基因工程作业题及答案6页
基因工程习题+答案
第一章绪论名词解释：1.基因操作：将在细胞外产生的核酸（物质）分子插入到病毒，质粒或其它载体系统中，再整合到特定的宿主中，从而形成一种新的可连续繁殖的有机体。
2.间断基因：序列中间插入有与氨基酸编码无关的DNA间隔区，使一个基因分隔成不连续的若干区段。
我们称这种编码序列不连续的基因为间断基因。
3.启动子：DNA分子可以与RNA聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。
4.亚克隆：当初始克隆中的外源DNA片段较长，含有许多目的基因以外的DNA片段时，在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行，将目的基因所对应的一小段DNA找出来，这个过程叫“亚克隆”。
填空题：1.基因操作的核心部分是基因克隆，基因克隆的基本要点有（克隆基因的类型），（受体的选择）和（载体的选择）。
2.（基因）是遗传物质的基本单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。
它可以是连续的，也可以是（不连续的）；可以是（DNA），也可以是RNA；可以存在于染色体上，也可以（存在于染色体之外如质粒、噬菌体）。
3.基因操作并不是一个法律概念，除了包括基因克隆外，还包括基因的（表达）、（调控）、（检测）和（改造）等与基因研究相关的内容。
4.启动子是指（基因转录过程中控制起始的部位）。
通常一个基因是否表达，（转录起始）是关键的一步，是起决定作用的。
在转录过程中，启动子还是（RNA聚合酶）的结合位点。
5.原核生物的RNA聚合酶主要由两部分组成：（核心酶）和（σ因子），其中σ-因子并不参与RNA的合成，它的作用主要是（识别要转录的起始位点）。
6.从（启动区）到（终止区）的这一段距离称为一个转录单位，或者一个转录产物，其中可包括一个或者多个基因。
7.转录终止子主要有两种，一种是（依赖ρ因子），另一种是（不依赖ρ因子）。
8.基因的书写方式，通常是写出的DNA序列总是与（mRNA）相同的那条链，方向是从（5'）到（3'）。
对于碱基的位置，一般自转录起始点向两个方向编号，其中转录起始点定为（+1），（在起始点上游第一个碱基）定为-1。
(0589)《基因工程》网上作业题及答案
（0589）《基因工程》网上作业题及答案1：第一次作业2：第二次作业3：第三次作业4：第四次作业5：第五次作业1：[论述题]一、名词解释1、限制性核酸内切酶；2、基因文库；3、cDNA文库；4、RFLP；5、核酸探针；6、转录二、简答题1、试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素？2、何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？3、什么叫基因工程（Gene Engineering），试从理论和技术两个方面谈谈Gene Engineering 诞生的基础？4、抗性基因是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？5、Y AC 载体具有什么样的功能性元件？为什么它在克隆大片段时具有很大的优越性？三、论述题1、分析比较琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的异同点？参考答案：一、名词解释1、DNA重组：是指用酶学方法将不同来源的DNA进行切割、连接，组成一个新的DNA 分子的过程。
2、克隆：原指一个亲本细胞经无性繁殖产生无数个相同细胞的子代群体的过程。
3、DNA克隆：是指将重组DNA分子导入到合适的受体细胞中，使其扩增和繁殖，以获得大量的相同的DNA分子，又称分子克隆或基因克隆。
4、目的基因：要分离和克隆的相应基因常称为目的基因。
因目的基因片段需插入载体，导入宿主细胞内进行复制或表达，所以对宿主细胞DNA而言，又称它为外源性基因或外源性DNA。
5、基因载体：能够携带外源DNA进入受体细胞内进行复制或表达的DNA分子，被称为基因载体。
6、质粒：是独立于细菌染色体之外，能自主复制的共价闭合环状双链DNA。
二、简答题1、答：（1）限制性核酸内切酶：识别并特异切割DNA碱基序列；（2）DNA polⅠ：催化缺口平移，制备高比度DNA探针；（3）Klenow片段：合成cDNA第二条链，补齐或标记双链DNA3′端；（4）TaqDNA聚合酶：DNA体外扩增(PCR)；（5）逆转录酶：催化合成cDNA；(6) T4DNA 聚合酶：聚合补平或标记DNA平末端或3′凹端等；（7）DNA连接酶：催化2条DNA链之间形成磷酸二酯键；（8）大肠杆菌DNA连接酶：应用于黏端DNA或切口间连接；（9）T4DNA连接酶：应用于黏性或平末端DNA的连接；（10）末端脱氧核苷酸转移酶：给载体或cDNA加上互补的同聚尾、加标记物；（11）碱性磷酸酶：防止载体自身连接、32P标记5′端；（12）T4多核苷酸激酶：5′端磷酸化、5′端标记放射性核素。
(完整版)基因工程原理练习题及其答案
基因工程原理练习题及其答案一、填空题1．基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
2．基因工程的两个基本特点是：(1)____________，(2)___________。
3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和__________。
4．碱裂解提取溶液I中的葡萄糖的作用________________、_______________、______________________________。
5．同一质粒不同构型在电泳过程中迁移速率为。
6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。
7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。
8．限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。
9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：(1)____________；(2)________________的活性。
10．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。
11．EGTA是____________离子螯合剂。
12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。
13．切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。
14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。
基因工程练习题带答案
基因工程练习题一、单项选择题1．在基因工程中，切割载体和含有目的基因的DNA片段中，一般需使用A.同种限制酶B.两种限制酶C.同种连接酶D.两种连接酶2．基因工程常用的受体有①大肠杆菌②枯草杆菌③结核杆菌④动植物细胞A.①②③④B.①②③C.②③④D.①②④3．有关基因工程的叙述正确的是A.限制酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成是在细胞内完成的C.质粒都可作为载体D.蛋白质的结构成分为合成目的基因提供资料4．下列哪项不是基因工程中经常使用的用来运载目的基因的载体A.细菌质粒B.噬菌体C.动植物病毒D.细菌核区的DNA5．基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。
在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的是A.人工合成目的基因B.目的基因与运载体结合C.将目的基因导入受体细胞D.目的基因的检测表达6．不是基因工程方法生产的药物是A.干扰素B.白细胞介素C.青霉素D.乙肝疫苗7．在基因工程中用来修饰改造基因的工具是A.限制酶和连接酶B.限制酶和水解酶C.限制酶和运载酶D.连接酶和运载酶8．下列哪项叙述不是运载体必须具备的条件A.具有某些标记基因B.决定宿主细胞的生存C.能够在宿主细胞中复制D.有一个或多个限制酶切点9．水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中有三种氨基酸构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记。
