第十章 双链RNA病毒
双链RNA的免疫调节作用及聚肌胞抗病毒应用进展
双链RNA的免疫调节作用及聚肌胞抗病毒应用进展李毅;金一;孙伦泉;汪明【摘要】双链RNA(dsRNA)被细胞上的识别受体TLR3和胞浆内的RIG-I/MDA5等识别后,通过下游信号途径.激活NF-κB和IRF-3等转录因子,对机体的先天免疫进行调节.聚肌胞(Poly I:C)是一种人工合成的dsRNA,作为天然存在的dsRNA的拟似物,具有良好的免疫增强作用.将Poly I:C用于抗病毒的研究是目前抗病毒药物研发的热点之一.本文就dsRNA对机体非特异性免疫的调节及Poly I:C抗病毒应用的进展做一综述.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2011(032)004【总页数】4页(P335-336,后插1-后插2)【关键词】聚肌胞;免疫调节;抗病毒;TLR3;RIG-I/MAD5【作者】李毅;金一;孙伦泉;汪明【作者单位】中国农业大学动物医学院,北京,100193;中国农业大学动物医学院,北京,100193;University,of,Technology,Sydney,Sydney,Australia;中国农业大学动物医学院,北京,100193【正文语种】中文【中图分类】R978.7病毒，特别是RNA病毒，侵入机体细胞后形成双链RNA(dsRNA)，能够被机体内的各种dsRNA受体识别，并通过不同的信号途径诱导机体和细胞产生I型干扰素、各种炎性因子和促炎因子，激活巨噬细胞、树突状细胞(DCs)、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、自然杀伤细胞(NK)等多种免疫效应细胞，使机体产生抗病毒和抗肿瘤的效果。
聚肌胞(Poly I∶C)是一种人工合成的dsRNA，具有dsRNA的结构特性，目前Poly I∶C作为天然dsRNA的拟似物被广泛的用于各种研究，特别是抗病毒和抗肿瘤的研究中。
本文将就dsRNA诱导机体非特异性免疫调节及利用Poly I∶C抗病毒的最新应用做一综述。
1 dsRNA刺激机体产生非特异免疫的信号通路细胞膜表面和胞浆中有多种识别受体能够识别dsRNA，因此，dsRNA在细胞内能够通过不同细胞信号途径激活机体的非特异性免疫。
双链RNA病毒(专业知识值得参考借鉴)
双链RNA病毒(专业知识值得参考借鉴)一概述双链RNA（dsRNA）病毒因其核酸为互补的双链RNA而得名。
dsRNA病毒有两个特点：一是病毒基因组多为10～12个节段的双链RNA分子；二是病毒具有双层衣壳，而没有包膜。
病毒的双链RNA在病毒自身依赖RNA多聚酶作用下转录出mRNA，然后再翻译出早期蛋白或晚期蛋白。
双链RNA在复制时，必须先以其原负链为模板复制出正链RNA，再由正链RNA复制出新的负链，构成子代RNA。
dsRNA病毒大部分属于呼肠病毒科。
呼肠病毒科有9个属，其中正呼肠病毒属、轮状病毒属、环状病毒属、colti病毒属等4个属的病毒感染人和其他脊椎动物。
二致病性1.呼肠病毒呼肠病毒主要感染婴幼儿。
呼肠病毒可从患有上呼吸道感染或腹泻的婴儿和儿童粪便和呼吸道分泌物分离到，并具有相对稳定的性质，提示呼肠病毒可能主要通过粪-口途径和呼吸道传播。
呼肠病毒感染无明显季节性。
呼肠病毒感染潜伏期一般为1～3天。
已知呼肠病毒与儿童的上呼吸道感染、发热、发热性皮疹及肠炎有关。
在成人感染中，可有轻微的呼吸道症状。
1型和2型呼肠病毒可引起普通感冒，伴有全身不适和头痛，3型呼肠病毒可引起鼻炎。
2.轮状病毒轮状病毒存在于许多哺乳动物体内，有广泛的宿主。
可以分为7个血清组（A组到G组），其中A 组是引起人类爆发轮状病毒感染的最重要病原。
轮状病毒可以通过粪-口途径传播，其感染具有季节性。
由于病毒颗粒是相对稳定的，可以在不同环境长期存活。
