动物体细胞杂交技术过程1
第13章 动物细胞融合及杂交瘤技术
第13章动物细胞融合及杂交瘤技术第1节动物细胞融合技术1 动物细胞融合方法:1.1 病毒诱导融合灭活的仙台病毒可诱发细胞融合成多核体细胞。
一般过程：弃上清双亲本细胞—→分别制成细胞悬液—→混合离心—→双亲细胞沉淀+灭活仙台病毒悬液冰浴20min 水浴37o C,30min—→混匀————→ 细胞凝集——————→ 细胞融合—→ 选择培养基间歇摇动间歇摇动1.2 化学诱导融合方法：类似植物细胞融合的PEG法。
特点：来源方便、使用简便、活性稳定、融合效率高由于动物细胞pH值多为中性至弱碱性,PEG溶液的pH值应调至7.4~8.0为宜。
1.3 电激诱导融合方法：类似植物原生质体电激融合。
优点：操作简单；适用于各种细胞类型; 不需加外源因子如PEG等;对细胞的毒性相对低;融合率很高;可用于细胞数量很少的融合过程;可在显微镜直视下定向诱导细胞融合以及直接挑选杂交细胞。
1.4 微流控制细胞配对和融合技术（Microfluidic control of cell pairing and fusion）（Nature Method,2009）2 融合细胞的筛选与植物杂合细胞筛选的模式类似。
同型合胞体（同核体）：其中含有两个或多个相同细胞核合胞体⎨异型合胞体（异核体）：含有两个或多个不同的细胞核。
杂种细胞：少数异型合胞体细胞核融合，染色体合并到一个细胞核内。
亲本体细胞来自同一物种——两套染色体彼此相容不发生排斥融合细胞⎨亲本体细胞来自不同物种——产生排斥现象(其中一套优先排斥)2.1 基于酶缺陷型细胞和药物抗性等所建立的杂种筛选（HAT等）2.2 基于营养缺陷型细胞等所建立的杂种筛选2.3 基于温度敏感突变型细胞组成的杂种筛选2.4 利用荧光激活分选技术进行筛选3 融合细胞克隆化利用单个细胞培养的技术选育出遗传稳定的、能表达特定性状的细胞系。
3.1、有限稀释法3.2、半固体培养基法3.3、显微操作法克隆化后的细胞,经过有限的扩增以后立刻就要冻存种子细胞.鉴定细胞克隆，筛选具有所需性状的杂种细胞杂交细胞的遗传表型：多样性；不稳定性4 细胞融合技术的主要应用:l) 染色体的基因定位；2) 遗传疾病的治疗与基因互补分析；3) 特殊活性物质的制备——淋巴细胞杂交瘤技术。
体细胞杂交技术的原理
体细胞杂交技术的原理
体细胞杂交技术，也称为核移植技术或克隆技术，利用体细胞的核转移来实现基因的重组。
其原理主要包括以下几个步骤：
1. 提取供体细胞：从一个成熟的个体中选择一种或几种基因型优良的体细胞作为供体细胞。
常用的供体细胞有皮肤细胞、血细胞、脂肪细胞等。
2. 制备卵母细胞：从同一物种的成熟个体中提取卵母细胞。
在大部分动物中，卵母细胞通常存在于卵巢中。
而对于植物，则常通过控制激素处理来提取卵母细胞。
3. 去核与体细胞融合：通过物理或化学方法，去除卵母细胞的核，得到去核卵母细胞。
然后，将供体细胞核转移到去核卵母细胞中，使其与卵母细胞融合。
4. 诱导发育：通过培养基以及一定的体外环境，诱导融合细胞发育成为胚胎。
这个过程可以通过控制培养基中的营养物质、生长因子以及培养条件的调节来实现。
5. 种植胚胎：将发育完全的胚胎植入供体或者其他寄主个体中，继续发育成为一个新的个体。
在动物中，常常将胚胎植入到母体的子宫内，进行进一步发育。
而植物则常常通过切割和茎体培养等方法来进行胚胎种植。
体细胞杂交技术主要靠核转移来实现基因的重组，因而利用这一技术可以获得与供体细胞相同基因组的个体，即克隆个体。
这项技术在生物医学研究、动物繁殖与保育、植物繁殖改良等领域有着广泛应用。
体细胞杂交程序
体细胞杂交程序
体细胞杂交程序是一种实验技术，用于将两个不同物种的体细胞融合在一起，形成一个细胞，包含了两个物种的染色体。
该程序通常包括以下步骤：
1. 准备细胞：从两个不同物种选择合适的细胞，如动物的体细胞或植物的叶片细胞。
2. 刺激融合：将两种细胞置于适当的培养基中，并通过使用化学物质或电脉冲等方法，刺激细胞融合。
3. 培养和选择：将融合细胞转移到含有必要营养物质和因子的培养基中，以促进其生长和分裂。
在培养的过程中，根据需要进行选择，通过筛选和分析细胞形态、染色体数量和遗传特征，以确定成功融合的细胞。
4. 培养成功细胞：一旦成功融合的细胞被鉴定出来，将其传代至足够数目，以确保细胞具备稳定的遗传性状，并确保可以进行后续的实验或应用。
体细胞杂交程序的目的是将两个物种的特性结合在一个细胞中。
这种技术可以用于生物研究、育种改良、生物医学和生物工程等领域，例如创建转基因生物、研究细胞发育和遗传学等。
体细胞杂交流程
序号
流程环节
详细描述
责任人
预期完成时间
1
选择亲本细胞
根据实验目的选择适当的亲本细胞，确保其遗传特性和生长状态良好
实验人员A
XXXX年XX月XX日
2
细胞培养
对亲本细胞进行培养和扩增，确保细胞数量和质量满足实验需求
实验人员B
XXXX年XX月XX日
3
细胞融合剂准备
准备适当的细胞融合剂，如聚乙二醇（PEG）等，确保融合剂的质量和浓度
实验人员C
XXXX年XX月XX日
4
细胞融合
将亲本细胞混合，并加入细胞融合剂，诱导细胞融合
实验人员D
XXXX年XX月XX日
5
融合细胞筛选
通过特定的选择培养基或标记基因等方法，筛选出成功融合的细胞
实验人员E
XXXX年XX月XX日
6
融合细胞培养
