PCR技术的种类及其应用
pcr技术有几种
PCR技术有几种PCR（聚合酶链式反应）是一种广泛应用于分子生物学领域的技术，其原理和过程都非常重要。
PCR技术可以迅速复制DNA片段，并在实验室中进行分析和研究。
PCR技术有几种不同的变体，每一种都有其特定的应用领域和优势。
1. 标准PCR标准PCR，也被称为常规PCR或传统PCR，是PCR技术最常用的形式。
在标准PCR中，需要使用DNA模板、一对引物、四种核苷酸和DNA聚合酶。
PCR反应从一段DNA的两端引导酶链的扩张，通过多次循环反复进行，最终产生大量的DNA复制产物。
标准PCR可用于多种应用，如基因克隆、基因表达定量分析、基因突变检测等。
它是分子生物学研究中最重要且最常用的工具之一。
2. 实时定量PCR实时定量PCR（qPCR）是PCR技术的一种改进形式，可以在PCR反应过程中实时监测扩增产物的积累量。
该技术利用荧光染料或探针标记扩增产物，通过测量荧光信号的强度来确定反应体系中的DNA量。
实时定量PCR广泛应用于基因表达分析、病原体检测、药物研发等领域。
由于其高灵敏度、准确性和快速性，成为许多实验室和医学机构的首选技术。
3. 逆转录PCR逆转录PCR（RT-PCR）是用于将RNA转录为相应的DNA的技术。
逆转录PCR结合了逆转录酶的作用和标准PCR的扩增机制，可以从RNA中合成DNA，进而进行进一步的分析。
逆转录PCR在研究基因表达和分析RNA病毒等方面发挥着重要作用。
它可用于确定基因是否转录为RNA，并量化RNA的表达水平。
4. 梯度PCR梯度PCR是一种对PCR反应条件进行逐步优化的技术。
通过在反应管中创建不同温度的梯度，可以在一个PCR实验中测试多个不同条件下的扩增效果。
这有助于确定最佳的PCR条件，以提高扩增效率和特异性。
梯度PCR在优化引物和降低非特异引物扩增的干扰方面非常有用。
对于特定的PCR 反应，梯度PCR可以提供更准确和高效的结果。
综上所述，PCR技术有多种不同的变体，每一种都有其特殊的应用领域。
PCR的种类原理及其应用
PCR的种类原理及其应用1. PCR的简介PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应）是一种在体外复制DNA的技术，它通过反复进行DNA的复制，扩增出目标DNA的数目，从而使得原来数量有限的DNA样本变得足够检测。
PCR技术的应用广泛，不仅可以在分子生物学研究中应用，也可以用于医学诊断、法医学鉴定等领域。
2. PCR的原理PCR技术主要依赖于DNA的复制酶(聚合酶)、DNA模板、引物以及dNTPs等原料。
PCR反应一般包括三个步骤：变性、退火和扩增。
2.1 变性在PCR反应开始时，将目标DNA加热到94-96°C，使其双链DNA解旋成两条单链，这个过程称为变性。
此时，DNA模板中的两条链将被分离开来，为下一步的引物结合提供条件。
2.2 退火随后，在PCR反应中，温度会降低到50-60°C，引物可以与模板DNA中的特定区域互补配对，这个过程称为退火。
引物的选择是PCR反应中的关键步骤之一，引物的序列需要与目标DNA序列的两端互补，使得引物在此处能够结合。
2.3 扩增一旦引物与DNA模板结合，聚合酶通过在引物上合成新的DNA链。
这个过程称为扩增。
聚合酶从引物的3’端开始构建新的DNA链，复制DNA模板。
扩增过程通常会进行30-40个周期，每个周期包括变性、退火和扩增三个步骤，使得目标DNA的数量呈指数增长。
3. PCR的种类3.1 普通PCR普通PCR是最基本的PCR类型，采用传统的PCR原理和步骤进行扩增。
普通PCR适用于检测目标DNA序列的存在与否，常用于基因组克隆、突变分析和基因表达分析等研究领域。
3.2 定量PCR定量PCR是基于普通PCR的基础上进行改进和优化的一种技术。
它可以定量测定PCR反应体系中目标DNA模板的初始数量。
定量PCR广泛应用于基因表达分析、病原体定量检测、药物代谢分析等领域。
