化妆品微生物检验方法
化妆品微生物五项检测
双倍胆盐乳糖
产酸：黄色 产气：气泡
EMB琼脂
镜检
配培 养基 和稀 释液
供试 液的 制备
化妆品微生物五项检验
菌落总数检验
菌落总数（Aerobic bacterial count）：化妆品检样经过处理,
在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、 pH值、需氧性质等）,1g（1mL）检样中所含菌落的总数.所得 结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性和 兼性厌氧菌落总数.
配培 养基 和稀 释液
供试 品的 处理
耐盐分
Baird Parker’s 或血琼脂
增 菌 24±2h 培 36±1℃ 养
分
离 24~48h 纯 36±1℃ 化
镜检
特征菌落
无菌落或无特征菌落
书写检验 记录单
最终结 果判断
革兰染色、镜检→ 生化试验:血浆凝固酶试验
甘露醇发酵试验
金黄色葡萄球菌检查流程图
灰/黑色
问题2
油性样品如何处理
稀释子型表面活性剂,分子一端 是亲水基团,一端是亲油基团,常用作增溶剂和 油/水乳化剂.决定了加入的顺序.
微生物许可检验项目 问题3
检验项目
特殊用途化妆品
非特殊用途 育 化妆品 发 类
染 发 类
烫 发 类
脱 毛 类
谢谢大家
接种阳性菌计算回收率
推荐了解： 人员培训能力掌握的检验重要指标. 有条件可做视具体样品测试结果. 在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附着于颗粒状
化妆品安全技术规范微生物检测
1、选取平均菌落数在30-300之间的平皿，当只有一个稀释度的平均菌落数在此范围时，即以该 平皿菌落数乘其稀释倍数报告之。（见下图）
2、若有两个稀释度在30-300之间，则应求出两菌落总数的比值来决定，若比值≤2，应报告其平 均数，若>2，则以其中稀释度较低的平皿菌落数报告之。（见下图）
2.1 化妆品采样要求
2.1.3 固体样品
称取10g，加到90mL灭菌生理盐水中，充分振荡混匀， 使其分散混悬，静置后，取清液作为供试液。
使用均质器时，则采用灭菌均质袋，将上述水溶性膏、霜、粉剂等 ， 称10g样品加入90mL灭菌生理盐水，均质1min~2min； 疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g样品，加10mL灭菌液体石 蜡， 10mL吐温80，70mL灭菌生理盐水，均质3min~5min。
2.1 化妆品采样要求 01 02 03 04 05
应从不少于2个包装单位的取样 中共取10g或10mL
包装应无破损，检验前不得 打开 样品应置于室温阴凉干燥处，不 要冷藏或冷冻 宜先取岀部分样品做微生物检 验，再将剩余样品做其他分析
所用器皿及材料均应事先灭菌
2.1 化妆品采样要求
微生物项目，若一个样品包装内各部分为独立包装, 应当分别检验 若一个样品包装内各部分为非独立包装，应混合取样检验 若产品为不同类别的彩妆组合，应分别检验。
2.6 金黄色葡萄球菌检验方法
Baird-Parker平板：圆形，光滑，凸 起，湿润，颜色呈灰色到黑色，边缘 为淡色，周围为一混浊带, 在其外层有 一透明带。用接种针接触菌落似有奶 油树胶的软度。
2.6 金黄色葡萄球菌检验方法
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化妆品微生物检验方法标准
化妆品微生物检验方法标准概述：化妆品微生物检验是对产品中的微生物含量和活性进行检测，旨在确保化妆品的质量和安全性。
本文将介绍化妆品微生物检验的方法标准，包括采样方法、微生物总数测试、致病微生物测试等内容。
一、采样方法采样是化妆品微生物检验的第一步，正确的采样方法对检验结果的准确性至关重要。
总体的采样方法包括以下几个方面：1. 选取适当数量和规格的样品，并确保样品具有代表性；2. 使用干净的取样工具，避免污染样品；3. 选择不同生产批次和生产日期的化妆品进行采样，以评估产品的质量稳定性；4. 遵循严格的卫生规范和操作规程进行采样。
二、微生物总数测试微生物总数测试是对化妆品样品中微生物总数量的测定。
其目的是评估产品的细菌污染程度和是否符合相关的卫生标准。
以下是常用的微生物总数测试方法：1. 高效液相色谱法（HPLC）：该方法通过分离、测定化妆品中微生物代谢产物的含量，从而推断微生物总数；2. 膜过滤法：通过将样品通过膜过滤器，然后将膜培养在适当的培养基上，计数培养基上出现的菌落数量；3. 稀释平板计数法：将样品进行系列稀释后，移取适量的稀释液均匀涂布在含有适当培养基的平板上，培养并计数菌落数量；4. 流式细胞术：利用流式细胞仪对样品中微生物进行计数和鉴定。
