RNA干涉的研究进展及应用前景
RNA干扰技术在生物学研究中的应用研究进展

RNA干扰技术在生物学研究中的应用研究进展RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是目前分子生物学领域中最具有影响力的生物技术之一,它充分利用了RNA分子的本身的功能和特性,实现了基因沉默和特定蛋白表达的调节。
RNAi技术一方面广泛应用于疾病治疗、基因功能解析,另一方面也广泛应用于农业科学、动物繁殖等领域。
本文将探讨RNA干扰技术在生物学研究中的应用及其研究现状。
一、RNAi技术的原理及优势RNA干扰技术是一种利用小分子RNA分子介导的特异性基因沉默机制,通过导入人工的小干扰RNA或者小干扰RNA相关的载体来抑制特定的基因表达。
RNA干扰技术在生物学研究中,主要有以下优越性:1. 特异性强:RNAi技术针对的是靶基因的序列区域,能够准确特异抑制目标基因,最大程度避免了对其他基因的影响;2. 操作简单:RNAi技术不需要进行DNA突变、克隆、体外重组等复杂操作,基本上只需在体外导入siRNA快速获得RNAi效应,比较适用于高通量筛选试验;3. 应用广泛:RNAi技术可以应用于多种生物体系,包括哺乳动物、植物、昆虫、线虫等,可以实现基因功能筛选、药物靶点筛选、基因治疗、转基因等一系列应用。
二、RNAi技术在生物学研究中的应用1. 基因功能研究RNAi技术广泛应用于基因功能研究。
在人类基因组研究中,RNAi技术被广泛应用于基因功能解析、基因验证、药物靶点筛选等方面。
RNAi技术可以使细胞内特定基因的mRNA水平下降,进一步研究这些基因在细胞生物学、分子遗传学、生理学甚至疾病发生机制中的作用。
2. 肿瘤疾病治疗在肿瘤疾病治疗方面,RNAi技术也被广泛应用。
RNAi技术可以抑制肿瘤生成、扩散及各个阶段的控制,因此它已成为肿瘤治疗和预防的主要手段之一。
RNAi技术可以抑制特定的肿瘤细胞中的抗凋亡基因的表达,使得肿瘤细胞失去增殖和分化能力,达到治疗效果。
3. 转基因技术研究RNAi技术在转基因技术研究中也有较大的应用,不仅可以实现优良基因的精准插入,还可以实现对转基因生物的一系列控制。
RNA干涉技术和工具的研究

RNA干涉技术和工具的研究随着分子生物学和基因组学方面的研究不断发展,RNA干涉技术也逐渐得到广泛的应用。
RNA干涉作为基因沉默和基因表达调控的新工具,不仅可以用于生命科学基础研究,还可以应用于医疗领域的基因治疗和肿瘤治疗等方面。
本文将介绍RNA干涉技术的基本原理、相关的工具和研究进展。
一、RNA干涉技术的基本原理RNA干涉技术(RNA interference,RNAi)是指通过外源或内源的RNA干涉分子介导的基因表达调控过程。
RNA干涉分子含有约20-30个核苷酸的短链RNA,可以与靶向RNA序列互补结合,从而导致其降解或沉默。
根据RNA干涉分子来源的不同,可以将RNAi分为内源RNA干涉和外源RNA干涉。
内源RNA干涉是指生物体内部产生的RNA干涉分子对基因表达的干涉。
内源RNA干涉分子包括微小RNA(miRNA)和小干扰RNA(siRNA),它们都是通过一系列酶的作用在细胞内产生的。
miRNA主要起到负向调控的作用,即通过靶向mRNA的5'UTR和3'UTR等区域来调节基因表达。
siRNA则是完全互补靶向,参与选择性的降解mRNA。
内源RNA干涉机制是一种广泛存在的基因调控方式,可以调节细胞生长、分化和肿瘤等生命过程。
外源RNA干涉是指在实验室条件下人工合成的RNA干涉分子,通过转染、外源构建或病毒载体等方式传递进入细胞,对靶向基因进行沉默或调控。
外源RNA干涉技术有着广泛的应用,可以应用于基因功能研究、基因治疗和肿瘤治疗等多个方面。
二、RNA干涉工具的研究进展近年来,随着RNA干涉技术的研究不断发展,越来越多的RNA干涉工具被开发出来,可以用于生物学研究和临床医学。