对筛选出的融合细胞进行培养和扩增，观察其生长和分化情况
实验人员F
XXXX年XX月XX日
7
遗传特性分析
对融合细胞进行遗传特性分析，如染色体数目、基因表达等
实验人员G
XXXX年XX月XX日
8
数据整理与分析
整理实验数据，进行统计分析和解读，得出实验结论
实验人员H
XXXX年XX月XX日
9
实验报告撰写
根据实验结果撰写详细的实验报告，包括方法、结果
人教版高中生物选修三知识点汇总(背诵版)
人教版高中生物选修三知识点汇总(背诵版)专题一基因工程1.2.3.4.5.6.7.8.9.基因工程的场所？（生物体外）基因工程操作水平？（DNA分子水平）基因工程利用的技术？（基因重组和转基因技术）基因工程的原理？（基因重组）基因工程的别名？（DNA重组技术）基因工程的目的？（获得人类需要的基因产物）基因工程/DNA重组技术的基本工具？（限制性核酸内切酶（限制酶），DNA连接酶，载体）工具酶？（限制酶，DNA连接酶）限制酶的分布？（主要分布在原核生物中）限制酶的作用部位？（磷酸二酯键）10.限制酶的特异性？（限制酶只能识别特定的双链DNA 序列，并在特定的切割位点切割）11.限制酶的专一性？（不同的限制酶识别不同的核苷酸序列）12.限制酶作用的结果是？（形成黏性末端或平末端）13.DNA连接酶的种类？（2类。
来自大肠杆菌的E.coliDNA连接酶（只能催化连接黏性末端），来自T4噬菌体的T4DNA连接酶（既能催化连接黏性末端也能连接平末端））14.DNA连接酶的作用位点？（磷酸二酯键）15.DNA连接酶和DNA聚合酶的区分？（DNA连接酶催化连接DNA片断，不需要模板，DNA聚合酶催化连接单个脱氧核苷酸，需要模板）16.载体的种类？（质粒（最常用），λ噬菌体的衍生物，动植物病毒）17.作为载体必备的条件？（能够在受体细胞中稳定存在并自我复制，对受体细胞无害，有一个或多个酶切位点，具有标志基因）18.质粒？（独立于拟核之外的小型环状双链DNA 份子）19.标志基因的作用？常用的有？（供重组DNA的鉴定和选择）（四环素抗性基因，氨苄青霉素抗性基因）20.基因工程中使用的质粒是否是天然质粒？（不是，使用的是人工改造过的天然质粒）21.基因工程的基本操作程序的步骤？（4个，获取目的基因，基因表达载体的构建（核心工程），将目的基因导入受体细胞，目的基因的检测与鉴定）24.PCR（多聚酶链式回响反映）技术的原理？（DNA复制）25.PCR技术操作环境？（生物体外，在PCR扩增仪中）26.PCR与DNA复制不同之处？（前者不需要解旋酶，高温解旋，后者要用解旋酶解旋；前者的DNA聚合酶要求热稳定性高，后者环境温和不需要热稳定性高的DNA聚合酶）（PCR技术中需要一种特殊的酶：Taq酶，又叫热稳定性DNA聚合酶）27.若基因较小，核苷酸序列，则能够通过DNA合成仪？（用化学方法直接人工合成）28.基因表达载体？（不同生物构建的表达载体有差别，但都需具备四部分：启动子，终止子，目的基因，标记基因）（复制原点）29.启动子和起始密码子，终止子和终止密码子？（启动子和终止子是DNA，起始密码子和终止密码子是RNA。
植物体细胞杂交技术流程的原理
植物体细胞杂交技术流程的原理英文回答：Somatic Cell Hybridization Technique: Principle and Process.The somatic cell hybridization technique is a valuable tool in genetics and biotechnology that allows for the fusion of two different somatic cells to create a hybrid cell. This technique has a wide range of applications, including the production of hybridomas for monoclonal antibody production, the study of gene expression and regulation, and the creation of cell lines for genetic engineering.The principle of somatic cell hybridization is based on the fusion of two cells with different genetic backgrounds. The resulting hybrid cell contains the genetic material from both parental cells, creating a unique combination of traits. The process of somatic cell hybridization involvesseveral key steps:1. Cell Preparation: The first step is to isolate and prepare the two desired cell types. Typically, one cell type is a recipient cell, which is often a myeloma cell or a