三、致病微生物测试致病微生物测试是对化妆品样品中致病微生物含量的检测。
该测试主要关注常见的致病菌，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
以下是常用的致病微生物测试方法：1. 酶免疫分析法（ELISA）：通过检测样品中致病菌特异性的抗原或抗体来判断样品是否存在致病菌；2. PCR技术：通过引物特异性扩增样品中的致病菌DNA，从而检测样品是否受到致病菌污染；3. 快速培养技术：利用快速培养方法，减少培养周期，快速检测致病菌的存在。
四、标准和参考文献化妆品微生物检验方法的标准和参考文献主要包括国际组织和国家相关机构发布的标准。
以下是几个常见的标准：1. 国家药品监督管理局发布的《化妆品质量规范》2. 国际标准化组织（ISO）发布的相关标准，如ISO 21149：2020 "Cosmetics -- Microbiology -- Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria"3. 美国食品药品管理局（FDA）发布的相关指导文件，如《微生物检验的尺度适应性》总结：化妆品微生物检验是保证化妆品质量和安全的重要环节。
化妆品中的微生物检测方法探讨
化妆品中的微生物检测方法探讨化妆品是现代人日常生活中常用的美容护肤品，然而，由于其在制造和包装过程中不可避免地存在微生物的污染风险，因此对于化妆品中微生物的检测方法变得尤为重要。
本文将探讨化妆品中常用的微生物检测方法，并分析其优缺点。
一、传统微生物检测方法1.1 培养基计数法培养基计数法是一种传统的微生物检测方法，主要通过将样品接种在富含营养成分的培养基上，利用培养基上微生物生长的可见指标，例如菌落的形状、大小和颜色，来进行微生物数量的估计。
这种方法的优点是相对简单易行，且可以获得微生物的种类和数量信息。
然而，由于微生物的生长需要一定的时间，培养基计数法的缺点在于结果的获取较为耗时，并且可能存在某些难以培养的微生物无法被检测出的问题。
1.2 涂布法涂布法是另一种传统的微生物检测方法，通过将样品涂布在培养基表面，让微生物在培养基上生长并形成可见的菌落。
然后再通过对菌落的计数，来估算样品中微生物的数量。
然而，这种方法同样存在时间耗费长和部分微生物无法被检测出的问题。
二、现代微生物检测方法2.1 PCR法聚合酶链反应（PCR）是一种现代的微生物检测方法，通过扩增微生物DNA片段，从而实现对微生物的定性和定量分析。
PCR法具有高度的灵敏度和特异性，能够检测到微生物以及微生物中的基因信息。
此外，PCR法还能够快速获得结果，并且对某些难以培养的微生物也能进行检测。
然而，PCR法存在着杂交污染和检测结果易受到外界干扰等问题。
2.2 DNA测序法DNA测序法是一种可以获得微生物遗传信息的高通量测序技术，通过对微生物样品中的DNA进行测序，可以获取到微生物的基因序列，并进一步了解微生物的种类和数量。
DNA测序法具有高灵敏度、高分辨率和广泛的适用性，能够检测到微生物的种类和潜在致病因子。
但是，DNA测序法的操作复杂，且成本较高，因此在实际应用中受到一定的限制。
2.3 荧光定量PCR法荧光定量PCR法（qPCR）通过利用特定标记的引物和荧光探针，能够实现对微生物DNA的定量分析。
化妆品中的微生物检测方法的比较研究
化妆品中的微生物检测方法的比较研究化妆品是人们日常生活中常见的使用品，其质量与安全性备受关注。
其中，微生物检测是确保化妆品质量与安全性的重要环节。
随着科技的进步，不同的微生物检测方法也逐渐被应用于化妆品行业。
本文将就化妆品中常见的微生物检测方法进行比较研究，包括传统的培养法、分子生物学方法以及先进的快速检测技术。
一、传统的培养法传统的培养法是化妆品微生物检测中最常用的方法之一。
这种方法通过将化妆品样品培养在富含营养物质的琼脂培养基上，在适宜的条件下培养细菌、酵母和真菌等微生物，并通过观察菌落的形态、颜色以及其它特征来鉴定和计数微生物数量。
尽管传统的培养法被广泛应用于化妆品行业，但其存在一些缺点。
首先，培养过程需要较长的时间，通常需要3至5天才能得到结果。
此外，一些微生物在特殊培养条件下很难生长，从而导致漏报。
同时，对于厌氧菌等难以培养的微生物也无法应用该方法。
因此，传统的培养法并不能满足化妆品行业中对快速、准确的微生物检测需求。
二、分子生物学方法随着分子生物学技术的进步，PCR（聚合酶链式反应）和实时荧光定量PCR等分子生物学方法逐渐应用于化妆品微生物检测中。
这些方法通过检测微生物DNA或RNA的特定序列，来确定微生物的存在与种类。
与传统培养法相比，分子生物学方法具有高效、快速的优势。
它能够在几个小时内确定微生物的存在与种类，且可以检测到无法通过传统培养法获得的微生物。
此外，分子生物学方法还具有较高的灵敏性和准确性，可以对微生物数量进行准确的定量。
