用分光光度计测DNA、RNA的浓度
样品DNA和RNA浓度测定操作规程
厦门艾德生物医药科技有限公司临检中心文件编号：
版本/修订号：A/0
主题内容样品DNA和RNA浓度测定操作规程生效日期：20111101
第 1 页共1 页
编制人：日期：
审核人：日期：
批准人：日期：
1.0目的
规范样品DNA和RNA浓度测定的操作程序，以确定核酸浓度是否适宜。
2.0范围
适用于PCR实验室样品DNA和RNA浓度测定的操作。
3.0职责
研发部检测服务技术员负责执行。
4.0仪器 /材料
4.1仪器：
a. 紫外可见分光光度计（型号ND-1000）
b. 移液枪（2.5uL）
4.2试剂：待测样品、Tris溶液。
5.0操作步骤
5.1小心吸出待测样品，吸取2uL在ND-1000机上测出其OD值。
5.2使用ND-1000机时，测定样品DNA时sample type应该改DNA-50，测定RNA时应改RNA-40。
5.3测量后检查曲线是否正常，A260/A230的比值应大于2，测定DNA的A260/A280的比值应在1.8~2.0
之间，RNA的A260/A280的比值应在1.9~2.1之间。
5.4提取的DNA放在-20℃保存待检，RNA直接逆转成cDNA后放于-20℃保存待检。
紫外分光光度计检测核酸浓度和纯净度
紫外分光光度计检测核酸浓度和纯净度
A260是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值范围是0.1到1.0，如果不在次范围建议稀释或浓缩样品；样品吸光度小于0.05,检查是否存在操作因素，正常情况下，DNA样品的吸光度一定大于0.1，样品中出现杂质或者不错纯净会使吸光度减小。
A280是蛋白和酚类最高吸收峰的吸收波长。
因此A260/A280的比值可以对核酸纯度进行评估，一般情况下，纯净的DNA的A260/A280比值为1.8,纯净的RNA为2.0. 如果比值较低，表明样品中存在蛋白或者酚类物质的污染，需要纯化样品，特别说明A260/A280=1.5时，相当于50%蛋白质/DNA溶液。
A230 是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，A260/A230比值可以对核酸样品纯度进行评估，纯净的DNA或者RNA的A260/A230比值为2.5。
如果比值小于2.0，说明样品存在碳水化合物、盐类、有机物的污染，需要纯化样品。
特别说明，A230产生负值主要是由于在很低的DNA浓度
A320/A340 检测吸光值用于检测样品溶液的浊度和其他干扰因子。
纯净的样品改值为0.00,如果不是，说明溶液中有悬浮物，需要纯化样品。
分光光度计的作用
分光光度计的作用分光光度计是一种测量物质在可见光或紫外线范围的光吸收的仪器。
它的作用非常广泛，特别是在化学、生化、药物学、环境科学和食品分析等领域。
分光光度计可以测量物质的浓度、反应速率、化学反应的平衡常数和动力学参数等。
下面详细介绍分光光度计的作用：1.测量物质的浓度分光光度计可以直接测量物质在特定波长下的吸光度，从而间接测量物质的浓度。
如果已知溶液的摩尔吸光系数(比如ε，摩尔透过系数)，就可以根据比尔定律计算出物质的浓度。
这种方法被广泛应用于化学、生化和制药领域，可用于测量多种物质，如蓝蛋白、DNA、RNA、核酸、蛋白质、药物等。
2.探测化学反应的动力学分光光度计可以监测和探测化学反应的动力学特性，如反应速率常数、反应中间体、反应机理和反应路径等。
通过测量正在进行的反应制量的变化，可以生成反应速率方程。
因此，分光光度计在研究化学反应机理、反应速率和反应平衡常数等方面扮演了重要角色，被广泛应用于分子生物学、化学和药学研究领域。
3.测量生物样品的质量分光光度计可以测量各种生物样品，如细胞、细胞器、蛋白质、DNA和RNA的质量。
这些样品在分光光度计上的吸收光谱与浓度或质量之间具有明显的关系，从而可以确定样品的质量和浓度。
4.检测样品中杂质的含量分光光度计可以检测样品中常见杂质的含量，提供关于样品的化学和物理性质的信息。
通过比较样品和纯净的溶液或化合物的光谱，可以确定样品中吸收或发射的频率和强度，从而分析样品的组分和杂质含量。
5.研究分子结构的变化分光光度计可以研究分子的结构，并且可以关注分子在反应过程中的变化。
通过测量分子的能量差异，可以使得分光光度计被用于研究分子的电子转移和能量转移，以及分子结构的变化。
以上是分光光度计的一些应用，还有很多其他的应用，这些应用使分光光度计成为一种十分重要的分析工具，可以广泛应用于科学研究和生产制造。
分光光度计测rna计算公式
分光光度计测rna计算公式
分光光度计是用来测量物质溶液对特定波长光线的吸光度的仪器。
在测量RNA时，通常会使用260纳米的波长进行测量。
RNA的
浓度可以通过以下公式计算：
RNA浓度(μg/ml) = A260 × 40 μg/ml.
