《呼吸道标本的实验室检查及结果解读》
呼吸道病毒标本采集运输、保存与实验室结果判读
甲型流感病毒根据其表面结构（H和N）及其基因特性的 不同可分为多种亚型。
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湖 南 省 疾 病 预 防 控 制 中 心 Hunan Provincial Center for Disease Control and Prevention
目前已从甲型流感病毒的 天然宿主水禽中分离到16 种HA与9种NA亚型的甲型 流感病毒。
Woo, et al. Exp Biol Med. 2009, 234:1117–1127 湖 南 省 疾 病 预 防 控 制 中 心 Hunan Provincial Center for Disease Control and Prevention
冠状病毒
感染特点
可引起呼吸道、肠道感染，也可能引起神经症状。 非SARS-CoV病毒，通过呼吸道飞沫传播，尚无动物模型， 多数感染较轻，为自限性，可加重慢阻肺等疾病。
湖 南 省 疾 病 预 防 控 制 中 心 Hunan Provincial Center for Disease Control and Prevention
流感病毒概述
分型与命名
根据流感病毒感染的对象，可以将病毒分为人类流感 病毒、猪流感病毒、马流感病毒以及禽流感病毒等类群。
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根据病毒粒核蛋白（NP）和膜蛋白（MP)抗原特性及其 基因特性的不同，可以将病毒分为甲（A）、乙（B）、丙 （C）三型。
Cox 湖 南 省 疾 病 预 防 控 制 中 心 Hunan Provincial Center for Disease Control and Prevention
肠道病毒
样本采集
在液体中稳定； 脑脊液、血清、全血、尿可以放在原始采集管中送交
实验室；直肠或咽拭子、鼻洗液等放入VTM；
儿童七种呼吸道病毒检测结果分析
儿童七种呼吸道病毒检测结果分析
本次检测共针对儿童七种常见呼吸道病毒进行了检测，包括流感病毒A、流感病毒B、腺病毒、人类鼻病毒、冠状病毒、副流感病毒和呼吸道合胞病毒。
首先，我们发现本次检测样本中没有检测到流感病毒A和流感病毒B的存在。
这可能是因为本次检测样本的来源包括了健康儿童，他们很可能已经接种了该疫苗或已经产生了相应的免疫力，因此没有被感染或病毒已被清除。
除此之外，我们不能排除样本可能存在假阴性情况。
其次，我们检测到本次样本中存在腺病毒、人类鼻病毒和呼吸道合胞病毒。
腺病毒感染通常表现为呼吸系统感染、咽喉炎等症状，尤其好发于儿童之间；而人类鼻病毒感染通常表现为上呼吸道感染、咳嗽、咳痰等症状。
而呼吸道合胞病毒也是一种常见的呼吸道病毒，感染后可引起类似感冒的症状，包括咳嗽、喉咙痛、流涕等。
同时，还检测到了冠状病毒和副流感病毒。
近年来，冠状病毒引发的呼吸道疾病不断爆发。
此次检测发现样本中存在冠状病毒，但并不能确定是否为新型冠状病毒。
副流感病毒感染也很常见，其症状通常包括咳嗽、发热等。
总体来说，本次检测结果显示样本中存在多种呼吸道病毒感染，表明目前儿童呼吸道疾病形势依然严峻。
建议家长注意孩子的身体状况，定期进行体检，并且注意给孩子注射相应的疫苗以预防感染。
在感染可能性较大的时候，及时就医并采取措施也是很重要的。
下呼吸道标本采集及临床报告解读46页PPT
66、节制使快乐增加并使享受加强。 ——德 谟克利 特 67、今天应做的事没有做，明天再早也 是耽误 了。——裴斯 泰洛齐 68、决定一个人的一生，以及整个命运 的，只 是一瞬 之间。 ——歌 德 69、懒人无法享受休息之乐。——拉布 克 70、浪费时间一桩大罪过。——卢梭
下呼吸道标本采集及临床报告解读
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
五呼吸系统标本微生物检验
支气管肺泡灌洗液
应尽快送检，室温下不超过2小时； 如不能及时送检，应4℃保存，不超 过24小时。
呼吸系统感染常见微生物
01
02
03
细菌
肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、 金黄色葡萄球菌、卡他莫拉菌
等。
病毒
呼吸道合胞病毒、流感病毒、 副流感病毒、腺病毒等。
真菌
白色念珠菌、曲霉菌等。
04
其他微生物
支原体、衣原体等。
定期演练和培训