潜伏期通常为48小时或更短，可以表现为亚临床状态感染，也可以导致轻度腹泻和呕吐，重者表现为严重的无血性、水样腹泻，并伴随脱水和电解质丢失。
三实验室检查1.呼肠病毒（1）标本直接检查主要采用血凝抑制试验。
检查呼肠病毒的抗原，也可用核酸杂交和PCR技术检测呼肠病毒的RNA。
（2）抗体检测检测呼肠病毒的抗体可采用血凝抑制试验和中和试验。
近来多采用ELISA检测呼肠病毒抗体。
2.轮状病毒轮状病毒感染可使用ELISA法，可检测到患者血清中抗病毒抗体浓度升高。
第十章 DNA、RNA的生物合成
400 40 20 109 90 140 有 有 有 有 有 无 有 有 有 聚合核苷酸数/分钟/分子(37℃) 1000 50 15000 主要功能 修复等 修复作用 复制
────────────────────────
表13-2 真核细胞中DNA聚合酶的性质 ───────────────────── DNA聚合酶 性质 -------------------------------------------------------
α
β
γ
δ
ε
───────────────────── 分布 细胞核 细胞核 线粒体 细胞核 细胞核 分子量(kd) >250 36-38 160-300 170 256 3’ →5’外切酶活性 无 无 有 有 有 5’ →3’聚合作用 有 有 有 有 有 主要功能 复制 损伤修复 复制 复制 复制,损伤修复
3、DNA的损伤修ranscription)
概念
以RNA为模板，dNTP为原料，反转录酶 催化，按碱基配对规律合成DNA的过程。 反转录酶, 又称为依赖RNA的DNA聚合酶 (RNA-dependent DNA polymerase, RDDP)
DNA 转录 RNA RNA(病毒)
2.半保留复制的实验证据:
1958年Meselson和Stahl用同位素15N标记大 肠杆菌DNA,首先证明了DNA的半保留复制。
DNA的复制的方式-----DNA半保留复制
1958, Messelson and Stahl 实验证实
含15N-DNA的细菌
普通DNA
培养于普 通培养液
第一代 细菌的DNA双链 (蓝线的代表含15N)
作用：防止重新形成双 链和防止单链模板 被核酸酶水解,维持DNA单链状态和完整性
双链rna识别分子
双链rna识别分子双链RNA识别分子，是指能够与双链RNA相互作用并识别其序列、结构等特征的分子。
这些分子在细胞中起着重要的作用，参与调控基因表达、维持细胞功能等重要生命过程。
双链RNA（dsRNA）是由两条互补的RNA链相互结合而成。
它在细胞内广泛存在，包括非编码RNA、长链非编码RNA等多种类型。
通过与特定的双链RNA结合，识别分子能够调节基因的转录、翻译和降解等过程，从而影响细胞的生理和病理。
双链RNA识别分子的种类繁多，包括RNA结合蛋白、小分子化合物、RNA酶等。
其中，RNA结合蛋白是最为常见的一类。
它们通常含有一种或多种结构域，能够识别双链RNA的特定序列或结构。
这种特异性结合能使其与特定的双链RNA相互作用，从而发挥调控功能。
双链RNA识别分子的发现和研究对于理解基因调控机制、疾病发生发展等具有重要意义。
通过研究这些分子的结构和功能，人们可以揭示它们在细胞内的作用机制，为开发新的治疗策略提供理论依据。
此外，双链RNA识别分子还可以作为药物开发的靶点，通过特异性结合双链RNA从而引发治疗效果。
为了更好地发现和设计双链RNA识别分子，科学家们利用各种高通量策略进行了大量的研究。
通过大规模筛选和筛选优化，已经发现了一系列具有高度特异性和亲和力的识别分子。
利用这些分子，人们可以实现对特定双链RNA的精准调控，为生物学研究和药物开发提供了强有力的工具。
然而，双链RNA识别分子的研究仍然面临一些挑战和困难。
首先，双链RNA的结构复杂多样，不同的双链RNA可能存在差异，使得寻找通用的识别分子成为一项艰巨的任务。
