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《植物组织培养》课件PPT第1章植物组织培养基本知识
②生长周期短，繁殖率高
由于人为控制培养条件，因此生长较快，一般20—30d为一个周期。植物 材料按几何级数繁殖生产，总体来说成本低廉，且能及时提供规格一致 的优质种苗或脱病毒种苗。
③管理方便，利于工厂化生产和自动化控制
植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、湿 度、营养、激素等条件，既利于高度集约化和高密度工厂化生产，也利 于自动化控制生产。它是未来农业工厂化育苗的发展方向。它与盆栽、 田间栽培等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫害等一系列繁杂 劳动，可以大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地。
愈伤组织（callus）:在人工培养基上由外植体上形成的一
团无序生长状态的薄壁细胞。
愈伤组织
二、植物组织培养的类型
• 按培养方法分为 固体培养 液体培养 看护培养 微室培养 包埋培养
二、植物组织培养的类型
3.按培养过程分为：
• 初代培养（Primary culture）(无菌培养物)
将从植物体上分离下来的第一次培养。
4.4 组织及细胞培养生产有用物质
Arregnin和bonner在1950年首先进行了培养橡胶茎愈伤组织获 取橡胶的尝试。
近50年来飞速的发展。从400多种植物培养细胞中分离到600多种 次级代谢产物，其中60多种在含量上超过或等于其原植物，20种 以上干重超过1％。 在日本，人参细胞培养已达130600L发酵罐；德国用1000L发酵罐 培养毛地黄细胞；在我国，人参细胞培养技术也已实现产业化。 利用培养细胞的生物转化能力生产高值化合物，德国科学家进行 了出色的研究。他们在毛地黄细胞的培养中加入生物合成途径的 中间化合物毛地黄毒素和一甲基毛地黄毒素，培养细胞以几乎 100％的转化速率使之羟基化，变为医药强心剂地高辛。
植物组织培养ppt课件
问题
3
植物自然条件下的繁殖方法有哪些？ 种子繁殖 无性繁殖
4
各种形态的种子
5
种 子 和 果 实 的 产 生
无性繁殖6
植物组织培养的基本原理
7
1902年，德国植物学家哈伯兰特细胞全能性的理论是植 物组培的理论基础。
1958年，美国植物学家斯蒂瓦特等人，用胡萝卜韧皮部 的细胞进行培养，终于得到了完整植株，并且这一植株 能够开花结果，证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞 全能的预言。
结论：生长素及细胞分裂素的比例可影响细胞的脱 分化及再分化。
pH ——一般控制5.8 无菌 ——操作台、培养基、实验仪器等
2 植物组织培养过程
17
根
离体的植物器官、 组织或细胞
脱分化
（外植体）
愈 伤 组 织
芽
再分化 胚 状
植 物 体
体
植物组织培养过程示意图
18Βιβλιοθήκη ①叶片接种到培养基上②产生愈伤组织
③愈伤组织增殖
④愈伤组织开始分化
⑤愈伤组织分化出芽
⑥培养基中的试管苗
能性表达的前提，再分化是细胞全能性表达的最终体现。
二、植物组织培养技术
14
1 培养条件
MS培养基配方 单位（mg/L）
15
KNO3
1900
NH4NO3
1650
KH2PO4
170
MgSO4.7H2O
370
CaCl2.2H2O
440
Na2.EDTA
37.3
FeSO4.7H2O
27.8
盐酸硫胺素（VB1） 0.1
20世纪80年代，每一个植物细胞具有该植物的全部遗传信息，在适 当条件下可表达出该细胞的所有遗传信息，分化出植物有机体所有不同 类型细胞，形成不同类型的器官甚至胚状体，直至形成完整再生植株。
