抗缪勒氏管激素AMH生殖内分泌方面的临床检测应用
AMH在临床妇科及生殖的应用PPT课件
生理基础
AMH在月经周期的变化
AMH可以在月经周期任意天数检测
周期内不同天数AMH值变化
不同周期间AMH值变化
不同指标组内相关系数 ICC>0.80表示具有重复性
International Journal of Endocrinology November 42013
生理基础
AMH在一天中的变化
治疗后，三组的AMH及INHB均显著 降低，三种方案均有效 治疗后，C组的AMH及INHB均显著低 于A、B组，中西医联合方案疗效更佳
中华检验医学杂志，May 2017, Vol.402,4No.5
临床案例
患者赵女士，20岁，近两年月经紊乱，现已停经6个月 身高160cm，体重86kg，体型肥胖，多毛 B超：双侧卵巢内可见多个大小不等的小囊状结构，呈蜂窝状，直径＜10mm 性激素：FSH=5.8 IU/L、LH=18.7 IU/L、E2=65.3 pg/ml、PRL=17.2 ng/ml AMH=12.16 ng/ml，INHB=161.56pg/ml
发育成阴道上段、子宫和输卵管
AMH于1947年首次在男性胎儿的睾丸
支持细胞中被发现
在男性中，8周胎儿即可分泌AMH，抑
女性
制缪勒氏管的发育，使中肾管在睾酮的
作用下发育为男性生殖道
在女性中，36周胎儿卵巢的颗粒细胞才
开始分泌AMH，由于缺乏AMH的分泌，
使生殖系统发育为女性
卵巢颗粒 细胞瘤
Obstetrics & Gynecology Science, 2014, 57(53):343
33
（四）女性围绝经期的健康管理
AMH用于预测绝经的临床研究
作者 Van rooji et al.
抗缪勒氏管指数(amh)
抗缪勒氏管指数(amh)
抗苗勒氏管指数（AMH）是女性卵巢功能的一个很好的指标。
它是一个血液标志物，可提供有关女性生殖健康的许多信息。
AMH是由卵巢组织分泌的一种生长因子，在诊断卵巢综合征等相关疾病中具有重要作用。
AMH是由幼年期早期发育的小型卵泡分泌的生长因子，由于AMH和卵巢对FHS和LH的反应不同，因此通常作为卵巢指标使用。
AMH指数越高，代表着女性卵巢内相应数量的小型卵泡越多，这意味着其生育能力较高。
随着年龄的增长，AMH水平会逐渐下降。
在35岁以下的女性中，卵巢储备呈现稳定的状态。
但随着年龄的增长，卵巢开始逐渐耗尽小型卵泡的储备，导致AMH水平下降。
因此，AMH指数可以用作预测女性生育能力的指标。
AMH指数对于不同生育阶段的女性具有不同的适用性。
对于从事不孕不育治疗的女性，AMH指数的水平对治疗和预测药物治疗反应至关重
要。
对于40岁以上的女性，AMH指数的准确性可能会降低。
这是因为
随着年龄的增长，一些小卵泡中的卵子可能会受到DNA损伤，导致它
们分泌AMH的能力降低。
除了生育方面，AMH指数在临床中还有其他用途。
例如，它可以用于评估卵巢储备是否可供作为卵子冷冻的候选者；评估围绝经期患者
的激素水平；以及诊断肝豆状核变性等疾病。
总之，抗苗勒氏管指数是女性生殖健康的重要指标。
它可以提供
重要的信息，对于不孕不育治疗和卵巢储备评估等方面具有重要意义。
但是，需要注意的是，AMH指数仅供参考，不能作为唯一的诊断标准，女性需要结合其他临床症状和体征来综合评估生殖健康。
抗苗勒管激素的临床应用
抗苗勒管激素的临床应用抗苗勒管激素（anti-Mullerian hormone，AMH）是转化生长因子β（TGF-β）超家族成员。
AMH是由睾丸未成熟的Sertoli细胞及卵巢窦前卵泡和小窦卵泡的颗粒细胞分泌的一种糖蛋白。