定期组织实验人员进行应急演练和培训，提高应对生物安全事件的 能力和水平。
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肺炎链球菌检验
通过血平板培养、Optochin敏感试验和胆汁溶菌试验等方法进行 鉴定。
流感嗜血杆菌检验
采用巧克力平板进行分离培养，并通过卫星现象、X因子和V因子依赖 试验等方法进行鉴定。
05 微生物检验结果解读与临 床意义
检验结果解读原则及注意事项
遵循微生物学原则
在解读检验结果时，需遵循微生物学的基本原则，包括微生物的 种类、数量、生长特性等。
高度的敏感性和特异性。
真菌学检验
1 2 3
直接镜检
采集患者的呼吸道分泌物或组织样本，在显微镜 下直接观察真菌的形态和结构特征，以初步判断 真菌的种类。
培养法
将样本接种于适当的培养基上，进行真菌培养， 观察真菌的生长情况和菌落特征，以鉴定真菌种 类。
血清学检测
利用特异性抗体与真菌抗原的结合反应，进行血 清学检测，如凝集试验、沉淀试验等，以辅助诊 断真菌感染。
病毒
如流感病毒、呼吸道合胞病毒等，病毒感染一般采取对症治疗和支持治疗。
真菌
如白色念珠菌、曲霉菌等，真菌感染多见于免疫力低下患者，治疗需考虑抗真菌药物。
呼吸道标本采集和结果解读
添加项标题
检测方法的局限性：不同检测方法可能存在不同的敏感性和特 异性，影响结果的准确性。
添加项标题
标本采集的局限性：呼吸道标本采集过程中可能存在污染、取 样不足等问题，影响结果的可靠性。
添加项标题
检测试剂的局限性：不同品牌、不同批次的检测试剂可能存在 差异，导致结果不一致。
添加项标题
呼吸道标本采集 和检测的时间较 长，需要等待实 验室结果才能做 出诊断，可能会 延误患者的治疗
时间。
汇报人：XX
解读人员的局限性：不同专业背景和经验水平的解读人员可能 对结果有不同的理解和判断，影响结果的解读和解释。
呼吸道标本采集 和检测不适用于 所有情况，如病 情较轻、无呼吸 道症状的患者可 能无法采集到有
意义的标本。
呼吸道标本采集 和检测的准确性 受到多种因素的 影响，如采集方 法、标本保存和
运输等。
呼吸道标本采 集和检测的敏 感性较低，可 能会漏检某些 病原体，导致 误诊或漏诊。
呼吸道标本采集难度大，易 受污染
采集过程中易发生交叉感染
呼吸道标本采集对患者的创 伤较大
呼吸道标本检测的准确性受多 种因素影响，如病毒变异、检 测试剂的灵敏度等。
呼吸道标本采集的难度较大， 容易受到污染或交叉感染。
呼吸道标本检测的特异性有时 不够理想，容易出现假阳性或
假阴性的结果。
呼吸道标本检测的时间较长， 需要等待较长时间才能获得检
检测原理：利用聚合酶链式反应（PCR）技术扩增呼吸道标本中的病毒核酸片段，从而检测病毒 的存在。
采样方法：通常采用鼻咽拭子或痰液作为呼吸道标本，通过专用的采样拭子采集后送检。
检测步骤：包括样本采集、保存、运输、核酸提取和扩增等步骤，通过荧光定量PCR仪进行检测。
下呼吸道标本结果报告
下呼吸道标本结果报告
一、标本类型：下呼吸道标本包括痰液、支气管肺泡灌洗液等。
二、检验项目：
外观：观察标本的颜色、性状、有无血丝、脓性分泌物等。
细胞学检查：计数白细胞、红细胞、鳞状上皮细胞、柱状上皮细胞等，了解炎症程度和细胞类型。
微生物学检查：检测细菌、病毒、真菌等微生物，明确感染的病原体类型。
抗原检测：针对某些特定病原体，检测其抗原成分，以明确诊断。
抗体检测：检测血清中针对某些病原体的抗体，了解感染情况及免疫状态。
细菌培养：对痰液或支气管肺泡灌洗液进行细菌培养，明确病原菌的种类及药敏试验，指导临床用药。
结核分枝杆菌检查：对疑似肺结核患者进行痰液或支气管肺泡灌洗液的结核分枝杆菌检查，明确诊断。
其他特殊检查：根据临床需要，进行其他相关的特殊检查，如分子生物学检测等。
三、报告形式：下呼吸道标本结果报告应以书面形式出具，包括检验项目、结果、参考值、结论等内容。
如有异常
结果，应在结论中注明，并给出相应的建议和处理方案。
四、报告时限：一般情况下，下呼吸道标本的微生物学检查、细菌培养等项目需要一定时间进行培养和鉴定，因此报告时限可能会有所延长。
具体时限应根据实验室实际情况而定，一般会在24-48小时内出具报告。
如有特殊情况，应及时通知相关医生或患者。
呼吸道感染的实验室诊断
太多的不定性是临床分离放线菌阳性率偏低的主要原因
起因：淋雨受凉 无发热 既往体健 病初抗生素治疗有效（LEV无效，换
头孢唑肟3w）
2008-4
❖ 黄色脓痰（100ml/d） ❖ 间断8-12）
❖ 感染？
▪ 细菌？结核？真菌？
❖ 肿瘤？ ❖ 血管炎？
.
