扫描电镜样品制备程序
扫描电镜制样
扫描电子显微镜(SEM)常规样品制备技术SEM常规制样方法（一）——试样的取材、固定、脱水和置换一、实验目的掌握扫描电镜制样过程：从取材、固定、脱水、置换、干燥、喷涂这一过程中样品怎样保持生活状态，从而得出接近生活状态的样品。
二、实验原理不论动物或植物组织，要求取材时操作必须快速，组织表面要清洁，必要时需超声波清洗，原理同TEM取材，但需强调的是SEM观察表面结构，所以应注意表面结构的清洁、完整和电镜下反应真实的形貌。
取材时动作要快、轻、准、大小在1mm-1cm之间，所用的器械要锋利、洁静，避免任何牵拉和挤揉样品表面的损伤，常用的固定剂有2-4%戊二醛和1%锇酸。
三、实验器材样品（动物或植物）、双面刀片、培养皿、l.5ml离心管、牙签、2-4%戊二醛、1%锇酸、0. 1M PBS缓冲液，乙醇、乙酸异戊酯。
四、实验步骤1、取材要求动作轻、迅速、准确，为了保持生活状态，应在固定前清洗掉表面杂质，即，迅速将标本放在PBS缓冲液中冲洗，也可超声波器中超10s-30s，使样品所带的污物除去（如：气管内壁上的粘液、植物叶上的灰尘等）。
2、固定（前固定）经过清洗的样品迅速投入2-4%戊二醛囤定液中，间歇振荡且室温固定约2-4小时即可。
样品固定的目的：使样品细胞的微细结构完整真实地保存下来。
如果样品没有很好地固定，那么样品在脱水时可能变形，破坏了样品的生活状态，也就是说，固定不好的材料，电镜下不能反映真实结构，所以这一步很重要。
3、冲洗0. 1M PH7.2 PBS缓冲液洗：30分钟中间换3-4次，因戊二醛与锇酸反应生成细微的沉淀，所以在后固定之前，用0. IM PBS缓冲液洗去多余的戊二醛之后，样品才可能进入锇酸固定液。
4、后固定：1%四氧化锇后固定1-2小时。
5、冲洗：重蒸水冲洗30分钟中间换3-4次，因四氧化锇与乙醇反应，所以在脱水前充分洗去残留的四氧化锇，样品才能进行脱水。
6、脱水脱水剂为乙醇，室温进行为了减少人工损伤，需要梯度脱水：30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%，每级15-20分钟，如果是动物样品，脱水时间可5-10分钟，脱水要充分完全地进行直到除尽样品中的水份为止，最后100%乙醇要重复2-3次，保证样品绝对无水。
利用聚焦离子束双束扫描电镜制备透射样品的主要流程
利用聚焦离子束双束扫描电镜制备透射样品的主要流程一、引言透射电子显微镜是一种高分辨率的显微镜，能够观察到物质的原子结构，广泛应用于材料科学、生物学等领域。
制备透射样品是使用透射电子显微镜进行观察的前提，其中聚焦离子束双束扫描电镜是一种常用的制备工具。
本文将详细介绍利用聚焦离子束双束扫描电镜制备透射样品的主要流程。
二、实验步骤1. 样品准备首先需要准备待制备的样品，通常情况下需要将样品切割成薄片或者薄膜。
对于不易切割或者较硬的材料，可以使用机械切割或者离子切割等方法进行处理。
2. 预处理将待制备的样品进行表面清洗和抛光处理，以保证样品表面平整光滑，并且去除可能存在的污染物和氧化物等。
3. 聚焦离子束预处理将经过预处理后的样品放入聚焦离子束双束扫描电镜中，进行聚焦离子束预处理。
该步骤的目的是利用聚焦离子束对样品表面进行刻蚀和清洗，以去除表面污染物和氧化物等，并且形成平整的表面。
4. 制备透射样品在聚焦离子束预处理完成后，需要进行透射样品的制备。