《组织培养》PPT课件
力。
整理课件
30
3、逐步添加和逐步排除的试验方法：
在植物组织分化与再生的研究中，在没有 取得可靠的分化与再生之前，往往添加各种 有机营养成分，而在取得了稳定的再生之后， 就可以逐步减少这些成分。在逐步添加时是 使试验成功，在逐步减少时是缩小范围，以 便找到最有影响力的因子，或是为了实用上 的需要竭力使培养基简化，以降低成本和利 于推广。在寻求最佳激素配比时，也经常用 到这种加加减减的简单方法。
整理课件
4
二、培养基特点
1.MS培养基：无机盐和离子浓度较高， 比较稳定的离子平衡溶液。养分数量和比 例较合适，硝酸盐含量较其他培养基高， 广泛应用于植物的器官、花药、细胞和原 生质体培养。
2.B5培养基：含有较低的铵，这个成分可 能对不少培养物生长有抑制作用，双子叶 特别是木本植物适合于B5培养基。
铁(Fe)、硼(B)、锰(Mn)、锌(Zn)、铜(Cu)、钼 (Mo)、钴(Co)、氯(Cl)。
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8
2）有机成分
有机成分（organic compound）： 指植物生长发育时必需的有机碳、、 氢、氮等物质。主要有糖、维生素、 肌醇、氨基酸等。
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①糖（sugar）
糖既可作为碳源，为培养的外植体 提供生长发育所需的碳骨架和能源外， 还具有维持培养基一定渗透压的作用。 常用蔗糖，浓度为1～5%。
4)水解酪蛋白（CH） 为蛋白质的水解物，主要成分为氨基酸， 使用浓度为100—200mg／L。受酸和酶的作用易分解，使用时要 注意。
5)其他 酵母提取液(YE)(0.01%-0.05%)，主要成分为氨基酸和维 生素类；麦芽提取液(0.01%～0.5%)、苹果和番茄的果汁、黄瓜的 果实、未熟玉米的胚乳等。遇热较稳定，大多在培养困难时使用，
植物的组织培养技术ppt
n(个)
3.1 6.1 5.3 5.0
回答下列问题： (1)按照植物旳需求量，培养基中无机盐旳元素可分为 ____________和________两类。上述培养基中，6－BA属于 ________类生长调整剂。 (2)在该试验中，自变量是________，因变量是_________， 自变量旳取值范围是________。 (3)从试验成果可知，诱导丛芽总数至少旳培养基是________ 号培养基。 (4)为了诱导该菊花试管苗生根，培养基中一般不加入 ________(填“6－BA”或“IAA”)。
①按照不同旳顺序使用这两类激素，会得到不同旳试验
成果(如下表)：
使用顺序
试验成果
先使用生长素，后使用细胞 有利于细胞分裂，但细胞
分裂素
不分化
先使用细胞分裂素，后使用 生长素
细胞既分裂又分化
同步使用
分化频率提升
②当同步使用这两类激素时，两者用量旳百分比影响植 物细胞旳发育方向。
①高：利于根的分化、抑制芽的形成 细生胞长分素裂用素量用量的比值②低：利于芽的分化、抑制根的形成
(1)配制诱导愈伤组织旳固体培养基，分装后要进行________。 接种前，要对人参根进行________。 (2)用于离体培养旳根切块，叫做________。培养几天后发觉少 数培养基被污染，若是有颜色旳绒毛状菌落，属于________ 污 染；若是有光泽旳黏液状菌落，属于________污染。 (3)用少许________酶处理愈伤组织，获取单细胞或小细胞团， 在液体培养基中进行悬浮培养，可有效提升人参皂苷合成量。 (4)人参皂苷易溶于水溶性(亲水性)有机溶剂，从培养物干粉中 提取人参皂苷宜选用________措施，操作时应采用________加 热。
植物组织培养精PPT.