89
实验室检查
❖血尿常规 (-)，血CRP 13.7mg/dl，ESR 44mm/hr ❖ 感染：
.
52
呼吸道标本细菌培养
血平板
• 肺炎链球菌 • β溶血链球菌 • 金黄色葡萄球
菌 • 卡他莫拉菌 • 奴卡菌
万古巧克力
• 流感嗜血杆菌 • 副流感嗜血杆
菌 • 卡他莫拉菌
中国兰
• 肠杆菌科 • 假单胞菌 • 不动杆菌
真菌
.
53
真菌培养
沙保弱 培养基
.
念显色 培养基
cal
ctr ckr
cgl
54
• 肺炎链球菌的侵袭力主要是荚膜，失去荚膜其毒 力减弱或丧失。
.
74
肺炎链球菌
.
75
肺炎链球菌
.
76
β溶血链球菌
• A群—化脓性链球菌，是引起化脓性感染的主要病原
菌，致病力最强，可引起痈、蜂窝织炎、急性咽炎、 丹毒、脓疱疮、猩红热、医源性伤口感染和产后感染 等。
•
B群—无乳链球菌，定居人体肠道和阴道，带菌率30%， 鼻咽部也携带此菌。可引发新生儿败血症、肺炎、脑 膜炎等。
.
47
.
48
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49
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50
检验方法
涂片
培养
细菌涂片 真菌涂片 抗酸染色 奴卡菌涂片 六胺银染色
呼吸道病原体感染实验室检测结果分析
呼吸道病原体感染实验室检测结果分析
张岩;曲少莲;杨红起;杨琴;袁美莲
【期刊名称】《滨州医学院学报》
【年(卷),期】2005(028)005
【摘要】呼吸道感染的病原体因不同国家、不同省市和地区而有所差异，为了解东营地区呼吸道病原体感染情况，为临床治疗提供参考依据，我们对2002年11月-2003年12月来我院就诊的423例患者所做的20种呼吸道病原体的检测结果进行了统计分析，现将结果报告如下。
【总页数】3页(P363-365)
【作者】张岩;曲少莲;杨红起;杨琴;袁美莲
【作者单位】胜利石油管理局中心医院检验科,东营市,257034;胜利石油管理局中心医院检验科,东营市,257034;胜利石油管理局中心医院检验科,东营市,257034;胜利石油管理局中心医院检验科,东营市,257034;胜利石油管理局中心医院检验科,东营市,257034
【正文语种】中文
【中图分类】R372
【相关文献】
1.柳州地区患儿9种呼吸道非典型病原体感染的检测结果分析 [J], 戴娟;
2.呼吸道联检试剂在HIV/AIDS合并呼吸道非典型病原体感染诊断中的应用研究[J], 钟敏;张桂仙;杨绍敏
3.新型冠状病毒肺炎与其他呼吸道病原体感染疾病的实验室数据比较 [J], 罗佳;应斌武;曹玲;朱玛;李青峰
4.广西桂林地区儿童9种呼吸道病原体感染的检测结果分析 [J], 翟励敏;王碧玉;初礼巍;赵丽春
5.一起由流感病毒引起的呼吸道疫情的实验室检测结果分析 [J], 石伟先;彭晓旻;丁丽新;王小梅;卢桂兰;高婷;董振英;吴疆
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北京医院陈东科主要内容呼吸道疾病的分类哪些呼吸道疾病需要做病原学检查 呼吸道感染病原学检查方法采集不同标本的临床意义标本处理程序快速筛查试验检验结果解读一、呼吸道疾病的分类1.感染性炎症（由各种微生物引起）；2.非感染性炎症：结节病、过敏性肺炎、嗜酸细胞浸润性肺炎、急性间质性肺炎、放射性肺炎、药物相关的肺疾病、支气管哮喘、Wegener’s肉芽肿等；3.非炎症病：气胸、肺栓塞、充血性心衰、肿瘤引起阻塞肺炎、淋巴瘤、肺泡蛋白沉积征等。
正确诊断是抗感染合理用药的前提●非感染性炎症不需要进行抗感染治疗要慎重甄别炎症的性质●不同病原体感染需要不同抗病原药物病毒感染需要抗病毒治疗寄生虫感染需要抗寄生虫治疗真菌感染使用抗真菌药物治疗细菌感染才使用抗细菌药物治疗鉴别诊断很重要排除性诊断技术（影像学、病理学、免疫学、分子生物学、抗原检测、感染标志物等）；采用特异性高的诊断技术，如肺栓塞采用同位素检查； 必要时可进行诊断性治疗，如过敏性肺炎采用激素。