其次，识别分子的设计和优化需要结合大量的实验和计算手段，涉及到多个领域的知识和技术。
因此，科学家们需要加强合作，开展跨学科的研究，以提高双链RNA识别分子的发现效率和应用价值。
综上所述，双链RNA识别分子是细胞中重要的调控因子，能够与特定的双链RNA相互作用并识别其序列、结构等特征。
通过研究这些分子，可以深入理解基因调控机制、疾病的发生发展，并为新药物的开发提供理论依据。
双链rna病毒有哪些
双链RNA病毒有哪些双链RNA病毒（Double-stranded RNA virus）是一类具有双链RNA（dsRNA）基因组的病毒。
它们广泛存在于动物、植物和真菌等生物体中，并且与多种疾病的发生和传播密切相关。
本文将介绍几种常见的双链RNA病毒。
1. 冠状病毒（Coronavirus）冠状病毒是一类具有环状外套膜和大型正链RNA基因组的双链RNA病毒。
它们主要感染哺乳动物，包括人类。
冠状病毒可以引起多种疾病，从普通感冒到严重的呼吸道综合征（例如SARS-CoV和MERS-CoV），甚至是致命的肺炎（例如COVID-19）。
2. 重要耐药真菌（Emerging Fungal Pathogens）一些耐药真菌也属于双链RNA病毒。
它们可以导致严重的人类疾病，尤其是在免疫系统受损的患者中。
例如，新兴的白假丝酵母菌（Cryptococcus neoformans）感染常见于艾滋病患者。
这些病原体可以通过受污染的土壤或鸟类粪便传播，危害人类健康。
3. 双链RNA病毒作为生物技术工具（Biotechnological Applications）双链RNA病毒也被利用为生物技术工具，在生物学研究和治疗领域发挥着重要作用。
例如，双链RNA病毒靶向RNA干扰（RNA interference，简称RNAi）技术已经被广泛应用于研究基因功能和开发新的药物。
通过设计合成特定的双链RNA病毒，可以选择性地沉默特定的基因，并探索其功能与相关疾病之间的关联。
4. 双链RNA病毒和植物病害（Plant Pathogens）双链RNA病毒也是植物病害的常见病原体。
它们可以导致植物的黄化、叶状体变形等病症，对植物的生长和产量造成严重影响。
某些双链RNA病毒也可以通过宿主植物的种子传播，进一步增加病害的传播范围。
5. 双链RNA病毒和动物病害（Animal Pathogens）除了感染人类之外，双链RNA病毒还可以感染和影响各种动物，包括家畜和野生动物。
第十章RNA的生物合成介绍
二)真核RNA聚合酶
• 真核较原核的酶复杂，已清楚的有RNA PolⅠ,Ⅱ,Ⅲ及Mt四型 • 组成和功能：均由多亚基构成，聚合酶 Ⅱ主要负责mRNA的合成； PolⅠ主要负 责rRNA的合成； PolⅢ主要负责tRNA和 5srRNA的合成。
三、启动子及终止信号 1. 启动子（promoter）
复制和转录的区别
相同点: • DNA 模板
• 依赖DNA的聚合酶
• 碱基配对规律 • 生成磷酸二酯键 • 链延长方向5'→3'
复制和转录的不同点
复 制 转 录
模板使用 两条全用、全部用完 参与子代 合成原料 dATP dGTP dCTP dTTP （dNTP） 合成酶类 多酶催化 DDDP
碱基互补 A-T、G-C 3′-OH 起始物质 RNA引物
转录后进行
一、mRNA的转录后加工
1. 5端形成 帽子结构 (m7GpppGp—)
7-甲基鸟嘌呤-三磷酸鸟苷
帽子结构的生成：
5 pppGp…
磷酸酶
5 ppGp…
鸟苷酸 转移酶
Pi
帽子结构的功能: • 核内生成, 保护 mRNA不被核酸外切 酶水解。 • 与翻译过程有关， 帽子结构结合蛋白 是翻译起始必需的 因子。
pppG
ppi
5 GpppGp…
SAM
甲基转移酶
5 m7GpppGp…