在转基因技术中，这种蛋白质的作用A.促使目的基因导入宿主细胞中B.促使目的基因在宿主细胞中复制C.使目的基因容易被检测和选择D.使目的基因容易成功表达10．应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才能达到检测疾病的目的。
这里的基因探针是指A.用于检测疾病的医疗器械B.用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子C.合成β—球蛋白的DNAD.合成苯丙氨酸羟化酶的DNA片段11．基因工程第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来，这要利用限制性内切酶。
一种限制性内切酶能识别DNA子中的GAATTC顺序，切点在G 和A之间，这是应用了酶的A．高效性 B.专一性 C．多样性D.催化活性受外界条件影响12．上海医学遗传研究所成功培育出第一头携带白蛋白的转基因牛，还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍，转基因动物是指A.提供基因的动物B.基因组中增加外源基因的动物C.能产生白蛋白的动物D.能表达基因信息的动物13．作为基因的运输工具——运载体，必须具备的条件之一及理由是A.能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因B.具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达C.具有某些标记基因，以使目的基因能够与其结合D.对宿主细胞无伤害，以便于重组DNA的鉴定和选择14．下列黏性末端属于同一种限制酶切割而成的是：A．①②B．①③ C．①④ D．②③15．下列平末端属于同一种限制酶切割而成的是A.①③B.①④C.②③D.②④16．下列有关基因工程的叙述中，不正确的是A.DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来B.基因探针是指用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子C.基因治疗主要是对有基因缺陷的细胞进行替换D.蛋白质中氨基酸序列可为合成目的基因提供资料17．下列属于PCR技术的条件的是[来源:学科网]①单链的脱氧核苷酸序列引物②目的基因所在的DNA片段③脱氧核苷酸④核糖核苷酸⑤DNA连接酶⑥DNA聚合酶⑦DNA限制性内切酶A.①②③⑤B.①②③⑥C.①②③⑤⑦D.①②④⑤⑦18．下列有关PCR技术的叙述正确的是A.作为模板的DNA序列必须不断的加进每一次的扩增当中B.作为引物的脱氧核苷酸序列必须不断的加进每一次的扩增当中C.反应需要的DNA聚合酶必须不断的加进反应当中D.反应需要的DNA连接酶必须不断的加进反应当中19．蛋白质工程中，直接需要进行操作的对象是A.氨基酸结构B.蛋白质的空间结构C.肽链结构D.基因结构20．有关基因与酶关系的叙述正确的是A.每个基因都控制合成一种酶B.酶的遗传信息编码在内含子的碱基序列中C.基因的转录、翻译都需要酶D.同一生物体不同细胞的基因和酶是相同的21．某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶（Amy）基因a,通过基因工程的方法，将a转到马铃薯植株中，经检测发现Amy在成熟块茎细胞中存在。
高中生物选修三“基因工程”综合练习(20题含答案)
高中生物选修三“基因工程”综合练习(20题含答案)高中生物选修三“基因工程”综合练习1. [选修三：现代生物科技专题]（15分，除注明外均为每空2分）请回答下列有关基因工程和胚胎工程的问题：（2）在基因表达载体中，启动子是_______________识别并结合的部位。
若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，最常用的原核生物是______________。
（3）将目的基因导入微生物常用____________处理受体细胞，使之变成感受态细胞。
我国科学家发明的将目的基因导入植物细胞的方法是________________。
（4）研究还发现胚胎干细胞可以诱导分化为造血干细胞，这体现了胚胎干细胞具有__________。
临床上常用诱导干细胞定向分化的方法修补损伤或衰老的组织器官，从而解决了___________问题。
谜底：（1）PCR技术（1分）化学方法直接人工合成目的基因（2）RNA聚合酶大肠杆菌（或细菌）（3）Ca（或CaCl2）花粉管通道法（4）发育的万能性供体器官缺乏（或器官移植后免疫排斥反应）2. [选修三：当代生物科技专题]（15分，除注明外均为每空2分）荒漠齿肋赤藓具有超强耐旱能力的原因是其含有抗旱基因ScALDH21。
科研人员提出两种提高棉花抗旱能力的途径，回答下列相关问题:（1）第一条途径：利用酶从荒漠齿肋赤藓中提取目的基因，即。
科研人员将目的基因整合到Ti质粒的上，常利用法导入棉花的叶肉细胞。
最后，将含目的基因的棉花叶肉细胞培育成转基因植株。
（2）第二条途径：可通过技术获得荒漠齿肋赤藓与棉花的杂种植物。
在该方法中，荒漠齿肋赤藓细胞与棉花细胞融合前需用酶去除细胞壁，常用诱导两原生质体融合成杂种细胞的化学试剂为。
该技术利用的主要原理有。
答案：（1）限制（1分）抗旱基因ScALDH21T-DNA （或可转移DNA）农杆菌转化（2）植物体细胞杂交纤维素酶和果胶聚乙二醇（或PEG）细胞膜的流动性和细胞的全能性3. [选修三：现代生物科技专题]（15分，除注明外均为每空2分）逆转录病毒载体是目前应用较多的动物基因工程载体之一。
基因工程试题与答案
基因工程试题与答案1、转基因动物的安全性问题正面观点：（1）转基因工程是不可阻挡的. 基因工程将影响当代重大的环境问题:人口过剩/污染/生物多样性急剧减退等等. 保护土壤/水/能源成为发展可持续农业的目标。
（2) 转基因食品的功效: 改良植物的食用品质；增加果蔬贮藏、保鲜性能；生产特殊食品——食品疫苗。
（3）迄今为止并没有发现转基因食品危害人体健康和环境的确切证据。
如果转基因生物技术得不到社会支持，这一研究将被扼杀。
反面观点：转基因的潜在危害：转基因动植物安全性评价主要集中在环境安全性，食品安全性以及对人动物健康的影响三方面。
环境安全性分析包括：（1）生存竞争性：转基因植物在生存竞争方面具有的优势可能导致生物多样性的减少，影响了生物多样性；（2）生殖隔离距离:基因不可控制的水平转移的可能性；与近缘野生种的可交配性：外源基因是否会漂流扩散至亲缘野生种中，从而破坏自然生态平衡；（3）对非靶生物的影响：转基因植物花粉通过风，雨，鸟，昆虫，真菌，细菌以至整个生物链传播使外源基因逃逸，从而造成基因污染。
（4）病毒发生异缘重组或异缘包装的可能性：自然界中存在着植物病毒之间的异缘重组。
（5）对农业和生态环境的影响，生态平衡. 如产生超级杂草的可能性；种植抗虫转基因作物后可能使害虫产生免疫并遗传、从而产生更加难以消灭的“超级害虫”；食品安全性：（1）转基因毒性. 如英国发现转基因马铃薯会减弱老鼠免疫系统功能，美国发现转基因玉米会危害蝴蝶幼虫及其相关生态环境；（2）人的毒理反应或过敏反应. 大肠杆菌细胞膜间隙中含有大量的内毒素，痕量的内毒素即可导致人体热原反应。
（3）实质等同性的原则，即某一种生物技术产品或其成分能够与市场上现有的对应产品进行比较。
如果一种转基因产品能够与现存的一种产品进行比较，并且发现具有实质同等性，便能用现产品安全性同种方法对待它。
转基因植物所引入的蛋白对人体可能是异性蛋白质，在部分人中可能发生食物过敏，特别是幼儿和某些过敏体质的人。
高中生物《基因工程》练习题(含答案解析)
高中生物《基因工程》练习题题号一二总分得分一、单选题（本大题共20小题，共20.0分）1.如图为DNA分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次为（）A. 解旋酶、限制酶、DNA连接酶B. 限制酶、解旋酶、DNA连接酶C. 限制酶、DNA连接酶、解旋酶D. DNA连接酶、限制酶、解旋酶2.下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（）A. 重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体B. 所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C. 选用细菌为重组质粒受体细胞是因为质粒易进入细菌细胞且繁殖快D. 只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达3.如图为基因表达载体的模式图。
