常用缓冲液的配制

常用缓冲液的配制（TBS，PBS）

科研探索2007-04-23 13:25:54 阅读728 评论0 字号：大中小订阅

这是各种缓冲液的配制方法

1. 0.01MPBS(PH7.2)液

NaCl 8g

Na2HPO4 1.15g

KH2PO4 0.2g （NaH2PO4）

加双蒸水至1000ml

2. 0.05MTBS(PH7.4)液

Tris(三羟甲基胺基甲烷) 12.1g

Nacl 17.5g

加双蒸水至1500ml

在搅拌下加浓HCL至PH7.4，再加双蒸水至2000ml。

3. 0.02MTBS（PH8.2）液

Tris 4.84g

Nacl 17.5g

BSA 2.0g

NaN3 1.0g

加双蒸水至1500ml

在搅拌下加浓HCL至PH8.2，再加双蒸水至2000ml。

（BSA—牛血清白蛋白；NaN3—叠氮钠，为防腐剂）。

4. 0.05MTB液（PH7.6）

先配制0.05MTB液：

Tris 60.75g

1N HCL 约420ml

双蒸水至1000ml

配制方法：先以少量双蒸水（300ml）溶解Tris，加入HCL后，再用1N HCL 或1N NaOH将PH值调至7.6，再加双蒸水至1000ml。

用时将0.5MTB稀释10倍，即为0.05MTB液（PH7.6）液

磷酸缓冲液(Gomori缓冲液)

最通用的磷酸盐缓冲液是以其发明者Gomori命名的。该缓冲液是由单价磷酸二氢盐和双价磷酸一氢盐的混合物组成的。通过变化每种盐的量，就可配制出pH 5.8至pH8.0之间缓冲液(见表A1-3A和A1-3。磷酸盐有很高的缓冲能力，在水中高度可溶。但是，它们也有不少潜在的缺点：

•磷酸盐缓冲液抑制许多酶促反应和步骤，而这些酶促反应和步骤恰恰是分子克隆的基础，其中包括许多限制酶对DNA的切割，DNA的连接和细菌转化等。

•因为磷酸盐在乙醇中沉淀，不能用于沉淀DNA和RNA。

•磷酸盐螯合像Ca2+和Mg2+这样的阳离子。

表A1-3A 25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制

pH 1 mol/L K2HP04的体积/mL 1 mol/L KH2PO4的体积/mL

5.8 8.5 91.5

6.0 13.2 86.8

6.2 19.2 80.8

6.4 2

7.8 72.2

6.6 38.1 61.9

6.8 49.7 50.3

7.0 61.5 38.5

7.2 71.7 28.3

7.4 80.2 19.8

7.6 86.6 13.4

7.8 90.8 9.2

8.0 94.0 6.0

注：根据Green(1933)的资料汇编。

用蒸馏水将混合的两种1mol/L的贮存液稀释至1000mL。根据Henderson-Hasselbaleh方程计算其pH值：

pH=pK'+Log ，在此，pK'=6.86(25℃)

表A1-3B 25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制

pH 1mol/L Na2HPO4的体积/mL 1mol/L NaH2P04体积/mL

5.8 7.9 92.1

6.0 12.0 88.0

6.2 1

7.8 82.2

6.4 25.5 74.5

6.6 35.2 64.8

6.8 46.3 53.7

7.0 57.7 42.3

7.2 68.4 31.6

7.4 77.4 22.6

7.6 84.5 15.5

7.8 89.6 10.4

8.0 93.2 6.8

注：根据ISCO(1982)的资料汇编