3.3 反转录PCR反转录PCR是在普通PCR基础上结合了反转录过程的一种PCR技术。
30多种PCR技术简单描述
1、Allele-specific PCR：等位基因特异性PCR，设计引物时选择在基因组的多态性区域，使等位基因的突变定位在（或接近）引物的3'端，在严谨的反应条件下，存在错配碱基的引物不能起始复制，而只有完全匹配的引物才能起始复制，产生的产物因此显示不同的基因型。
2、Assembly PCR(也称作Polymerase Cycling Assembly或PCA)：组装PCR通过使用多个具有短重叠区的长的寡核苷酸来合成长的DNA链的方法。
通过寡核苷酸产生一条条正向或反向DNA链，而寡核苷酸的重叠区则确定链组装的顺序，因此可有选择性的产生最终的长链DNA分子。
3、Asymmetric PCR：不对称PCR，可选择性的扩增出靶DNA的一条链，从而用于测序反应或制备单链杂交探针。
反应中限制一个引物的加入量，随着这一引物的用尽，后续的扩增中另一引物延伸的产物量大大过量。
这一技术的关键是使用的限制引物的量要合适，引物量过多，则产物主要是双链DNA；引物量过少，在前几轮循环就被耗尽，结果导致单链的产量减少。
在不对称PCR的基础上发展出Linear-After-The-Exponential-PCR (LATE-PCR，线性指数PCR)，使数量限制的引物比过量的引物的解链温度更高，从而维持较高的反应效率。
4、Dial-out PCRA highly parallel method for retrieving accurate DNA molecules for gene synthesis.A complex library of DNA molecules is modified with unique flanking tags（标签）before massively parallel sequencing. Tag-directed primers （标签靶向的引物）then enable the retrieval of molecules with desired sequences by PCR.5、Helicase-dependent amplification（依赖解旋酶的扩增）Similar to traditional PCR, but uses a constant temperature（恒温） rather than cycling through denaturation （变性）and annealing/extension （退火/延伸）cycles. DNA helicase, （DNA解旋酶）an enzyme that unwinds （解旋）DNA, is used in place of thermal denaturation（热变性）.6、Hot start PCR：热启动PCR，是提高PCR特异性和可信度的最好的方法之一。
所有pcr技术的种类原理应用
所有PCR技术的种类、原理和应用引言聚合酶链式反应（PCR）是一种基于酶的技术，用于在体外扩增特定片段的DNA。
PCR技术自20世纪80年代初以来就被广泛应用于分子生物学研究和临床诊断中。
随着技术的不断发展，出现了多种PCR技术，每种技术都有其特定的原理和应用。
传统PCR（PCR）传统PCR是最早被开发的PCR技术之一，也是最常用的PCR技术之一。
它基于酶扩增DNA的原理，包括三个主要步骤：变性、退火和延伸。
传统PCR可以扩增小片段的DNA，通常在100至1000个碱基对之间。
实时定量PCR（qPCR）实时定量PCR，又称荧光定量PCR，是一种可以实时监测PCR反应过程的技术。
在qPCR中，DNA在每一个循环中都会产生荧光信号，这种荧光信号与PCR产物的数量成正比。
qPCR可以精确地定量起始模板的数量，并且通常有更高的灵敏度和特异性。
数字PCR（dPCR）数字PCR是一种用于准确测定DNA分子数量的技术。
相对于传统PCR或实时定量PCR而言，数字PCR可以更加准确地计算起始DNA模板的数量。