下列有关基因工程的说法错误的是（）A. 基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建B. 任何基因表达载体的构建都是一样的，没有差别C. 图中启动子和终止子不同与起始密码子和终止密码子D. 抗生素抗性基因的作用是作为标记基因，用于鉴别受体细胞中是否导入了载体4.一些细菌能借助限制性核酸内切酶抵御外来入侵者，而其自身的基因组DNA经预先修饰能躲避限制酶的降解。
下列在动物体内发生的过程中，与上述细菌行为相似的是（）A. 巨噬细胞内溶酶体杀灭病原体B. T细胞受抗原刺激分泌淋巴因子C. 组织液中抗体与抗原的特异性结合D. 疫苗诱导机体产生对病原体的免疫5.某目的基因两侧的DNA序列所含的限制性核酸内切酶位点如图所示，最好应选用下列哪种质粒作为载体（）A. B.C. D.6.下图是研究人员利用供体生物DNA中无限增殖调控基因制备单克隆抗体的思路流程。
下列相关叙述正确的是（）A. 酶a、酶b作用位点分别为氢键和磷酸二酯键B. Ⅰ是经免疫的记忆细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞C. 筛选出既能无限增殖又能产生专一抗体的Ⅱ必须通过分子检测D. 上述制备单克隆抗体的方法涉及转基因技术和动物细胞核移植技术7.下列关于基因工程技术的说法，正确的是（）A. 切割质粒的限制酶均只能特异性地识别3-6个核苷酸序列B. PCR反应中两种引物的碱基间应互补以保证与模板链的正常结合C. 载体质粒通常采用抗生素抗性基因作为标记基因D. 目的基因必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制8.在其他条件具备的情况下，在试管中进入物质X和物质Z，可得到相应产物Y．下列叙述正确的是（）A. 若X是DNA，Y是RNA，则Z是逆转录酶B. 若X是DNA，Y是mRNA，则Z是脱氧核苷酸C. 若X是RNA，Y是DNA，则Z是限制性内切酶D. 若X是mRNA，Y是核糖体上合成的大分子，则Z是氨基酸9.下图表示的是三种黏性末端，下列说法正确的是A. 甲、乙、丙黏性末端是由两种限制酶作用产生的B. 若甲中的G处发生突变，限制酶可能无法识别该切割位点C. 乙中的酶切位点在A与G之间D. 目前常用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等几类原核生物10.如图是利用基因工程技术生产可使用疫苗的部分过程，其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制性核酸内切酶。
基因工程习题与参考答案-2012--英汉全
基因工程习题与参考答案第一部分1. Fill in the blank with suitable words: (填空)1) There are four basic steps in a gene cloning procedure, including①cutting, i.e. generation of DNA fragments using restriction endonuclease;②ligation /recombination, i.e. joining DNA fragments to vector or carrier molecule using ligase;③transformation and amplification, i.e. introduction of recombinants into a host cell for amplification;④identification, i.e. selection or screening of required sequence.2) In genetic engineering cloning means using asexual reproduction to obtain organisms that are genetically identical to one another.3) Gene engineering is also known as genetic engineering, recombinant DNA technology, molecular cloning, gene cloning，gene manipulation technology，genetic modification or new genetics. (Write at least two points).4) Three great inventions in techniques paved the ways for the birth of the genetic engineering, which are ①the discovery of restriction nucleases and DNA fragmentation,②the discovery of DNA ligase and ligation of DNA fragments, and ③the study and application of vectors.5) The gene operation technique was first established in 1973 at Stanford University in USA by S. Cohen andhis research group.(when, where, by whom)6) Three basic procedures for preparing nucleic acid are:①opening the cells in the sample to expose the nucleic acids for further processing;②separation of the nucleic acids from other cell components;③recovery of the nucleic acid in purified form.6) The nucleic acid in the liquid solution can be precipitated by using ethanol or isopropanol, and collected by centrifugation.And the precipitated DNA pellet can be resuspended by TE or de-ionized water.7) The mRNA molecules can be separated from other RNA by affinity chromatography procedures, or caesium chloride density gradient centrifugation.8) In preparing plasmid for gene cloning alkaline lysis method is usually used.9) Nucleic acid concentration determined by measuring the absorbance at 260 nm, using a spectrophotometer. An A260 of 1.0 is equivalent to a concentration of 50 ug ml-1 for dsDNA, or 40ug m1-1 for ssDNA or RNA.10) DNA probes can be labeled by nick translation, end labeling, random priming, PCR labeling etc.11) Northern blotting, a technique for the separation of RNA molecules through agarose gels followed by detection of specific RNAs through hybridization with singlestranded DNA.12) Southern blotting is a technique for the