2. 3-末端 Poly A尾: （长约100-200bp） 生成：在核内修饰, 与转录终止同时进行。 作用：增加mRNA稳定性，维持翻译模板活性。
AAAAAAA· · · · · ·3
mRNA
3加尾
核酸酶 5
AATAAA GTGTGTG
结构基因 ：能作为转录模板的DNA区段。
第十章RNA转录
【习题】一、单项选择题1．合成RNA需要的原料是：A．dNTPB．dNMPC．NMPD．NTPE．NDP2．转录的含义是：A．以DNA为模板合成DNA的过程B．以DNA为模板合成RNA的过程C．以RNA为模板合成RNA的过程D．以RNA为模板合成DNA的过程E．以DNA为模板合成蛋白质的过程3．关于复制与转录的说法错误的是：A．新生链的合成都以碱基配对的原则进行B．新生链合成方向均为5′至3′C．聚合酶均催化磷酸二酯键的形成 D．均以DNA分子为模板E．都需要NTP为原料4． DNA双链中,指导合成RNA的那条链叫：A．反意义链B．Crick链C．编码链D．模板链E．以上都不对5．关于DNA复制和转录，下列说法错误的是：A．都以DNA为模板 B．需NTP作原料C．遵从A—T（u）配对，G—C配对D．都需依赖DNA的聚合酶E．产物都是多核苷酸链6．有关转录和复制的叙述正确的是：A．合成的产物均需要加工B．与模板链的碱基配对均为A-TC．合成起始都需要引物D．原料都是dNTPE．都在细胞核内进行7．关于DNA指导的RNA聚合酶，下列说法错误的是：A．以DNA为模板合成RNAB．是DNA合成的酶C．以四种NTP为底物D．催化3’,5’–磷酸二酯键的形成E．没有DNA时，不能发挥作用8．有关原核生物RNA聚合酶的叙述,不正确的是：A．σ因子参与启动B．全酶含有σ因子C．全酶与核心酶的差别在于σ亚基的存在 D．核心酶由α2ββ′组成E．核心酶由αββ′组成9．原核生物识别转录起始点的亚基是：A．αB．βC．ρD．σE．β′10．真核生物催化tRNA转录的酶是：A．DNA聚合酶ⅢB．RNA聚合酶ⅠC．RNA聚合酶ⅡD．RNA聚合酶ⅢE．DNA聚合酶Ⅰ11．催化原核生物mRNA转录的酶是：A．RNA聚合酶B．RNA聚合酶ⅠC．RNA聚合酶ⅡD．RNA聚合酶ⅢE．DNA聚合酶Ⅰ12．外显子是指：A．不被翻译的序列B．不被转录的序列C．具有表达活性的编码序列D．被转录非编码的序列E．以上都不是13．原核生物参与转录起始的酶是：A．解链酶B．引物酶C．RNA聚合酶全酶D．核心酶E．RNA聚合酶Ⅱ14．原核生物中DNA指导的RNA聚合酶的核心酶组成是：A．α2ββ’σB．α2ββ’C．αββ’D．α2βE．ββ’15．抗生素利福平专一性的作用于RNA聚合酶的哪个亚基：A．αB．βC．β′D．α2E．σ16．RNA聚合酶全酶识别启动子的位置在：A．转录起始点的上游B．转录起始点的下游C．结构基因转录区内D．不能转录的间隔区内E．以上都不是17．真核生物催化45SrRNA转录的酶是：A．RNA复制酶B．RNA聚合酶ⅠC．RNA聚合酶ⅡD．RNA聚合酶ⅢE．RNA聚合酶核心酶18．关于真核生物的RNA聚合酶，下列说法错误的是：A．RNA聚合酶Ⅰ的转录产物是45S–rRNA B．RNA聚合酶Ⅱ转录生成hnRNAC．利福平是其特异性抑制剂 D．真核生物的RNA聚合酶是由多个亚基组成E．RNA聚合酶催化转录时，还需要多种蛋白质因子19．大肠杆菌的转录过程：A．有冈崎片段形成B．需RNA引物C．不连续合成同一链D．与翻译过程几乎同时进行E．RNA聚合酶覆盖的全部DNA均打开20．原核生物启动子的-35区的保守序列是：A．TATAATB．TTGACAC．AATAAAD．CTTAE．GC21．原核生物启动子的-10区的保守序列是：A．TATAATB．TTGACAC．AATAAAD．CTTAE．GC22．对真核生物启动子描述错误的是：A．转录起始点上游有共同的序列5′TATAB．转录起始点上游有共同的序列5′CAATC．5′端的TATA序列又叫TATA盒D．