数字PCR将稀释DNA样本分成数百万个小的反应区域，每个区域中只有一个DNA分子存在，通过监测阳性和阴性信号的比例，可以计算出原始DNA模板的数量。
长片段PCR长片段PCR是一种特殊的PCR技术，用于扩增较长的DNA片段（通常超过10 kb）。
由于长DNA片段在PCR反应中容易出现问题，如失去扩增能力或产生非特异性产物，因此长片段PCR通常需要进行优化。
长片段PCR在基因克隆、基因表达分析等领域中得到了广泛应用。
反转录PCR（RT-PCR）反转录PCR是一种用于将RNA转录成DNA的技术，然后再通过PCR进行扩增。
在RT-PCR中，首先使用反转录酶将RNA逆转录为cDNA（互补DNA），然后利用PCR扩增cDNA。
RT-PCR被广泛应用于研究基因表达调控、病毒诊断和基因突变检测等领域。
循环病毒扩增（LAMP）循环病毒扩增（LAMP）是一种新型的PCR技术，可以在恒温下进行，不需要复杂的温度程序。
pcr种类的原理及应用
PCR种类的原理及应用1. PCR的基本原理聚合酶链反应（PCR）是一种重要的分子生物学技术，可以在体外快速合成大量DNA片段。
PCR主要包括三个步骤：变性、引物结合和延伸。
1.变性：PCR反应开始时，将反应体系中的DNA加热至95℃，使DNA双链解离为两条单链。
2.引物结合：将反应体系温度降低至50-60℃，引物与目标DNA序列互补配对。
引物是两条短的DNA片段，它们与目标DNA序列的两个末端互补配对。
3.延伸：在引物的作用下，将反应体系温度升高至72℃，引物在目标DNA序列上的互补区域上作为模板，聚合酶可以合成新的DNA链。
这样，每个PCR循环后，目标DNA序列的数量就会翻倍。
多个PCR循环后，可以获得目标DNA序列的大量复制品。
2. PCR的种类及其原理2.1 实时定量PCR（qPCR）实时定量PCR（quantitative PCR，qPCR）是利用荧光信号实时监测PCR反应过程中目标DNA的累积量。
它可以定量测量起始DNA模板的数量。
qPCR采用与传统PCR类似的方法进行DNA扩增，但在反应过程中添加了荧光染料。
这些荧光染料会与目标DNA结合并发出荧光信号。
通过检测荧光信号的强度，可以确定PCR反应的复制数量，从而定量测量起始DNA的数量。
qPCR广泛用于基因表达研究、病原菌检测、基因突变分析等领域。
2.2 逆转录PCR（RT-PCR）逆转录PCR（Reverse Transcription PCR，RT-PCR）是一种将RNA逆转录为cDNA（互补DNA）后，在进行PCR扩增的技术。
RT-PCR可以用于研究基因的转录水平以及病毒等RNA病原体的检测。
RT-PCR首先使用逆转录酶将RNA逆转录为cDNA。
然后，通过PCR扩增cDNA，使目标基因的复制数量大量增加。
最后，可以通过分析PCR产物的大小和序列进行进一步研究和检测。
2.3 数字PCR（Digital PCR）数字PCR（Digital PCR）是一种用于高灵敏度和绝对定量的PCR技术。
PCR的种类及其应用有哪些
PCR的种类及其应用有哪些引言聚合酶链反应（PCR）是一种重要的分子生物学技术，已被广泛应用于基础研究、医学诊断、食品安全、物种鉴定等领域。
PCR技术通过体外扩增DNA片段，能快速、高效地产生大量目标DNA。
本文将介绍PCR的一些主要种类以及它们在各个领域的应用。
常见的PCR种类1. 常规PCR常规PCR也称为传统PCR，是最基本的PCR技术。
该方法主要包括三个步骤：变性、退火和延伸。
在变性步骤中，DNA被加热至高温，使其双链结构解开，形成两条单链。
在退火步骤中，引物与目标DNA序列结合。
在延伸步骤中，DNA聚合酶会从引物的3’端开始合成新的DNA链。
通过多次循环这个过程，可以快速扩增目标DNA。
2. 实时荧光定量PCR实时荧光定量PCR（qPCR）是一种可以实时监测PCR反应过程的技术。
在扩增过程中，与目标DNA序列结合的专门设计的探针会产生荧光信号。
