维生素C生产工艺综述
维生素C工业废水处理综述
维生素C工业废水处理综述摘要：分析了Vc废水的来源及水质特点，综述了生物法、化学法等在Vc 废水处理中的应用。
关键词：Vc废水；废水处理；Abstract: analysis of the source and quality characteristics of Vc wastewater, biological method, chemical method in the treatment of Vc wastewater was reviewed in this paper.Keywords: Vc wastewater; wastewater treatment;前言：目前国内Vc生产采用的是两步发酵工艺，以山梨醇、玉米浆、多种无机盐、盐酸、乙醇等l8种原料，经发酵、提取、转化、精制而成，生产工艺复杂，原料平均利用率较低。
Vc废水主要包括高浓度废水和低浓度废水，废水整体呈酸性，且COD浓度很高。
这样的废水如不加以处理直接排放，必将对自然水体和周围环境造成严重污染。
1 Vc生产废水来源及其水质特征1．1 Vc生产废水来源Vc生产主要原料为山梨醇，Vc废水主要来源及各工段废水中主要为高浓度有机污染物，包括乙醇、乙酸、菌丝体蛋白质、古龙酸、Vc等，还含有铵态氮及各种无机盐等，水质总体偏酸性。
1．2 Vc废水的水质特征(1)COD浓度高；(2)水质水量变化大，且高浓度废水间歇排放；(3)混合废水水质偏酸I生(4)废水色度高，且为真色。
2 Vc废水的处理方法目前国内主要以生物法对Vc工业废水进行处理。
2．1 生物法Vc生产废水属于高浓度有机废水，含对微生物有毒或抑制性物质少，可生化性较好，因此，国内外常用的Vc废水处理方法是生物法。
根据作用微生物的不同，生物处理方法可分为好氧处理和厌氧处理。
2．1．1 厌氧生物处理工艺厌氧生物法是指无分子氧条件下通过厌氧微生物的作用，将废水中各种复杂的有机物分解为甲烷和二氧化碳等物质的过程，同时把部分有机质合成细菌体，通过气、液、固分离，使废水得到净化的一种废水处理方法。
维生素C生产技术
" 山梨糖的 #: 值为 - D !2 K ’( " ! :G= < $。 4*7 的 活力与 ! " #$% 的合成呈正相关， 伴生菌的存在
［!!， !,］ 能提高 4*7 的比活力 。 4BLMNGB 等 （ ’113） 首 先从液化醋杆菌 （ 7!’&"$%!&’( /. 8 1’ 9 %!.’#, ） 中克隆
半化学合成方法。该工艺方法的发酵原料仍为 D 而非葡萄糖； 并且， 第二步发酵过程中涉 % 山梨醇， 及 ( 株菌的混合发酵， 其详细消长机制尚未完全明 了。这些都需要人们进一步研究和探索。 ( M ( M & 二步发酵法 为了解决二步发酵法存在的问题， 人们除了优
［&&］ 化发酵工艺以外 ， 主要对微生物菌种进行了选
(CC)
F6 M ,
物能够自己合成 !"， 而人和许多动物由于肝脏中 缺少一种古洛内酯氧化酶， 因而不能自己合成， 必 须从外界摄取。
所采用的主要工艺方法。 A0B"> 公司等） 但是莱氏法也存在着不少缺陷， 诸如生产工序 繁多、 劳动强度较大， 容易造成环境污染， 等等。为 此， 自上世纪 ,C 年代起， 各国学者一直致力于莱氏
［&］ 中起着重要的生理作用 。
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维生素C制剂的鉴别、杂质检查、含量测定方法综述
维⽣素C制剂的鉴别、杂质检查、含量测定⽅法综述维⽣素C制剂的鉴别、杂质检查、含量测定⽅法综述维⽣素C制剂的鉴别、杂质检查、含量测定⽅法综述摘要:维⽣素C即L-抗坏⾎酸是⼀种⽔溶性维⽣素，具有多种剂型。
ChP2010收载有维⽣素C原料及其⽚剂、泡腾⽚、颗粒剂、泡腾颗粒剂、注射剂和复⽅制剂维⽣素C银翘⽚。
维⽣素C 银翘⽚系临床常⽤于治疗流⾏性感冒引起的发热头痛、咳嗽、⼝⼲、咽喉肿痛等症状的复⽅制剂，其组份为VitC、⾦银花、桔梗、连翘、对⼄酞氨基酚、芦根等成份，其中V itC易发⽣氧化导致含量显著降低。