该步骤通常使用聚焦离子束扫描电镜中的离子束切割技术，将样品切割成薄片或者薄膜。
在切割过程中需要控制切割深度和角度等参数，以保证切割出来的样品厚度均匀，并且不会出现断层或者裂纹等缺陷。
5. 透射样品清洗将制备好的透射样品进行清洗处理，以去除可能存在的污染物和氧化物等。
通常情况下可以使用乙醇、异丙醇、甲苯等有机溶剂进行清洗。
6. 透射样品检测制备好的透射样品需要进行检测，以确认其厚度和质量是否符合要求。
通常情况下可以使用扫描电镜或者原子力显微镜等技术进行检测。
7. 透射样品贴片将制备好的透射样品贴在透射电子显微镜的网格上，以便于进行观察。
在贴片过程中需要注意避免产生气泡和皱纹等缺陷。
8. 透射样品观察将贴好的透射样品放入透射电子显微镜中，进行观察。
在观察过程中需要控制电子束的强度和聚焦度等参数，以保证图像清晰度和分辨率。
同时需要避免对样品产生损伤或者烧毁等情况。
三、结论通过以上步骤可以制备出高质量的透射样品，并且利用透射电子显微镜进行高分辨率的观察。
场发射扫描电镜的样品制备和操作步骤
场发射扫描电镜的样品制备和操作步骤场发射扫描电镜（Field Emission Scanning Electron Microscopy）是一种高分辨率的电子显微镜技术，可用于观察和分析各种材料的表面形貌和微观结构。
为了获得清晰的显微图像，样品制备和操作步骤非常重要。
一、样品制备1. 样品的选择：场发射扫描电镜适用于不同种类的材料，如金属、陶瓷、聚合物等。
选择合适的样品很关键，它应具备研究对象的特性，并且能够承受电子束的辐照。
2. 样品的固定：为了保持样品的形状和结构不变，通常需要将其进行固定。
对于固态材料，可以使用金属夹片或导电胶进行固定。
对于液态材料，可以将其冷冻或凝胶化，以保持其形状。
3. 样品的切割和打磨：有时候，需要将样品切割成适当的尺寸，以便放入样品架中。
这可以通过使用金刚石切割机、电解或机械研磨仪器等设备来完成。
4. 样品的真空处理：在将样品放入场发射扫描电镜前，通常需要将其进行真空处理。
这可以通过将样品放入真空干燥器中、在低压下进行加热或冷冻干燥来完成。
真空处理有助于去除空气中的水分和气体，以减小背景干扰。
二、操作步骤1. 打开电镜系统：在开始操作前，需要将场发射扫描电镜系统打开并进行预热。
预热时间通常需要几十分钟，以保证系统内部达到稳定的工作温度。
2. 放置样品：将样品放置在样品架上，并确保其良好接触。
对于粉末状样品，可以使用导电胶将其固定在样品支架上。
对于固态样品，可以使用金属夹片固定在样品架上。
3. 调整显微镜参数：通过调整电子束能量、聚焦、工作距离等参数，来优化扫描电子显微镜的成像质量。
这些参数的选择取决于样品的特性和所需的分辨率。
4. 开始观察：一切准备就绪后，可以开始观察样品。
通过控制电子束的扫描和探测系统，可以获得样品的表面形貌和微观结构的信息。
在观察过程中，要注意避免样品表面的污染和损坏。
5. 数据分析：场发射扫描电镜获得的图像可以进一步进行数据分析。
可以通过对图像进行增强、测量尺寸和形状、进行结构分析等手段，来得到更详细的样品信息。
(完整)扫描电镜样品制备程序
(完整)扫描电镜样品制备程序扫描电镜样品制备程序一、固定：戊二醛-锇酸双固定法1．2.5%戊二醛（试剂1）固定4小时（或者过夜)2．0.1M 磷酸缓冲液（试剂2)清洗3次,每次15-30分钟3．1％锇酸（试剂3)固定2-4小时4．0。