卵巢内的小窦卵泡数量越多，AMH 的浓度便越高；反之，当卵泡随着年龄及各种因素逐渐消耗，AMH 浓度也会随之降低，接近绝经期时，AMH 便渐趋于0，可作为预测卵巢储备的标志物。
AMH是卵泡生长发育的调节因子，AMH参与生理性卵泡形成过程中的两次重要募集：始基卵泡募集和优势卵泡募集。
AMH通过旁分泌抑制卵泡从始基卵泡池进入生长卵泡池，从而调控始基卵泡的募集。
AMH在始基卵泡向生长卵泡的转换期和早窦卵泡期通过AMH受体直接或间接影响卵泡的发育过程，可抑制卵泡的生长，防止卵泡过快过早消耗，保存卵巢的储备功能。
过高的AMH对卵泡的生长和发育有抑制作用，缺乏AMH的卵泡对FSH更敏感。
AMH水平在PCOS患者呈2～3倍增加，而其2～5mm卵泡的数目也增加2～3倍。
随着卵泡逐渐增大，AMH生成逐渐减少至消失，＞9mm的卵泡几乎无AMH 表达。
窦卵泡数目（AFC）代表卵巢中卵泡的数量，年龄代表其中卵子的质量，AMH对于数量和质量都有体现，反映了卵泡池中在外源性FSH刺激下可生长卵泡的规模。
在卵巢储备下降的一系列事件中，AMH的改变相对而言是最早的。
对于有正常排卵性月经的女性而言，AMH比FSH、AFC和INHB更能准确反映卵巢生殖功能的下降和预测即将到来的绝经过渡期。
基础AMH＜1.26μg/L用于预测卵巢储备能力降低的敏感性可达97%，高度提示卵巢储备降低，但需用AFC进一步证实。
接受IVF/ICSI治疗的患者血清及卵泡液中AMH水平越高则受精率越高。
因此，AMH可能成为预测受精率的指标。
AMH预测妊娠结局的作用明显优于FSH。
预测卵巢低反应时AMH与AFC的作用无显著差别。
预测OHSS优于年龄和BMI。
抗缪勒氏管激素(AMH)在生殖医学临床应用
Serum AMH in ovarian failure
• 最后月经期前5年下 降到检测不到的水平
• 绝经年龄预测
(Sowers et al, 2008; Van Disseldorp et al, 2008)
AMH and激素避孕药
• 使用激素避孕 药后， AMH 水平无显着变 化
(Li et al., Contraception 2011)
预测累积活产
Sensitivity (%)
100 80 60 40 20 0 0
ROC curve for prediction of cumulative live birth
20 40 60 80 100 100 - Specificity (%)
AFC AMH Age
AFC AMH Age Diagnonal
活产率~8% per cycle; 15% cumulative with AMH <= 0.4 ng/ml: (Weghofer et al., 2011)
Cut off at AMH < 0.1 ng/ml:只有很小的比 例排除。
除了年龄以外，並不提供额外预测价值。
卵巢储备目的
3. 卵巢刺激方案和FSH剂量个体化
卵巢刺激方案和fsh剂量个体化?卵子的数量和活产率有很強关联?活产率上升直至15个卵子15和20个卵子趋于稳定超过20个卵子稳步下降17预测卵巢反应?amh是优越的女性年龄fshe2或inhibinb预测卵巢反应?amh和afc對反應差和反應过度的有类似的预测能力broeretalfertilsteril2008
et al, 2007)
AMH与卵巢颗粒细胞瘤 (GCT)
卵巢颗粒细胞瘤(granulosa cell tumour, GCT) 患者的AMH水平显著升高
抗缪勒氏管激素（AMH）在生殖内分泌方面的临床应用