二、哪些疾病需要做病原学检查不必常规做病原学检查的肺炎：无基础疾病的轻症社区获得性肺炎。
需要做病原学检查的肺炎：需住院治疗的中重症肺炎、住ICU的中重症肺炎、医院获得性肺炎、免疫抑制宿主肺炎、疑似耐药菌感染的肺炎、特殊病原体引起的肺炎、常规抗菌治疗无效或吸收延迟的肺炎等。
三、呼吸道感染病原学检查方法 涂片镜检法培养法PCR法基因芯片技术感染标志物检查（PCT、CRP、IL-6、1-3-β-D-葡聚糖、半乳甘露聚糖等）快速抗原检查（尿、胸水、脑脊液、分泌物等）四、采集不同标本的临床意义咳痰经支气管吸引物（TTA）经胸壁针刺吸引物（TNA）经支气管镜采样标本（BAL，PSB）开胸肺活检（OLB）组织标本经人工气道采样的下呼吸道标本微生物学检验的标准化首先应从标本采取与处理的规范化开始。
“正确的微生物学检验始自正确的标本采取。
临床医师、护师及检验技师都必须通晓其要领。
”___引自著名的临床微生物检验专著《Manual of Clinical Microbiology》主编Patrick Murray 的话标本采集时机的影响炎症的消退也许很漫长，但如果用药正确很多病原菌会很快消失。
五、标本处理程序（1）去污染处理：要提高从混合菌标本中分离可疑病原菌的分离率，有必要对标本进行去污染处理。
例如：分离分枝杆菌前对标本进行酸（或碱）处理，对怀疑有芽孢杆菌感染的标本要进行热处理（或用乙醇预处理）。
（2）浓缩：其目的是为了集菌，常用的方法有沉淀法（离心）和漂浮法（饱和盐水和汽油法等）。
（3）洗涤：减少口腔定植菌的污染。
（4）涂片：粘稠标本最好压片处理。
（5）消化：其目的是为了将被粘液或组织包裹的病原体释放出来。
（6）接种：根据患者病情、涂片镜检结果选择培养基及孵育条件。
六、快速病原筛查试验PCR法基因芯片法涂片镜检法：操作最简单、费用最低、用时最短，结果最直观的检验方法就是标本直接涂片、染色或不染色、显微镜检。
2011年世界卫生组织(WHO)对临床微生物实验室提出三项指导性方针：✓临床微生物实验室尽可能把目标集中在快速诊断方面✓显微镜检查对建立快速的初步诊断具有很大价值✓实验室人员必须主动与临床结合，将实验室数据转化为临床有用的信息标本直接涂片镜检的临床意义►根据对标本直接涂片、镜检，即可获得感染病原的信息。
即细菌、真菌、螺旋体、寄生虫，或其他病原感染。
并在第一时间通知临床医生，为医生经验用药提供参考依据。
标本涂片制作方法制片很重要！涂片的制备水平及染色的质量，直接影响到镜检的结果。
基本要求：涂片的厚薄以镜下见到单层细胞为宜；染色结果以细胞核、浆清晰，胞内吞噬物清楚可见，革兰染色阴、阳性分明为佳。
制片步骤1. 标本处理；2. 压片；3. 固定；4. 拉片；5. 染色.阅片：根据人体对细菌/真菌感染在早期主要以非特异性免疫(细胞免疫为主)的特点，选择痰标本中脓细胞成团块状分布，集中而不稠密，且周围无鳞状上皮细胞或无细菌大量分布的区域为阅片区，观察视野中脓细胞聚集处的脓细胞胞浆中有无吞噬的细菌、或发现被脓细胞包裹的细菌、或与脓细胞伴行的细菌，以及细菌的染色性及排列特征，菌体特征等。
并作记录，以此作为确定病原菌的理论依据。
七、检验结果解读阴性结果解读：排除假阴性结果。
阳性结果解读：根据方法学原理、患者流行病学史等进行分析，注意排除污染或定植。
药敏结果解读：遵守药敏试验规则，注意天然耐药、特殊耐药机制、感染部位（组织分布）、儿童用药等。
2.阳性结果解读（1）感染菌的确认：根据标本直接涂片镜检结果及肺穿刺结果，结合细胞免疫理论进行分析。
阳性结果解读（2）排除定植菌：根据标本直接涂片镜检结果进行综合分析。
阳性结果解读（3）排除污染菌：采集过程、实验过程。
原始标本涂片中未见。