1M 磷酸缓冲液（试剂2）清洗3次，每次15分钟二、脱水：乙醇系列1．30%乙醇 15－20分钟2．50％乙醇 15－20分钟3．70％乙醇 15－20分钟4．80％乙醇 15－20分钟5．90%乙醇 15－20分钟6．95%乙醇 15－20分钟7。
100%乙醇两次每次15-20分钟三、置换：乙酸异戊酯2次，每次15分钟（或过夜）。
四、干燥：临界点干燥五、离子溅射金六、扫描电镜观察附注：试剂配置试剂1:2.5%戊二醛取0.2M磷酸氢二钠40.5mL（A液），0.2M磷酸二氢钠9。
5mL（B液)，混合均匀（即0。
2M磷酸盐缓冲液 pH7.4），加入10mL浓度为25％的戊二醛，用超纯水稀释至100mL。
试剂2：0。
1M 磷酸缓冲液（pH 7.4）A液：0。
2M磷酸氢二钠称取3。
561g Na2HPO4.2H2O（或者5。
365g Na2HPO4.7H2O); 或7.164g Na2HPO4.12H2O），溶于100mL双蒸水中.B液：0.2M磷酸二氢钠称取2。
760g NaH2PO4。
H2O(或者3.121g NaH2PO4。
2H2O），溶于100mL双蒸水中。
量取A液36.0mL， B液14。
0mL,混合均匀后用双蒸水稀释至100mL，得0。
1M 磷酸缓冲液（pH 7.4）。
试剂3:1％锇酸将2％的锇酸溶液与0。
1M磷酸盐缓冲溶液（pH 7.4)等体积混合,得1％锇酸。
注意：该操作在通风橱中进行。
扫描电镜样品制备
3、清洗：对于一些表面凹凸不平较厉害，且粘有许
多杂质的样品，在固定的前后都要进行彻底的清洗，以 免影响成像的质量。
三种清洗方法——
(1)蛋白酶消化法：这种方法比较简便，适用于易清洗的 样品，步骤如下：
(3)如果图像的质量不行，可以改用导电胶粘样品和适当喷 涂。
2、活体样品的直接观察法：对于一些体积较小，且含
水分少的活的昆虫类等样品，如：蚊、螟、蚁、蛾等，也 可以省略化学固定等一系列步骤，使之在生活状态下就可 用扫描电镜观察。具体步骤如下：
(1)取样：不要碰伤样品。 (2)清洗：用生理盐水或PBS洗1—3次(不要致死样品、清
高锰酸钾后固定 脱水：丙酮，叔丁醇、乙腈 干燥：自然干燥、真空干燥、液体CO2临界点干燥
法、冷冻干燥法 样品的导电处理：金属镀膜法（真AgNO3、 醋酸铀、柠檬酸铅、重铬酸钾样品表面离子化 或产生导电性金属化合物）
1、临界点干燥
(一)临界点干燥仪的结构——
临界点干燥(Critical Point Drying，CPD)是当前最 常用的一种方法。(图)
有多种临界点干燥仪，如：Anderson制作的和田中敬 一制作的旧式临界点干燥仪；较新型的日本电子HCP一4、 Bomar SPC、Parr 4770；以及日立HCP—l、HCP一2临界点 干燥仪等。(图),
不同的物质有各自的临界点、临界压力和临界密度。物
理实验证明，某物质在其气液面消失的状态下，表面 张力作用消失，分子之间的内聚力等于零。
临界点干燥仪的设计就依据了这种物理性质。
2 ．选择干燥剂：
考虑到生物样品有限的承受力，一般要选择低温和低 压临界点的干燥剂。
扫描电镜SEM样品制备
二、实验用品
1. 材料
2.
植物的的根、茎、叶或动物的脏器等。
3. 2. 试剂
4.
丙酮、乙醇、2％戊二醛溶液、1％锇酸、
磷酸缓冲液、醋酸异戊酯、液体二氧化碳、导
电胶等。
5. 3. 器材
6.