抗缪勒氏管激素（AMH）在生殖内分泌方面的临床应用孟晓楠【摘要】目的研究探讨抗繆勒氏管激素（AMH）在生殖内分泌方面的临床应用价值.方法随机性抽取本院2013年8月？2016年8月期间来院就诊多囊卵巢综合征病患73例作为观察对象,设立为观察组;另抽取本院同期收治行健康体检经期正常女性43名,作为健康参考组;均观察对比生殖内分泌指标（卵泡刺激素、睾酮、雌二醇、抗繆勒氏管激素、黄体生成素）,并结合ROC曲线分析技术评估抗繆勒氏管激素检测特异性与敏感度.结果观察组患者各项生殖内分泌指标检测均与健康参考组女性具有明显差异性（P〈0.05）.将各项生殖内分泌指标纳入ROC曲线分析发现,抗繆勒氏管激素检测敏感度可达到84%,而特异性指标可超过93%,属生殖内分泌各项指标检测中最具可信度.结论生殖内分泌检测诊断中可将抗繆勒氏管激素指标作为参考指导标志物之一,其检测敏感度较高,具备优质特异性,有效提高诊断结果可信度.【期刊名称】《临床研究》【年(卷),期】2018(026)001【总页数】2页(P15-16)【关键词】抗繆勒氏管激素;生殖内分泌;诊断价值【作者】孟晓楠【作者单位】平顶山市妇幼保健院优生遗传科,河南平顶山467000【正文语种】中文【中图分类】R711.75抗缪勒氏管激素作为典型的性腺功能重要指标，在人体生殖器官的成长发育过程有着重要的参与；如男性性腺发育可通过睾丸细胞合成抗缪勒氏管激素，可在胚胎发育环节即可生成，同时在男性后期生命成长形成惯序发展；而女性则通过卵巢细胞生成抗缪勒氏管激素，其指标含量相对较少，同时当女性发育至青春期，抗缪勒氏管激素可随着年龄的增长而逐步降低，发展至绝经期后，抗缪勒氏管激素含量将无法检出[1]。
目前众多学者对于抗缪勒氏管激素的研究报道多集中在卵巢功能的评估、多囊卵巢综合征、卵巢及性功能早熟等症状评估；而对于患者生殖功能方面少于报道。
对此本文回顾性分析本院2013年8月～2016年8月期间来院就诊多囊卵巢综合征病患73例，采取对照研究模式探析生殖内分泌方面检测抗缪勒氏管激素检测特异性与敏感度，现将报告如下：选取本院2013年8月～2016年8月期间来院就诊多囊卵巢综合征病患73例，年龄20～39岁，平均年龄(28.14±3.72)岁，全部患者均通过检查诊断符合鹿特丹会议(ESHRE /ASRM)制定的多囊卵巢综合征诊断标准[2]，设立为观察组；另抽取本院同期收治行健康体检经期正常女性43名，作为健康参考组，年龄23～38岁，平均年龄(29.03±4.15)岁；本次研究已排除伴有全身代谢疾病，高血压或糖尿病患者，检测前3个月内均未激素用药或影响机体内分泌功能用药。
女性体内抗苗勒氏管激素AMH的生理作用及临床应用进展
女性体内抗苗勒氏管激素AMH的生理作用及临床应用进展抗苗勒氏管激素属于转化生长因子家族的一种糖蛋白，由睾丸支持细胞和卵巢颗粒细胞分泌。
具有调节细胞发育及分化、促进苗勒氏管退化的重要作用。
在女性生殖系统发育过程中，它抑制卵巢颗粒细胞上黄体生成素受体及黄体酮的生物合成，调节卵子的发生及细胞的减数分裂并对成熟卵泡的选择具有重要作用。
相关研究显示，它能够抑制原是卵泡形成卵泡库并降低生长卵泡对FSH的应答，可作为卵巢老化标志和女性卵巢肿瘤的标记。
随着临床研究工作不断深入，人们逐渐认识到抗苗勒氏管激素对卵泡发育的影响，同时还进一步了解卵巢肿瘤及相关疾病的发生机制。
该文通过对AMH在生理性及卵巢功能异常疾病的卵泡形成中的作用进行综述，以期为日后临床研究工作提供相关参考依据。
标签：抗苗勒氏管激素；生理作用；卵巢功能异常疾病；临床研究与发展卵泡的发生与发育不仅受垂体性腺轴调节，还收卵巢内相关因子的自分泌与旁分泌影响。
这些因子主要为转化生物因子β超家族成员，包括颗粒细胞来源的抗苗勒氏管激素、卵母细胞来源的生长分化因子-9等。