根据其结构性质采⽤不同的⽅法对其进⾏鉴别、检查、含量测定。
关键词:维⽣素C制剂;鉴别;检查;含量测定内容:仪器及试剂(1)仪器紫外可见分光光度计;⾼效液相⾊谱仪;分析天平;薄层板;滴定管等。
(2)试剂硝酸银试液、⼆氯靛酚、碘滴定液、亚甲蓝⼄醇溶液、淀粉指⽰剂、草酸、醋酸、盐酸、硫酸等。
⼀维⽣素C⽚【鉴别】1. 与硝酸银的反应:⽅法:精密称取本品适量(约相当于维⽣素C 0.2g),加⽔10ml溶解。
取该溶液5ml，加硝酸银试液0.5ml，即⽣成银的⿊⾊沉淀。
2. 与2,6-⼆氯靛酚反应: ⽅法:取本品适量(约相当于维⽣素C 0.2g)，加⽔10ml溶解。
取该1溶液5ml，加2,6-⼆氯靛酚钠1,2滴，试液的颜⾊即消失。
3. 薄层⾊谱法: ⽅法:取本品细粉适量( 约相当于维⽣素C l0mg)，加⽔10 ml，振摇使维⽣素C溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液;另取维⽣素C 对照品，加⽔溶解并稀释制成l ml 中约含1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层⾊谱法，吸取上述两种溶液各2uL,分别点于同⼀硅胶GF254薄层板上，以⼄酸⼄酯-⼄醇-⽔(5:4:1)为展开剂，展开，晾⼲，⽴即置紫外光灯(254 nm)下检视。
供试品溶液所显主斑点的位置和颜⾊应与对照品溶液的主斑点相同。
【检查】1. 颜⾊检查:取本品的细粉适量(约相当于维⽣素C 0.1g)，加⽔20ml，振摇使溶解，滤过，滤液照分光光度法在440nm处测定，吸光度不得超过0.07。
维生素C含量测定方法综述及其比较
维生素C含量测定方法综述及其比较作者：刘彬赵惠新来源：《课程教育研究》2018年第42期【摘要】维生素C（vitamin C，VC）含量测定是生物化学教学的经典实验，也是药物分析、食品营养分析等科研及实践的重要相关技术。
本文对目前用于VC含量测定的几种方法进行介绍，并从应用材料范围、影响因素、成本、设备需要等各方面进行比较，为开展相关教学实验设计及科学研究中选择VC含量的测定提供参考。
【关键词】维生素C含量测定 ;光谱法 ;色谱法 ;滴定法【基金项目】新疆师范大学博士启动基金项目，新疆假龙胆适生地植物群落物种多样性及其生物量研究（XJNUBS1813）;国家自然科学基金，早春短命植物独行菜低温休眠与下胚轴伸长的分子调控机制（31660079）。
【中图分类号】G420 【文献标识码】A 【文章编号】2095-3089（2018）42-0178-02维生素C（vitamin C，VC），是一种水溶性维生素。
其水溶液呈弱酸性，又名抗坏血酸。
其化学本质为一类己糖醛基酸，具有强的还原性，是重要的医用药效物质，又是评价水果、蔬菜及果蔬饮品营养价值的主要指标之一。
由于其生物功能显著、人们认知度比较广泛，“VC的定量测定”实验则成为教材设计、教学设计的重要知识点，也往往是生物化学、植物生理学等本科生物专业课程的经典常选实验之一。
还是中学生物探究性学习设计的重要案例（北师大版7年级第八章）。
维生素 C 的含量测定主要有光谱法、容量法、色谱法、电化学分析法等几大类方法，每大类中又有若干种方法。
本文就常用的几种VC含量测定方法进行概括介绍，并将各种方法应用范围等进行比较。
一、光谱法测定VC含量是基于VC溶液本身的特征性光吸收峰，或VC直接或间接与物质发生反应，反应产物有特征性光吸收峰。
根据特征性光吸收峰面积或光吸收强度直接或间接计算VC含量。
根据光吸收特征等，VC含量测定有荧光光度法、紫外分光光度法、可见分光光度法、红外分光光度法、原子吸收分光光度法、旋光法、折光法等。
维生素c葡萄糖苷的合成-概述说明以及解释
维生素c葡萄糖苷的合成-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述:维生素C葡萄糖苷是一种重要的维生素C衍生物，其具有广泛的生物活性和药理作用。