其中A260是在260纳米波长下测得的吸光度值。
这个公式的推
导涉及到质量吸光系数和Beer-Lambert定律，但在实际应用中，可
以简单地使用这个公式来计算RNA的浓度。
需要注意的是，这个公式是一个近似值，因为RNA在260纳米
波长下的吸光系数可能会有一定的变化，取决于RNA的纯度和构象。
因此，在进行RNA浓度测量时，最好使用纯度较高的RNA样品，并
在可能的情况下进行验证。
另外，分光光度计也可以用来计算RNA的纯度，通过测量在
260纳米和280纳米波长下的吸光度比值（A260/A280）。
这个比值
可以用来评估RNA样品中是否有蛋白质或其他污染物质存在。
总的来说，分光光度计是测量RNA浓度和纯度的重要工具，通过合理的使用和数据分析，可以得到准确的结果用于后续的实验和分析。
RNA浓度测定(紫外光吸收法)
RNA浓度测定（紫外光吸收法）一、实验目的1.了解紫外吸收法测定RNA浓度的原理。
2.熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。
二、实验原理核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统(－C＝C一C＝C 一)，能够强烈吸收250~280nm 波长的紫外光。
核酸(DNA，RNA)的最大紫外吸收值在260nm 处。
遵照Lambert-Beer 定律，可以从紫外光吸收值的变化来测定RNA物质的含量。
在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同，紫外吸收光也随之表现出明显的差异，它们的摩尔消光系数也随之不同。
所以，在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行。
三、实验器材1.UV-9100型紫外可见分光光度计。
2.容量瓶100ml（*1）3.试管1.5cm*15cm（*9）4.吸管四、实验试剂1.酵母RNA2.标准RNA试剂（100微克每毫升）3.NaOH溶液五、实验步骤1.RNA粗品的制备称取8g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40ml，沸水浴加热30min，经常搅拌。
冷却，然后4000r|min离心15分钟。
取上清液，加入95%酸性乙醇40ml，边加边搅。
加毕，静置5-10min离心。
滤液先用95%乙醇洗2次，继而用无水乙醇洗2次，洗涤时可用细玻璃棒小心搅动沉淀。
乙醇滤干后，滤渣即为粗RNA。
2.样品的处理：称取0.2~0.25g粗品RNA，加2ml0.2%NaOH和1ml H2O溶解，调成糊状，再加入40~50mlH2O,溶解，调PH至7.0，后定容至100ml（再取2ml 定容至100ml 待测，此过程重复三次）3.标准曲线的绘制取六支试管，编号，按表加入试剂六、作表作图λ:260nm测得样品RNA浓度为25.3μg|ml样品RNA质量为25.3μg|ml×50×100ml=0.1265g样品RNA纯度：0.1265÷0.2133=59.3%七、误差分析1.根据理论在5~45μg|ml与吸光值成正比，而该范围的两个端点没有取到，六号试管RNA浓度已经超出了范围，不能作为曲线的参考值。
RNA浓度测定(紫外光吸收法)
RNA浓度测定（xx吸收法）一、实验目的1.了解紫外吸收法测定RNA浓度的原理。
2.熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。
二、实验原理核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统(－C＝C一C＝C 一)，能够强烈吸收250~280nm波长的紫外光。
核酸(DNA，RNA)的最大紫外吸收值在260nm处。
遵照Lambert-Beer 定律，可以从紫外光吸收值的变化来测定RNA物质的含量。
在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同，紫外吸收光也随之表现出明显的差异，它们的摩尔消光系数也随之不同。