separation of DNA molecules through agarose gels followed bydetection of specific DNAs after denaturation through hybridization with single-stranded DNA.13) Western blot is the detection of specific proteins following electrophoresis using antibodies.14) Nucleic acid fragments can be separated by gel electrophoresis. There are mainly two kinds of gels, agarosegel and polyacrylamide gel /PA gel.15) PFGE, the acronym for pulsed-field gel electrophoresis, is by altering the direction of the electric current toalter the path of DNA molecules as they travel through the gel.16)PCR, polymerase chain reaction – cycles of DNA denaturation, primer annealing and extension with DNApolymerase lead to a amplification of the target DNA sequence. It is a technique to amplify specific(target/desired) DNA sequences in vitro.17) There are three steps in each PCR cycle. Denaturation allows two strands of the target DNA molecule areseparated at 94 ℃. Annealing allows primers to recognize and bind to the target DNA strands at the lower temperature. Extension is the use of DNA polymerase and dNTPs to synthesize a new DNA strand in a 5’ to 3’ direction at 72℃.18) In a standard PCR reaction system including the following components:①1×PCR reaction buffer (500mmol/L KCl,100mmol/L Tris.Cl pH 8.3).② MgCl2/ Mg2+.③50 μM each of dNTPs.④ a pair of primers.⑤Taq DNA polymerase (1-2 units).⑥(1pg -1ug) of DNA template.19) Primer is a short DNA or RNA sequence that is paired with one strand of DNA and provides a free 3’ hydroxyl group at which DNA replication can initiate.20) Reverse transcriptase is the enzyme that synthesizes DNA from RNA templates.21) Inverse PCR is used to amplify regions that lie outside the known region.22) S1 nuclease cleaves only single stranded DNA, including single stranded nicks in mainly double-stranded molecules.23) Isocaudamer (同尾酶) Restriction enzymes which are from different sources, recognize different DNAsequence, but produce the same sticky ends.24) Isoschizomer Restriction enzymes which recognize the same DNA sequence. They may cut at the same orat different positions within it.25) DNA Ligase is an enzyme that catalyses the formation of a phosphodiester bond between two DNA chains.There are mainly two types of them, one is T4 phage DNA ligase purified from E. coli cells infected with bacteriophage T4, another is E. coli DNA ligase saperated from E. coli.26) Vectors are autonomously replicating DNA molecules used to carry foreign DNA fragments. A vectorshould be fairly small DNA molecules, to facilitate isolation and handling; have an origin of replication, so that their DNA can be copied and maintained in the cell population as the host organism grows and divides;have some sort of selectable marker that will enable the vector to be detected; have at least one, often multiple restriction endonuclease recognition site, to enable DNA to be inserted during the production of recombinants. Also called MCS (multiple cloning site).27) Transformation refers to the introduction of extraneous DNA into a cell. It is also means the conversion ofan animal cell into immortalized, tumor-like, cell.28)Transfection refers to the introduction of phage DNA into a cell.29) The ligation of cDNA into vectors to form the recombinants can be done using the following four ligatingstrategies, depending on the ends properties. They are sticky end ligation, blunt end ligation, ligating byusing linkers or adapters and/or by homopolymer tailing.30) The DNA library size can be decided according to the formula derived by Clarke and Carbon in 1976,where N is the number of clones required. p is the probability of a particular sequence presented (0.95 or0.99); f is the ratio of genomic