• 外植体材料：薄细胞层（ 一般3~6层），在适宜 八执第、行二的 课标时准游科泳室安辖全区一旦发生火灾，立即按《紧急应变任务编组预案》的要求，实施扑救；同时，协助公安消防监督机关调查起火
原因车，辆及的处安理全善感后觉工敏作锐。的前台接待员可以就应聘者的态度发表有价值的意见。
条件下，可以获得不同的器官。 室到让顶了应部 展 聘的厅者热里进风以入分后一配，模器销拟，售工通人作过员环热可境风以，分接以配着帮器跟助的客你热户评空谈估气，他均让的匀客“地户工进参作入与”干，能燥让力室客。内户情。确境并认测呈，试螺一往旋项往状一在转项面动地试。提的料示最液他后经，阶贮 提 段槽示进进完行入了，塔以这顶后时，的将客面料户试液本人送来选到怀已装疑为置的数在问不干题多。
茎尖离体培养后，可能会出 现的反应：
① 生长太慢；
② 生长过旺，愈伤增多；
③ 生长正常；
二.植物愈伤组织培养
• 愈伤组织培养：是指诱导植物外植体产生无序生 长的薄壁细胞及对其培养的技术。
• 产生原因：经过灭菌或切割后，在适当的环境下 产生的。
• 一般薄壁细胞和形成层易形成愈伤组织。 • 特点：或疏松或致密；颜色不一；可形成一些
• 茎尖培养是切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分， 进行无菌培养。这是组织培养中用得最多的一个取 材部位。
• 根据培养目的和取材大小可分为微茎尖培养和普通 茎尖培养。微茎尖指带有1-2个叶原基的生长锥，其 长度不超过0.5mm。普通茎尖指较大的茎尖(如几 mm到几十mm)、芽尖及侧芽。
• 特点：技术简单，操作方便，茎尖容易成活，成苗 所需时间短。
水清7．分理成迅 身交速上资蒸的讯发堆，积在物极，短然的后时用间砖内头干、燥木成棍品等。支持可能不塌的物体，扩大空间。这时，一定要用衣物捂住鼻、口，防止因灰尘呛闷而造成
原因车，辆及的处安理全善感后觉工敏作锐。的前台接待员可以就应聘者的态度发表有价值的意见。
条件下，可以获得不同的器官。 室到让顶了应部 展 聘的厅者热里进风以入分后一配，模器销拟，售工通人作过员环热可境风以，分接以配着帮器跟助的客你热户评空谈估气，他均让的匀客“地户工进参作入与”干，能燥让力室客。内户情。确境并认测呈，试螺一往旋项往状一在转项面动地试。提的料示最液他后经，阶贮 提 段槽示进进完行入了，塔以这顶后时，的将客面料户试液本人送来选到怀已装疑为置的数在问不干题多。
茎尖离体培养后，可能会出 现的反应：
① 生长太慢；
② 生长过旺，愈伤增多；
③ 生长正常；
二.植物愈伤组织培养
• 愈伤组织培养：是指诱导植物外植体产生无序生 长的薄壁细胞及对其培养的技术。
• 产生原因：经过灭菌或切割后，在适当的环境下 产生的。
• 一般薄壁细胞和形成层易形成愈伤组织。 • 特点：或疏松或致密；颜色不一；可形成一些
• 茎尖培养是切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分， 进行无菌培养。这是组织培养中用得最多的一个取 材部位。
• 根据培养目的和取材大小可分为微茎尖培养和普通 茎尖培养。微茎尖指带有1-2个叶原基的生长锥，其 长度不超过0.5mm。普通茎尖指较大的茎尖(如几 mm到几十mm)、芽尖及侧芽。
• 特点：技术简单，操作方便，茎尖容易成活，成苗 所需时间短。
水清7．分理成迅 身交速上资蒸的讯发堆，积在物极，短然的后时用间砖内头干、燥木成棍品等。支持可能不塌的物体，扩大空间。这时，一定要用衣物捂住鼻、口，防止因灰尘呛闷而造成
植物的组织培养(上课用)PPT演示课件
38
（四）培养
1、愈伤组织的培养
从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。 2周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白 色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温 箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈 伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽， 必须更换培养基，进行继代培养.
39
2、愈伤组织的继代培养
45
结合录像外植体灭菌与接种操作，谈谈组织培养污染的主 要途径及怎样预防污染？
1、外植体带菌 3、接种操作时带入
2、培养基及接种 器具灭菌不彻底
4、环境不清洁
46
污染的预防措施
（一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操作规程 （四）保证接种与培养环境清洁
21
③当同时使用这两类激素时，两者用量的比 例影响植物细胞的发育方向。
生长素用量比细胞分 裂素用量
植物细胞的发育方向
比值高时
有利于根的分化、抑 制芽的形成
比值低时
有利于芽的分化、抑 制根的形成
比值适中时 促进愈伤组织的生长
22
（4）环境因素： （ pH、温度、光照）等条
件也能影响植物组织培养。菊花组织培养，一
微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不 同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物 包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
③、高等植物是光能自养型生物，为什么在植 物组织培养过程中还需要提供有机物培养基？
此时的组织或细胞为离体的，细胞所生活 的环境为液体有机物营养环境，而不能体现其 整个植物体的光能自养。
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
（四）培养
1、愈伤组织的培养
从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。 2周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白 色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温 箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈 伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽， 必须更换培养基，进行继代培养.