所以，在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行。
三、实验器材1.UV-9100型紫外可见分光光度计。
2.容量瓶100ml（*1）3.试管1.5cm*15cm（*9）4.吸管四、实验试剂1.酵母RNA2.标准RNA试剂（100微克每毫升）3.NaOH溶液五、实验步骤1.RNA粗品的制备称取8g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40ml，沸水浴加热30min，经常搅拌。
冷却，然后4000r|min离心15分钟。
取上清液，加入95%酸性乙醇40ml，边加边搅。
加毕，静置5-10min离心。
滤液先用95%乙醇洗2次，继而用无水乙醇洗2次，洗涤时可用细玻璃棒小心搅动沉淀。
乙醇滤干后，滤渣即为粗RNA。
2.样品的处理：称取0.2~0.25g粗品RNA，加2ml0.2%NaOH和1mlH2O溶解，调成糊状，再加入40~50mlH2O,溶解，调PH至7.0，后定容至100ml（再取2ml定容至100ml待测，此过程重复三次）3.标准曲线的绘制取六支试管，编号，按表加入试剂六、作表作图λ:260nmRNA m:0.2133g试管1219100.2328200.433437300.627546400.817655500.981A0.519B0.523C0.522标准0 RNA(ML)蒸馏水（ml）RNA浓度μg|ml吸光度1.210.80.60.4吸光度RNA样品线性(吸光度) 1000.0000.测得样品RNA浓度为25.3μg|ml样品RNA质量为25.3μg|ml×50×100ml=0.1265g样品RNA纯度：0.1265÷0.2133=59.3%七、误差分析1.根据理论在5~45μg|ml与吸光值成正比，而该范围的两个端点没有取到，六号试管RNA浓度已经超出了范围，不能作为曲线的参考值。
DNA含量测定方法
DNA及RNA含量测定方法一、光密度测定法[原理] DNA和RNA在260nm处有一很高的吸收峰，利用这个原理我们测其OD260，再推算出其浓度。
一、光密度测定法[原理]，再DNA和RNA在260nm处有一很高的吸收峰，利用这个原理我们测其OD260推算出其浓度。
[仪器]分光光度计(紫外可见光两用)。
[试剂]水，DNA或RNA溶液。
[操作](1)取5ulDNA样品或4ulRNA样品加水到lml。
(2)用lml水做空白。
(3)把样品杯放在分光光度计比色槽上。
(4)每ul中DNA或RNA浓度(ug)将是OD值的10倍，例如稀释后样品在260nm 处OD值为0.2，则原DNA或RNA样品浓度为2ug／ul。
(5)如果想要检测样品的纯度，那么还要再测一次280nm处OD值，计算二者的比率，若比率接近2，则说明样品中核酸比较纯。
若比率小于1.6，则说明蛋白或其它吸收此波长的杂质在其中，建议再用酚／氯仿抽提继以乙醇沉淀以除去杂质。
(6)如果想检测样品中是否残存酚等有机杂质，那么还要测定一次230nm处OD值。
二、琼脂糖电泳测量法[原理]质粒DNA及微量DNA片段的浓度可与已知浓度的DNA同时进行电泳，根据结合的溴化乙锭荧光强度，估计其含量。
[仪器]紫外透射反射分析仪(上海康华生化仪器制造厂)；电泳槽；电泳梳；电泳仪。
[试剂]6×上样缓冲液：0.25％溴酚蓝；40％(W／V)糖。
pH8.3。
10×TBE电泳缓冲液：0.89mol/LTris-硼酸；0.02mol／LEDTANa20.8％琼脂糖：0.8％琼脂糖；100mi 1×TBE5mg／mlEB：0.5gEB；100ml三蒸水[操作](1)用1×TBE电泳缓冲液0.8％琼脂糖凝胶，加溴化乙锭其终浓度为0.5ug ／m1。
(2)加热使琼脂糖熔化均匀，取出室温冷却至50-60℃。
(3)取一块5×7cm玻璃板，置水平台上，放一微型点样梳，点样梳底部离玻璃平板的距离为0.5-1. 0mm。
紫外分光光度计用途
紫外分光光度计用途