抗苗勒氏管激素又称为苗勒管抑制物质。
它只在性腺中产生，表达于初级卵泡到小窦卵泡的颗粒细胞中，在调控卵泡生长与发育中发挥着重要作用。
该文对AMH在生理性和卵巢功能异常疾病的卵泡形成中的作用进行综述。
1 AMH基因AMH的作用机制AMH是一种同源二聚体糖蛋白激素，属于转化生长因子β（TGF-β）超家族的一员。
它的发现主要是发现在雄性性分化中的重要作用，20世纪40年代Jost 等[1]对兔胚的去势研究证实雄性兔胎苗勒氏管的退化与睾丸产生的某种物质-苗勒氏管抑制物（MIS）有关，MIS缺如时，胚胎将发育成雌性表型，苗勒氏管分化成阴道上部，子宫和输卵管。
数年后发现这种物质是由睾丸的间质细胞（Sertoli 细胞）产生的，并被称为抗苗勒氏管激素[2]。
胚胎睾丸最早于孕8周时开始产生AMH[3]。
1981年Hutson等首次发现卵巢颗粒细胞也可产生AMH[4]。
妇科生殖AMH检测临床应用
妇科生殖AMH检测临床应用
第23页
第二章
临床应用和病例分析
2.1 卵巢贮备-生育力评定-围绝经期
AMH能够作为预测绝经期有效生物标志物
Van Disseldorp J等提出： AMH=0.086ng/ml作为预测绝 经临界值。
妇科生殖AMH检测临床应用
van Disseldorp J. J Clin Endocrinol Metab, -澳大利亚、荷兰
诊疗为多囊卵巢综合症
妇科生殖AMH检测临床应用
第33页
第二章
临床应用和病例分析
2.2 疾病诊疗-PCOS
PCOS是育龄期妇女发病率达5-21%常见疾病，占无排卵不孕患者80%以上；
临床特征： 1）稀发排卵或无排卵 2）HI 和 IR 3）卵巢多囊样改变，阴道B超下 可观察到大量窦卵泡（AFC>12） 4）多毛及痤疮等
2.2 疾病诊疗-POF 不一样年纪正常组和POF组AMH水平比较
AMH ng/ml
（ ）
妇科生殖AMH检测临床应用
年纪
年纪
Knauff et al. J Clin Endocrinol Metab, March. -荷兰
第31页
第二章
2.2 疾病诊疗-POF
临床应用和病例分析
年纪＜40岁
AMH＜0.08ng/ml
妇科生殖AMH检测临床应用
第15页
第二章
临床应用和病例分析
ACOG美国妇产科学会教授共识
妇科生殖AMH检测临床应用
第16页
第二章
临床应用和病例分析
2.1 卵巢贮备-生育力评定
鹿特丹 、乌德勒支等几所大学联合研究各项指标在不一样年纪改变
AMH可更早地反应卵巢贮备功效
抗苗勒氏管激素(AMH)检测的临床意义
AMH与卵巢颗粒细胞瘤 (GCT)
卵巢颗粒细胞瘤患者治疗的监测
AMH 可以作为卵巢 GCT 的一种特殊标记，并且对卵巢GCT 的复发有一定预测价值。
Rey et al. Am J Obstet Gynecol 1996, 174:958
AMH在辅助生殖技术 (ART)中的应用
辅助生殖技术（ART）包括 •人工授精（AI） •体外受精—胚胎移植（IVF-ET） •单精子卵浆内注射（ICSI） •胚胎植入前遗传学诊断（PGD）
服避孕药 射避孕药
孕药
酮类药物
酮
N
23
23
9
20
20
Age 30（26-35）32（26-35）46（42-50）37（31-43）39（32-42）
使用前
27.2
20.9
2.7
15.8
15.5
AMH浓度 （10.3-40.3） （13.2-35.4） （1.9-21.9） （10.0-27.3） （5.3-19.7）
ICC
AMH
0.89
Inh B
0.76
AFC
0.73
FSH
0.55
E2
0.22