5′端的TATA序列又叫Pribnow盒E．5′的TATA序列又叫Hogness盒23．下列哪一项不是原核生物转录空泡的结构成分：A．DNA模板链B．DNA编码链C．新生成的RNA链D．转录因子E．RNA聚合酶24．5′AATAA，是真核生物：A．顺式作用元件B．反式作用因子C．转录加尾修饰点D．启动子的辨认序列E．RNA聚合酶开始结合的序列25．原核生物识别转录起点的是：A．ρ（Rho）因子B．α亚基C．σ因子D．核心酶E．β亚基26．核酶是在研究哪中RNA的前体中发现的：A．tRNA前体B．mRNA前体C．SnRNAD．rRNA前体E．hnRNA27．下列关于原核生物转录延长阶段错误的叙述是：A．σ因子从转录起始复合物上脱落 B．核心酶催化此过程C．RNA聚合酶与模板结合松驰 D．RNA聚合酶与模板的结合紧密E．转录过程未终止时，即开始翻译28．参与RNA聚合酶Ⅱ转录的转录因子中，能结合TATA盒的是：A．TFⅡAB．TFⅡBC．TFⅡDD．TFⅡEE．TFⅡF29．关于真核细胞RNA聚合酶Ⅱ，下列说法正确的是：A．在细胞核中催化合成mRNA前体B．对鹅膏蕈碱不敏感C．仅存在于线粒体中D．催化转录生成45S-rRNAE．利福平是其特异性抑制剂30．mRNA转录后的加工不包括：A．5′端加帽子结构B．3′端加polyA尾C．切除内含子D．连接外显子E．3′加CCA尾31．以下对tRNA合成的描述不正确的是：A．tRNA3′末端需要加上ACC-OHB．tRNA前体中有内含子C．tRNA前体还需要进行化学修饰加工D．RNA聚合酶Ⅲ催化tRNA前体的生成E．tRNA前体在酶的催化下切除5′和3′端处多余的核苷酸32．ρ因子的功能是：A．结合阻遏物于启动区域处 B．增加RNA合成速率C．释放结合在启动子上的RNA聚合酶 D．参与转录的终止过程E．允许特定转录的启动过程33．内含子是指：A．不被转录的序B．被转录的非编码序列C．被翻译的序列D．编码序列E．以上都不是34．DNA上某段碱基顺序为5’-ATCAGTCAG-3’，复制后生成的DNA单链碱基顺序为：A．5’-CUGACUGAU-3’ B．5’-CTGACTGAT-3’C．5’-UAGUCAGUC-3’ D．5’-ATCAGTCAG-3’E．5’-UTGUCAGUG-3’35．DNA分子上某段碱基顺序为5′AGCATCTA，转录后的mRNA相应的碱基顺序为：A．5′TCGTAGATB．5′UCGUAGAUC．5′UAGAUGCUD．5′TAGATGCTE．以上都不是36．外显子是：A．基因突变的表现B．断裂开的DNA片段C．不转录的DNA也就是反义链D．真核生物基因中能表达为成熟RNA的核酸序列E．真核生物基因初级产物中表达的非编码序列37．AATAAA核苷酸序列是：A．限制性内切酶辨认的切口B．原核生物启动子辨认的核酸序列C．真核生物转录加尾修饰点D．真核生物启动子辨认的核酸序列E．Pribnow盒38．Pribnow盒是：A．真核细胞启动子序列 B．位于转录的终止区的结构序列C．原核生物位于-10bp左右的保守区 D．是mRNA 上的一个结构序列E．形成发夹结构, 阻止RNA聚合酶的结合39．新合成的mRNA链的5′端最常见的核苷酸是：A．ATPB．TTPC．GMPD．CTPE.GTP40．真核生物mRNA的转录后加工有：A．3’末端加上CCA-OHB．把内含子拼接起来C．脱氨反应D．去除外显子E．首、尾修饰和剪接41．关于真核生物mRNA的聚腺苷酸尾巴，错误的说法是：A．是在细胞核内加工接上的 B．其出现不依赖DNA模板C．维持mRNA作为翻译模板的活性D．先切除3’末端的部分核苷酸然后加上去的E．直接在转录初级产物的3’末端加上去的42．关于外显子的叙述正确的是：A．基因突变的序列B．mRNA5′端的非编码序列C．断裂基因中的编码序列D．断裂基因中的非编码序列E．