荧光信号的强度与目标DNA的数量成正比，可以通过荧光信号的变化来确定初始目标DNA的数量。
qPCR被广泛用于基因表达研究、病原体检测、SNP分型等领域。
3. 逆转录PCR逆转录PCR（RT-PCR）是一种特殊的PCR技术，用于从RNA模板合成相应的DNA。
该技术首先通过逆转录酶将RNA转录为互补的DNA（cDNA），然后使用传统PCR技术扩增目标DNA。
RT-PCR广泛应用于基因表达分析、病毒诊断等领域。
4. 巢式PCR巢式PCR是对常规PCR的改进，通过进行两轮PCR反应来提高扩增特异性。
在第一轮PCR反应中，使用外部引物扩增目标DNA片段。
在第二轮PCR反应中，使用内部引物扩增第一轮PCR反应产物。
巢式PCR被广泛应用于微生物检测、基因定位等领域。
5. 数字PCR数字PCR是一种利用限稀稀释原理进行PCR信号计数的精确定量技术。
该技术通过将模板DNA稀释成稀溶液，使每个PCR反应管中仅有一个模板DNA分子。
通过计数正反应管的数目，可以准确确定目标DNA的初始浓度。
PCR分为几类
PCR分为几类PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，可以在体外迅速扩增DNA 片段。
PCR的应用广泛，可以用于基因检测、疾病诊断、遗传学研究等领域。
根据PCR 的目的和方法不同，可以将其分为以下几类。
1. 标准PCR标准PCR是最基本的一种PCR方法，也是最常见的一种。
它包括三个主要步骤：变性、引物结合和扩增。
在变性步骤中，样本中的DNA被加热使其解旋成两条单链。
然后，在引物结合步骤中，两个特异性引物与目标DNA序列的两端结合。
最后，在扩增步骤中，DNA聚合酶通过引物在目标序列上进行扩增，生成大量目标DNA。
2. 实时定量PCR实时定量PCR是一种可以定量测定起始DNA数量的PCR方法。
与标准PCR不同，实时定量PCR在扩增过程中同时进行荧光信号检测。
这种PCR方法可以利用荧光染料或探针来监测PCR产物的数量，从而在扩增过程中实时定量目标DNA的起始数量。
实时定量PCR在基因表达分析、病原体检测和突变分析等方面有广泛的应用。
通过测定样品中特定基因的表达水平或病原体的数量，可以获得有关相应生物学过程或疾病状态的重要信息。
3. 反转录PCR（RT-PCR）反转录PCR是一种结合了逆转录和PCR的技术。
逆转录是将RNA转录为DNA的过程，通过反转录酶，目标RNA可以合成互补的DNA（cDNA）。
然后，使用PCR方法扩增cDNA，以便测定RNA的存在和定量。
RT-PCR广泛应用于基因表达研究和病毒检测等领域。
通过测定目标基因的mRNA 水平或检测病毒RNA的存在，可以了解基因表达的水平或病毒感染的情况。
4. 数字PCR数字PCR是一种精确测定DNA分子数量的PCR方法。
与传统PCR不同，数字PCR 将DNA分为许多微小的反应容器，并分别进行扩增。
通过计算阳性和阴性反应容器的数量，可以确定样品中DNA的精确浓度。
数字PCR在基因拷贝数分析、细胞自由DNA检测和胚胎植入前遗传诊断等方面有广泛的应用。
PCR的种类及其应用实验报告
PCR的种类及其应用实验报告简介聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一种分子生物学技术，可在体外合成大量特定DNA片段。
PCR技术广泛应用于生物医学研究、疾病诊断以及生物工程领域。
本实验旨在探究PCR技术的种类及其应用。
PCR的种类传统PCR传统PCR包括三个主要步骤：变性、引物结合和延伸。
首先，通过高温变性将DNA 双链分离为两条单链DNA。
然后，引物与目标DNA序列的两端结合。
最后，通过DNA 聚合酶的作用，在引物的起始点上合成新的DNA链。
实时定量PCR实时定量PCR（Real-time Quantitative PCR，qPCR）是PCR的一种改进形式，可快速、准确地定量测定 DNA的相对数量。
qPCR使用荧光探针或染料实时监测PCR反应的进程，从而实时测定DNA产物的累积量。