然而，分子生物学方法也有一些限制。
首先，这些方法的设备和试剂价格较高。
其次，技术要求较高，需要专业的操作人员进行操作和分析，不适合普通实验室的应用。
因此，对于一些中小企业来说，分子生物学方法的应用较为困难。
三、先进的快速检测技术随着科技的不断发展，一些先进的快速检测技术也逐渐应用于化妆品微生物检测中。
其中包括荧光定量PCR、质谱法和流式细胞术等。
荧光定量PCR结合了传统PCR和实时荧光定量PCR的优势，可以进行快速、高通量、定量的微生物检测。
化妆品的检验方法
化妆品的检验方法
微生物检验是化妆品卫生性的重要检验方法。
微生物检验主要包括总
菌落数、大肠菌群、霉菌和酵母菌等指标的检测。
常用的微生物检验方法
有菌落计数法、膜过滤法和前处理+涂布法等。
此外，还可以使用PCR技
术对化妆品中可能存在的病原微生物进行检测。
稳定性测试是为了评估化妆品在存储和使用过程中的物理和化学稳定性。
稳定性测试主要包括外观、pH值、粘度、溶解度、离析和沉淀等指
标的测定。
稳定性测试可以确定产品的保存期限，也可以评估产品的质量
和性能。
生物学活性测试用于评估化妆品的功效和安全性。
生物学活性测试主
要包括皮肤刺激性、致敏性、眼刺激性和抗菌性等的测试。
常用的生物学
活性测试方法有皮肤刺激试验、皮肤致敏试验、眼刺激试验和抗菌试验等。
除了上述主要的检验方法外，还可以根据具体需求进行其他相关测试，如光敏性、防晒性能、抗氧化性能等。
此外，还要注意遵守产品标准和相
关法规的要求，并参考国家和国际标准组织发布的相关标准方法进行检验。
综上所述，化妆品的检验方法主要包括化学分析、微生物检验、稳定
性测试和生物学活性测试等。
通过这些检验方法，可以确保化妆品的安全性、卫生性和质量标准，保护消费者的健康和权益。
化妆品原料微生物检验标准
化妆品原料微生物检验标准一、细菌总数1.目的：评估化妆品原料的细菌污染程度，反映化妆品生产过程中的卫生状况。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行细菌总数的测定。
3.判定标准：细菌总数小于或等于1000 CFU/g（CFU/ml）为合格，超过此标准为不合格。
二、霉菌和酵母菌总数1.目的：评估化妆品原料的霉菌和酵母菌污染程度，反映原料的卫生状况。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行霉菌和酵母菌总数的测定。
3.判定标准：霉菌和酵母菌总数小于或等于100 CFU/g（CFU/ml）为合格，超过此标准为不合格。
三、耐热大肠菌群1.目的：检测化妆品原料中是否存在耐热大肠菌群，反映原料的卫生状况。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行耐热大肠菌群的测定。
3.判定标准：未检出耐热大肠菌群为合格，检出耐热大肠菌群为不合格。
四、金黄色葡萄球菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在金黄色葡萄球菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行金黄色葡萄球菌的测定。
3.判定标准：未检出金黄色葡萄球菌为合格，检出金黄色葡萄球菌为不合格。
五、铜绿假单胞菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在铜绿假单胞菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行铜绿假单胞菌的测定。
3.判定标准：未检出铜绿假单胞菌为合格，检出铜绿假单胞菌为不合格。
六、沙门氏菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在沙门氏菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行沙门氏菌的测定。
3.判定标准：未检出沙门氏菌为合格，检出沙门氏菌为不合格。
七、志贺氏菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在志贺氏菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行志贺氏菌的测定。
3.判定标准：未检出志贺氏菌为合格，检出志贺氏菌为不合格。
八、大肠埃希氏菌O157:H71.目的：检测化妆品原料中是否存在大肠埃希氏菌O157:H7，预防感染性疾病的发生。
化妆品微生物检测标准
化妆品微生物检测标准
一、细菌总数检测
细菌总数是指化妆品中含有的细菌类微生物的总数。
细菌总数是评价化妆品卫生质量的重要指标之一，也是反映化妆品被污染程度的重要指标之一。