它是一种天然存在于柑橘类水果中的化合物，也可以通过化学合成或生物转化的方法得到。
维生素C，也称为抗坏血酸，是人体必需的营养物质之一。
它具有抗氧化、免疫调节、促进胶原蛋白合成等多种生理功能。
然而，由于维生素C的低稳定性和易氧化性，其应用受到一定的限制。
维生素C葡萄糖苷的出现为解决上述问题提供了新的途径。
它是维生素C与葡萄糖分子所组成的化合物，不仅具有维生素C的生物活性，还具有葡萄糖的保护作用，可以增强维生素C的稳定性和生物利用度。
本篇文章将重点介绍维生素C葡萄糖苷的合成方法和其在医学、保健品、化妆品等领域的应用。
通过对合成方法的探讨，我们可以深入了解维生素C葡萄糖苷的合成机制和关键技术，为其大规模生产和应用提供技术支持。
文章的结构将按照引言、正文和结论三个部分展开。
在正文部分，我们将详细介绍维生素C葡萄糖苷的定义、特性以及不同的合成方法。
在结论部分，我们将总结维生素C葡萄糖苷的重要性，并展望未来其在医学和保健领域的应用前景。
通过本文的阅读，读者可以更好地了解维生素C葡萄糖苷的合成和应用，为其在药学和保健行业的发展提供参考和借鉴。
同时，也可以为相关领域的科研工作者和企业提供技术指导和创新思路。
1.2 文章结构文章结构包括引言、正文和结论三个部分。
引言部分介绍了文章的背景和目的，主要包括概述、文章结构和目的三个方面。
正文部分是文章的核心内容，详细介绍了维生素C葡萄糖苷的定义和特性以及其合成方法。
在2.1小节中，将介绍维生素C葡萄糖苷的定义和特性，包括其化学结构和生物活性等方面的内容。
在2.2小节中，将详细介绍维生素C葡萄糖苷的合成方法，包括化学合成方法和生物合成方法等方面的内容。
结论部分对文中的内容进行总结和归纳，主要包括维生素C葡萄糖苷的重要性和未来研究方向两个方面。
维c综述
维生素C生产工艺摘要：维生素C 生产具有流程长、工艺复杂、能耗高、排污量大且难处理等特点；通过多年的维生素C 工程设计经验和对维生素C 行业的关注，对近年来维生素C 工业生产中的新技术、新工艺、新设备从节能减排的角度进行了总结研究，主要工艺方法有赖氏法，酯转法，发酵法等。
关键词: 维生素C;酯转法;发酵法一．维生素C概述1.基本概念维生素是生物体内一类量微、化学结构各异，具有特殊功能的小分子有机化合物，它们大多需从外界摄取。
维生素有以下特点：（1）维生素是天然食物中的一种成分，是一种活性物质，对机体代谢起调节和整合作用。
（2）维生素需求量很小。
（3）大多数维生素在体内不能合成，要从外界摄取。
（4）绝大多数维生素是通过辅酶或辅基的的形式参与体内酶促反应体系。
（5）人体内维生素缺乏时，会发生一类特殊的疾病，称“维生素缺乏症”。
维生素并不是补品，人体每日需要量是一定的，多摄入并不一定好，使用不当，反而会导致疾病。
2.生产方法（1）化学合成法烟酸、烟酰胺、叶酸、维生素B1、B6、D、E、K等。
（2）发酵法B12、B2，维生素C和生物素，维生素原等。
（3）生物提取法从猪心中提取辅酶Q10，从槐花米中提取芦丁，从提取链霉素后的废液中提取B12等。
二、维生素C ( Vitamin C，V C)维生素C又名抗坏血酸(Ascorbic acid)，呈白色粉末，无臭，味酸，熔点190～192℃，易溶于水和甲醇，略溶于乙醇，不溶于乙醚、氯仿及石油醚等。
具有较强的还原性，易受光、热、氧等破坏，在碱液中或有微量金属离子存在时，分解更快，但干燥结晶后较稳定。
V是C一种人体必需的水溶性维生素，也是一种抗氧化剂，广泛应用于医药、食品、饲料等领域。
不同的维生素对物质代谢的调节作用是不同的。
机体缺少某种维生素时，可使物质代谢过程发生障碍，从而使机体不能正常生长，以至发生不同的“维生素缺乏症”。
例如，缺乏V Bl 可引起脚气病，缺乏VA会引起夜盲症，缺乏维生素VC会引起坏血病等，总之，维生素在维持机体的代谢中起着十分重要的作用。
题目维生素C的含量测定综述.