qPCR技术广泛应用于基因表达研究和疾病诊断等领域。
反转录PCR反转录PCR（Reverse Transcription PCR，RT-PCR）是一种结合了反转录和PCR的技术，可将RNA转录成DNA，并进一步进行PCR扩增。
RT-PCR技术常用于研究基因表达，可以测定特定基因的转录水平。
数字PCR数字PCR（Digital PCR，dPCR）是一种对DNA分子进行数字化处理的PCR技术。
这种技术能够准确计算起始DNA分子的数量，而不依赖于外部标准曲线。
dPCR常用于检测低拷贝基因、测定突变频率等。
PCR的应用基因克隆PCR技术在基因克隆中起着关键作用。
通过合成引物，选择性扩增所需基因片段，可以获得大量特定目标DNA。
这些扩增的DNA片段可以用于构建基因表达载体、插入突变或其他基因编辑等实验操作。
疾病诊断PCR技术在疾病诊断中具有重要意义。
通过特定引物扩增病原微生物的DNA或RNA，可以快速检测出疾病的存在。
例如，PCR在检测病毒、细菌感染和遗传疾病等方面广泛应用。
法医学鉴定PCR技术在法医学领域有着重要应用，可以通过扩增可疑样本中目标基因的DNA片段，进行罪犯的DNA鉴定。
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PCR技术的种类及其应用1PCR技术的基本原理PCR技术是在模板DNA引物和四种dNTP等存在的条件下,依赖于DNA聚合酶(T aq酶)的酶促合成反应。
其具体反应分三步：变性、退火、聚合。
以上三步为一个循环，每一循环的产物DNA又可以作为下一个循环模板，数小时后，介于两个引物之间的目的DNA得到了大量的复制，经25〜30次循环DN数量可达2X106~7拷贝数。
2PCR技术的种类2.1反向PCR( Inverse PCR, IPCR技术原理：反向PC是克隆已知序列旁侧序列的一种方法.主要原理是用一种在已知序列中无切点的限制性内切酶消化基因组I) NA•后酶切片段自身环化•以环化的DNA 作为模板，用一对与已知序列两端特异性结合的引物，扩增夹在中间的未知序列。
该扩增产物是线性的DNA片段，大小取决于上述限制性内切酶在已知基闲侧翼DNA 序列内部的酶切位点分布情况。
用不同的限制性内切酶消化，可以得到大小不同的模板DNA再通过反向PCR获得未知片段。
该方法的不足是：①需要从许多酶中选择限制酶，或者说必须选择一种合适的酶进行酶切才能得到合理大小的DNA片段。
这种选择不能在非酶切位点切断靶DNA。
②大多数有核基因组含有大量中度和高度重复序列，而在YAC或Cosmid中的未知功能序列中有时也会有这些序列，这样，通过反向PCR得到的探针就有可能与多个基因序列杂交。
2.2锚定PCR( Anchored PCR, APCR)技术用酶法在一通用引物反转录cDNA3 '末端加上一段已知序列，然后以此序列为引物结合位点对该cDNA进行扩增，称为APCR。
应用：它可用于扩增未知或全知序列，如未知cDNA的制备及低丰度cDNA文库的构建。
2.3不对称PCR(asymmetric PCR)技术两种引物浓度比例相差较大的PCR技术称不对称PCR在扩增循环中引入不同的引物浓度，常用50〜100T比例。
在最初的10〜15个循环中主要产物还是双链DNA,但当低浓度引物被消耗尽后,高浓度引物介导的PCR反应就会产生大量单链DNA 应用：可制备单链DNA片段用于序列分析或核酸杂交的探针2.4反转录PCR( reverse transcription, RT- PCF)技术当扩增模板为RNA时，需先通过反转录酶将其反转录为cDNA才能进行扩增。
RT - PC应用非常广泛，无论是分子生物学还是临床检验等都经常采用。
2.5修饰引物PCR技术为达到某些特殊应用目的，如定向克隆、定点突变、体外转录及序列分析等，可在引物的5'-端加上酶切位点、突变序列、转录启动子及序列分析结合位点等。