39
2、愈伤组织的继代培养
45
结合录像外植体灭菌与接种操作，谈谈组织培养污染的主 要途径及怎样预防污染？
1、外植体带菌 3、接种操作时带入
2、培养基及接种 器具灭菌不彻底
4、环境不清洁
46
污染的预防措施
（一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操作规程 （四）保证接种与培养环境清洁
21
③当同时使用这两类激素时，两者用量的比 例影响植物细胞的发育方向。
生长素用量比细胞分 裂素用量
植物细胞的发育方向
比值高时
有利于根的分化、抑 制芽的形成
比值低时
有利于芽的分化、抑 制根的形成
比值适中时 促进愈伤组织的生长
22
（4）环境因素： （ pH、温度、光照）等条
件也能影响植物组织培养。菊花组织培养，一
微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不 同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物 包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
③、高等植物是光能自养型生物，为什么在植 物组织培养过程中还需要提供有机物培养基？
此时的组织或细胞为离体的，细胞所生活 的环境为液体有机物营养环境，而不能体现其 整个植物体的光能自养。
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
植物组织培养ppt课件
36
三、植物组织培养的发展简史
四个阶段
探索阶段（1902-1929年） 奠基阶段（1930-1960年） 迅速发展阶段（1960-1980） 生产上广泛应用阶段(1980-今）
37
1. 探索阶段（1902-1929年）
Haberlandt：
贡献： 提出细胞全能性假说 首次进行离体细胞培养
有不同的培养反应。 （6）植物种类的差异。 一般双子叶植物比单子叶植物
及裸子植物容易。
25
4、愈伤组织（Callus）培养
①愈伤组织生长过程
在脱分化的过程中，多形成Callus, 其细胞结构无明 显极性。
• （1）诱导期：细胞准备进行分裂， 细胞大小几乎不变，
生理生化变化大，迅速合成蛋白质和核酸。
RNA
27
28
③愈伤组织的继代培养 在多数情况下，随着培养时间的延长，Callus长势
下降、褐变、分化和形态发生能力下降甚至死亡。主 要原因：染色体畸变，基因突变， 生理因素（代谢产 物），细胞或组织内激素平衡的改变，细胞对外源生 长物质的敏感性改变，培养基损耗等。
29
④愈伤组织形态发生 （1）准备：外层细胞分裂逐渐减慢并停止；内部较深
19
2 、细胞分化（Cell differentiation）
①概念
（1） 分化：是指植物体各个部分出现异质性的现象，
包括细胞分化、组织分化和器官分化。
（2）细胞分化：指同一来源的细胞逐渐产生出形态结 构、功能特征各不相同的细胞类群的过程，其结果是 在空间上细胞产生差异，在时间上同一细胞与其从前 的状态有所不同。
35
②影响细胞再分化因素： 从理论上讲，在离体培养条件下经过再分化可获 得各种
三、植物组织培养的发展简史
四个阶段
探索阶段（1902-1929年） 奠基阶段（1930-1960年） 迅速发展阶段（1960-1980） 生产上广泛应用阶段(1980-今）
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1. 探索阶段（1902-1929年）
Haberlandt：
贡献： 提出细胞全能性假说 首次进行离体细胞培养
有不同的培养反应。 （6）植物种类的差异。 一般双子叶植物比单子叶植物
及裸子植物容易。
25
4、愈伤组织（Callus）培养
①愈伤组织生长过程
在脱分化的过程中，多形成Callus, 其细胞结构无明 显极性。
• （1）诱导期：细胞准备进行分裂， 细胞大小几乎不变，
生理生化变化大，迅速合成蛋白质和核酸。
RNA
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③愈伤组织的继代培养 在多数情况下，随着培养时间的延长，Callus长势
下降、褐变、分化和形态发生能力下降甚至死亡。主 要原因：染色体畸变，基因突变， 生理因素（代谢产 物），细胞或组织内激素平衡的改变，细胞对外源生 长物质的敏感性改变，培养基损耗等。
29
④愈伤组织形态发生 （1）准备：外层细胞分裂逐渐减慢并停止；内部较深
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2 、细胞分化（Cell differentiation）
①概念
（1） 分化：是指植物体各个部分出现异质性的现象，
包括细胞分化、组织分化和器官分化。
（2）细胞分化：指同一来源的细胞逐渐产生出形态结 构、功能特征各不相同的细胞类群的过程，其结果是 在空间上细胞产生差异，在时间上同一细胞与其从前 的状态有所不同。
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②影响细胞再分化因素： 从理论上讲，在离体培养条件下经过再分化可获 得各种
植物组织培养【优质PPT】
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2、植物组织培养技术的初步形成（1930-1960年）