成熟mRNA中的编码序列43．下列关于mRNA的叙述正确的是：A．3’末端含有CCA—OHB．在三种RNA中寿命最长C．5’末端有“帽子”结构 D．含许多稀有碱基E．二级结构呈三叶草型44．关于tRNA叙述错误的是：A．在真核细胞核内，由RNA聚合酶Ⅲ催化合成其初级产物B．二级结构呈三叶草型C．3’末端有CCA—OHD．含有许多稀有碱基E．5’末端有多聚A尾巴45．下列哪种反应不属于转录后修饰：A．5’端加上帽子结构B．3’端加聚腺苷酸尾巴C．脱氨反应D．外显子去除E．内含子去除46．tRNA稀有碱基的生成没有下列哪种反应：A．甲基化反应B．还原反应C．核苷内的转位反应D．脱氨反应E．水解反应47．反转录酶可以催化下列哪种反应：A．DNA→蛋白质B．DNA→RNAC．RNA→RNAD．RNA→RNA:DNA杂交体→DNA E．RNA→蛋白质48．将病毒RNA的核苷酸顺序的信息，在宿主体内转变为脱氧核苷酸顺序的过程是：A．复制B．转录C．反转录D．翻译E．翻译后加工49．在DNA生物合成中，具有催化RNA指导的DNA聚合反应，RNA水解及DNA指导的DNA聚合反应三种功能的酶是：A．DNA聚合酶B．RNA聚合酶C． DNA水解酶D．反转录酶E．连接酶50．反转录酶不具有下列哪种特性：A．存在于致癌的RNA病毒中B．以RNA为模板合成DNAC．RNA聚合酶活性D．RNA酶活性E．可以在新合成的DNA链上合成另一条互补DNA链二、多项选择题1． DNA复制与RNA转录的共同点是：A．需要单链DNA做模板B．需要DNA指导的DNA聚合酶C．合成方式为半保留复制D．合成方向为5′→3′E．合成原料为NTP2．哪些是E．coli RNA聚合酶的亚基：A．αB．εC．γD．βE．σ3．参与转录的物质有：A．单链DNA模板B．DNA指导的RNA聚合酶C．NTPD．NMPE．DNA指导的DNA聚合酶4．真核生物和原核生物RNA聚合酶：A．都有全酶、核心酶之分B．都从5′→3′延长RNA链C．都受利福平的特异性抑制D．作用时都不需要引物E．合成的原料一样5． RNA转录需要的原料：A．TTPB．GTPC．CTPD．UTPE．ATP6．原核生物转录起始区前有下列哪些序列? A．TATAATB．AAAAAAC．UUUUUUD．TTGACAE．AATAAA7． tRNA前体的加工包括：A．5′端加帽结构B．切除5′和3′端多余的核苷酸C．去除内含子D．3′端加CCAE．对核苷酸进行化学修饰8． tRNA碱基化学修饰作用是：A．甲基化B．羟化C．转位D．碱基还原E．氧化9．真核生物mRNA前体的加工包括：A．5′端加帽结构B． 3′端加多聚A尾C．3′端加CCA-OHD．去除内含子E．连接外显子10．RNA碱基配对的原则是：A．A-UB．T-AC．C-GD．G-AE．T-U11．内含子是指：A．成熟的mRNAB．hnRNAC．剪接中被除去的RNA序列D．合成蛋白质的模板E．非编码序列12.．hnRNA：A．是mRNA前体B．合成和分解都很迅速C．能被翻译成氨基酸的顺序D．含有内含子和外显子E．是tRNA的前体13．真核生物mRNA转录后修饰包括：A．切除内含子B．加上聚A尾巴C．把所有嘌呤甲基化D．生成次黄嘌呤E．加上帽子结构14．tRNA辨认结合：A．密码子B．氨基酸C．启动子D．转录因子E．氨基酰tRNA合成酶15．核酶的特点是：A．有催化作用的蛋白质B．有催化作用的RNAC．底物是RNAD．底物是突变的DNA片段E．底物是蛋白质16．原核生物转录起始区：A．－10区有TATAAT序列B．－35区有TTGACA序列C．结合RNA聚合酶后不易受核酸外切酶水解D．转录起始点转录出起始密码子AUGE．－25～－30区有TATA序列17．反转录酶可催化下列哪些反应：A．DNA→DNAB．DNA→RNAC．RNA→DNAD．RNA →RNA :DNA杂交体E．RNA→蛋白质18．以下对反转录酶催化的反应哪些描述是正确的：A．RNA指导的DNA合成反应B．DNA指导的RNA合成反应C．RNA的水解反应D．有3′→5′外切酶活性E．DNA聚合的方向是5′→3′三、填空题1．大肠杆菌的RNA聚合酶由α2ββ′σ五个亚基组成，其中辨认起始点的亚基是________，其余四个亚基共同组成________。