size to fragment size.31) Partially digested genomic DNA fragments with restriction enzyme Sau 3A can be ligated to vectors suchasλreplacement vector EMBL4, restricted with enzyme Bam H I, because both the enzymes produce the same sticky ends which are complementary. They are called isocaudamers.32) Selection is where some sort of pressure (e.g. the presence of an antibiotic) is applied during the growth ofhost cells containing recombinant DNA. The cells with the desired characteristics are therefore selected by their ability to survive. Screening is a procedure by which a population of viable cells is subjected to some sort of analysis that enables the desired sequences to be identified.33) In gene cloning the selection or/and screening methods is mainly based on one of following four criteria:①DNA sequence of the clone;②protein sequence of the encoded polypeptide;③ a biochemical function of the polypeptide;④the ability of the polypeptide encoded by the recombinant clone to interact with other polypeptides. 34）Primers used in PCR experiments needn’t match the target sequence exactly. This can be used①to make mutations；②to change the amplified DNA sequence；③to search for homologous gene sequences to one already known.35）The 3’-end of a primer must match the target sequence exactly. So, we cannot introduce mutations at the 3’-end of the primer, a favorite location to introduce changes is the 5’-end.2. What glossary best fit for the following explanation?1)Genetic engineering The formation of new combinations of heritable material by the insertion of nucleicacid molecules, produced by whatever means outside the cell, into any virus, bacterial plasmid or other vector system so as to allow their incorporation into a host organism in which they do not naturally occur but in which they are capable of continued propagation.2)Northern blotting A technique for the separation of RNA molecules through agarose gels followed bydetection of specific RNAs through hybridization with single stranded DNA.3)Southern blotting A technique for the separation of DNA molecules through agarose gels followed bydetection of specific DNAs after denaturation through hybridization with single-stranded DNA.4)Western blotting The detection of specific proteins following electrophoresis using antibodies.5)Primer A short DNA or RNA sequence that is paired with one strand of DNA and provides a free 3’hydroxyl group at which DNA replication can initiate.6)RT-PCR A method for the amplification of a specific mRNA. Reverse transcriptase is used to form acDNA which is then amplified using PCR.7)RFLP Restriction fragment length polymorphism. A difference in the length of a specific restrictionfragment found in different members of the same species. Usually caused by a small mutation whichcreates or destroys a restriction endonuclease recognition site, or by a variation in the number of repeats ofa tandemly repeated sequence.8)RAPD (randomly amplified polymorphic DNA)9)SCAR (sequence characterized amplified region)10)SSR(simple sequence repeat)11)AFLP (amplified fragment length polymorphism)12)RFLP (restriction fragment length polymorphism). A difference in the length of a specific restrictionfragment found in different members of the same species. Usually caused by a small mutation whichcreates or destroys a restriction endonuclease recognition site, or by a variation in the number of repeats ofa tandemly repeated sequence.13)STS Sequence tagged site (from sequencing RFLP ends)14)CAPS Cleaved amplified polymorphic sequence15)RACE Rapid amplification of cDNA ends16)RNA polymerase The enzyme that synthesizes RNA from a DNA template.17)TA cloning A method for cloning PCR products that