cell line lacking specific genes, while the other cell type is the donor cell, which contains the desired genes.2. Cell Fusion: The next step is to fuse the two cell types together. This is typically achieved by using a chemical agent such as polyethylene glycol (PEG), which promotes cell membrane fusion. The fused cells are then cultured in a medium that supports their growth and allows for the selection of hybrid cells.3. Selection of Hybrid Cells: After cell fusion, the hybrid cells must be selected from the unfused parental cells. This is often achieved by using a selective medium that allows only the hybrid cells to survive. For example, if the recipient cells are myeloma cells that lack the ability to synthesize a specific enzyme, the selective medium can be supplemented with this enzyme, allowing onlythe hybrid cells to grow.4. Clonal Isolation: Once the hybrid cells are selected, they are cloned to produce a stable cell line. Thisinvolves isolating individual hybrid cells and culturing them to establish a clonal population. The resulting clones are then characterized and screened to identify those that possess the desired traits.中文回答：体细胞杂交技术原理和流程。
动物细胞和植物细胞杂交的实例
动物细胞和植物细胞杂交的实例标题：一次奇妙的实验：动物细胞与植物细胞的杂交在人类历史上，科学家们经常进行各种实验，以便更好地了解生命的奥秘。
而在这些实验中，有一次尤其引人注目，那就是动物细胞与植物细胞的杂交实验。
这次实验的目的是探索动物细胞和植物细胞之间是否存在某种可能的结合方式。
科学家们通过精密的操作将一种动物细胞与一种植物细胞进行结合，希望能够在新的细胞中观察到两种细胞的特征和功能的结合。
实验开始前，科学家们对动物细胞和植物细胞进行了详细的研究和分析。
他们发现，动物细胞具有高度的活动性和灵敏性，能够通过神经传导和肌肉运动实现各种生物功能。
而植物细胞则具有良好的稳定性和自养能力，能够通过光合作用和根系吸收水分养分来维持生命活动。
在实验中，科学家们首先选择了一种动物细胞和一种植物细胞，然后将它们置于一种特殊的培养基中。
经过一段时间的培养，他们观察到了一些有趣的现象。
新的细胞在形态上呈现出中间状态，既有动物细胞的柔软和可塑性，又有植物细胞的稳定和坚韧。
这种形态的结合使得新细胞在外形上显得独特而美丽。
新细胞在功能上也呈现出了动植物细胞的特点的结合。
它能够通过神经传导实现一定的运动，同时还能够通过光合作用和根系吸收养分来自养。
这样的功能结合使得新细胞具备了独特的生存和适应能力。
通过进一步的观察和实验，科学家们还发现，这种动植物细胞杂交的新细胞在抵抗病原体和适应环境变化方面具有更强的能力。
这为进一步研究细胞的特性和生命的演化提供了重要的线索。
这次动植物细胞杂交的实验不仅仅是一次科学的突破，更是人类对生命奥秘追求的体现。
通过这次实验，科学家们对生物界的多样性和复杂性有了更深入的理解，也为未来的科学研究提供了新的思路和方向。
当我听到这个实验的结果时，我感到非常震惊和兴奋。
这次实验不仅探索了动植物细胞之间的奇妙结合，也让我更加深入地思考了生命的本质和起源。
我深信，在不久的将来，科学家们会继续探索生命的奥秘，带给我们更多关于生命的惊喜和发现。
细胞生物学实验报告——动物细胞融合
山东大学细胞生物学实验报告聚乙二醇（PEG ）法诱导的动物细胞融合实验2012/9/11实验目的：了解细胞融合技术的发展过程和主要方法的基本原理，用聚乙二醇(PEG)化学诱导法进行鸡血红细胞的融合实验，掌握实验的基本操作，观察鸡血红细胞融合的不同时期。
实验原理：1. 细胞融合的概念两个或两个以上的细胞或原生质体在自然或人为诱导的情况下细胞质膜相互融合，细胞质相互混合成为一个整体杂合细胞的现象被称为细胞融合。
细胞融合可以发生在同种细胞之间也可以在不同物种间实现。