《动物病毒学》课件：第十一章 双链RNA病毒
➢ 型特异抗原为VP2，含有中和位点和血凝素，可凝 集绵羊及人O型红细胞
➢ 根据中和试验可将BTV分为26个血清型，各型之间 无交叉免疫，病毒有基因序列漂移和重配现象
地区 美国 澳大利亚
南非和西部非洲
中国 瑞士
血清型 10，11，13，17 1，20，21，23
1~15，18，19，22，24
1~4，12，15，16 25，26
版纳病毒
人
神经症状
病毒属
蟹十二节段病毒属
刺突呼肠孤病毒亚科
哺乳动物正呼肠孤病毒1-4型 多种哺乳动物
小肾炎、肠炎、 鸡、火鸡、番鸭、鹅
慢性呼吸道病、心肌炎
水生呼肠孤病毒属
科州蜱传热病毒属
二、科的特征
➢无囊膜，球形病毒粒子，直 径60-80nm，双层衣壳（三 层），均呈二十面体对称， 内壳体与核酸构成核心。
引起犊牛腹泻 ➢我国由庞其方等于 1979 年首次从儿童腹泻粪便中检
测出轮状病毒 ➢1975 年 Woode 和Bridge 首次从猪分离出轮状病毒。 ➢我国于1982年从腹泻猪粪便中分离到轮状病毒
2. 轮状病毒的主要特性
➢病毒形态类似车轮而得名 ➢基因组由11个双股RNA片段组成 ➢衣壳抗原VP6为群特异抗原 ➢根据中和试验分为A、B、C、D、E
共15个属，其中对脊椎动物致病的有7个属：
正呼肠孤病毒属 质多角体病毒属 斐济病毒属 水稻病毒属 真菌呼肠孤病毒属
环状病毒属
轮状病毒属 植物呼肠孤病毒
科州蜱传热 东南亚十二节
病毒属
段RNA病毒属
光
刺
滑
突
呼肠孤病毒两个亚科的形态结构示意图
呼肠孤病毒科的主要脊椎动物致病病毒
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第十章双链RNA病毒
1 呼肠孤病毒科（Reoviridae）
分类
按病毒的宿主范围和致病性不同分为12个属，其中对脊椎动物致病的有6个属：
正呼肠孤病毒属（禽呼肠孤病毒）轮状病毒属（轮状病毒）
环状病毒属（蓝舌病病毒、非洲马瘟病毒）科州蜱传热病毒属（科州蜱传热病毒）
东南亚十二节段病毒属（版纳病毒）水生呼肠病毒属（草鱼出血热病毒）
科的特征
无囊膜，球形病毒粒子，直径60-80nm，双层衣壳（三层），内层衣壳呈二十面体对称，内壳体与核酸构成核心。
基因组为双股RNA，分为10-12个节段，总碱基数18-23kb，总分子量为12-20×106D。
有6-10种结构多肽，细胞浆内复制，某些种有血凝性。
禽呼肠孤病毒（Avian reovirus, ARV)
属于呼肠孤病毒科、正呼肠孤病毒属
病毒形态与理化特性
无囊膜、球形病毒粒子
对热有较强的抵抗力，能耐受60℃8-10h，56℃22-24h，37℃可达13-16周，22℃为48-51周，4 ℃为3年以上。
对乙醚不敏感，对2%来苏儿、3%甲醛等有抵抗力
无血凝活性，能诱导细胞融合
病毒基因组结构特征
根据电泳迁移率的不同，可将ARV的双链RNA基因组分为10个节段，这10个节段又可分为L(大）、M（中）、S(小）三个组
正链(+)基因节段的5’段有帽子结构，而且每个dsRNA节段的3’端均露出羟基，这种dsRNA 节段完全能够抵抗单链特异性的核酸酶S1的降解
ARV的致病性
流行于鸡、鸭、火鸡、鹅、鹦鹉等禽类
主要引起感染鸡的病毒性关节炎/腱鞘炎和吸收障碍综合征，感染番鸭时多见肝、脾肿大及表面出现白色小坏死点
可水平传播，也可垂直传播
发病率高，但死亡率比较低。
临床上常见于鸡马立克氏病毒、传染性法氏囊病毒感染的病例，混合感染可加剧病情和死亡。