1. RNA干涉载体RNA干涉载体是指一类用于RNA干涉分子的传递和表达的载体。
RNA干涉载体的设计和构建对于RNAi技术的应用至关重要。
目前常见的RNA干涉载体包括质粒载体、病毒载体和纳米粒载体等。
质粒载体的构建成本低,但难以快速传递。
RNA干扰技术的应用前途

RNA干扰技术的应用前途RNA干扰技术是近年来生物科技领域备受关注的一个新兴技术,它可以针对特定基因实现高效的基因沉默和调节,从而为疾病诊断和治疗等领域提供了新思路和解决方案。
本文将从基本原理、应用领域、现有技术和未来展望四个方面来探讨RNA干扰技术的应用前途。
一、基本原理RNA干扰(RNAi)是一种自然现象,即通过小分子RNA专门干扰某些特定基因的表达。
RNAi可以分为内源性RNAi和外源性RNAi。
内源性RNAi通常发生在真核生物的染色体底物上,是一种防御机制,用于保护生物免受病毒和转座子等外源DNA的侵袭。
外源性RNAi则是我们普遍所说的RNA干扰技术,它是人工合成dsRNA导致沉默特定基因的一种方法。
当外源性dsRNA进入细胞后,会被酶类切割成21-23nt的小分子RNA,即小干扰RNA (siRNA)。
siRNA会与细胞内的RNA识别和切割复合物(RISC)结合,然后将其中一个链片段引导到RISC复合物中,RISC复合物再进一步识别基因mRNA,将其切割或降解,从而实现基因沉默和调节。
二、应用领域RNA干扰技术广泛应用于生物学、医学、农业和疫苗等多个领域。
在生物学领域,RNA干扰技术可以用来研究基因功能、分析基因调控网络和病理生理学过程等。
在医学领域,RNA干扰技术可以用来治疗癌症、病毒感染疾病、代谢性疾病、神经退行性疾病等。
在农业领域,RNA干扰技术可以用来提高作物产量、抗病虫害能力和品质等。
在疫苗领域,RNA干扰技术可以用来设计和生产针对严重疾病的疫苗。
三、现有技术目前,RNA干扰技术的核心技术是合成siRNA和运送siRNA到目标细胞内。
合成siRNA的最新技术可以保证siRNA的效率和特异性,并能降低它的副作用。
运送siRNA到目标细胞内的方法可以分为体外和体内两种,体外运送方法有依赖于电穿孔、化学物质转染和病毒的转染等;体内运送方法有依赖于胶体金纳米粒子、离子复合物、把siRNA修饰成类似肽类物质成分进行运载等。
RNA干扰技术的应用与发展前景研究

RNA干扰技术的应用与发展前景研究RNA 干扰技术,这可真是个神奇又有趣的东西!咱今天就来好好聊聊它的应用和发展前景。
先来说说我对 RNA 干扰技术的一次有趣观察。
前阵子,我在实验室里看到研究人员们正围绕着一组细胞样本忙碌着。
他们专注的神情让我也不由得紧张起来。
只见他们小心地操作着仪器,准备利用 RNA 干扰技术来探究某个特定基因的功能。
那场景,就像是在进行一场精细的手术,每一个步骤都容不得半点马虎。
RNA 干扰技术在医学领域的应用那可真是相当广泛。
比如说,在肿瘤治疗方面,它可是个大功臣。
科学家们发现,可以通过 RNA 干扰技术来抑制肿瘤细胞中那些异常活跃的基因,让肿瘤细胞没法再疯狂生长和扩散。
这就好比给肿瘤细胞戴上了紧箍咒,让它们没法兴风作浪。
想象一下,那些狡猾的肿瘤细胞,原本肆无忌惮地繁殖,现在被RNA 干扰技术给治得服服帖帖,多让人兴奋啊!不仅如此,在抗病毒领域,RNA 干扰技术也大显身手。
像一些顽固的病毒,比如乙肝病毒、艾滋病病毒,传统的治疗方法有时候效果不太理想。
但 RNA 干扰技术就像一把利剑,能够精准地切断病毒在细胞内复制所需的基因表达,从而有效地控制病毒的传播和感染。
在农业方面,RNA 干扰技术也能发挥重要作用。
比如说,通过干扰害虫体内关键基因的表达,可以让害虫失去生存和繁殖的能力,从而减少农作物的损失。
这就像是给农作物穿上了一层看不见的防护服,让害虫们无从下手。
再来说说 RNA 干扰技术在基因功能研究中的应用。
以前,要想搞清楚一个基因到底有啥作用,那可真是费时费力。
但有了 RNA 干扰技术,就简单多啦。