扫描电镜、 临界点干燥法、真空喷镀仪、
6. 样品的干燥
常规临界点干燥法。
临界点干燥法
• 临界点干燥法是一种消除了物相界面(液相／气相)，也就是 消除了表面张力来源的干燥方法。这种方法由于没有表面 张力的影响，所以样品不易收缩和损伤。具体处理步骤如 下：
• 装样： 将样品从醋酸异戊酯中挑入(或倒入)样品笼中，用 滤纸吸去样品笼外围的醋酸异戊酯，然后连笼移入仪器的 样品杯(高压容器)内，盖上盖并拧紧以防漏气。(注：在装 样前，应先打开仪器电源，将温度调节设定在0℃处预冷 10～15min，以保证液态二氧化碳有足够量进入样品杯中)。
• 排气：在保持温度不变的条件下(即不关电源)，打开流量 计的排气阀门，以1.0～1.51／min的速度排气(速度慢些 更好)。约经45～60min后，排气完毕，样品杯的压力下降 到零，将温度调节至室温约5rain后，即可取出样品装台镀 膜(若不能立即装台，应置于干燥器内保存)。
临界点干燥操作时的注意事项： • 在样品放进样品杯前，样品杯应预先冷却至0～10℃。 • 样品不宜过湿，但也不能让其表面干涸，应在半干半湿时
离子溅射镀膜法:
在低真空中进行辉光放电时，由于离子冲击，阴极金 属物质有飞溅现象称为溅射。利用离子溅射仪对样品进行 金属镀膜的方法，称为溅射镀膜法。溅射镀膜法的装置很 简单，主要由真空部分(真空泵)和溅射部分(真空罩)组成， 在真空罩内装有阴极和阳极，阴极对着阳极的一面装有用 于溅射用的金属靶(黄金靶、铂靶、白金靶或钯靶等)，样 品放在阳极的样品座上面。当真空罩内的真空度抽到10～ 1Pa时，在阴极与阳极之间加上1000～3000V的直流电压， 两极之间产生弧光放电的电场。在电场的作用下，罩内残 余的气体分子被电离为正离子和电子，正离子被阴极吸引 轰击金属靶，激发出金属颗粒和电子，并被阳极吸引附着 在样品表面而形成金属导电膜。
环境扫描电镜操作流程
环境扫描电镜操作流程英文回答：Scanning Electron Microscopy (SEM) is a powerful tool used to analyze the surface of materials at a high resolution. It allows us to observe the morphology and topography of samples in great detail. In this response, I will outline the step-by-step process of conducting an SEM analysis.1. Sample preparation: The first step is to prepare the sample for analysis. This involves cleaning the sample and ensuring it is dry. The sample is then mounted onto a conductive sample holder, such as a metal stub, using a conductive adhesive or carbon tape.2. Loading the sample: The sample holder is then placed in the SEM chamber. The chamber is a vacuum environment, so it is important to ensure the sample is properly sealed to prevent air leaks. Once the sample is loaded, the chamberis closed and the vacuum is established.3. Adjusting the parameters: Before starting the analysis, the operator needs to set the appropriate parameters for the SEM. This includes adjusting the acceleration voltage, beam current, and working distance. These parameters will depend on the specific requirements of the analysis and the type of sample being examined.4. Imaging the sample: Once the parameters are set, the operator can start imaging the sample. The electron beam is scanned across the sample surface, and the secondary electrons emitted from the sample are collected and used to generate an image. The operator can adjust the magnification and focus