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二氯酚靛酚法
该法简便易行，但有下列缺点:1。在生物组织内和组织提取液中， 抗坏血酸能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在。它们 同样具有维生素的生理功能，但不能将2，6-二氯酚靛酚还原脱 色。（总抗坏血酸的量常用2，4-二硝基苯肼法和荧光分光光度 法测定）2.生物组织提取物和生物体液中常含有其它还原性物质， 其中有些在同样的条件下也可使2，6-二氯酚靛酚还原脱色。3. 在生物组织中，常有色素类物质存在，给滴定终点的观察造成 困难
紫外测定法 • 原理：根据维生素C具有对紫外光产生吸收、 对碱不稳定的特性，在243nm处测定样品 液与碱处理样品液两者吸光度值之差，并 通过标准曲线，即可计算出维生素C的含量 • 优点：紫外测定法是维生素C快速测定的方 法，操作简单，不受其它还原性物质等成 分的干扰。
碘滴定法
• 原理 维生素C又称抗坏血酸Vc，分子式C6H8O6。维生素C易溶于水， Vc具 有还原性，可被I2定量氧化，因而可用I2标准溶液直接测定。其滴定 反应式：C6H8O6＋I2= C6H6O6＋2HI • 滴定过程中应注意的问题 • ⑴滴定过程中，要保持缓慢滴定，同时要晃动锥形瓶。这样既可以防 止碘溶液过量，又可以使碘溶液与被滴定溶液充分混合。 • ⑵滴定标准维生素C溶液时，碘溶液的用量较大，当锥形瓶内的溶液 出现棕红色时，已接近氧化还原反应的终点，此时，更要放慢滴定的 速度。 • ⑶每次实验前，都要重新滴定标准维生素C溶液，得出所用的碘溶液 量。因为不同的维生素C药片之间，以及每次所配制的碘溶液(或可溶 性淀粉溶液)之间，可能存在着微量的差异，这种差异将导致所用的 碘溶液的量不同。 • ⑷有时仅仅通过观察颜色，不容易确定氧化还原反应是否达到终点。 这时，可以暂时记下所需的碘溶液的量，继续缓慢滴入碘溶液0 5 min， 如果这时的颜色比第一次读数时变得更蓝，而且0 5 min 后不褪色， 则应以第二次所需的碘溶液量为准；如果颜色不再变蓝，则应以第一 次的读数为准。
维生素C制作过程及流程
维生素维生素类生产工艺维生素是一类生物生长和代谢所必需的、具有特殊功能的小分子有机化合物，其既不是细胞的组成物质，也不是能量物质。
一般分为脂溶性和水溶性两大类，脂溶性维生素在体内可直接参与代谢的调节作用，而水溶性维生素是通过转变成辅酶对代谢起调节作用。
不同的维生素对物质代谢的调节作用是不同的。
机体缺少某种维生素时，可使物质代谢过程发生障碍，从而使机体不能正常生长，以至发生不同的“维生素缺乏症”。
例如，缺乏V Bl可引起脚气病，缺乏V A会引起夜盲症，缺乏维生素V C会引起坏血病等，总之，维生素在维持机体的代谢中起着十分重要的作用。
一、维生素C ( Vitamin C，V C)维生素C又名抗坏血酸(Ascorbic acid)，呈白色粉末，无臭，味酸，熔点190～192℃，易溶于水和甲醇，略溶于乙醇，不溶于乙醚、氯仿及石油醚等。
具有较强的还原性，易受光、热、氧等破坏，在碱液中或有微量金属离子存在时，分解更快，但干燥结晶后较稳定。
V C 是一种人体必需的水溶性维生素，也是一种抗氧化剂，广泛应用于医药、食品、饲料等领域。
维生素C的合成常通过化学或微生物方法获得，下面介绍主要的维生素C合成法。
1. 莱氏法1933年瑞士化学家莱齐特因等用化学合成方法合成维生素C取得成功，也称莱氏法。
该法是最早生产维生素C的方法，也是国外采用的方法。
工艺路线如图8-1所示。