relies on the addition of template independent Aresidues to PCR products by Taq DNA polymerase.18)Exonuclease An enzyme that digests a nucleic acid molecule from one or both ends.19)Endonuclease An enzyme that cuts within a nucleic acid molecule, as opposed to an exonuclease, whichdigests DNA from one or both ends.20)Restriction endonuclease/restriction enzyme A naturally occurring bacterial enzyme which recognizes andcuts DNA molecules at specific sites. Type II restriction endonucleases are used extensively in gene cloning.21)Restriction fragment A piece of DNA created by cutting DNA with a restriction endonuclease.22)Linker A short double-stranded synthetic oligonucleotide containing one or more internal restrictionenzyme recognition sites. Used to add cohesive ends to DNA molecules that have blunt ends.23)Adaptor A short double-stranded synthetic oligonucleotide with one blunt end and a nucleotide extensionthat can base pair with sticky end.24)Alkaline phosphatase An enzyme that removes 5’ phosphate groups from the ends of DNA molecules,leaving 5’ hydroxyl groups.25)Polynucleotide kinase (PNK)An enzyme that catalyses the transfer of a phosphate group onto a 5’hydroxyl group.26)Terminal transferase An enzyme that adds nucleotide residues to the 3’ terminus of an oligo- orpolynucleotide.27)Blunt ends/flush ends: DNA termini without overhanging 3’ or 5’ ends.28)Cohesive ends/sticky ends: Those ends (termini) of DNA molecules that have short complementarysequences that can stick together to join two DNA molecules. Often generated by restriction enzymes. 29)Cloning vector: A vector used for reproducing the DNA fragment is often referred to as a cloning vecto r.30)Expression vector: When a vector is used for expressing a gene contained within the cloned DNA, it iscalled an expression vector.31)Shuttle vectors: Contain not only the origin of replication and selectable marker for E. coli,but alsofunctionally similar sequences for maintenance in other hosts, so it can not only maintained in E. coli, can also replicated in other hosts.32)DNA library A collection of DNA clones containing the whole genome of an organism, part of the genomeor all of the genes expressed in a particular tissue at a particular time.33)DNA ligase An enzyme used for joining DNA molecules by the formation of a phosphodiester bondbetween a 5’ phosphate and a 3’ OH group in gene cloning.34)DNA polymerase An enzyme which synthesizes a complementary DNA strand from a DNA or RNAtemplate.35)dNTP Abbreviation for deoxynucleoside triphosphate, the building block of DNA.36)Genomic library A collection of clones which together represent the entire genome of an organism or acollection of DNA fragments, derived from the genome of an organism, cloned into a vector.37)cDNA library is a collection of double-stranded cDNA molecules contained within a vector. It containsDNA copies of mRNA and is tissue and developmental stage specific. Its formation is dependent on an RNA-dependent DNA polymerase enzyme, reverse transcriptase.38)α-complementation in mutants of E. coli which express an inactive version of β-galactosidase, subunitassembly (and enzyme activity) may be restored by the presence of a small amino-terminal fragment of the lacZ product (the a-polypeptide) usually produced from a cloning vector.39)YAC Yeast Artificial Chromosome40)BAC The abbreviation for bacterial artificial chromosomes. Artificially constructed bacterial plasmidscontaining all of the sequences required for replication of a chromosome in yeast, which can accommodate very large DNA inserts of at least 300 kb.41)HAC stands for human artificial chromosome42)PAC P1 derived artificial chromosome. A vector, based on the