蓝舌病毒（Bluetongue virus)
病毒的基本特性
蓝舌病病毒（Bluetongue virus)，属于呼肠孤病毒科，环状病毒属，双股RNA病毒
基因组为10个双股RNA。
病毒可使鸡胚死亡，表现水肿和出血病毒存在于病畜血液和各器官中
病毒至少有24个血清型，各型之间无交叉免疫，病毒有基因序列漂移和重配现象
致病性
以昆虫为传播媒介的反刍动物的一种急性传染病。
OIE规定必须通报的A类传染病(OIE指定的15种A类病）。
主要发生于绵羊，表现为发热、白细胞减少、口鼻和胃黏膜的糜烂性炎症。
病羊：羔羊长期发育不良并有死亡，胎儿畸形，羊毛损坏（变粗而脆），造成很大经济损失。
2 双RNA病毒科（Birnaviridae）
传染性法氏囊病毒（禽）传染性胰坏死病毒（鱼）
科的特征
病毒颗粒呈二十面体对称，球形，只具单层衣壳，粒子直径约为55-77nm，无囊膜，表面无突起。
基因组为双股、双节段RNA，病毒体有4-5种结构蛋白，在胞浆中复制。
对醚、氯仿和胰蛋白酶有抵抗力，具有很高的热稳定性，IBDV于56℃可存活5h，于60℃存活90min，耐酸（pH3.0）。
传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus, IBDV）
同义名：传染性法氏囊炎病毒、盖姆波罗病病毒、鸡肾病变病毒
病毒的基本特性
传染性法氏囊病毒（Infectious Bursal Disease Virus，IBDV）属于双RNA病毒科，禽双RNA 病毒属。
无囊膜，二十面体立体对称，直径55-65nm，感染细胞内呈晶格样排列。
IBDV的理化特性
IBDV对外界抵抗力强，对乙醚和氯仿不敏感。
在pH12时失活，但在pH2时不受影响。
耐冻融，反复冻融5次毒价不降低。
超声波破裂不能灭活。
在鸡舍中可以存活2-4个月，消毒和清洗的鸡舍也难以去除病毒。
IBDV基因组的结构组成
双链、分节段的RNA病毒，A节段约长3.3 kb, B节段约长2.9 kb。
IBDV抗原性血清分型
VP3具有种特异性抗原表位，VP2具有型特异性抗原表位；
VP2可以诱导保护性抗体
VP3的抗体没有保护作用
根据VP2抗原性的不同，可以将IBDV分为血清Ⅰ型和血清Ⅱ型
血清Ⅰ型鸡源毒株，仅对鸡致病，可以分为6个亚型。
血清Ⅱ型为火鸡源性，一般对鸡和火鸡无致病性，其抗体对血清Ⅰ型不能产生保护。
病毒分离培养
分离IBDV比较困难。
鸡胚源细胞培养物分离和连续穿代IBDV非常困难。
鸡胚尿囊腔接种效果差。
鸡胚接种
IBDV在鸡胚上繁殖，选无母源抗体或SPF鸡胚。
5-7日龄鸡胚接种卵黄囊，9-11日龄鸡胚接种绒毛尿囊膜。
感染胚水肿，头部、趾部和肾脏充血、出血，肝脏点状坏死和出血斑。
变异株不致死胚，仅出现肝脏肿大和脾脏肿大。
细胞培养
鸡胚中适应的IBDV毒株可适应细胞培养并产生细胞病变效应。
常用的细胞系由鸡胚成纤维细胞，鸡胚肾细胞，鸡胚法氏囊细胞，鸡胚淋巴细胞系和一些非鸡源细胞系。
致病性
自然宿主是鸡和火鸡，但最近几年国外也有关于从鸭、鹅、鸥等鸟类血清中检测到IBDV抗体的报道。
同时，我国学者周宗安等发现麻雀、鸭、鹅均可自然感染IBDV.(感染谱在不断扩大！）
野毒具有不同程度的致病力，疫苗毒株也有潜在的致病力，所有的鸡都面临IBDV的威胁。
诊断
抗原检测
免疫荧光：病毒分离鉴定的辅助手段。
双抗夹心ELISA：直接对组织中的病毒进行检测和分型，快速诊断。
抗体检测
VN：固定病毒稀释血清，能够区分IBDV血清型和不同毒株间的抗原差异。
ELISA：只能检测群特异性抗原，不能区分血清型。
AGPT：检测群特异性抗原，临床多用。
思考题
1、双链RNA病毒包括哪两个科？
2、呼肠孤病毒分为哪几个属？各属中有哪些重要的病毒？
3、双RNA病毒与呼肠孤病毒的主要区别是什么？
4、可采用哪些方法分离培养IBDV？。