c.让菌液干燥后，用显微镜在高倍镜下观察放线菌的细胞形态和菌落特征。
d.取一小块酵母菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的酵母菌菌落。
e.用无菌吸管将酵母菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。
f.将带有酵母菌菌液的显微镜载玻片倾斜，滴入一滴亚甲基蓝染液，静置5分钟。
g.用显微镜在高倍镜下观察染色后的酵母菌细胞，根据染色程度判断细胞的存活状态。
四、实验结果与分析：通过观察放线菌的细胞形态和菌落特征，可以发现放线菌的形态特征是不规则的菌落结构，内部有菌丝状结构。
放线菌的细胞形态多样，有圆形或椭圆形细胞。
实验五___放线菌、霉菌及真菌的形态观察
a.形态观察：酵母是不运动的单细胞真核生物， 形态观察：酵母是不运动的单细胞真核生物， 形态观察 通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。 通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。 大多数 酵母菌以出芽方式进行无性繁殖， 酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁 有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。 殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。 b.死活鉴定：美蓝是一种无毒的染料，它的氧 b.死活鉴定：美蓝是一种无毒的染料， 死活鉴定 化型呈蓝色，还原型呈无色。 化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的 活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用， 活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用， 细胞内具有较强的还原能力， 细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色 的氧化型变为无色的还原型。因此， 的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原 能力的酵母活细胞是无色的， 能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢 作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。 作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。
实验五
放线菌、 放线菌、霉菌及酵母菌的 形态观察
一．实验目的
学习并掌握观察放线菌、 学习并掌握观察放线菌、霉菌及酵母菌 形态的基本方法； 形态的基本方法； 初步了解放线菌、霉菌及酵母菌的形态 初步了解放线菌、 特征。 特征。
04 实验四 放线菌、酵母和霉菌形态的观察
04 实验四放线菌、酵母和霉菌形态的观察实验目的：1. 了解微生物的形态特征。
2. 熟悉显微镜的使用方法，学习普通染色技术。
3. 学习鉴别放线菌、酵母和霉菌的形态特征。
实验材料：1. 盐酸裂解液、甲醛定型液、碘酒、甲基橙、溴酚蓝等。
2. 放线菌、酵母和霉菌的培养物。
实验步骤：1. 取一小块培养物放在玻片上，滴上一滴生理盐水并用小棒子将其研磨均匀。
2. 放线菌培养物制片：将研磨好的放线菌制成薄片，滴上盐酸裂解液使其变成透明，定型液使其固定，并在空气中晾干。
然后，在火上加热定邦，再用碘酒染色，过后清水洗净，醋酸洗净并晾干或用吹风机吹干。