研究人员可以有针对性地抑制某个基因的表达,然后观察细胞或者生物体出现的变化,从而推断出这个基因的功能。
这就好像是在一个复杂的机器中,一个一个地关掉零件,看看对整个机器的运行有啥影响。
不过呢,RNA 干扰技术也不是完美无缺的。
比如说,如何确保RNA 干扰的特异性和有效性,就是一个需要解决的问题。
RNA干扰技术的应用前景

RNA干扰技术的应用前景一、简介RNA干扰技术是一种通过介导特定RNA序列降低或抑制目标基因表达的方法。
它通过引入外源性双链RNA(dsRNA)分子,激活内源性RNA干扰机制,从而导致靶向特定mRNA的降解和靶标基因的沉默。
这一技术已经被广泛应用于基础生物学研究和生物医学领域,取得了重要的突破。
本文将探讨RNA干扰技术的应用前景。
二、农业领域1.提高农作物抗性通过应用RNA干扰技术,我们可以有效地靶向关键基因进行沉默,从而提高农作物对病原体、害虫和环境胁迫的抵抗力。
例如,靶向病原性真菌基因的RNA干扰技术可以有效抑制病害的传播,提高农作物的产量和品质。
2.调控农作物发育RNA干扰技术可以通过沉默植物内源性基因的表达,实现对农作物发育的精确调控。
这种技术可以用于改善农作物的大小、形状、颜色等特征,从而提高农作物的市场竞争力。
三、医学领域1.基因治疗RNA干扰技术在基因治疗中具有重要意义。
通过针对特定基因的干扰,可以有效地治疗一些遗传性疾病,如囊性纤维化、遗传性视网膜病变等。
此外,RNA干扰技术还可以抑制癌基因的表达,达到抗癌治疗的效果。
2.药物研发RNA干扰技术可用于药物的研发。
通过靶向特定基因的RNA干扰,可以筛选出具有特定治疗效果的候选药物。
这种技术可以促进药物的研发进程,提高新药的研发成功率。
四、病毒学研究RNA干扰技术在病毒学研究中起到了重要的作用。
通过利用RNA干扰技术,可以有效地抑制病毒的复制和传播,从而开发出新的抗病毒药物。
此外,RNA干扰技术还可以用于研究病毒的生命周期和致病机制,为病毒学研究提供了有力的工具。
五、遗传学研究RNA干扰技术在遗传学研究中的应用也愈发重要。
通过靶向特定基因的RNA干扰,可以对基因功能进行研究,揭示基因在生物体内的作用机制。
此外,RNA干扰技术还可应用于基因组学和转基因研究等领域。
六、总结RNA干扰技术作为一种先进的基因沉默技术,具有广泛的应用前景。
它在农业领域可以提高农作物抗性和调控农作物发育;在医学领域可以应用于基因治疗和药物研发;在病毒学研究领域可以用于抗病毒药物开发;在遗传学研究中可以揭示基因功能等。
RNA干扰技术的发展与应用前景

RNA干扰技术的发展与应用前景RNA干扰技术是一种革命性的分子生物学技术,它可以对基因进行定向的靶向沉默和调控,成为了分子医学领域的研究热点。
RNA干扰技术的发展迅猛,应用领域不断扩大,具有广阔的前景和潜力。
1. RNA干扰技术的发展历程RNA干扰技术最早由美国科学家Fire和Mello于1998年发现,并于2006年共同获得诺贝尔生理学或医学奖。
随后,该技术在基因沉默、基因表达调控、病毒防御等方面的应用得到广泛研究。
特别是人基因组的完成,使得RNA干扰技术在人类基因疾病的治疗和抑制病毒感染等领域具有重要的应用前景。
2. RNA干扰技术的作用原理RNA干扰技术利用双链RNA介导靶向沉默和调控基因。
简单来说,就是利用已知基因的序列信息设计合成siRNA(双链RNA分子),siRNA可以通过RNA诱导的靶向效应,精确地连接并分解目标mRNA分子,阻断蛋白质的合成。
此外,还可以通过shRNA(plasmid RNA)、miRNA等形式对基因进行调控,改变基因表达。
3. RNA干扰技术的应用前景3.1 基因表达调控RNA干扰技术可以对有害基因进行靶向沉默,治疗基因疾病;对抗受到变异或缺少的有益基因,促进胚胎或干细胞分化或肿瘤恶化的扩散;整合与维持基因座位中的基因表达变化的遗传编程过程,将自组织的产生与维持致密的生物体的结构和功能联系起来。