图8-1 莱氏法合成维生素C的工艺路线工艺流程如下：（1）菌种的获得以D-葡萄糖为原料，加氢催化生成D-山梨醇，再加入醋酸菌如A cetobacter suboxyclans、A．raucons、A．aceti、A．Xylinoides等将山梨醇氧化成山梨糖，188常使用的是A．suboxyclan和A．melangenum，这是该工艺过程中关键的一步。
（2）第一步发酵a. 在进行发酵时采用的条件是温度为26～30℃，最适pH值为4.4～6.8。
b．培养基的成分：0.5％酵母浸膏为主要营养源，山梨醇浓度为19.8％，通气量比1:1.8，30℃培养30～40h，收率可达97.6％。
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维生素C生产工艺综述摘要:介绍了维生素C 的性质、功能和用途。
综述了维生素C 生产技术的演变过程和发展趋势。
着重探讨了微生物发酵法的生产工艺进展。
介绍了二步发酵法的研发现状,探讨了2 - 酮基- L- 古龙酸的分离提取工艺。
展望了我国维生素C 生产技术的前景。
关键词:维生素C ,功能,二步发酵法,发酵,2 - 酮基- L —古龙酸,分离提取The Overview on the Production Process of Vitamin C Abstract : Characters , functions and uses of vitamin C are introduced. Developmental process and trend of industrial technology on vitamin C are reviewed. Advances in industrial technology of microbiological fermentation method are discussed emphatically. After present situation of R &D of the two steps fermentation method is introduced , the separation and purification processes of 2- keto-L- gluconic acid are discussed. The direction of industrial technology on vitamin C in China is previewed.Key words : Vitamin C ,Function , Two steps fermentation method ,Fermentation , 2- keto-L-gluconic acid , Separation and extraction维生素C(vitaminC ,以下简称Vc) 又名L - 抗坏血酸(L - ascorbicacid) ,是一种人体必需的水溶性维生素。
Vc 广泛存在于生物组织中,在新鲜水果、蔬菜和动物肝脏等中的含量尤为丰富。
绿色植物能够自己合成Vc ,而人和许多动物由于肝脏中缺少一种古洛内酯氧化酶,因而不能自己合成,必须从外界摄取。
1.维生素C 的性质、功能和用途性质纯维生素 C 在常温下为无色晶体,味酸,易溶于水。
Vc 在结晶状态尚稳定,而在水溶液中则很不稳定,容易为加热、氧化所破坏。
L-抗坏血酸具有较强的还原性,在体内经抗坏血酸氧化酶的作用可脱氢氧化成L-脱氢抗坏血酸,该脱氢反应是一个可逆反应。
还原型的L-抗坏血酸和氧化型的L-脱氢抗坏血酸均具有生理活性,它们构成的一对氧化- 还原系统,在细胞代谢中起着重要的生理作用[1 ]。
功能与用途Vc 在人体中具有广泛的生理作用:1) 参与体内氧化还原反应[2 ] ;2) 对抗自由基损伤[3 ] ;3) 改善机体免疫功能[4 ] ; 4) 参与胶原蛋白和细胞间质的合成[2 ] ;5) 参与神经递质的合成[2 ] ;6) 参与氨基酸代谢与铁代谢[2 ] ;7) 抑制血小板及白细胞活化[2 ];等等。
