瑞氏染色的步骤
瑞氏染色流程
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瑞氏染色法
5.3结果观察，将干燥后的血涂片置显微镜下观察。先用低倍镜观察血涂片，再用油镜。
部门：医学检验中心血液病实验室
文件号：YFY-YXJYZX-ZD-MY-601
版本号：2011第0次修改
文件名称：乙肝病毒表面抗原检测
发布日期：2011年12月1日
修定日期：年月日
伊红通常为钠盐。
将适量的伊红，美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。
甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红ME，使其解离为M+和E+，后两者可以选择性地吸附于血细胞内的不同成分而使其着色；二是具有很强的脱水作用，可固定细胞的形态，当细胞发生凝固时，蛋白质被沉淀为颗粒状或者网状，增加细胞结构的表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。
部门：血液科中心实验室细胞形态室
文件号：YFY-YXJYZX-ZD-MY-601
版本号：2011第0次修改文件名称：Biblioteka 发布日期：2013年5月1日
修定日期：年月日
1检验方法
瑞氏染色法
2检测原理
把已制成的血细胞分布均匀的薄膜涂片，用复合染料染色。其着色的原理包括物理吸附及化学亲和作用。不同种类的细胞及同一细胞的不同成分及不结构，对酸性及碱性染料的结合能力不同，因而使不同种类的细胞染成不同的颜色，呈现各自的特点。
3实验标本要求
新鲜的骨髓细胞涂片及血液细胞涂片
4试剂
4.1来源
自配。
4.2检测试剂组成
4.2 .1瑞氏染料由酸性染料伊红(eosin,E)和碱性染料亚甲蓝(methylene blue,M|+)组成的复合染料。
亚甲蓝(又名美蓝)为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构，通常为氯盐，即氯化美蓝。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料(即天青)。
瑞氏染色
精选课件
8
5、淋巴细胞(lymphocyte)
形态：呈圆形或卵圆形，大小不等； 胞核呈圆形，一侧常有小凹陷，染色深；胞质 较少，环绕核周围呈一窄带，嗜碱性，呈蔚蓝色
精选课件
9
正常值及临床意义
正常参考值
中性粒细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 单核细胞 淋巴细胞
46-63% 0-5% 0-1% 1-7% 24-47%
形态：胞核呈蓝紫色，染色质呈块状，着色深； 成熟的N胞核多为分叶状，一般可分2～5叶，常见 3叶，幼稚的N胞核呈杆状。胞质中含许多散在细 小的颗粒，Wright染色中呈紫红色
嗜天青颗粒 溶酶体 特殊颗粒 分泌颗粒
精选课件
7
4、单核细胞(monocyte)
形态：胞体大，呈圆形或椭圆形；胞核形态多样，可呈 卵圆形、肾形或马蹄形，核常偏位，染色质颗粒 细而松散，故着色浅；胞质较多，呈弱嗜碱性， 常染 涂 片制 作：
推片 血液
载玻片
将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚 薄取决于速度和角度：快、大(厚)。 慢、小（薄）
一张满意的血涂片应厚薄均匀
头
体
尾鲜明
涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号
B 123
李 四
精选课件
3
血 涂 片 染色：
涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴 覆盖整个血膜1分钟
临床意义
外周血中白细胞主要由中性粒细胞和淋巴细胞 所组成，这二种细胞的升高及减低可直接导致 白细胞总数相应的改变。
精选课件
10
中性粒细胞
升高
感染或化脓性炎症 中毒 急性出血 恶性肿瘤
减低
某些感染 化学药物中毒 某些血液病 脾亢和免疫性疾病 放射病
[课件]瑞氏染色PPT
![[课件]瑞氏染色PPT](https://img.taocdn.com/s3/m/5af6e1163968011ca30091e9.png)
李 四
血 涂 片 染色：
涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴 覆盖整个血膜1分钟 勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和 Ⅱ液充分混允静置10分钟
直接流水冲洗3-5分钟 （切勿先到掉染液） 涂片经水洗干燥后用油镜 分类计数100个白细胞 李 四 123
血涂片的观察：
经染色后的血涂片先用低倍镜观察： 1.染色情况(满意、偏酸、偏碱） 2.观察细胞分布情况，选择细胞分布均匀之 处转浸油镜进行白细胞分类计数。 油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。