2. 细胞人工融合的主要方法及基本原理细胞体外融合的主要方法分为病毒诱导，化学诱导和物理诱导。
1953年，M. Kuroya 在临床中第一次分离到仙台病毒（HVJ ）[1]。
1958年，日本学者Okada 发现仙台病毒（HVJ ）能诱导动物细胞融合[2]，其基本原理是仙台病毒的衣壳上有细胞表面受体的结合位点，可以诱导不同细胞凝集，最终使不同细胞的细胞膜相互融合。
1974年，加拿大学者高国楠发明了细胞的聚乙二醇（Polyethyleneglycol ，PEG ）化学融合法，由于该方法对实验条件要求极低，试剂易得，操作简单，成为应用最广泛的细胞融合方法。
化学诱导细胞融合的基本原理是PEG 等化学物质能够诱导细胞膜磷脂分子的极性基团发生结构重排，相互接触的细胞在细胞膜恢复过程中借助磷脂分子的亲和作用和表面张力实现融合。
比之于仙台病毒诱导法，PEG 诱导法的效率提高了几百倍。
80年代，科学家发明了细胞电融合法[4, 5]，电融合法将细胞融合的产率提高到了50%-80%。
电融合法的建立是基于细胞膜表面带电荷的性质。
当在细胞悬液周围加入特定方向的电场时，细胞表面会发生极化现象，相邻的细胞将吸附在一起。
这时突然提高电场强度，细胞间彼此接触的细胞膜会被击穿，细胞膜修复时受到磷脂分子间的亲和作用和细胞膜表面张力的作用将会发生融合。
图2. 以电融合方法得到的3T3-C2融合细胞 （引自J. Teissie 等，1982 )。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？
体外培养单个Ｂ淋巴细胞， 体外培养单个Ｂ淋巴细胞，提取分泌的抗体 体外培养淋巴细胞能无限增殖吗? 体外培养淋巴细胞能无限增殖吗 怎样解决这个问题？ 怎样解决这个问题？
二、单克隆抗体
设计方案： 设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 －－ 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖 －－
去除细胞壁后诱 使细胞分散后诱 导原生质体融合 导细胞融合 物理、 物理（离心、 物理（离心、振 物理、化学方法 电刺激） （同左） 动、电刺激） 同左） 化学（聚乙二醇） 化学（聚乙二醇） 灭活的病毒
诱导方法
用途
获得杂种植株
主要用于制备 单克隆抗体
思考题
7、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？ 、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？ 利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞 8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？ 、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？ 生产单克隆抗体
通过长期的实验， 通过长期的实验，科 学家们采用体细胞杂交 技术获得了“番茄—马 技术获得了“番茄 马 铃薯”植株。 铃薯”植株。
“番茄 马铃薯”理想图 番茄—马铃薯 番茄 马铃薯”
植物体细胞杂交技术过程
原理？ 原理？
植物细胞的融合
方法？ 方法？
融合 完成 的 标志
植物组织培养
原理？
植物细胞A 植物细胞
融合后的细胞 进行有丝分裂
思考题
1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？ 、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？
酶解法， 酶解法，如纤维素酶或果胶酶
2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？ 、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？
无需， 无需，因为动物细胞无细胞壁
3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？ 、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？
细胞融合后培养液中有几种细胞？ 细胞融合后培养液中有几种细胞？ B BB B瘤 瘤瘤 瘤 瘤 筛选杂种细胞 已知细胞合成DNA有 已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途 DNA 两条途径，其中D 径能被氨基嘌呤阻断。 径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两 DNA合成途径 但一般不分裂增殖。 合成途径， 条DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓 瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖， 瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖， 将这两种细胞在试管中混合， PEG促融 促融， 将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，在 筛选培养基上筛选获得杂种细胞。 筛选培养基上筛选获得杂种细胞。