因此,Vc 在坏血病[5 ]、感冒、心血管缺陷、高胆固醇、糖尿病、精神抑郁症[6 ]、危重型克山病等疾病的临床治疗中均具有重要的用途。
此外,Vc还可以用作食品添加剂、饲料添加剂、某些农作物的催熟剂、化妆品工业防锈剂[6 ] ,等等。
的生产方法莱氏法莱氏法是1933年德国化学家Reichstein等发明的最早应用于工业生产VC的方法。
该法以葡萄糖为原料,经催化加氢制取D - 山梨醇,然后用醋酸菌发酵生成L - 山梨糖,再经酮化和化学氧化,水解后得到2 - 酮基- L - 古洛糖酸(2 - KLG) ,再经盐酸酸化得到VC。
莱氏法生产的VC产品质量好、收率高。
由于生产原料廉价易得,中间产物的化学性质稳定,至今仍是许多国外VC生产商,如Roche公司、BASF / Takeda 公司和E. Merck公司等厂商采用的主要工艺方法。
但是莱氏法也存在不少缺陷,诸如生产工序多、劳动强度较大,使用大量有毒、易燃化学药品,容易造成环境污染等。
为此,自20世纪60年代起,各国学者一直致力于莱氏法的改进。
其过程如图1所示：H2/ Ni 醋酸杆菌丙酮/ H2SO4D-葡萄糖D-山梨醇L-山梨糖双丙酮-L-山梨糖高压[O]水解化学转化双丙酮-2-酮基-L-古洛糖酸2- KLC VcNiSO4图1莱氏法生产Vc的工艺流程二步发酵法我国的混合菌发酵工艺是20 世纪70 年代由中国科学院微生物研究所和北京制药厂共同建立的，包括 2 个发酵步骤，故称两步发酵法。
第一步是在醋酸杆菌作用下将D－山梨醇氧化为L－山梨糖，俗称醇糖转化，目前国外对其相关基因和转化机制的研究已经比较清楚；第二步是在一种混合菌系的作用下将L－山梨糖进一步氧化为KGA，俗称糖酸转化[7]。
上述混合菌系包括2 种微生物，直接负责山梨糖生物氧化的微生物俗称小菌，最初曾被鉴定为氧化葡萄糖酸杆菌（Gluconobacter oxydans），最近Urbance等[8] 经系统分类学鉴定对其重新命名为普通酮古龙酸菌（Ketogulonigenium vulgare）。
另一种微生物俗称大菌，本身不能转化山梨糖，作为伴生菌起到辅助小菌生长和产酸的作用。
许多微生物具有这种伴生菌的作用，生产中常用的有腊状芽孢杆菌（Bacillus cereus）、巨大芽孢杆菌（B．megaterium）、苏芸金芽孢杆菌（B．thuringiensis）等。
目前国内Vc 生产厂家都采用混合菌发酵法，该法是惟一成功应用于大规模Vc 工业生产的微生物转化法，具有糖酸转化效率高的突出优势。
目前我国Vc 生产规模占世界总生产规模的2 ／3，其中80％的产品用于出口，是我国医药领域的支柱产业。
混合菌发酵法在国内的成功应用也引起了国外的广泛关注。
1986 年，我国的两步发酵法向瑞士Hoffmann La－Roche 公司进行了技术转让。
其过程如图2所示：H2/ Cat 醋酸杆菌大菌、小菌D - 葡萄糖 D - 山梨醇 D - 山梨糖 2 – KLG混合发酵化学转化Vc图2二步发酵法生产Vc的工艺流程大、小菌关系的研究进展二步发酵法中的第二步发酵是由氧化葡萄糖酸杆菌（Gluconobacter oxydans）和巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）混合发酵完成的，前者为产酸菌俗称小菌，但单独培养传代存活率及产酸能力较低。
后者为伴生菌俗称大菌，它不产酸，混合培养时产酸显着提高。
混合发酵中大小菌两者关系复杂，一直是国内外学者研究的热点。
魏东芝[9]曾提出大菌为小菌提供某种生长因子促进小菌生长的设想。