实验原理：采用倾注平板法，将一定体积的样品注入细菌培养基中，经过培养后，细菌在培养基表面生长繁殖形成菌落，通过计数菌落数，可以推测出样品中细菌的总数。
实验步骤：
（1）将样品进行适当稀释；
（2）将一定体积的稀释液注入细菌培养基中；
（3）将培养基放入培养箱中，在适宜的温度和湿度条件下培养；
（4）观察菌落的生长情况，并进行计数。
注意事项：
（1）实验前要对手部进行消毒，避免污染样品和培养基；
（2）实验过程中要使用无菌技术和无菌器材；
（3）实验后要对培养基进行灭菌处理。
二、大肠菌群检测
大肠菌群是指一群好氧性芽孢杆菌，它们的出现意味着化妆品可能被粪便污染。
实验原理：采用滤膜法，将一定体积的样品通过滤膜过滤，将滤膜放在培养基上培养，观察是否有大肠菌群生长。
实验步骤：
（1）将样品进行适当稀释；
（2）将滤膜放在过滤器上，将稀释液过滤；
（3）将滤膜放在培养基上培养；
（4）观察是否有大肠菌群生长。
注意事项：
（1）实验前要对手部进行消毒，避免污染样品和培养基；
（2）实验过程中要使用无菌技术和无菌器材；
（3）实验后要对培养基进行灭菌处理。
三、肠道致病菌检测
肠道致病菌是指能够引起肠道疾病的细菌，如沙门氏菌、霍乱弧菌等。
实验原理：采用生化反应和血清学试验等方法，对样品中的肠道致病菌进行检测。
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lb)20min高压灭菌。注意振荡，使沉淀于底层的吐温80充分混合，冷却至25C左右使用。
注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用多胨代替。
灭菌液体石蜡。
灭菌吐温80。
4.样品的采集及注意事项
所采集的样品， 应具有代表性， 一般视每批化妆品数量大小， 随机抽取相应数量的包装单位。
检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10mLo包装量小于20g的样品，采样
稀释法进行。如为5mL则加到45mL灭菌生理盐水中，混匀后制成1:10检液。
油性液体样品，取样品10mL，先加5mL灭菌液体石蜡混匀，再加10mL灭菌的吐温80,在40C〜44C水浴中充分混合，制成1:10检液。
固体样品
的检液。10:1灭菌生理盐水中， 充分振荡混匀， 使其分散混悬， 静置后， 取上清液作为90mL，加到10g称取．
2.定义 本规范采用下列定义 菌落总数(Aerobic bacterial count)是指化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后(如培
养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等)，1g(1mL)检样中所含菌落的总数。所得
结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。
测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生总评价的综合依据。
1000,1:10000，……等，每种稀释度应更换1支吸管。
将融化并冷至45C〜50C的卵磷脂吐温80营养琼脂培养基倾注到平皿内，每皿约15mL,随 即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，置36C士1C培养箱内
培养48h士2h。另取一个不加样品的灭菌，2h士48hC培养箱内培养1C士36置翻转平皿，待琼
氯化钠
5g
琼脂
15g
卵磷脂
1g
吐温80
7g
蒸馏水
1000mL
制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80,将其他成分（除琼脂外）加 到其余的蒸馏水中，溶解。加入已溶解的卵磷脂、吐温80,混匀，调pH值为〜，加入琼脂，（121C
15lb）20min高压灭菌，储存于冷暗处备用。
%氯化三苯四氮唑（2,3,5-triphenyl terazolium chloride,TTC）
脂凝固后，营养琼脂培养基，80卵磷脂吐温15mL加入约空平皿，
为空白对照。
为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100mL卵磷脂吐温80营养琼脂中加入1mL%的TTC
溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。