bacteriophage P1 genome, used to clonelarge DNA fragments in E. coli43)Electroporation is a physical way for introducing DNA into cells using an electric current.44)Nucleic acid hybridization the pairing of complementary nucleic acids (DNA–DNA or DNA– RNA).The process by which a single stranded polynucleotide molecule (DNA or RNA) base pairs with amolecule with its complementary sequence to form a doublestranded molecule.45)Insertional inactivation the destruction of the function of a gene by cloning a DNA sequence into it.46)Palindromic – a sequence of DNA that read on one strand in a 5’–3’ direction is the same as than on theother strand in a 5’–3’ direction.47)PCR – polymerase chain reaction cycles of DNA denaturation, primer annealing and extension with DNApolymerase lead to a amplification of the target DNA sequence.48)PFGE Pulsed field gel electrophoresis49)Primer A short DNA or RNA sequence that is paired with one strand of DNA and provides a free 3’hydroxyl group at which DNA replication can initiate.50)Yeast two-hybrid screen A technique to identify proteins that are able to interact with each other. It’s acloning method that reveals potential protein–protein interactions by the ability of such interactions to activate expression.51)Vector A DNA molecule that possesses the ability to self-replicate. Used to introduce foreign DNA intohost cells, where it is replicated autonomously in large quantities.52)Concatemer A polynucleotide molecule made up of repeated units of the same sequence joined end to end.53)Contig One of a series of overlapping DNA fragments produced during the course of a sequencing project,made up by assembling many smaller DNA sequences.54)cos site A sequence in a bacteriophage DNA molecule that is cut during phage maturation to producecohesive, single-stranded extensions located at the ends of the linearized genome.55)Cosmid An artificially constructed plasmid cloning vector which contains a bacteriophage cos siteenabling the vector to be packaged into bacteriophage λ for infection into E. coli, enabling relatively large DNAfragments (up to about 50 kb) to be cloned at high efficiency.56)Homologous recombination Exchange of genetic material between two similar DNA segments bybreakage and reunion, with each other, of the two DNA strands.57)Polylinker In a cloning vector, a short synthetic region containing the recognition sequences for severalrestriction enzymes. Also called a multiple cloning site.第二部分绪论、基因工程基础一、填空题1. 基因工程是20世纪70 年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
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第二章1. 名词解释：核酸内切酶、核酸内切限制酶、同裂酶、同尾酶、核酸外切酶、末端脱氧核苷酸转移酶答：核酸内切酶：是一类从多核苷酸链的内部催化磷酸二酯键断裂的酶。
核酸内切限制酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列（4—8bp），并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。
同裂酶：识别位点的序列相同的限制性内切酶。
同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。
核酸外切酶：是一类从多核苷酸链的一头开始催化降解核苷酸的酶。
末端脱氧核苷酸转移酶：可以不需要模板，在单链DNA或突出的双链DNA3’-OH端随机添加dNTPs的酶2. 限制性内切核酸酶的命名原则是什么？答：限制性内切核酸酶按属名和种名相结合的原则命名的，即：属名+种名+株名+序号；首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写；第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写；第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写；(2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。
第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。
顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、…等，用正体。
3．部分酶切可采取的措施有哪些？答：1）缩短保温时间2）降低反应温度3）减少酶的用量4. 在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么?答：回文序列是：5'-CATATG-3，5．什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影响?答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。
条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星活性。