1933年，我国植物生理学家李继侗培养银杏胚胎，并发现银杏胚乳提取 液可促进离体胚的生长。
1937年，White发现B族维生素对离体根培养的重要性。并指出IAA对植 物生长发育的控制起重要作用。
1937,1938年，Gantheret在培养基中加入上述生长因子，使得柳树形成层 诱导形成的愈伤组织连续生长。Nobecomt对烟草种间杂种茎段的形成层细 胞培养也得到了类似的结果。
（3）液体培养(Liquid Culture)：震荡、旋转或静置培 养。
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固体培养： 液体培养
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三、植物组织培养技术的理论基础
植物细胞的全能性(Plant cellular totipotency）
从理论上讲，植物体的每个生活细胞都具有该 植物体的全部遗传信息，在特定的离体培养条件 下，具有发育成完整植株的潜在能力。
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3、植物组织培养技术的发展（1960年以后）
1960年，Morel利用兰花茎尖培养对兰花进行营养繁殖；
1962年，Murashige和Skoog开发出最著名的Murashige和Skoog培养基 （MS基本培养基），并被后来广泛采用的基本培养基。
1964年，印度人Guha和Maheshwari利用曼陀罗花粉培养获得第一例 单倍体植株。从而开辟了单倍体育种技术。
细胞团培养
茎尖分生组织培养 原生质体培养
2021/5/27
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矮牵牛茎尖离体培养培养
2021/5/27
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大蒜根尖培养及植株
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待培养基冷却至50℃～ 60℃时，分装到组培瓶 中，每瓶25～30mL，拧 上盖子。
（图8，10，11）
注：瓶盖上的固定滤膜装 置要拧紧，防止滤膜脱落。 （图9）
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（ 图 ）
（ 图 ）
全程服务 实验无忧8
9
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（图10）
（图11）
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全程服务 实验无忧
植物组培实验操作指导
北京川布兰生物技术开发有限公司 技术部
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全程服务 实验无忧
一、培养基制备
配制培养基需要的仪器设备 电子天平、烧杯、电磁炉或微波炉、不 锈钢盆、移液器、吸头和吸头盒、高压 蒸汽灭菌锅、组培瓶、量筒、药勺、玻 璃棒、植物组织培养试剂盒。（见下图）
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（ 图 ）
（ 图 ）
全程服务 实验无忧22
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接种结束后把瓶口和 瓶盖在酒精灯火焰灭 菌2 ～3秒后盖上瓶 盖，放在光照培养架 或者恒温光照培养箱 内培养。（图30，31）
培养条件：25℃室温 光照培养12h，黑暗 培养12h。
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（图30） （图31） 全程服务 实验无忧23
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（图15） 全程服务 实验无忧14
2、双手消毒
点燃酒精灯，使用酒精 棉球擦拭双手，尽量擦 拭到手指缝和指甲盖位 置。（图16，17）
注：如果用火柴点酒精 灯一定要让火柴熄灭后 方可放入废液缸，以免 点燃使用过的酒精棉球 引起火灾。
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（ 图 ）
（图4）
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（图4） 全程服务 实验无忧6
3、添加激素调节pH
按照培养的不同植物以 及不同外植体添加合适 的激素（图5）（矮牵牛 腋芽转接不需加激素）， 调节pH值至6.0。（图6、 7）
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（ 图 ）
（ 图 ）
全程服务 实验无忧776来自4、分装（ 图 ）
全程服务 实验无忧15
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3、接种器械消毒