白细胞形态异常
主要是指N和L的异常改变。遗传性、感染、中毒、放射 性或造血系统恶性病变等因素是白细胞形态改变的常 见原因。
（1）N 包括毒性变化、巨多分叶核、棒状小体以及 其他的异常形态。
5、淋巴细胞(lymphocyte)
形态：呈圆形或卵圆形，大小不等； 胞核呈圆形，一侧常有小凹陷，染色深；胞质 较少，环绕核周围呈一窄带，嗜碱性，呈蔚蓝色
正常值及临床意义
正常参考值
中性粒细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 单核细胞 淋巴细胞 46-63% 0-5% 0-1% 1-7% 24-47%
李 四
1hite blood cell, WBC) 中性粒细胞
嗜酸性粒细胞
白细胞 嗜碱性粒细胞 淋巴细胞 单核细胞
1、中性粒细胞(neutrophilic granulocyte,N)
形态：胞核呈蓝紫色，染色质呈块状，着色深； 成熟的N胞核多为分叶状，一般可分2～5叶，常见
瑞氏染色
血涂片：将血液在载玻片上推制成较薄 的一层血膜。 待干燥后用染色液进行染色，染色液通 常选用瑞氏或瑞-姬氏。
血 涂 片制 作：
推片
血液 载玻片 将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚 薄取决于速度和角度：快、大(厚)。 慢、小（薄）
瑞氏染色操作流程
瑞氏染色操作流程一、瑞氏染色实验前准备1.1准备染色液和显影液针对瑞氏染色实验，首先要准备染色液和显影液，染色液由25mL的瑞氏染料，90mL的盐酸溶液（浓度为5％），以及1mL的激发剂混合而成。
而显影液则是在10mL的9N的硫酸、10mL的5％的NaOH溶液、10mL的1％的苯甲醇和10mL的1％的芳香族醇基乙醇混合而成。
1.2准备染色木质菌梗在预先准备瑞氏染色液和显影液后，接下来要准备染色用的木质菌梗才能开始瑞氏染色实验。
首先，用洗碗笠将要染色的木质菌梗洗淨，然后用医用刀在木质菌梗中切出厚约2mm的薄片，最后用蒸汽–水泼淋法将木质菌梗片浸湿，方可准备瑞氏染色实验。
二、瑞氏染色实验操作2.1放置染色片在准备好染色液和显影液，以及木质菌梗薄片后，此时要把准备的的木质菌梗薄片放置在染色槽内，以留出表面空间，方便染色液充分浸渍。
2.2加入染色液之后将准备的瑞氏染色液加入染色槽，在实验室内控制温度为37℃，放置20分钟后，可以观察菌梗表面是否呈染色，一般都可以看到浅色到深色之间的蓝色或紫色染色，这说明瑞氏染色已经取得成功。
2.3加入显影液如果瑞氏染色实验成功，那么接下来可以准备将木质菌梗片洗净后加入显影液了，而此时温度需要将控制在22℃，放置5-10分钟后，可以发现菌梗片变淡，并且半透明，证明显影液已经取得成功。
2.4用x网影像再接着，用X网影像观测染色后的木质菌梗，当观测到菌梗表面开始出现斑斑点点发亮时，这表明染色实验结束，在此基础上对木质菌梗进行另一个体系的判断，也就是对菌梗的形态和染色的准确性进行分类、认定和鉴定。
三、瑞氏染色实验结束完成上述瑞氏染色实验操作后，就可以对经过染色后的木质菌梗进行分析、鉴定，完成木质菌梗的离子吸收率、分子斑点和染色效果等等内容，通过瑞氏染色实验把细菌聚集在一起，以便进行实验分析，这正是瑞氏染色实验取得成功的原因。
瑞氏染液
新离解。 ○缓冲液须保持一定的 pH 使染色稳定，PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8， ○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使
pH 恒定。 缓冲液配制
（pH6.4~6.8，弱酸性）： 配方 1 ： 配方 2： 1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml 1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml H2O(新鲜) 加至 1000ml 置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。 姬姆萨（Giemsa's stain；天青-伊红）染色 1．姬姆萨染料是伊红(AzurII Eqsin)和天青（蓝）2 号合成的。 2．姬姆萨染料（ Giemsa, 天青-伊红）染液配制： 姬姆萨染料（粉末） 0.5g 或 7.5g 甲醇（AR） 33ml 或 500ml 甘油（AR） 33ml 或 500ml ●先将姬姆萨染料放入乳钵中，逐渐倒甘油研磨溶于甘油中，置于 56℃水温箱内，90～120 分 钟，然后加入甲醇，摇匀后放置数天，过滤后或不过滤即可使用。此染液放置室温阴暗处，时间越 长越好。 ●使用染液可临时配置）：姬姆萨染液 1ml，加 DDH2O10ml 混匀。即可使用。 染色步骤 （1）先用甲醇固定 2～3 分钟。 （2）将血或骨髓涂片放置姬姆萨使用液 15～30 分钟。 （3）涂片用自来水冲洗，在室温中干燥待查。 染液鉴定 瑞氏或姬姆萨染色液鉴定：刚配好或放置一个月以上的染液可进行下列鉴定： 1．