ICC = 组内相关系数 ICC> 0.80 表示具有重复性。 Fanchin et al., Hum Reprod, 2005
AMH不受激素避孕药影响，便于临床使用
避孕药使用前后AMH浓度的变化
组别
复合型口 复合型注 孕激素避 注射黄体 左炔诺孕
抗苗勒氏管激素（AMH）
检测的临床意义
1 AMH生理基础
2 AMH特性
3
3 AMH临床应用
3
2
Anti-Müllerian Hormone(AMH)
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抗缪勒氏管激素AMH生殖内分泌方面的临床检测应用
关于抗缪勒氏管激素（AMH）
抗缪勒氏管激素（anti-Mullerian hormone，AMH）是转化生长因子β超家族的成员之一，由Professor Alfred Jost首先发现。
AMH是由两个相同的70×10³Da亚基，通过二硫键连接组成的二聚糖蛋白，相对分子质量为140×10³Da；人类AMH编码基因位于19号染色体短臂，大小2.4～2.8kb，含有5个外显子。
抗缪勒氏管激素（AMH）在性腺器官发育过程中起着重要作用，是男女性腺功能的重要标记物之一。
在男性AMH主要由睾丸间质细胞产生，始于胚胎形成并贯穿生命始终；在男性胎儿的发育过程中，AMH导致缪勒氏管退化，形成正常发育的男性生殖管道。
在女性AMH主要由卵巢颗粒细胞产生，血清AMH保持相对于男性较低的一个水平，从青春期开始，血清AMH水平随时间慢慢降低，并在更年期降低到ELISA法检测不到的水平。
抗缪勒氏管激素主要应用领域：
（1）卵巢储备功能的评价（2）多囊卵巢综合症（PCOS）
（3）辅助生殖技术（ART）中的预测（4）卵巢早衰
（5）隐睾症（6）青春期性早熟
检验原理：
试剂盒采用三步夹
心酶联免疫法定量
检测：在第一步，将
标准品、质控品和样
本加入到包被了抗体的微孔中并孵育。
在第一次孵育和洗涤之后，微孔中加入生物素标记的抗体并进行孵育。
在第二次孵育和洗涤之后，微孔中加入链霉亲和素-辣根过氧化物酶结合物（SHRP）进行孵育。
在第三次孵育并且清洗之后，加入显色液（TMB）进行孵育，随后加入酸性终止液结束反应。
理论上，抗体-生物素结合物与固相抗体-抗原复合物结合之后，再与链霉亲和素-辣根过氧化物酶结合物结合。
这样抗体-抗原-抗体生
物素复合物-SHRP结合在微孔上，通过酶-底物反应检测。
酶和底物反应程度由主波长为450nm，参考波长为630nm的双波长来测定，测得的吸光度反应了样品与校准品中被检测物的浓度，且成正相关，通过建立对数-对数标准曲线方程，求得待测样本的激素的浓度。
产品参数:
产品名抗缪勒氏管激素（AMH）ELISA定量检测试剂盒
方法定量三步夹心免疫分析法
90/30/30
孵育时
间
检测范
0.06-18ng/ml
围
样本量25μL
血清
样本类
型
储存条
2-8℃，避光保存
件
有效期18个月
无
交叉反
应
精密度批内变异系数（CV）≤10%
批间变异系数（CV）≤15%
干扰性两倍生理浓度的血红蛋白、甘油三酯、胆红素的干扰性在±10%以内
特点介绍
1.独有的人源AMH特异性：只针对人源及灵长
类AMH具有特异性，优化了检测特异性。
2.重组的人源AMH校准品：4个冻融周期保持
稳定，预设浓度的校准品，避免由系列稀释引起的潜在误差
3.检测范围宽（0.06-18ng/ml）：避免样本重
复试验。
4.三步夹心酶联免疫法：方法操作简单，适用
于多数自动化平台。
5.长达18个月有效期：保证检测结果的一致
性和保持高精密度。
6. 结果判读便捷：可使用各类计算软件进行结果的定量分析。
验证实验：