6．菌落计数方法 先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5倍〜10倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各平皿 的菌落数后， 求出同一个稀释度各平皿生长的平均菌落数。 若平皿中有连成片状的菌落或花点样 菌落蔓延生长时， 该平皿不宜计数。 若片状菌落不到平皿中的一半， 而其余一半中菌落数分布又 很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2,以代表全皿菌落数。
1.范围
本规范规定了化妆品微生物检验的基本要求 本规范适用于化妆品样品的采集、保存及供检样品制备。
2.仪器和设备
天平。 高压灭菌器。 振荡器。 三角瓶，250mL。玻璃珠。
琉璃棒。
刻度吸管，1mL、10mL。研钵或均质器。
恒温水浴箱。
3. 培养基和试剂
制法：先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后，再与其它成分混合， 加热溶解，调pH为〜分装,
量可适当增加样品包装数量。
供检验样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品 被污染。
接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不能及时检验，样品 应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。
若只有一个样品而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做细菌 检验，再将剩余样品做其它分析。
3.仪器和设备
三角瓶，250mL。
量筒，200mL。
pH计或精密pH试纸。
高压灭菌器。
试管：15x150mm
灭菌平皿:直径9cm。
灭菌刻度吸管，10mL、1mL。
酒精灯。
恒温培养箱：36C士1C。
放大镜。
4.培养基和试剂
生理盐水：见总则中。
卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基
成分：
蛋白胨
20g
牛肉膏
3g
若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报
告之（见表1中例4）。
若所有稀释度的平均菌落数均小于30个，刚应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告
在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器 皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行，或在相应条件下，按无菌操作规定进行。 如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出之日起该菌种及被检样品应保存一个月。
5.供检样品的制备 液体样品
水溶性的液体样品，可量取10mL加到90mL灭菌生理盐水中，如样品少于10mL,仍按10倍
如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称10g样品加入90mL灭菌生理盐水，均质1min〜2min;疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g样品，加入10mL灭菌液体石蜡，10mL吐温80,70mL灭菌生理盐水，均质3min〜5min。
、菌落总数
1.范围 本规范规定了化妆品中菌落总数的检验方法。 本规范000mL
溶解后过滤，（121°C15lb）20min高压灭菌，装于棕色试剂瓶，置4C冰箱备用。
5.操作步骤
用灭菌吸管吸取1:10稀释的检液2mL,分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。另取1mL注
入到9mL灭菌生理盐水试管中 （注意勿使吸管接触液面），更换一支吸管，并充分混匀，制成1:100检液。吸取2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL-如样品含菌量高，还可再稀释成1:
7.菌落计数及报告方法
首先选取平均菌落数在30个〜300个之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀 释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数（见表1中例1）。
若有两个稀释度， 其平均菌落数均在30个〜300个之间，则应求出两菌落总数之比值来决定， 若其比值小于或等于2,应报告其平均数，若大于2则报告其中稀释度较低的平皿的菌落数（见 表1中例2及例3）。