3. 酵母培养物制片：将研磨好的酵母制成薄片，滴上碘酒染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。
4. 霉菌培养物制片：将研磨好的霉菌制成薄片，滴上甲基橙染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。
5. 用显微镜观察制片。
实验结果：放线菌：放线菌为革兰阳性菌，细胞形状呈弯曲的短小棍形，光学显微镜下看到的细胞较长，一般在1-20微米之间，可以分枝，分枝形成的菌丝从外形上呈现出类似于蜘蛛网的形状。
勃林美细胞内有许多成熟的孢子，呈现为典型的链状。
常常在不规则的小菌落或黏液内生长。
酵母菌：酵母细胞直径一般在2-5微米之间，为单细胞生物，在将染好色的玻片放在光学显微镜下很容易看到直径3微米以上的球形，卵圆形等细胞结构，表面光滑。
细胞质软，柔软而透明。
霉菌：霉菌属真菌，具有多种形态，种类繁多，细胞直径1-5微米，长1-10微米，细胞呈现不规则形状，通常形成的是在菌丝基础上聚合并且扩展而成的菌落。
通过本次实验观察和比较放线菌、酵母和霉菌的形态特征，可以得出以下结论：1. 放线菌为分枝杆菌，细胞型态呈弯曲状，外观类似于蜘蛛网。
2. 酵母为单细胞生物，呈圆球形或卵圆形，表面光滑、整齐。
3. 霉菌属于真菌，细胞形态呈现不规则形状。
实验五放线菌、霉菌及真菌的形态观察
对实验结果的理解与思考
• 通过本次实验，我们观察到了放线菌、霉菌及真菌的形态特征， 了解了它们在形态学上的差异。这些微生物在自然界中广泛分 布，对环境和生物体产生重要影响。例如，某些放线菌可以产 生抗生素，对人类医疗和农业具有重要意义；而某些霉菌可以 引起食品和物品的霉变，对人类生活造成困扰。因此，对微生 物形态学的深入了解有助于我们更好地认识和利用这些微生物 资源。
放线菌
放线菌是一种呈辐射状排列的细菌，其菌落形态通常为圆形或不规则形，表面粗糙、干燥 ，颜色多样。放线菌的细胞壁厚，呈革兰氏阳性。
霉菌
霉菌的菌落形态通常为绒毛状、絮状或蜘蛛网状，颜色多样，包括白色、灰色、褐色等。 霉菌的菌丝体非常发达，且具有分支。
真菌
真菌的形态多种多样，包括酵母、霉菌和大型真菌。真菌的菌落形态通常为圆形或椭圆形 ，表面光滑、湿润，颜色多样。真菌细胞壁薄，呈革兰氏阳性或阴性。
04 结果分析
放线菌形态分析
01
02
放线菌的形态多样，包 括链状、球状和杆状等。
放线菌的菌落形态也较 为多样，有的呈圆形， 有的呈不规则形状。
03
放线菌的菌落表面粗糙 或光滑，颜色各异，有 的呈白色，有的呈黄色 或橙色。
04
放线菌的细胞壁通常较 厚，具有分枝的菌丝， 有利于在各种环境中的 生存和繁殖。
03 实验步骤
样品采集与制备
样品采集
从不同环境（土壤、水体、空气 等）中采集放线菌、霉菌及真菌 的样本。
样品制备
将采集的样本进行分离、纯化， 制备成适合显微镜观察的样品。
显微镜观察
显微镜选择
选择适合观察放线菌、霉菌及真菌的 显微镜，如光学显微镜或电子显微镜 。
观察方法
将制备好的样品放置在显微镜下，观 察放线菌、霉菌及真菌的形态特征， 如菌丝、孢子等。
实验三 微生物菌落,放线菌、酵母菌、霉菌形态观察
它们是怎样形成的？ 7．细菌、放线菌、酵母菌、霉菌在制片方法上有何特点？ 8．总结在显微镜下看到青霉、黄曲霉和黑根霉在以下各方 面的异同： (1) 菌丝有隔或无隔 (2) 无性繁殖的方式 (3) 有性繁殖的方式
内容： 1．观察细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的菌落
形态。 2．观察放线菌的形态结构特征 3．观察酵母菌个体形态。 4．曲霉、青霉、根霉形态观察。
二、材料和用具
1．菌种：金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、 酿酒酵母、灰色链霉菌、黑曲霉、 产黄青霉、根霉。
2．染液：乳酸石炭酸棉兰，吕氏美兰染液， 碘液，0.04%的中性红染色液，0.1%美蓝 染色液，石炭酸复红染色液。
