丽春红(Ponceau S)染色液的配制及使用
病理学技术中级(师)专业实践能力模拟试卷5(题后含答案及解析)
病理学技术中级（师）专业实践能力模拟试卷5(题后含答案及解析) 题型有：1. A1型题1．下列关于网状纤维James染色法的描述，正确的是A．网状纤维呈黑色，胶原纤维呈绿色，背景呈黄色B．5％硝酸银使用时要滴染C．甲醛配好后，要放在冰箱内储存D．二氨银配制时，氨水要一滴一滴加E．二氨银配制时，要加入充分氨水使沉淀物完全溶解正确答案：D解析：James染色法使网状纤维呈黑色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。
55％硝酸银使用时不能滴染，应放在立式5片染色缸内进行。
甲醛要新配制。
配制二氨银液时，氨水一滴一滴加，边加边摇动容器，直至滴加到最初形成的沉淀恰好溶解，要避免氨水加得太多，最好使沉淀物不要全部溶解。
知识模块：常用的特殊染色技术2．弹性、胶原纤维的双重染色法中，弹力纤维和胶原各呈什么颜色A．弹性纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈黄色B．弹性纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色C．弹性纤维呈蓝色，胶原纤维呈绿色D．弹性纤维呈红色，胶原纤维呈绿色E．弹性纤维呈黄色，胶原纤维呈红色正确答案：B 涉及知识点：常用的特殊染色技术3．关于Shift阿尔辛蓝地衣红染色法的叙述，错误的是A．高锰酸钾氧化液需要新配制B．地衣红染色液可反复使用C．酸性黏多糖呈蓝色D．中性黏多糖呈棕色E．阿尔辛蓝染色时间越长效果越好正确答案：E解析：阿尔辛蓝染色5分钟，水洗。
知识模块：常用的特殊染色技术4．Lillie硫酸亚铁染色法常用于观察A．胆色素B．黏多糖C．黑色素D．肌肉E．纤维正确答案：C 涉及知识点：常用的特殊染色技术5．关于使用刚果红进行淀粉样物质染色时，需注意的问题不包括A．苏木精染色的细胞核不能深B．淀粉样物质可以结合偏光的方法得到良好的效果C．观察时应结合HE切片D．在偏光显微镜下呈特征性的红色双折光性E．由于无水乙醇有脱色作用，脱水后即用冷风干燥，再透明封固正确答案：D解析：使用刚果红进行淀粉样物质染色在偏光显微镜下呈特征性的绿色双折光性。
改良Van Gieson 丽春红S染色液使用说明
545ml
90ml
450ml
RT，避光
临用前，按 A:B=1:9 混合，即为改良 VG 染色液，即配即用。
产品说明： 胶原纤维(Collagen Fiber)是结缔组织中分布最广含量最多的一种纤维，广泛分布于各种脏 器，其中皮肤、巩膜、肌腱最丰富。Van Gieson 胶原纤维染色原理与阴离子染料分子的大 小和组织的渗透有关。分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的 组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。PA 分子量小，丽春红和复红 次之，淡绿分子量最大。改良 VG 染色后，肌纤维呈黄色，胶原纤维呈红色。 本产品用于区分胶原纤维和肌纤维，鉴别组织器官的损失、硬化，鉴别肿瘤组织等实验。 染 色后胶原纤维呈鲜红色，肌纤维、神经胶质细胞胞质和红细胞呈黄色。 使用方法：
1、 切片常规脱蜡复水。 2、 苏木素染核（可选）。 3、 使用改良 VG 染色液染色 0.5-3min。
4、 弃染液，直接用 95%酒精液急速分化约数秒钟。 5、 无水乙醇脱水，二甲苯透明，封片，观察拍照。 染色结果：
胶原纤维
红色
肌纤维、神经胶质细胞胞质及红细胞
黄色
注意事项： 1. 试剂要现配现用，不可预先配制后放置，放置后会失去染色力。 2. 改良 VG 染色液的染色时间不宜过长，一般 1min 左右，可根据实验结果适当调整， 出现鲜红色为最佳。 3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
改良 Van Gieson 丽春红 S 染色液使用说明 货号：G1338 规格：50 ml /100 ml /500ml 保存：室温密闭保存，有效期一年 产品组成：
名称
规格
50ml
100ml
丽春红染色液的配制及使用
丽春红染色液的配制及使用丽春红（PONCEAUS）是一种广泛用于生物化学和分子生物学实验中的缺陷染料，主要用于染色蛋白质凝胶和膜，也可用于检测核酸电泳结果。
下面将介绍丽春红染色液的配制方法和使用注意事项，并附上一些相关实验技巧。