取 1 滴染液于乳白玻板上，自行迅速扩散开，其颜色变紫红色，且有伪足形成。 2．取 1 滴染液加 1 滴缓冲液，染液由深蓝色立即变为紫红色。 3．取血片或骨髓片进行试染检查，观察染色后各类细胞的胞核、胞浆及颗粒着色情况，pH 是 否合适及染色合适时间。如有上述变化，表明染液合格，可供使用。 混合染色 瑞氏染色(Wright's)-姬姆萨（Giemsa's）混合染色： ●瑞氏染色的染料配方浓度对细胞核着色程度适中,细胞核结构和色泽清晰艳丽,对核结构的识 别较佳,但对胞浆着色偏酸,色泽偏红,对细胞浆内颗粒特别是嗜天青颗粒及嗜中性颗粒着色较差。 ●姬姆萨染色对胞浆着色能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别对嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗 粒着色较清晰, 色泽纯正,而对胞核着色偏深,核结构显示较差。 ●故采用以瑞氏染液为主，姬姆萨染液为辅的混合染色。 染色步骤： 1. 先用瑞氏染液将涂膜面充分覆盖； 2. 稍等片刻再加姬姆萨染液 2-3 滴加减(根据涂片上细胞多少及增升程度酌情而定)； 3. 稍等 1-2 分钟后,再加磷酸盐缓冲液,加时应缓慢地一滴一滴加在涂片膜上,直至膜面上染色液 形成表面张力而终止染色液加入； 4. 染色 30-40 分钟； 5. 分色：用自来水缓缓冲洗至少 3 分钟以上,待干，勿用滤纸吸干,以免滤纸纤维污染涂片。
瑞氏染色
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电话：400-676-6191 邮箱：bestbio@
传真：021-60853530
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
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产品号 403001 403002 403003 403004 403005 403097 403098 403099
产品 TRAP 染色试剂盒 Masson 染色试剂盒 革兰氏染色试剂盒 瑞氏染色试剂盒 姬姆萨染色试剂盒 亚甲基蓝染色试剂盒 碱性磷酸酶染色试剂盒 酸性磷酸酶染色试剂盒
产品说明书
产品号 403022 403023 403091 403092 403093 403094 403095 403096
结果分析： 细菌染成蓝色；细胞核呈蓝色；血红蛋白、嗜酸性颗粒染成粉红色；淋巴细胞胞浆、嗜 碱性粒细胞胞浆中颗粒呈蓝色；组织细胞的细胞质呈红色；完全成熟的红细胞呈粉红色。
注意事项： 1、 推片方法：取全血 3ul 左右置载玻片上，将推玻片保持与载玻片 30 度角，置于血 滴正前方，稍往后移与血滴接触，即可见血液沿推片下缘散开，再均匀沿载玻片平 面平稳向前滑动，至血液铺完血膜为止。 2、 涂片时不要太厚也不要太薄。 3、 用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。血膜要干透后才能染色，否则染色时血 膜易脱落。 4、 染色过深或过浅应调整染色时间。 5、 染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用 75%乙醇脱色 3-5 秒。 6、 染色液可重复使用。
瑞氏染色
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4、单核细胞(monocyte)
形态：胞体大，呈圆形或椭圆形；胞核形态多样，可呈 卵圆形、肾形或马蹄形，核常偏位，染色质颗粒 细而松散，故着色浅；胞质较多，呈弱嗜碱性， 常染成蓝色，内含许多细小的嗜天青颗粒
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5、淋巴细胞(lymphocyte)
形态：呈圆形或卵圆形，大小不等； 胞核呈圆形，一侧常有小凹陷，染色深；胞质 较少，环绕核周围呈一窄带，嗜碱性，呈蔚蓝色
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血 涂 片制 作：
推片 血液
载玻片
将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚 薄取决于速度和角度：快、大(厚)。 慢、小（薄）
一张满意的血涂片应厚薄均匀
头
体
尾鲜明
涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号
B 123
李 四
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血 涂 片 染色：
涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴 覆盖整个血膜1分钟
勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和 Ⅱ液充分混允静置10分钟