离心、电激等物理方法；PEG等化学方法 离心、电激等物理方法； 等化学方法
4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？ 、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？
能 还可以利用灭活的病毒进行诱导
？
5、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形 、 成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？ 成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？
去壁
原生质体A 原生质体A 原生质体B 原生质体
去壁
人 工 诱 导
筛选融 合AB 的原生 质体
促进融合 的方法？ 的方法？
杂种 细胞 脱 再 AB 分
生 出 细 胞 壁 化
愈 伤 组 织
再 分 化
杂 种 植 株
植物细胞B 植物细胞
成果和未解决的问题
成果：克服不同生物远缘杂交的障碍，出 成果：克服不同生物远缘杂交的障碍， 现自然界没有的新品种。 未解决的问题： 未解决的问题：未能让杂种植物按照人们 的需要表现出亲代的优良。 的需要表现出亲代的优良。
二、单克隆抗体
1.抗体是由何种细胞产生的？ 抗体是由何种细胞产生的？ 抗体是由何种细胞产生的
提 问
浆细胞)能分泌多种 ２、一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞 能分泌多种 一个Ｂ淋巴细胞 浆细胞 抗体吗？ 抗体吗？
３、一种抗原侵入机体之后，引起机体免 一种抗原侵入机体之后， 疫反应产生的抗体只有一种吗？ 疫反应产生的抗体只有一种吗？ 简述获得抗体的传统途径？ ４. 简述获得抗体的传统途径？ ５、这种方法获得的抗体有什么缺陷？ 这种方法获得的抗体有什么缺陷？
如果将牛的细胞与植物细胞杂交， 如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶 那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！ 牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！ 动物细胞也能融合吗？ 动物细胞也能融合吗？
一、动物细胞融合
1、动物融合的过程 请同学们阅读课本P52动物融合
1、动物细胞融合过程
不同DNA的两个细胞 不同DNA的两个细胞 DNA 灭活病毒诱导细胞融合
？
传统血清抗体的制备
特异性差、纯度低； 产量低、 特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏 抗原 刺激 动物体 浆细胞 抗体 抗体不纯
抗原不纯
每个Ｂ淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个Ｂ淋巴细 每个Ｂ淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个Ｂ 胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。 胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。
二、单克隆抗体
3.单克隆抗体的应用：
①在基础理论研究中具有重要意义 ②在疾病诊断、治疗和预防方面，具有 在疾病诊断、治疗和预防方面， 特异性高、灵敏度高等优越性。 特异性高、灵敏度高等优越性。 ③生物导弹
思考题
★制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细 胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？ ★假如你掌握了动物细胞融合技术，你想用它 来解决什么问题？
幻 灯 片
不能
6、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？ 、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？
2、动物细胞融合的概念
动物细胞融合也称细胞杂交， 动物细胞融合也称细胞杂交， 是指两个或多个动物细胞形成一个 细胞的过程
植物、 植物、动物细胞融合的比较
比较项目 原理 细胞融合的方法 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 动物细胞融合 细胞膜的流动性
杂种细胞
2.制备过程： 2.制备过程： 制备过程
注射抗哪些？ 融合后培养液中有几种细胞 怎样筛选出杂交瘤细胞， 怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交 瘤细胞有何优点 为何要进行克隆化培养和专 一抗体检测，多次筛选 一抗体检测， 大量增殖杂交瘤细胞获得单 抗的方法