配制丽春红染色液：材料：-丽春红染料粉末-乙醇-蒸馏水或去离子水步骤：1.称取适量的丽春红染料粉末并置于一个干燥的玻璃容器中。
建议根据实验需要确定染色液的浓度，通常可选用0.2-0.5%浓度的丽春红溶液。
2.用乙醇溶解染料粉末，可以先加入适量的乙醇湿润染料，再加入足够量的乙醇溶解。
溶解过程中可以用玻璃棒或磁力搅拌器轻轻搅拌。
3.在染料完全溶解后，加入足够的蒸馏水或去离子水将体积稀释至所需的终浓度。
4.最后，用滤纸或滤膜过滤染色液以去除悬浮物。
使用丽春红染色液的注意事项：1.染色前，确保蛋白质凝胶或膜已完成电泳，否则染色效果可能不佳。
2.准备一个干燥的容器，并将蛋白质凝胶或膜放入其中。
3.用足够的丽春红染色液完全浸泡蛋白质凝胶或膜，充分均匀搅拌，以确保染色效果均匀。
4.染色时间通常为10-30分钟，但染色时间应根据染料浓度和样品特性进行优化。
过长或过短的染色时间都可能对结果产生不良影响。
5.染色后，用蒸馏水或去离子水彻底洗涤蛋白质凝胶或膜，直至染色液中没有可见染料残留为止。
6.最后，可将染色后的蛋白质凝胶或膜进行成像或进一步处理。
一些相关实验技巧：1.在染色前，对蛋白质凝胶或膜进行固定可以提高染色效果和染色均匀性。
2.染色液中的染料浓度和染色时间可根据实验需求进行优化和调整。
3.若需要去除丽春红染色液残留在蛋白质凝胶或膜上的染色产品，可尝试用去离子水或含有10%乙酸溶液进行洗涤。
4.染色后的蛋白质凝胶或膜应避免长时间曝露在光线下，以免染色产品褪色。
丽春红染色液的配制及使用
丽春红染色液的配制及使用一、丽春红染色液的配制：1.原料准备：-丽春红色素-醋酸-纯水-pH试纸-温度计-搅拌器2.配方示例：-丽春红色素：5克-醋酸：10毫升-纯水：90毫升3.配制步骤：a.先将纯水倒入容器中，加热至60℃左右。
b.将丽春红色素加入容器中，并用搅拌器搅拌均匀。
c.逐渐加入醋酸，并继续搅拌，直至溶解均匀。
d.使用pH试纸检测液体的酸碱度，保持在3-4之间。
e.最后，用纯水调整液体体积至所需的量，继续搅拌均匀。
二、丽春红染色液的使用：1.准备工作：-预先将要染色的物品进行清洗，确保表面没有杂质。
-准备好必要的工具，如刷子、喷枪、刮板等。
-确定好染色的时间和环境，保持通风良好。
2.染色操作：a.首先，将丽春红染色液倒入适量的容器中。
b.根据染色需要，可以选择直接刷涂、喷涂或浸泡等方式。
c.涂抹均匀后，根据需要可以用刮板将涂料刮平整。
d.将染色物品置于通风处晾晒，使染色液充分渗透并固化。
e.固化时间一般需要24小时左右，具体时间根据染色物品材质而定。
f.染色固化完成后，用清水进行彻底冲洗，确保染色液彻底清洗掉。
g.最后，将染色物品晾干或进行必要的后处理，如烘干、氧化等。
三、注意事项：1.配制过程中要注意个人安全，避免将液体接触到皮肤或眼睛，如有接触应立即用清水冲洗。
2.染色液使用过程中要保持通风良好，避免吸入有害气体。
3.不同的材质有可能对染色效果产生影响，建议事先进行小样测试。
4.在使用过程中要避免交叉染色，对不同颜色的物品要分别处理。
5.染色液固化后会形成不可撤销的颜色，使用者需谨慎操作，避免不必要的损失。
丽春红的使用方法
丽春红的使用方法
丽春红染色液的使用方法如下：
1．取1ml丽春红染色原液，加入去离子水10ml稀释备用。
2．将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中，摇动3-10分钟或更长时间，直至出现清晰条带，记录结果。
3．用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，每次3-5分钟，去
除丽春红，进行后续的WB检测。
可用于检测Western Blot 实验中PVDF 或NC 膜上蛋白，以检测蛋
白的转膜效率；具有灵敏度高，使用方便等优点。
丽春红(Ponceau S)染色液可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane)和醋酸纤维素膜(cellulose acetate membrane)上的蛋白的检测。
丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也
可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。
丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它适
当溶液洗去。
本试剂盒使用方便，本底低，灵敏度较高，对蛋白的检测下限是250