先使用酒精棉球对解剖 剪（解剖刀）和镊子进 行擦拭，然后放于酒精 灯火焰进行灼烧，剪刀 的交叉部位需张开活动 以便充分灼烧。灼烧灭 菌后放于两面板或试管 架上冷却。（图17，18， 19，20）
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（ 图 ）
（ 图 ） 全程服务 实验无忧16
把无菌苗按芽剪成“丫”字型，只留一个腋芽 和叶柄。（图25，26，27）
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全程服务 实验无忧
（图21、22、23、24）
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全程服务 实验无忧
修剪叶片时先四周剪平，剪出伤口，叶子较大 的话再剪开，最后剪成边长0.5cm大小即可。
修剪茎段即剪取两个腋芽之间的部分。
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（图19） 客服热线：4006965155
（图20） 全程服务 实验无忧
4、修剪无菌苗
把装有无菌苗的组培瓶口在酒精灯火焰周围灭 菌几秒钟，打开瓶盖，用镊子夹出无菌苗放于 无菌培养皿中，盖好培养皿盖子。（图21，22， 23，24） （注：瓶口灭菌时间不宜过长，以 免烧坏瓶口）
剪去无菌苗的叶子，只留下茎段和叶柄。
三、移栽
移栽到花盆或花圃、也可移栽至 小型无土栽培系统。
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全程服务 实验无忧
1、炼苗
挑选长势较好而且长 出根系的无菌苗，在 移栽培养的环境中先 闭瓶放置3天，再打 开瓶盖放置3天，让 无菌苗适应室内的温 度和湿度。（图32）
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（ 图 ）
全程服务 实验无忧25
超净工作台、光照培养架或恒温 光照培养箱、解剖剪、镊子、两 面板（试管架）、酒精灯、火柴 （打火机）、酒精棉球、无菌培 养皿、废液缸。
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全程服务 实验无忧
接种培养需要的仪器设备
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全程服务 实验无忧
1、超净台灭菌
打开超净工作台内的紫 外灯和风机（开到低速 档），把实验用到的相 关器械放进超净工作台 紫外照射灭菌20 ～ 30min。灭菌结束后关 闭紫外灯，继续吹风 5min去除臭氧的味道。 （图15）
5、灭菌及冷却
把分装好的组培瓶和培 养皿放于高压蒸汽灭菌 锅中121℃灭菌20分钟。 （图12，13，14）
灭菌结束后取出放置室 温冷却凝固备用。
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（全图程12服）务 实验无忧10
（图13）
（图14）
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全程服务 实验无忧
二、无菌苗接种培养
全程服务 实验无忧
培养基制备所需仪器设备及耗材
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全程服务 实验无忧
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全程服务 实验无忧
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全程服务 实验无忧
2、加热煮沸
将溶解的培养基用电磁 炉加热煮沸至琼脂全部 溶解，溶液呈澄清态。 少量的培养基可用烧杯 放于微波炉加热。煮沸 溶解后添加蒸馏水补充 加热损失的水分。
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2、移栽到花盆
炼苗结束后把无菌 苗从组培瓶中取出， 去净培养基，把组 培苗移栽到蛭石和 草炭土的混合基质 中。（图33，34， 35，36）
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（ 图 ）
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（图35） 客服热线：4006965155
（图36） 全程服务 实验无忧
注意：使用叶片为材料时，挑选叶片较大植株； 使用茎段为材料时挑选茎段较长的植株，方便 修剪。
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（图25、26、27） 全程服务 实验无忧
5、接种培养
把未接种培养基 瓶口在酒精灯火 焰灭菌2 ～3秒后 打开瓶盖，用镊 子夹取腋芽或叶 片接种于培养瓶 内。叶片平铺在 培养基上，页面 朝上，腋芽直接 插入培养基即可。 （图28，29）
3、成苗开花
在培养的过程中要经 常浇水或营养液，温 度维持在25℃ ～ 30℃，植株容易开花。 （图37）
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（图37） 全程服务 实验无忧28
实验结束 Thank you!