2.6巢式PCR(NEST PCR)技术先用一对靶序列的外引物扩增以提高模板量，然后再用一对内引物扩增以得到特异的PCR 带,此为巢式PCR。
若用一条外引物作内引物则称之为半巢式PCR。
为减少巢式PCR的操作步骤可将外引物设计得比内引物长些，且用量较少，同时在第一次PCR时采用较高的退火温度而第二次采用较低的退火温度，这样在第一次PCR时，由于较高退火温度下内引物不能与模板结合，故只有外引物扩增产物，经过若干次循环，待外引物基本消耗尽，无需取出第一次PCR产物，只需降低退火即可直接进行PCR扩增。
这不仅减少操作步骤，同时也降低了交叉污染的机会。
这种PCR称中途进退式PCR( drop-in, drop-out PCR)。
上述三种方法主要用于极少量DNA模板的扩增。
2.7等位基因特异性PCR( Allele- specificPCR, ASPCR)技术ASPCR依赖于引物3'-端的一个碱基错配，不仅减少多聚酶的延伸效率，而且降低引物-模板复合物的热稳定性。
这样有点突变的模板进行PC扩增后检测不到扩增产物，可用于检测基因点突变。
2.8单链构型多态性PCRsingle- strandconformational polymorphism PCR SSCPPCF)技术SSCP- PCR是根据形成不同构象的等长DNAI链在中性聚丙烯酰胺凝胶中的电泳迁移率变化来检测基因变异。
在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶中，单链DN迁移率除与DN长度有关外，更主要取决于DN单链所形成的空间构象，相同长度的单链DNA因其顺序不同或单个碱基差异所形成的构象就会不同，PCR产物经变性后进行单链DN礙胶电泳时，每条单链处于一定的位置，靶DN冲若发生碱基缺失、插入或单个碱基置换时，就会出现泳动变位，从而提示该片段有基因变异存在。
2. 9 低严格单链特异性引物PCR (Lowstringencysingle specific primer PCR, LSSP-PCR)技术LSSP - PCR是建立在PCR基础上的又一种新型基因突变检测技术。
要求是“二高一低”,高浓度的单链引物(5'端/ 3'端引物均可),约4. 8Lmol,高浓度的Taq酶(16Lmol/ 100ml),低退火温度(30C),所用的模板必须是纯化的DNA片段。
在这种低严格条件下，引物与模板间发生不同程度的错配，形成多种大小不同的扩增产物，经电泳分离后形成不同的带型。
对同一目的基因而言，所形成的带型是固定的，因而称之为“基因标签”。
这是一种检测基因突变或进行遗传鉴定的快速敏感方法。
2.10复合PCR( multiplex PCR)技术在同一反应中用多组引物同时扩增几种基因片段，如果基因的某一区段有缺失，则相应的电泳谱上这一区带就会消失。
复合PCR主要用于同一病原体的分型及同时检测多种病原体、多个点突变的分子病的诊断。
2.11重组PCR技术重组PCR技术是在两个PCR扩增体系中，两对引物分别由其中之一在其5'-端和3' 端引物上带上一段互补的序列，混合两种PCR扩增产物，经变性和复性，两组PCR产物互补序列发生粘连，其中一条重组杂合链能在PCR条件下发生聚合延伸反应，产生一个包含两个不同基因的杂合基因。
2.12随机引物扩增技术(arbitrary primedPCR, AP- PCR)AP-PCR技术通过随意设计或选择一个非特异性引物,在PCR反应体系中，首先在不严格条件下使引物与模板中许多序列通过错配而复性。
如果在两条单链上相距一定距离有反向复性引物存在，则可经Taq酶的作用使引物延伸而发生DNA片段的扩增，经一至数轮不严格条件下的PCR循环后,再于严格条件下进行扩增。
扩增的产物经DNA测序凝胶电泳分离后，经放射性自显影或荧光显示即可得到DNA指纹图。
AP-PCR用于肿瘤的抑制基因、癌基因的分离；菌种、菌株及不同物种的鉴定；遗传作图；不同分化程度或某些不同状态下的组织的基因表达差异等方面的研究。
2.13差示PCR ( differential PCR, d -PCR)技术d-PCR可以定量检测标本靶基因的拷贝数。