冯树等[10]研究证实，大菌胞内液和胞外液均可促进小菌生长，大菌胞外液中具有该作用的组分分子量在100kDa以上；大菌胞外液具有促进小菌产酸，其胞内液无该作用；大菌胞外液中具有该活性作用的组分为30-50kDa和大于100kDa 两个部分。
其中前者是一种含铁和锌的蛋白质，该活性蛋白的形成规律和作用机制尚在探索中。
焦迎晖[11]等通过分析Vc二步发酵过程中活菌产酸量、糖酸转化活力等，证明了大菌的胞外液或胞内液对小菌休止细胞的糖酸转化活力并没有直接影响，即大菌的作用仅仅是促进小菌的生长，而对产酸的促进作用是因使小菌密度提高的结果。
目前，大、小菌的详细混生机制尚未完全明了，仍需人们进一步探索。
菌种选育的研究有关二步发酵法中的第二步发酵过程的菌种选育一直是微生物发酵法生产维生素C研究的热点课题之一，我国学者作了大量的工作。
尹光琳等[7]采用紫外照射、化学诱变和原生质体融合等方法选育得到的新组合菌系SCB 329—SCB 933的发酵周期仅40—50h，产酸达115—130mg/mL，转化率约为90%。
焦鹏等[12]运用SMA探针技术HB—HG影印技术筛选得到了一株蛭弧菌J26，摇瓶发酵产生2—KLG的发酵单位为50—60 mg/mL。
通过优化发酵条件，该菌株的发酵单位已达到%—%。
许安等[13]利用离子注入技术选育出的2—KLG高产菌系IPPM—1028，其转化率较出发菌M—2980提高%，发酵周期为60—64h，2—KLG浓度可达70 mg/mL 左右，转化率为95%。
李越中[6]采用含pUB 110质粒的小菌转化子（Km r St s）与Q132（Km s St r）大菌进行原生质体融合，获得可连续传代10代以上的小菌，这将为实现小菌的单独培养以及对小菌的遗传学研究打下基础。
陈建华等[14]用配对法筛选得一株氧化葡萄糖酸杆菌（Gluconobacter oxydans）10—3的优良伴生菌短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）97002,L—山梨糖的转化率达90%左右。
初步尝试两菌属间原生质体融合。
尽管有关二步发酵法第二步发酵过程的菌种选育的研究进行了很多，但仍处于实验室研究或小试阶段。
发酵工艺条件的研究微生物发酵是一个极其复杂的生化反应过程。
基质浓度、温度、PH等因素对微生物的生长和产物的形成都会产生直接影响。
国内一些学者对二步发酵法工艺进行了深入的研究。
魏东芝等[9]研究了VC二步发酵过程的动力学，通过测定发酵中大小菌生长规律及基质和产物的变化，建立了简化的动力学模型，在一定程度上揭示了2KLG 发酵系统的本质特征，为分析发酵过程，指导生产及实现生产连续自动化奠定了基础。
张忠泽[15]等通过优化通气、温度和金属离子等环境因子，显着改善了二菌协同共生效果，醇酸转化率提高了%，发酵周期缩短了。
针对L—山梨糖浓度不高的问题，尹光琳等[7]通过对新组合菌系SCB329—SCB933批加L—山梨糖技术的研究，既避免了高糖对菌体生长的抑制作用，又能利用菌株的优良特性，使底物浓度提高到14%。
康学真[16]等通过对VC二步发酵中大小菌的比例对产酸的影响，测定和分析了零级、一级、二级种子的生长曲线，得出了各级种子的最适培养时间、零级种子培养最初接种量及大小菌的接种比例，对实践有指导作用。
蒋宇扬、张成刚[17]研制了几种稀土元素化合物，考察了它们对2—酮基L—古龙酸还原酶（KGR）及在L—山梨糖发酵中对2—KLG产酸的影响，摇瓶试验结果表明，在L—山梨糖发酵中加入稀土元素化合物，发酵时间缩短6h，2—KLG 产酸量提高超过6 mg/mL。
李越中[6]采用聚乙烯/海藻酸钙包埋对大、小菌进行固定化，获得高于游离菌的产酸量；并采取种子液活化的方法使固定化细胞半衰期延长至10批次。