纳克。
特殊染色
字号：大中小第一节结缔组织和肌纤维染色Van Gieson苦味酸酸性复红法(VG法)用途：VG法用于区分胶原纤维和肌纤维。
原理：酸性复红和苦味酸对这两种纤维都具有较强的亲合力，结果胶原纤维被酸性复红染成红色，肌肉被苦味酸染成黄色。
此方法是一种优良的传统方法。
固定：10%福尔马林切片：4-6微米试剂：Weigert铁苏木精液：A液：苏木精1g，无水酒精100 ml。
一般配制后需要数周或数月自然氧化，成熟后使用。
B液：29%三氯化铁水溶液4 ml，蒸馏水95 ml，盐酸1 ml。
两液分别配制，临用时A、B液等量混合，过滤后使用。
24h后失去染色能力。
Van Gieson液：1%酸性复红水溶液10 ml苦味酸饱和水溶液90 ml临用时1:9混合过虑后使用。
Van Gieson苦味酸酸性复红法(VG法)步骤：1．石蜡切片脱蜡至水。
2．Weigert苏木精液5-10 min。
3．充分水洗。
4．Van Gieson液1-5 min。
5．95%酒精迅速分化数秒。
6．无水酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。
结果：胶原纤维呈红色、肌肉、神经胶质、胞浆、红血球呈黄色、细胞核呈黑色或棕蓝色。
体会与说明：由于酸性复红退色较快，染色结果不能长期保存，一般只能保存3～6个月。
二Masson三色法试剂：Regaud 氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸馏水80ml。
将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用。
Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml。
0.2%冰醋酸水溶液：冰醋酸0.2 ml，蒸馏水100 ml。
1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml。
苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g，蒸馏水98 ml，冰醋酸2 ml。
1%光绿水溶液：光绿1g，蒸馏水100 ml。
Masson三色法步骤1．石蜡切片脱蜡至水。
2．铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）。
GENMED 丽春红染色溶液产品说明书
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS12202 v.A GENMED丽春红染色溶液产品说明书（中文版）主要用途GENMED丽春红红染色溶液是一种旨在通过使用显色染料丽春红（Ponceau S）与蛋白质氨基基团的结合并显示红色蛋白条带，快速、敏感、可逆地检测在聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）、PVDF膜、硝酸纤维素膜（Nitrocellulose membrane；NC）、醋酸纤维素膜（cellulose acetate）上的蛋白成分的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
适用于蛋白凝胶电泳和WESTERN BLOT 印迹膜的蛋白检测。
产品即到即用，性能长期稳定，着色清晰灵敏，可检测250纳克以上的蛋白。
技术背景丽春红染色剂（Ponceau S）是一种水溶性的阴离子重氮染料，由重氮氨基偶氮苯二磺酸（diazotized4-amino-1,1’-azobenzene-3,4’-disulfonic acid； Acid Yellow 9）和萘酚二磺酸（2-naphthol- 3,6-disulfonic acid；R acid）耦合到四钠盐上。
其分子式为C22H12N4Na4O13S4，分子量为760.6。
最大吸收光谱为520nm波长。
带负电荷的丽春红分子与正电荷的蛋白质氨基基团结合，也可以非共价键形式与蛋白质非极性区域结合。
产品内容GENMED染色液（Reagent A）30毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED染色液（Reagent A）在室温下，避免光照，有效保证6月用户自备染色塑料盒：用于纤维膜蛋白印迹染色的容器实验提示方法一、醋酸纤维素膜染色实验开始前，完成蛋白质电泳和转印。
然后进行下列操作。