迈康准TM AMH检测试剂与某品牌试剂90个样本检测结果比较
分析性能评估指标：
1检测限：
三批成品试剂盒对1份检测限参考品复孔检测（n=20），严格按照产品使用说明书进行操作，分析统计检测结果，计算20次重复检测结果A值平均值M和标准差SD，以M+2SD计算浓度值，本试剂的检测限评价如下，检测限不高于0.06ng/mL：
1 2 3
M SD 检测
限
M SD
检
测
限
M SD
检
测
限
0.0 549 0.0
028
0.04n
g/mL
0.0
506
0.0
030
0.0
3
ng/
mL
0.0
472
0.0
032
0.0
3
ng/
mL
2 线性：
三批成品试剂盒对6份线性参考品（L1-L6）进行复孔检测（n=2），严格按照产品使用说明书进行操作，分析统计检测结果，试剂盒测量系统的线性评价如下：
样本稀
释
倍
数
1 2 3
检测
结果
(ng/m
l)
相关
系数
r
检测
结果
(ng/m
l)
相关
系数
r
检测
结果
(ng/m
l)
相关
系数
r
L 1 1
13.45
0.99
90
13.53
0.99
80
13.36
0.99
80
L 2 1/2
6.70 6.63 6.42
L 3 1/6
2.20 2.21 2.17
L 4 1/1
8
0.69 0.72 0.74
L 5 1/7
2
0.18 0.17 0.15
L 6 1/2
88
0.04 0.04 0.05
3准确度
三批成品试剂盒对2份准确度参考品（A1、A2）进行复孔检测（n=3），严格按照产品使用说明书进行操作，分析统计检测结果，准确度评价如下：
4 精密度
三批成品试剂盒对2份精密度参考品复孔检测（n=10），严格按照产品使用说明书进行操作，分析统计检测结果，本试剂盒重复性及批间差评价如下：
三批产品批内中、低值重复性检测
批号样本标准差均值CV 批内重
复性
1 R
m
0.064
2.998
2.15% 高度一
致
R
l
0.028
0.500
5.66% 高度一
致
2 R
m
0.082 2.974 2.76% 高度一
致
R
l
0.021 0.507 4.24% 高度一
致
3
R
m
0.051
2.959
1.72% 高度一
致
R
l
0.020
0.512
4.00% 高度一
致三批产品批间中、低值批间差检测
样本批号标准
差
均值
CV
批间一
致性
R
m 1
0.072 2.938 2.44%
高度一
致2
3
R
l 1
0.020 0.514 4.00%
高度一
致2
3
5 特异性（交叉反应）
三批成品试剂盒对高浓度的抑制素A、抑制素B、激活素A、激活素B、激活素AB溶液进行复孔检测（n=2），严格按照产品使用说明书进行操作，分析统计检测结果，本试剂盒的检测特异性评价如下：
浓度交叉反应性（%）交叉
反应物
100ng/mL 未被检出抑制
素A
抑制
100ng/mL 未被检出
素B
50ng/mL 未被检出激活
素A
激活
50ng/mL 未被检出
素B
50ng/mL 未被检出激活
素AB
6 干扰性
血红蛋白、甘油三酯、胆红素以大于生理浓度两倍以上量加到质控血清中，AMH的浓度均在质控浓度的±10%以内，结果如下表：
干扰物质检测
浓度
(mg/m
L)
未添加
时样本
浓度
(ng/mL)
添加后样本
检测浓度
(ng/mL)
差
异度
（%）
血红蛋白
1
.5
2.5
； 1.0
2.449 ；
0.957
-2.
0 ；
-4.3
甘油三脂
5
.0
2.5
； 1.0
2.478 ；
0.933
-0.
9 ；
-6.7
胆红素
.5
2.5
； 1.0
2.466 ；
0.954
-1.
4 ；
-4.6。