3.2 细胞治疗RNA干扰技术利用RNA引物的靶向性去除特定的细胞,与基于抗体等方法相比,其安全、便捷、经济的特性也使得其应用潜力巨大。
3.3 抗病毒治疗RNA干扰技术在抗病毒方面的应用也尤为重要。
利用siRNA沉默病毒基因,可以有效治疗多种病毒感染,如HIV、乙型肝炎、甲型肝炎和流感等。
此外,RNA干扰技术还可以用于生物免疫检测,特别是高危感染病毒的快速检测,如新冠肺炎等,具有广阔的市场前景。
4. RNA干扰技术的挑战RNA干扰技术的应用离不开四个因素:RNA引物、传递载体、细胞浓度、基因网络。
RNA干扰机制的研究与应用

RNA干扰机制的研究与应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由小的RNA分子调控基因表达的机制,是一项重要的基因研究技术。
自2001年发现该现象以来,该技术在分子生物学和生物医学研究中得到了广泛的应用。
本文旨在介绍RNA干扰机制的研究进展和应用,并探讨其在生命科学领域中的前景。
RNA干扰机制的研究进展RNA干扰机制指的是,通过特殊的基因调控RNA分子,干扰那些被识别的RNA与其相应基因间的配对,从而调节基因的表达。
RNA干扰主要由两类小RNA分子介导实现:小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和microRNA(miRNA)。
siRNA作为一类具有双链结构的小RNA,在RNA干扰中发挥着至关重要的作用。
siRNA的结构使其能够特异性地识别和切断与其能够匹配的mRNA,从而沉默基因。
与此相似,miRNA是一类由非编码RNA产生的小RNA,通过结合靶基因mRNA并抑制其翻译从而调节基因表达。
miRNA发挥着很重要的生命调控作用,涉及到各个生物体系的发育、生长等重要过程。
自RNA干扰技术被发现以来,对其具体机制的研究一直在不断深入。
目前,我们对siRNA和miRNA的发生、生物学功能,以及它们与细胞内运输和响应的分子机制等方面都有了更深入的认识。
而这些研究对于生命科学领域的基础研究和临床应用具有重要意义。
RNA干扰技术的应用RNA干扰技术是一个强大的分子生物学工具,它具有在细胞和整个生物体中高效地压制目标基因表达的能力。
通过改变细胞特定基因表达,RNAi技术可以揭示细胞过程,便于观察和研究来自整个生物体的基因调控网络。
RNAi技术的应用不仅限于基础研究,它还被广泛地应用于疾病治疗、农业基因改良等领域。
1. 疾病治疗与传统的药物治疗模式相比,RNA干扰技术具有更高的特异性和更少的不良反应,因此被越来越多的人关注和研究。
与其他疾病相比,RNA干扰技术对基因缺陷和癌症处理更具有挑战性。
RNA干扰技术的应用与发展

RNA干扰技术的应用与发展RNA干扰技术是一种基因沉默技术,可以通过降低目标基因的mRNA水平来进一步研究该基因在生物过程中的作用,具有广泛的应用前景。
随着RNA干扰技术的不断完善和发展,它已经在基础研究、药物研发、农业生产、医学诊断和治疗等方面展现出了广泛的应用价值,本文将重点探讨RNA干扰技术的应用及其发展趋势。
一、RNA干扰技术的基本原理及优势RNA干扰技术是通过基因沉默来研究目标基因的功能,是一种具有高度特异性的基因表达调控技术。
该技术基于RNA靶向催化降解机制,利用小RNA分子针对目标mRNA序列进行靶向结合,并介导RNase酶切分解目标mRNA,从而抑制该基因的表达。
与传统的基因敲除技术相比,RNA干扰技术具有以下优势:(1)应用灵活性:RNA干扰技术可以用于体内和体外多种细胞和生物体,包括哺乳动物细胞、植物细胞、真菌和线虫等。
(2)高效性:RNA干扰技术可以对多种靶基因同时进行干扰,具有高效性和高度特异性。
(3)低成本:RNA干扰技术相比于传统的基因敲除技术,具有成本低、操作简单等优点。