1．将含有蛋白的醋酸纤维膜置于染色塑料盒里2．小心加入适量的（ 毫升/平方厘米）的GENMED染色液（Reagent A），覆盖膜表面3．室温下，孵育5分钟，避免光照4．继续后续酸化、固定、清理处理（注意：建议使用GENMED蛋白质转印印迹膜丽春红（Ponceau S）染色试剂盒－GMS30081）方法二：PVDF膜或硝酸纤维素膜染色实验开始前，完成蛋白质电泳和转印。
维多利亚蓝染色液
弹力和胶原纤维染色法（显示胶原和弹力纤维）
试剂配制：
维多利亚蓝染色液：
维多利亚蓝（Victoria blue 上海） 2.0g
糊精 0.5g
间苯二酚 4.0g
蒸馏水 200ml
混合后加热煮沸，边煮边搅拌，约5min。
再将30%三氯化铁水溶液25ml煮沸后加入上述混合液中，继续煮沸3min，要不断搅拌，搅拌棒上会出现胶样物质。
然后终止加热，冷却后过滤。
将滤纸上的物质连同滤纸放入60℃恒温箱中烤干。
再将烤干的蓝色粉末连同滤纸溶于400ml 70%乙醇中。
最后加浓盐酸4ml，苯酚5g，苯酚不能溶解时可略加温溶解。
放置成熟后使用。
丽春红S染色液：
0.5%丽春红（Ponceaus 上海试剂三厂） 15ml
加饱和苦味酸水溶液（1.22%） 85ml
弹力和胶原纤维染色步骤：
1．石蜡切片脱蜡至水；
2． 70%乙醇洗2min；
3．维多利亚蓝染液中0.5-2h；
4． 95%乙醇分色1秒钟；
5．蒸馏水洗2min；
6．丽春红S染液3-4min；
7．无水乙醇冲洗染液2次（动作要快）；
8．直接在空气中晾干；
9．二甲苯透明，中性树胶封固。
结果：弹力纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。
注意事项：
1．维多利亚蓝液可反复使用，溶液在室温中可保存数年。
2．维多利亚蓝液用95%乙醇分色后，要立即在水中浸洗。
浸洗后显微镜下观察分色程度，分色不够可再用乙醇分色。
3．丽春红S液染色后将切片倾斜用无水乙醇从一侧快速冲洗，稍干燥后立即透明封固，过于干燥会产生黑色颗粒。
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丽春红（Ponceau S）染色液的配制及使用
丽春红（Ponceau S）也称猩红，可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜（nitrocellulose membrane）和醋酸纤维素膜（cellulose acetate membrane）上的蛋白的检测。
丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。
丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色。
丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它适当溶液洗去。
因此，蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜，用丽春红染色后将目的条带切下用于测序。
注意：丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。
使用说明
将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中，摇动5-10分钟或更长时间；取出印迹膜，用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，可出现清晰条带，记录结果；用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除丽春红，进行后续的WB 检测。
补充：丽春红染色液也可以直接用来染PAGE胶，不过，在染色之前最好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE胶，起到固定蛋白的作用。
丽春红染色液的配制
常用的丽春红染色液有两种：一种用乙酸配制，另外一种用三氯乙酸（TVA）和5-磺基水杨酸（5-Sulfosalicylic acid）配制。
配制方法如下：
一、用乙酸配制成分：0.1%（w/v）丽春红，5%（v/v）乙酸，ddH2O。
4 ℃保存，不要冻上。
也可以配成“0.2%（w/v）丽春红，3%（v/v）乙酸，ddH2O”。
二、用三氯乙酸和5-磺基水杨酸成分：2% （w/v）丽春红，30%的三氯乙酸，30%的5-磺基水杨酸。