3.错误报告 患者信息错误护理、护工差错实验室差错4.药敏结果解读医生：✧了解试验方法学原理✧了解CLSI折点范围、更新信息✧了解体外实验结果与体内疗效存在不一致✧结合生化指标及药理学参数具体分析（PK/PD）实验室：✧规范操作✧质量控制结果在控药敏结果解读（1）遵守药敏试验规则：我国卫生部于1998年规定：我国药敏试验暂按CLSI历年颁布的所有微生物药敏试验文件作为部颁标准，此决定至今未改变。
CLSI：Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI（临床和实验室标准协会）是一家国际性、非官方、非营利、跨学科、制定标准和教育的组织，得到美国国家标准协会（ANSI）认可。
制定达成共识的标准和指南，并促进其在医疗保健系统内的应用。
CLSI推荐的抗微生物药物敏感性试验操作方法和判断标准被世界上许多国家和地区所采用。
每年CLSI都会根据研究资料对抗微生物药物敏感性试验执行标准信息增刊(M100文件)进行修订和更新。
药敏结果解读（2）天然耐药机制：天然耐药定义为固有的(非后天获得的)抗生素耐药，这代表了几乎所有野生型菌株的抗菌素谱的特性。
天然耐药非常普遍，因此，无需做药敏试验。
例如：柠檬酸杆菌对氨苄西林天然耐药。
天然耐药见CLS M100-S25附录B.这些表格至少有3个用途: (1)提供了一种评价检测方法的准确性；(2)帮助识别同类表型；(3)可帮助验证累积药敏试验数据。
药敏结果解读（3）特殊耐药机制：临床医生，特别是感染科医生应该掌握必要的临床微生物知识。
诸如PRSP、BLNAR 、MDR-TB、MRSA、HLARE、VRE、VISA、ESBLs、AmpC、KPC、MBL(包括NDM-1等)、IRTs等耐药机制，如果没有临床微生物检查协助进行药物筛选，全凭经验治疗往往会导致抗感染治疗失败。
药敏结果解读（4）感染部位（组织分布）：药物在不同组织中的分布浓度不尽相同，用药时应该充分考虑。
必要时应该根据菌株的MIC值进行计算。
药敏结果解读（5）儿童用药：根据儿童生理特点合理用药。
综合分析结合质控结果进行分析。
根据流行病学资料、影像学、病理学、免疫学、分子生物学、血常规结果、血沉、尿中检测抗原、感染标志物、病原菌代谢产物分析等进行综合分析。
《微生物专业岗位设置和诊断性报告专家共识（草案）》2014年11月22-23日，“中国医师协会第九届全国检验与临床学术会议”（苏州）为我国临床微生物检验的发展制订出一张宏伟“蓝图” 适用范围：中国三级甲等综合医院临床微生物科（组）病原学报告结果1. 病原学检测报告：由技术组生成的标本质量描述、病原体形态图文、培养鉴定、药敏结果等；2. 病原学诊断报告：由检验医师或教授根据技术组生成的病原学检测报告、患者临床信息、影像学及病理等其他检测结果综合分析后生成病原学诊断报告；将抗菌药物分级报告，并能根据报告对临床感染性疾病的治疗或感染控制提出相应的建议。
推荐几个专业网站►微生物之家论坛：►检验天空：►检验医学论坛：►丁香园：►阳光检验网论坛：►上海国际医院感染控制论坛：►WHONET：www.who.int/emc/WHONET/WHONET.html►细菌图片网站：/asmonly/details_print.asp?id=2566&Lang =&ISkip=0►临床微生物图片-临床医学专题网：/jytp/lcwsw/lcwsw.htm►维基百科：/zh-cn/Wikipedia:%E9%A6%96%E9%A1%B5►权威细菌分类网站：（1）德国站：http://www.dsmz.de/microorganisms/bacterial_nomenclature_info.php?genu s=Enterobacter&species=aerogenes&bnu_no=775928#775928（2）法国站：http://www.bacterio.cict.fr/ijk/klebsiella.html。