二、RNA干扰技术在基础研究领域中的应用RNA干扰技术在基础研究领域中的应用主要包括以下方面:(1)开发基因靶向治疗药物:RNA干扰技术的高度特异性和高效性能够使其成为基因治疗药物的有力工具,其可以直接针对疾病靶基因进行沉默,从而实现治疗目的。
(2)筛选基因功能:RNA干扰技术可以用于大规模筛选基因功能,为理解生物体内基因调控网络提供了有效手段。
(3)研究疾病发病机制:RNA干扰技术可以针对疾病相关靶基因进行沉默,从而研究疾病发病机制和药物效果。
三、RNA干扰技术在药物研发领域的应用RNA干扰技术作为一种新型的基因靶向治疗手段,已经在药物研发领域中展现出广泛应用前景:(1)研究药物靶标基因的作用及筛选药物:RNA干扰技术可以用于研究药物靶标基因的作用,快速筛选出与药物靶标基因相关的其他基因,并进行进一步的研究。
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RNA干涉的研究进展及应用前景摘要:RNA干涉是广泛存在于生物体中的一种转录后基因沉默( post-transcriptional gene silencing ,PTGS ),它是由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)介导的同源mRNA高效特异性降解,从而导致基因表达沉默。
从RNAi现象发现以来,进行了许多的研究,对其的基本作用机制有了初步的了解。
作为一种阻断基因表达的新手段,RNAi 技术日趋成熟完善,开辟了一条基因治疗的新途径。
RNAi技术在很多人类疾病的基因治疗上都有应用,如肿瘤、癌症、病毒性感染疾病等方面。
关键字:RNA干涉;基因沉默;机制;应用RNA干涉(RNA interference, RNAi),是真核生物中普遍存在的一种自然现象,在生物体内双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发同源mRNA高效特异性降解,从而导致基因表达沉默。
dsRNA可以抑制不同类型细胞的靶向基因表达, 用特异性的抗体几乎检测不到靶向基因所表达的蛋白质。
因此,RNA技术又被形象的称为基因敲除(knockout) 或基因沉默(gene silencing),RNAi是一种典型的转录后基因调控方法,又称转录后基因沉默( post-transcriptional gene silencing ,PTGS )[1]。
它广泛存在于生物界,是生物体抵御病毒或其他外来核酸人侵而保持自身遗传稳定的保护性机制[2]。
1. RNAi的发现历史九十年代初期,科学家在向牵牛花转导色素合成基因时,观察到“共抑制”(cosuppression)现象。
Jorgensen 等将产紫色素基因导入矮牵牛属植物中, 希望花的紫色更深, 却发现转基因后部分花的颜色不但没有加深, 反而变成白色, 这表明外源和内源产紫色素基因的表达都受到抑制, 他们将这一现象称为共抑制(cosuppression)[3]。
所谓共抑制是指内源基因在转基因或病毒感染的诱导下发生的基因沉默现象,大部分是转录后水平的基因沉默(PTGS)[4]。
1994年,意大利的Cogoni[5]将类胡萝卜素合成所需基因转入到粗糙红色链胞酶中,结果导至30%的转化细胞中的霉菌自身基因失活,他们叫这种基因失活现象为压制(Quelling)。
1995年,Guo[6]等发现注射正义RNA和反义RNA均能有效并特异性地抑制秀丽新小杆线虫par-1基因的表达,该结果不能使用反义RNA技术的理论做出合理解释。
直到1998年,Fire[7]等证实Guo等发现的正义RNA抑制同源基因表达的现象是由于体外转录制备的RNA中污染了微量dsRNA而引发,并将这一现象命名为RNAi。
在后来的研究中,不断发现由dsRNA介导的RNAi现象出现在多种真核生物中,如真菌、果蝇、拟南芥、锥虫、水螅、涡虫、斑马鱼等。
2.RNAi的作用机制根据现有研究显示,可能的作用机制可分为三个阶段:起始阶段、效应阶段和循环放大阶段。