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小飞守角制作
（图8，10，11）
注：瓶盖上的固定滤膜装 置要拧紧，防止滤膜脱落。 （图9）
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（ 图 ）
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（图10）
（图11）
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植物组培实验操作指导
北京川布兰生物技术开发有限公司 技术部
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一、培养基制备
配制培养基需要的仪器设备 电子天平、烧杯、电磁炉或微波炉、不 锈钢盆、移液器、吸头和吸头盒、高压 蒸汽灭菌锅、组培瓶、量筒、药勺、玻 璃棒、植物组织培养试剂盒。（见下图）
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（ 图 ）
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接种结束后把瓶口和 瓶盖在酒精灯火焰灭 菌2 ～3秒后盖上瓶 盖，放在光照培养架 或者恒温光照培养箱 内培养。（图30，31）
培养条件：25℃室温 光照培养12h，黑暗 培养12h。
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（图30） （图31） 全程服务 实验无忧23
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（图15） 全程服务 实验无忧14
2、双手消毒
点燃酒精灯，使用酒精 棉球擦拭双手，尽量擦 拭到手指缝和指甲盖位 置。（图16，17）
注：如果用火柴点酒精 灯一定要让火柴熄灭后 方可放入废液缸，以免 点燃使用过的酒精棉球 引起火灾。
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（ 图 ）
（图4）
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（图4） 全程服务 实验无忧6
3、添加激素调节pH
按照培养的不同植物以 及不同外植体添加合适 的激素（图5）（矮牵牛 腋芽转接不需加激素）， 调节pH值至6.0。（图6、 7）
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（ 图 ）
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全程服务 实验无忧776来自4、分装（ 图 ）
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3、接种器械消毒
先使用酒精棉球对解剖 剪（解剖刀）和镊子进 行擦拭，然后放于酒精 灯火焰进行灼烧，剪刀 的交叉部位需张开活动 以便充分灼烧。灼烧灭 菌后放于两面板或试管 架上冷却。（图17，18， 19，20）
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（ 图 ） 全程服务 实验无忧16
把无菌苗按芽剪成“丫”字型，只留一个腋芽 和叶柄。（图25，26，27）
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（图21、22、23、24）
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修剪叶片时先四周剪平，剪出伤口，叶子较大 的话再剪开，最后剪成边长0.5cm大小即可。
修剪茎段即剪取两个腋芽之间的部分。
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（图19） 客服热线：4006965155
（图20） 全程服务 实验无忧
4、修剪无菌苗
把装有无菌苗的组培瓶口在酒精灯火焰周围灭 菌几秒钟，打开瓶盖，用镊子夹出无菌苗放于 无菌培养皿中，盖好培养皿盖子。（图21，22， 23，24） （注：瓶口灭菌时间不宜过长，以 免烧坏瓶口）
剪去无菌苗的叶子，只留下茎段和叶柄。
三、移栽
移栽到花盆或花圃、也可移栽至 小型无土栽培系统。
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1、炼苗
挑选长势较好而且长 出根系的无菌苗，在 移栽培养的环境中先 闭瓶放置3天，再打 开瓶盖放置3天，让 无菌苗适应室内的温 度和湿度。（图32）
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超净工作台、光照培养架或恒温 光照培养箱、解剖剪、镊子、两 面板（试管架）、酒精灯、火柴 （打火机）、酒精棉球、无菌培 养皿、废液缸。
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接种培养需要的仪器设备
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1、超净台灭菌
打开超净工作台内的紫 外灯和风机（开到低速 档），把实验用到的相 关器械放进超净工作台 紫外照射灭菌20 ～ 30min。灭菌结束后关 闭紫外灯，继续吹风 5min去除臭氧的味道。 （图15）
5、灭菌及冷却
把分装好的组培瓶和培 养皿放于高压蒸汽灭菌 锅中121℃灭菌20分钟。 （图12，13，14）
灭菌结束后取出放置室 温冷却凝固备用。
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（全图程12服）务 实验无忧10
（图13）
（图14）
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二、无菌苗接种培养
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培养基制备所需仪器设备及耗材
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2、加热煮沸
将溶解的培养基用电磁 炉加热煮沸至琼脂全部 溶解，溶液呈澄清态。 少量的培养基可用烧杯 放于微波炉加热。煮沸 溶解后添加蒸馏水补充 加热损失的水分。
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2、移栽到花盆
炼苗结束后把无菌 苗从组培瓶中取出， 去净培养基，把组 培苗移栽到蛭石和 草炭土的混合基质 中。（图33，34， 35，36）
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（图35） 客服热线：4006965155
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注意：使用叶片为材料时，挑选叶片较大植株； 使用茎段为材料时挑选茎段较长的植株，方便 修剪。
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（图25、26、27） 全程服务 实验无忧
5、接种培养
把未接种培养基 瓶口在酒精灯火 焰灭菌2 ～3秒后 打开瓶盖，用镊 子夹取腋芽或叶 片接种于培养瓶 内。叶片平铺在 培养基上，页面 朝上，腋芽直接 插入培养基即可。 （图28，29）
3、成苗开花
在培养的过程中要经 常浇水或营养液，温 度维持在25℃ ～ 30℃，植株容易开花。 （图37）
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