to obtain the desired level of detail.5. Analyzing the results: After capturing the images, the operator can analyze the data. This may involve measuring the dimensions of features, identifying the composition of different areas, or studying thedistribution of elements. Specialized software can be usedto enhance the images and perform quantitative analysis.6. Reporting and interpretation: Finally, the results of the SEM analysis are reported and interpreted. The operator may need to provide a detailed description of the sample, explain the significance of the findings, and draw conclusions based on the observations. The results can be used in various fields, such as materials science, biology, and forensics.中文回答：环境扫描电镜（SEM）是一种用于高分辨率分析材料表面的强大工具。
扫描电镜细胞样品制备步骤
扫描电镜细胞样品制备步骤嘿，咱今儿就来讲讲扫描电镜细胞样品制备那些事儿哈！
你想想看，细胞那么小的玩意儿，咱要想好好观察研究它们，可得下一番功夫呢！就像咱要给一个小娃娃打扮得漂漂亮亮去参加重要活动一样。
首先呢，得把细胞好好地收集起来。
这就好比去果园摘果子，得小心翼翼地把果子从树上摘下来，不能弄伤了它们。
咱得用合适的方法把细胞从它们生长的地方轻轻地取出来，可不能太粗鲁啦！
然后呢，就是给细胞洗个澡啦！把它们身上那些不需要的杂质啥的都洗掉，让它们干干净净的。
这就像是咱自己洗澡一样，把身上的脏东西都洗掉，清清爽爽的。
接下来，就是固定啦！这可重要得很呢！就好像给细胞穿上了一件坚固的铠甲，让它们能保持住自己的形态，不会东倒西歪的。
不然等会儿咱观察的时候，它们都变形了，那可咋整呀！
再之后，就是脱水啦！把细胞里面多余的水分都去掉，就像咱把湿漉漉的衣服晾干一样。
这一步可得仔细着点儿，不能让细胞受损哦！
接着呢，是干燥啦！让细胞处在一个干燥舒适的环境里，这样它们才能好好地被我们观察呀！
再往下，就是镀膜啦！这就好像给细胞披上了一层神秘的外衣，让它们在电镜下能更好地显现出来。
最后，就可以把制备好的细胞样品放到扫描电镜里面去观察啦！哇塞，你能想象到吗，通过电镜看到细胞的那一刻，就好像打开了一个微观世界的大门，里面有着无数的奥秘等着我们去探索呢！
你说这是不是很神奇呀？咱通过这一步步的操作，就能看到细胞的各种奇妙之处啦！所以呀，可别小瞧了这扫描电镜细胞样品制备的步骤哦，每一步都马虎不得呢！咱得像对待宝贝一样精心地去处理这些细胞，这样才能得到最准确、最有价值的观察结果呀！这可不是闹着玩的事儿呢！大家可得认真对待哟！。
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扫描电镜样品制备程序
一、固定：戊二醛-锇酸双固定法
1．2.5%戊二醛（试剂1）固定4小时（或者过夜）
2．0.1M 磷酸缓冲液（试剂2）清洗3次，每次15-30分钟
3．1%锇酸（试剂3）固定2-4小时
4．0.1M 磷酸缓冲液（试剂2）清洗3次，每次15分钟
二、脱水：乙醇系列
1．30%乙醇15－20分钟
2．50%乙醇15－20分钟
3．70%乙醇15－20分钟
4．80％乙醇15－20分钟
5．90%乙醇15－20分钟
6．95%乙醇15－20分钟
7.100%乙醇两次每次15-20分钟
三、置换：
乙酸异戊酯2次，每次15分钟（或过夜）。
四、干燥：
临界点干燥
五、离子溅射金
六、扫描电镜观察
附注：试剂配置
试剂1：2.5%戊二醛
取0.2M磷酸氢二钠40.5mL（A液），0.2M磷酸二氢钠9.5mL（B液），混合均匀（即0.2M磷酸盐缓冲液pH7.4），加入10mL浓度为25%的戊二醛，用超纯水稀释至100mL。
试剂2：0.1M 磷酸缓冲液（pH 7.4）
A液：0.2M磷酸氢二钠
称取3.561g Na2HPO4.2H2O（或者5.365g Na2HPO4.7H2O）; 或7.164g Na2HPO4.12H2O)，溶于100mL双蒸水中。
B液：0.2M磷酸二氢钠
称取2.760g NaH2PO4.H2O（或者3.121g NaH2PO4.2H2O），溶于100mL双蒸水中。
量取A液36.0mL, B液14.0mL，混合均匀后用双蒸水稀释至100mL，得0.1M 磷酸缓冲液（pH 7.4）。
试剂3：1%锇酸
将2%的锇酸溶液与0.1M磷酸盐缓冲溶液（pH 7.4）等体积混合，得1%锇酸。
注意：该操作在通风橱中进行。