它是将目的基因和一个单拷贝的参照基因置于一个试管中进行PCR扩增。
电泳分离后呈两条区带，比较两条区带的丰度，或在引物5'端标记上放射性核素后，通过检测两条区带放射性强度即可测出目的基因的拷贝数。
2.14定量PCR( quantitative PCR, qPCR 技术qPCR技术是用合成的RN作为内标来检测PCR T增目的mRNA的量,涉及目的mRNA和内标用相同的引物共同扩增，但扩增出不同大小片段的产物，可容易地电泳分离。
一种内标可用于定量多种不同目的mRNA。
qPCR可用于研究基因表达，能提供特定DNA基因表达水平的变化，在癌症、代谢紊乱及自身免疫性疾病的诊断和分析中很有价值。
2.15竞争性PCR(competitive PCR, c-PCR)技术c-PCR技术是竞争cDNA模板与目的cDNA同时扩增，使用同样的引物，但一经扩增后, 能从这些目的cDNAi别开来。
通常使用突变性竞争cDNA模板，其序列与目的cDNAP 列相同,不过模板中仅有一个新内切位点或缺少内切位点，突变性的cDNA模板可用适当的内切酶水解，并用分光计测定其浓度。
cDNA目的序列和竞争模板相对应的含量，可用溴化乙锭染色，电泳胶直接扫描进行测定，或掺入放射性同位素标记的方法测定。
竞争模板开始时的浓度是已知的，则cDN用的序列的最初浓度就能测定。
这种方法能精确测定mRN中cDNA靶序列,可用于几个到10个细胞中mRNA勺定量。
2.16半定量PCR(semiquantitative PCR,sq- PCR 技术sq-PCR不同于c-PCR的是参照物ERCC-2的PCR产物与目的DNA的PCR产物相似,并分别在试管中扩增。
sq- PCR的流程为样品和内参照RNA分别经反转录为cDNA,然后样品cDNA和一系列不同量参照cDNA分别在不同管进行扩增，PCR产物在琼脂糖凝胶上电泳拍照，光密度计扫描，作出标准曲线，通过回归公式便可定量表达的基因量。
虽然管与管之间的扩增效率难以控制，但由PC扩增的所有样本和参照物在不同的实验中差异很小。
这种敏感的技术可用于其他低表达的基因定量2.17原位PCR( in situ PCR)技术原位PCR综合了PCR和原位杂交(In situ hybridizati on, ISH)的优点，是一种在组织切片或细胞涂片上原位对特定的DNA或RNA进行扩增,再用特异性的探针原位杂交检测。
原位PCR标本一般需先经化学固定，以保持组织细胞的良好形态结构。
细胞膜和核膜有一定的通透性,PCR T增所需的各种成分可进入细胞内或核内,在原位对特定的DNA或RNA进行扩增。
扩增产物由于分子量较大或互相交织，不易透过细胞膜向外弥散，故保留在原位。
这样就很容易应用ISH将其检出，同时还可对目的DNA序列的组织细胞进行形态学分析。
2.18免疫PCR(immu no PCR)技术抗原-抗体反应与PCR技术的结合产生了免疫PCR，是目前为止最为敏感的检测方法理论上可测到一个抗原分子的存在。
通过用一个具有对DNA和抗体双重结合活性的连接分子,使作为标记物的DNA分子特异地结合到Ag- Ab复合物上，从而形成Ag- Ab- DNA复合物，附着的DNA标记物可用适宜的引物进行PCR扩增。
特异性PCR产物的存在证明DNA标记物分子特异地附着于Ag - Ab复合物上，进而证明有Ag存在。
吴自荣等将Ab通过化学交联剂直接连接到分子上构建成Ab-DNA探针，组成免疫PCR检测新模式，具有高度灵敏和特异性。
免疫PCR可对流行性传染病(如肝炎、爱滋病等)进行检测，检测体液中致癌基因和癌基因表达的微量蛋白等。
2.19长片段PCR( long-PCR)技术长片段PCR是用高质量模板DNA保证其完整性,引物应较长(21〜34bp)，使用高的退火温度及错配率更低的酶，将无3'-5'外切酶活性的DNAS合酶和低浓度有3'-5'外切酶活性的DNA聚合酶组合使用，缓冲体系通过提高Tris的浓度或改用Tricine缓冲液以增强缓冲能力，并调高体系的pH。