概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8．0以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。
第三章1．如何将野生型的l噬菌体改造成为一个理想的载体?答：①删除l噬菌体的非必需区，留出插入空间；并在余下的非必须区内制造限制酶切点②引进某些突变表型，作为选择标记③突变某些基因，使它成为安全载体④删除lDNA必须区段上常用的限制酶切点2．什么是蓝白斑筛选法?答：这种方法是根据α互补的原理来筛选重组体。
主要是在载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌b—半乳糖苷酶的α基因片段（LacZ’），携带有lac基因片段的载体转入LacZ’－的宿主菌后，在IPTG（异丙基硫代-β-D 半乳糖）诱导下，载体表达的b—半乳糖苷酶的α肽段和宿主菌表达的b —半乳糖苷酶的b肽段互补，形成有活性的b—半乳糖苷酶，该酶可以分解无色的5—溴—4—氯—3—引哚—b—D—半乳糖苷(X-gal)得到蓝色的5—溴—4—氯—靛蓝，因此在含有X-gal平板上形成浅蓝色的菌斑。
外源基因插人LacZ’(或LacZ’基因部分被取代)后，重组的克隆将丧失分解X-gal的能力，在含有X-gal的平板上形成白色的菌斑，非重组的克隆则为蓝色菌斑。
3． M13系列载体具有哪些优缺点?答：（1）有MCS，便于克隆不同的酶切片段（2） Xgal显色反应，可供直接选择（3）可以克隆双链DNA分子中的每一条链4．辅助噬菌体DNA和相应的噬菌粒是如何协同工作的?答：虽然噬菌粒载体携带有M13的IG区，能够合成单链DNA，但是它没有M13的功能基因，没有M13基因2的产物存在，所以不能合成单链DNA。
而辅助噬菌体具有M13的所有功能基因，但是IG区是缺陷的，辅助噬菌体本身的DNA不能进行单链复制，于是就可以为噬菌粒提供基因2产物和包装蛋白。
5．某一质粒载体具有Tetr和Kanr的表型，在Kan抗性基因内有一Bgl I 的切点。
现用Bgl I切割该载体进行基因克隆，问：(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组体?答：(1)加四环素；(2)Tet r Kan s和Tet r Kan r；(3)重新点种在含Tet、Kan 和只加Tet的平板上，选择只在Tet平板上生长的菌落，即为所需的重组体。
第四章1. 目的基因的获取方法有哪些？各有什么优缺点？答：1）鸟枪法克隆：优点是可以随机克隆供体细胞的全基因组DNA片段；缺点是①工作量较大，需要了解目的基因的背景知识，②不能获得最小长度的目的基因，③不能除去真核生物目的基因的内含子结构2）cDNA法：优点是①能获得最小长度的目的基因②能除去真核生物目的基因的内含子结构；缺点是①仅限于克隆mRNA分子具有polyA结构的蛋白质编码基因②mRNA分离纯化困难3）PCR法：优点是高效快速的体外合成目的基因；缺点是已知待扩增目的基因或DNA片段两侧的序列4）化学合成法：优点是适于合成引物、接头等多种DNA短片段；缺点是必须已知基因的DNA序列，直接合成较大的基因成本较高2. 什么是基因组文库(genomic library)?构建基因组文库，涉及哪些基本过程?它同遗传学上的基因库有什么不同?答：基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基因组DNA 的各种片段的克隆群。
一般以改造的噬菌体DNA或黏粒作为载体，包括下列过程：(1)高分子量染色体DNA的制备；(2)体外重组连接；(3)包装蛋白的制备；(4)重组体的体外包装；(5)将重组DNA导人寄主细胞；(6)筛选。
基因组文库同遗传学上所讲的基因库是完全不同的概念。
基因库(gene pool)是指在进行有性生殖的某一群体中，能进行生殖的个体所含总的遗传信息。
在基因组文库的构建中，由于使用的载体不同，分为噬菌体载体和黏粒载体构建的基因组文库、YAC文库、BAC文库等。
3. 什么是cDNA文库(complementDNAlibrary)?同基因组文库有何差别?答：同mRNA互补的DNA称为cDNA。
cDNA文库是以某一生物的总mRNA为模板，在无细胞系统中，在反转录酶的作用下，首先合成一互补的DNA, 即第一链，破坏RNA模板后，再以第一链为模板合成第二链，得到的双链DNA称为cDNA。
选用适合的载体，将合成的cDNA重组导人寄主细胞，经筛选得到韵cDNA克隆群称为cDNA文库。
由于cDNA技术合成的是不含内含子的功能基因，因此是克隆真核生物基因的一种通用方法。
由于细胞内的基因在表达的时间上并非是统一的，具有发育的阶段性和时间性．有些则需要特殊的环境条件。
所以，cDNA文库是不可能构建得十分全，也就是说任何一个cDNA文库都不可能包含某—生物全部编码基因。
第五章1. 你在做Southern印迹分析，为了节省时间，你电泳后直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上，然后用标记探针杂交，最后发现放射自显影片是空白。
错在哪里?答：错在电泳后直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上，而没有先将凝胶中的DNA变性成为单链，从而导致目标DNA未能与探针杂交；另外如果你的杂交探针是双链的，在加人杂交混合物之前忘记将探针变性也可能得到空白的放射自显影结果。
2．什么是Western印迹?它与Southern印迹有什么不同?答：Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上，然后用特异性的抗体进行检测。
它与Southern的不同在于探针的性质不同，在Western印迹中使用的探针是抗体(蛋白质)，而Southern印迹中使用的探针是核酸（DNA或RNA）。
3. 蓝白斑筛选法为什么也会有假阳性?答：b—半乳糖苷酶的N末端是非必需的，，可以进行修饰，并不影响酶的活性或a肽的互补性。
如果插入的外源DNA引起a肽的可读框的改变，或者插入片段在正确的可读框中含有终止密码的话，就会形成白色噬菌斑。
如果插入DNA的碱基数正好是3的倍数，且不含有终止密码的话，仍然会形成蓝色噬菌斑。
这种插入物的长度可达几百个碱基对。
4. 重组体克隆的筛选和鉴定方法有哪些？答：1）载体表型选择法2）根据插入基因的表型选择3）DNA电泳检测法4）核酸杂交检测法5）免疫化学检测法6）转译筛选法第六章1．如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因，并使之在大肠杆菌中进行表达? 简要说明实验中可能遇到的问题及可能的解决办法。
答：要使动物中编码激素的基因在大肠杆菌中表达，通常遇到的问题有：(1)细菌的RNA聚合酶不能识别真核生物的启动子。
(2)大多数真核基因有内含子，这些内含子在转录后从前体mRNA中被切除而形成成熟mRNA。
细菌细胞没有这样的机制来去除内含子。
(3)有些真核生物的蛋白质是通过前体分于加工而来的，例如胰岛素就是通过加工去除前体分子内部的33个氨基酸残基而来，剩下的两段肽链分别形成胰岛素的a、b链。
(4)产生的真核生物的蛋白质产物可以被细菌的蛋白酶所识别和降解。
针对上述可能出现的问题，建议在克隆的过程中采取以下措施：①应将激素的编码序列置于含有核糖体结合位点和起始密码子ATG的细菌强启动子的附近(含有这种序列的载体称表达载体)。
②可以以激素的mRNA为模板用反转录酶合成激素的基因。
这种DNA不含内含子可插入到载体中进行克隆。
此外，如果蛋白质序列短则可通过化学合成得到该基因。
合成的基因应含起始密码ATG、通过该激素蛋白的氨基酸序列推测而来的编码序列，以及1—2个终止密码：ATG——————编码序列————————TGA TAG现在，这个合成基因可被插入载体中。
③有时加工过程可以在离体条件下进行。
如果加工有困难，可以用合成基因，从而免除加工过程。
④选用合适的突变型宿主从而防止蛋白酶水解。
如果用酵母作为宿主上述许多问题都可以较容易地解决，尤其是现在有既能在大肠杆菌中又能在酵母中复制的穿梭质粒载体。
说明：1)ATG,TAG和TGA是对应mRNA中的转录起始信号AUG和终止信号UAG,UGA的DNA序列。
2)克隆生长素释放抑制因子基因时采用化学合成基因的方法。
生长索释放抑制因子是一种由下丘脑分泌的激素，长14个氨基酸残基，因此人工合成的基因，包括在宿主菌中表达所需的转录的起始和终止信号，仅51bp长。
希望以上资料对你有所帮助，附励志名言3条：1、生命对某些人来说是美丽的，这些人的一生都为某个目标而奋斗。
2、推销产品要针对顾客的心，不要针对顾客的头。