紫外分光光度计（Ultraviolet Visible Spectrophotometer）是一种用于定量分析物质的仪器，它能够测定样品在紫外及可见光区域的吸收光谱，并利用比较样品与标准物质的吸收差异来确定其成分的浓度。
紫外分光光度计可以广泛应用于物质的定量分析、质量检测及药物生产等领域。
下面将介绍紫外分光光度计的具体用途：
1. 分析生命科学领域中各种细胞、蛋白质、核酸等的浓度和纯度，如DNA、RNA的定量、蛋白质浓度检测等。
2. 分析药物化学领域中各种药物的浓度和纯度，如氨基酸类药物、生物合成药物等。
3. 分析食品、饮料、化妆品等行业中各种成分的浓度。
4. 紫外分光光度计还可以应用于环境科学领域中重金属、有机物质、水质检测及污染源分析等领域。
5. 在工业生产和科学研究中，紫外分光光度计可用于分析有机合成反应中的反应物和产物，还可以应用于质谱联用技术，以确定样品中含有的化合物的性质和浓度等相关参数。
总之，紫外分光光度计是一种重要的分析仪器，它广泛应用于生命科学、药物化学、环境科学、化学合成等相关领域。
它的
快速、高灵敏度和精确性赢得了广泛的赞誉，成为科学研究和商业实践的基石。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
用分光光度计测定质粒DNA的浓度
一、目的
熟练掌握分光光度法检测DNA纯度和浓度的方法。
二、原理
DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm 处。
波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。
对标准样品来说，浓度为1μg / ml时，DNA钠盐的OD260＝当OD260＝1时，dsDNA浓度约为50μg / ml ssDNA浓度约为37μg / ml RNA浓度约为40μg / ml寡核苷酸浓度约为30μg / ml（youyu底物不同有差异）
当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA吸光度的准确测定。
一般情况下同时检测同一样品的OD260、OD280和OD230，计算其比值来衡量样品的纯度。
经验值：
纯DNA：OD260/OD280≈(＞,表明有RNA污染；＜1。
6，表明有蛋白质、酚等污染）
纯RNA：＜OD260/OD280＜（＜时表明有蛋白质或酚污染；＞时表明可能有异硫氰酸残存）
若样品不纯，则比值发生变化，此时无法用分光光度法对核酸进行定量，可使用方案二的方法或其他方法进行估算。
三、材料、试剂及器具
1、材料
提取的PUC19样品、PUC19标准样品
2、试剂
灭菌重蒸水，TE缓冲液
四、操作步骤
1、UV-240紫外分光光度计开机预热10min.
2、用重蒸水洗涤比色皿，吸水纸吸干，加入TE缓冲液后，放入样品室的S池架上，关上盖板。
3、设定狭缝后校零。
4、将标准样品和待测样品适当稀释（DNA5μl或RNA4μl用TE缓冲液稀释至1000μl）后，记
录编号和稀释度。
5、把装有标准样品或待测样品的比色皿放进样品室的S架上，关闭盖板。
6、设定紫外光波长，分别测定230nm、260nm、280nm波长时的OD值。
7、计算待测样品的浓度与纯度。
DNA样品的浓度（μg / μl）:OD260×稀释倍数×50/1000
RNA样品的浓度（μg / μl）：OD260×稀释倍数×40/1000
PS：对于一般的紫外分光光度计，若用1cm的石英比色皿，则至少稀释到3ml，才能达到光照高度的量。
根据上述材料的描述，
1、取DNA5μl，用水或TE（DNA用什么溶的就选择什么稀释）稀释至3Ml.稀释倍数则为600.
2、分别测定230nm、260nm、280nm波长时的OD值
3、
（1）计算DNA纯度：OD260/OD280
纯DNA：OD260/OD280≈(＞,表明有RNA污染；＜1。
6，表明有蛋白质、酚等污染）
（2）计算DNA浓度（μg / μl）:OD260×稀释倍数×50/1000。