3．其他：显微镜、载玻片、盖玻片、酒精灯、 镊子、接种环。
三、操作步骤及注意事项
(一) 观察菌落 1．注意细菌菌落的形状、高度、大小、颜色、
是否湿润、光泽、透明度、边缘状况。
2．观察酵母菌菌落表面湿润或干燥，有无光 泽、隆起形状、边缘的整齐度、大小、颜 色等。
3．观察放线菌菌落表面形状、大小、颜色、 边缘，以及有无色素分泌到培养基内等。
4．观察青毒、曲霉、根霉平板中的菌落，描 述其菌落特征。注意菌落形态的大小，菌丝 的高矮，生长密度，孢子颜色和菌落表面等 状况。并与细菌、放线菌、酵母菌菌落进行 比较。
菌落特征
形态：点状、圆形、丝状、不规则、 假根状、纺锤形
隆起：扁平、拱起、凸透镜状、枕状、 脐突状
边缘：完整、波纹、裂中状、噬蚀状、 丝状、卷曲
(二) 放线菌形态特征的观察 用镊子取放线菌时要注意力度，太轻不宜取 下，太重则会损环菌丝形态。
(三) 酵母菌的形态观察 注意通过微加热增加酵母的死亡率，易于观 察死亡细胞。
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霉菌的营养体是分枝的丝状体，细胞 的平均宽度是3-10微米，比细菌要宽得 多，所以，显微镜检查时，在低倍镜下 就可以看清楚。
（四）放线菌和真菌形态的观察 及环境微生物的检测
（实验8，实验1）
目的要求
1、学习并掌握放线菌、霉菌小室 培养的技术和方法。 2、了解放线菌的形态特征。 3、掌握常见霉菌的基本形态特征。
实验原理
放线菌是指能形成分枝丝状体或 菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。菌丝 体分为两部分，即潜入培养基中的营 养菌丝(或称基内菌丝) 和生长在培 养基表面的气生菌丝。
开皿盖，在空气中暴露1小时（每桌1培 养皿）。 2．取一带培养基（牛肉）的培养皿，打 开皿盖，用手指触摸培养基的表面（每5 人1培养皿）。 将培养皿倒置于37℃温箱培养1-2天。
教学内容
小室的制作方法,小室培养. 观察自然状态的霉菌形态. 观察保持完整形态的放线菌。
实验报告及思考题
绘制观察到的自然状态的霉菌形态， 放线菌形态。
分生孢子
霉 菌 的 无 性 孢 子
芽生孢子 节孢子
厚垣孢子
孢囊孢子
二 放线菌
1、营养菌丝
匍匐生长于培养基内，吸收营养，也称基内菌丝。一般无隔膜， 直径0.2-0.8 mm，长度差别很大，有的可产生色素。
2、气生菌丝 营养菌丝发育到一定阶段，伸向空间形成气生菌丝，叠生于营养 菌丝上，可覆盖整个菌落表面。在光学显微镜下观察，颜色较深 ，直径较粗（1-1.4 mm），有的产色素。
有些气生菌丝分化成各种孢子丝， 呈螺旋形、波浪形或放射分枝状等。 孢子常呈圆形、椭圆形或杆形。气生 菌丝及孢子的形状和颜色常作为分类 的重要依据。
为了观察放线菌自然生长状态下 的形态特征。本实验介绍的是小室 培养法。
小室培养法也称载玻片法。可以 观察霉菌清晰、完整、保持自然状 态的形态。
小室培养法
为什么用小室培养霉菌，进行形态 观察？
实验方法：
（一） 小室培养：（采用无菌操作）
用无菌解剖刀取一小块固体培养基，置
于已灭菌培养皿内的载玻片上
用
接种环在固体培养基四周分别接上四种
菌的孢子 盖上盖玻片
在滤纸上
滴 加 无 菌 甘载玻片，置高
倍镜下观察.
（二）环境微生物检测
环境微生物检测： 1．取一带培养基（土豆）的培养皿，打
3、孢子丝 气生菌丝发育到一定阶段，其上可分化出形成孢子的菌丝，即孢 子丝，又称产孢丝或繁殖菌丝。其形状和排列方式因种而异，常 被作为对放线菌进行分类的依据。
放线菌形态与结构
放线菌孢子丝形态
实验材料
验1． 黑根霉(Rhizopus nigricans) 2． 黑曲霉（Aspergillus sp） 3． 产黄青霉(Penicillium chrysogenum) 4．放线菌（Streptomyces jingyangensis） 5．环境中微生物的检测： 每桌3个培养 皿。