观察内容
• 红细胞 • 白细胞 • 血小板
对其形态、数量、分布情况进行观察
白细胞分类：一般情况计数100个白细胞，并计算出各种白细胞所 占 的比例。同时观察各种细胞的形态（大小、外形、胞质、胞核） 有无变化。
1
• 血涂片：将血液在载玻片上推制成较薄的 一层血膜。
• 待干燥后用染色液进行染色，染色液通常 选用瑞氏或瑞-姬氏。
பைடு நூலகம்
直接流水冲洗3-5分钟 （切勿先到掉染液）
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涂片经水洗干燥后用油镜 分类计数100个白细胞 李 四
4
血涂片的观察：
经染色后的血涂片先用低倍镜观察： 1.染色情况(满意、偏酸、偏碱） 2.观察细胞分布情况，选择细胞分布均匀之
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瑞氏染色液说明书
【产品名称】
瑞氏染色液
【包装规格】
货号：DM0005
单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml；
每套/盒包装规格分别为：2×20ml/盒、2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。
【预期用途】
主要用于对血细胞进行染色。
【检验原理】
瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(MethyleneBlue)组成的复合染料，各种细胞成分化学性质不同对各种染料的亲和力也不一样，如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料结合后，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和亚甲蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质；原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。
本染色液经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色，细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。
【主要组成成分】
试剂组成主要成分
1、瑞氏染液瑞氏染料、甲醇
2、磷酸盐缓冲液磷酸盐
【储存条件及有效期】
5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】
1、血细胞涂片染色：要求新鲜全血或EDTA.2K抗凝血。
2、阴道分泌物(妇科白带)涂片染色：新鲜标本离开人体涂片后，需尽快以火焰或酒精固定，以避免细胞变形。
3、骨髓涂片染色：涂片制成后，应在空气中快速摇动或扇干，防止细胞皱缩变形或固空气潮湿而溶血，不能用高温或火烤干燥。
4、脱落细胞涂片：取样本并涂片，待检涂片固定可采用自然干燥法或湿片固定法(具体操作可根据不同检体及所采用的固定液所对应的规范操作要求进行）；若采用湿片固定法，标本浸泡时间稍长些，效果会更佳；若采用湿片固定液固定标本，固定液用后需经常过滤，更换，防止细胞交叉污染。
【检验方法】
1、滴加瑞氏染液于涂片上，并让染液覆盖整个标本涂片，染色；
2、将等量的磷酸盐缓冲液滴加于瑞氏染液上面，以嘴或洗耳球使两液充分混合，染色；
3、水洗，冲洗时不能先倒掉染色液，可缓慢从玻片一端冲洗，以防有沉渣沉淀在标本上；
4、干燥、镜检。
【检验方法的局限性】
仅供形态学初检观察染色使用。
【注意事项】
1、血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀，必须充分干燥，否则在染色过程中容易脱落，以免影响染色效果。
2、染色时间须视何种标本、涂片厚薄、有核细胞多少及温度等而定。
3、pH值对染色有一定影响，载玻片应清洁、无酸碱污染，以免影响染色效果。
4、涂片染色中请勿先去除染色液或直接对涂片用力冲洗，不能先倒掉染液，以免染料沉着于涂片上。
5、染色液可重复使用，但不能多次重复，若有沉淀物应过滤后使用。
6、染色过深可用甲醇或酒精适当脱色，最好不复染。
7、如果染色过深或过浅，应调整染色时间或工作液浓度。
8、瑞氏染液用前应充分摇匀，保证染色的均一性；染色液用量应充足，勿使染色液蒸发干。
9、本产品仅用于体外诊断，应由专业人士使用及进行结果的判读。
10、使用前应详细阅读说明书，并做好个人卫生防护，在有效期内使用，生产日期、生产批号和失效日期见包装。
11、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。
【基本信息】
备案人/生产企业名称：安徽雷根生物技术有限公司
住所：淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房。