效应阶段即当病毒基因、人工转入基因及转座子等外源性基因随机整合到真核宿主细胞基因组内,并利用宿主细胞进行转录时,常常产生一些与这些基因的mRNA同源的dsRNA。
dsRNA在ATP供能的情况下,被Dicer酶切割成多个具有特定长度和结构的小片段RNA(大约21~23 bp),即siRNA。
siRNA在细胞内RNA解旋酶的作用下解链成正义链和反义链。
效应阶段,反义siRNA再与体内一些酶(包括内切酶、外切酶、解旋酶等)结合形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC)。
RISC与外源性基因表达的mRNA 的同源区进行特异性结合,RISC具有核酸酶的功能,在结合部位切割mRNA,切割位点即是与siRNA中反义链互补结合的两端。
被切割后的断裂mRNA随即降解,从而诱发宿主细胞针对这些mRNA的降解反应。
循环放大阶段是由siRNA引发的。
siRNA作为引物与靶RNA结合并在RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)作用下合成更多新的dsRNA,新合成的dsRNA再由Dicer切割产生大量的次级siRNA,从而使RNAi的作用进一步放大,最终将靶mRNA完全降解。
RNAi的作用机制决定了RNAi有以下几个特点:高序列特异性、高效性、RNAi抑制作用迅速、RNAi的靶基因位点具有选择性、具有高稳定性[8]、可传播性与遗传性、对ATP 与时间计量的依赖性[2]。
3.RNAi的应用在过去的20年,RNAi作为沉默基因表达的本能机制而出现,这古老的抗病毒反应可以用来特定地抑制某种目的基因的功能,RNAi正成为一个非常有效地研究中工具用于揭示许多基因的功能[9]。
RNAi的生物功能遍布生物体的整个生命周期,包括:发育、代谢、对逆境的反应、疾病的抗性以及其他各个方面[10]。
目前,与RNAi相关的研究主要集中在治疗人类疾病和提高植物的性状。
3.1 RNAi在肿瘤治疗中的应用肿瘤(Tumor)是机体在各种致癌因素作用下,局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控,导致其克隆性异常增生而形成的异常病变。
学界一般将肿瘤分为良性和恶性两大类。
良性肿瘤在通过手术治疗后一般能够恢复健康,但是恶性肿瘤因为其顽固性不容易被治愈。
恶性肿瘤也就是人们常说的癌症。
而使用RNAi技术来治疗肿瘤在近年来是热门的研究方向,许多种癌症都已证实RNAi技术可以抑制肿瘤的体外和活体内的生长。
如肝癌、宫颈癌、乳腺癌、鼻咽癌及胰腺癌等。
肿瘤细胞中调节细胞增殖、凋亡、细胞周期和信号转导等的肿瘤相关基因都可作为肿瘤治疗药物的靶分子[11]。
那么通过RNAi可以使肿瘤细胞这些相关基因表达沉默,从而达到治疗肿瘤的目的。
很多实验证明,科研人员利用RNAi抑制癌细基因的表达,且在很多的肿瘤研究中取得了显著的效果。
如Cmkovic-Mertns[12]等研究发现在宫颈癌细胞中,他们选用可产生凋亡作用的livin基因作为研究对象,用针对livin基因的siRNAs特异性高效地抑制肿瘤细胞中livin基因的表达,同时还发现针对livin的基因的siRNA能够有效增加livin阳性肿瘤癌细胞对诱导细胞凋亡的刺激因素的敏感性。
在黄迪南[13]等的实验中,也得出了siRNA 表达载体介导的RNAi能有效地抑制Hela细胞中hPOT1基因表达,从而导致Hela细胞凋亡。
在其他研究人员的试验中,通过RNAi技术对其他一些基因表达地抑制来抑制Hale细胞的活性或者使其失活。
对于其他癌症,也有相似的研究。
如RNAi沉默chk1基因的表达,针对chk1的RNAi可以提高Lewis肺癌细胞的抑制率和凋亡[14]。
在RNAi下调LAT1的表达对胃癌细胞SGC-7901的体外增殖、迁移与侵袭有抑制作用,并且细胞周期被阻断,LAT1在胃癌细胞恶性生物学行为中其关键作用,对其细胞增殖、迁移与侵袭中发挥重要作用[15]。
对于肿瘤的治疗,关键在于肿瘤细胞的超强生命力,不断裂变增生。
而且,肿瘤细胞会扩散,一旦扩散,则治疗会更加困难。
现如今的治疗方法一般就是长期化疗,然后再进行手术。
长期的化疗,会导致人体免疫力的降低,倘若体内还有残留或潜伏的肿瘤细胞,则很容易复发。
RNAi技术可以从基因的水平上抑制肿瘤细胞某些基因的表达,从而导致肿瘤细胞分裂增殖或者转移被抑制,甚至可以导致肿瘤细胞的死亡。
相较传统的治疗方法,RNAi技术更能从源头解决肿瘤治疗的问题,也不用通过手术切割身体的一部分。
在未来的研究中,随着RNAi 技术的完善,该项技术一定会在肿瘤的治疗中广泛应用。
3.2 RNAi在病毒性感染疾病中的应用病毒性感染疾病是一类传染性强、危害性大的疾病, 目前的治疗主要依赖药物和干扰素。
然而很多的病毒性疾病,仍然需要更加有效的治疗方法。
如艾滋病(Acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS)、乙肝、丙肝、禽流感等。
RNAi技术的发现以及对它的不断研究,可能为病毒性疾病的治疗提供更加有效的途径。
RNAi是机体中古老而天然的抗病毒机制,越来越多的研究者利用此项技术针对病毒特定基因来抑制病毒的复制,或者利用siRNA 作用于病毒靶受体或辅助因子以干扰病毒的侵染,以期达到治疗病毒性疾病的目的[16]。
近年来,RNAi在ADIS、乙肝、甲肝等病毒性感染疾病中的应用研究活跃,并且取得了令人鼓舞的成绩。
引起ADIS的病毒是感染人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)。
从发现到现在短短几十年时间内,随着HIV的广泛传播和流行,ADIS已成为危害人类的又一大疾病,而对它的治疗却一直没有行之有效的方法,大多数的抗HIV治疗药物不能对疾病进行彻底的治疗, 而且患者还需要长期终身服药。
RNIi技术则为ADIS的治疗带来了新的希望。
其基本策略是选择HIV病毒或宿主细胞基因作为靶点,如在nef、tat基因及HIV21辅助分子的相应基因或是针对宿主的细胞表面受体,设计siRNAs针对CD4,CXCR4和CCR5来阻止病毒的入侵[17]。
而有关研究对通过对NCBI发表的1000多个HIV-1序列做了同源比较,选择了HIV-1gag、env、nef基因中极保守的5个序列作为siRNA作用的靶序列,并利用H1启动子构建siRNA表达载体,在细胞内自主合成约19bp的5种siRNA样转录产物,均能不同程度地抑制HIV-1特异性目标基因的表达,其中针对gag1,env1,nef基因的3个siRNA 抑制效果最明显[18]。
Novina C D等用化学合成法制备了针对宿主细胞CD4mRNA的siRNA。
转染能表达人CD4抗原的Magi细胞,三天后通过Northern印记检测,发现CD4mRNA含量减少了8倍,相应的HIV-1感染量也减少了四倍[19]。
张涛等[20]在HIV-1vif基因区中筛选获得一个具有高效抑制特性和较好保守性特征的siRNA序列,同时证明其具有vif基因抑制特异性,整合有该siRN A表达元件的H IV -1易感T细胞株可高效抑制HIV-1在细胞中的复制,具有良好的应用潜力。
乙肝和丙肝是分别由乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)和丙型感炎病毒(Hepatitis C virus, HCV)。
众多实验结果表明,RNAi技术可以阻止HBV和HCV的复制。
孙朝晖等[21]利用siRNA表达框架法设计针对HBV X 基因的siRNA,转染HepG2.2.15细胞,转染后的HBV X 基因mRNA的量明显减少,而且HBsAg和HbeAg的分泌也被抑制,抑制高峰在48h。