LF-I分子杂交炉和分子杂交炉价格
基因工程(基因工程的主要技术与原理分子杂交技术)

Southern杂交主要用来判断某 一生物样品中是否存在某一基因, 以及该基因所在的限制性酶切片 段的大小。(DNA水平)
Southern杂交也可检测目的基 因的拷贝数。
CK 1 2 3 4 5
Southern bloting
这种检测方法与其它免疫学方法的不同是,一方面 可以避免非特异性的免疫反应,而且更关键的是可以 检测出目标蛋白质的分子量,从而直观的在滤膜上显 示出目标蛋白。
五、Dot blot hybridization
1、原理:
在Southern杂交的基础上发展起来的用于 快速检测特异核酸分子的杂交技术。将核酸 样品直接转移到适当的滤膜上,然后进行杂 交检测。
凝胶
3)转移并固定到滤膜上
通过毛细管渗吸或电转移或真空转移的方式,将凝 胶上的DNA转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上。最后 通过80℃处理或紫外线照射将DNA固定在滤膜上。
Southern blotting 装置示意图
4)探针的制备及杂交
预杂交:将结合了DNA分子的滤膜先与特定的预 杂液进行预杂交,也就是将滤膜的空白处用鱼精 DNA或牛奶蛋白封闭起来,防止在杂交过程中滤膜 本身对探针的吸附。
当用一个标记的核酸分子与核酸样品杂交, 便可查明该样品中是否存在与该标记核酸分 子具有同源性的核酸分子。这个标记的核酸 分子称为探针(probe),可以是DNA,也可以 是RNA,或合成的寡核苷酸。
二、基本过程
1、核酸印迹(Nucleic acid blotting): 将核酸样品(DNA、RNA或蛋白质)在凝胶
在1975年,由英国的E. Southern首先设计发明的, 因此又称为Southern杂交(Southern blotting)。
大型仪器对外测试收费标准

73
基因扩增仪
15元/样品
74
基因扩增仪
15元/样品
75
数字式植物压力室
100元/天
76
叶绿素荧光仪
300元/天,50元/小时
77
叶面积仪
150元/天
78
植物动态气孔计
100元/天
79
基因测序仪
45元/样品
80
基因芯片系统
3000元/片
81
基因芯片扫描仪
150元/小时
82
显微镜
300元/小时
62
滑走切片机
60元/样品
63
紫外分光光度计
100元/样品
64
倒置显微镜
100元/样品
65
紫外分光光度计
100元/样品
66
全自动凯氏定氮仪
150元/样品
67
细胞基因转移仪
30元/样品
68
数字凝胶成像分析系统
30元/样品
69
分光光度计
15元/样品
70
基因扩增仪
15元/样品
71
电泳仪
30元/样品
72
新型梯度PCR仪
83
分子杂交炉
60元/小时
84
磷屏成像仪
150元/小时
85
便携式光合作用测定系统
300元/天
86
遗传工作站
300元/小时
87
光谱仪
300元/天
88
定氮仪
200元/天
44
单体分离仪
50元/小时,500元/样品
45
激光诱导荧光检测器
100元/样品
46
制备色谱系统
DIG Northern标记及杂交检测试剂盒中文说明书

DIG Northern Starter KitDIG Northern标记及杂交检测试剂盒说明书版本:Version 8.0 (2010年8月)利用体外转录法进行地高辛标记的RNA探针合成反应,采用酶联免疫方法及即用型化学发光底物CDP-Star进行杂交分子的检测。
利用本试剂盒可进行10次标记反应,和10次杂交检测反应(10×10cm2杂交膜)。
产品目录号:12 039 672 910试剂盒于-15 ~ -25℃保存1. 概况1.1 说明书内容1. 概况 (2)1.1说明书内容 (2)1.2试剂盒组成 (3)2. 介绍 (5)2.1 产品概述 (5)3. 实验步骤和需要的材料 (7)3.1 实验开始前准备 (7)3.2 实验流程 (7)3.3 DNA模板制备 (7)3.4 DIG-RNA标记 (9)3.5定量标记反应效率 (10)3.6 适用于DIG Northern bolts的凝胶系统 (12)3.7 RNA转膜和固定 (13)3.8 杂交 (14)3.9 免疫检测 (15)3.10探针洗脱和重探 (17)4 附录 (18)4.1 疑难问题解决 (18)4.2参考文献 (19)1.2 试剂盒组成杂交反应所需的仪器和其他反应试剂请根据您的实验操作流程准备杂交反应所需的仪器和其他试剂,参见下表,请注意所有试剂应使用DMPC或DEPC处理的水配置:带*的试剂为罗氏应用科学部提供的试剂。
2.1 产品概述反应原理DIG Northern标记及杂交检测试剂盒采用体外转录法,以地高辛(DIG,一种甾类半抗原)标记的UTP为底物,进行RNA探针的标记合成,所获得的单链RNA探针用于后续的杂交反应,带有地高辛分子的杂交子通过酶联免疫反应和CDP-Star底物进行化学发光检测。
应用尼龙膜上的Northern blots杂交反应样本•线性化质粒,质粒上含相应的RNA聚合酶启动子序列(SP6,T3,T7)注意:质粒上待转录的目标片段长度应在200-1000 bp。
中国人常见G6PD基因突变的快速检测

中国人常见G6PD基因突变的快速检测肖奇志;李哲;周玉球;郑勤【摘要】目的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺乏症是世界上最常见的遗传性红细胞酶缺陷病.本文探讨建立一种简便快速、准确可靠、经济实用的G6PD缺乏症分子诊断技术.方法采用DNA测序技术通过双盲法对所建立的单管多重PCR结合分子杂交技术进行方法学评价.结果所建立的新技术可成功地检出上述中国人常见的G6PD基因突变并能清楚区分男性杂合子、女性杂合子或纯合子或双重杂合子.盲法分析结果显示,该技术对经DNA直接测序确诊的G6PD标本的诊断准确度和重复性均达到100%.结论单管多重PCR结合分子杂交技术可准确、快速地检测中国人常见的G6PD基因突变且具有经济和实用的优点,非常适合于G6PD缺乏症的大人群分子筛查和临床样品的基因诊断.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2011(003)004【总页数】5页(P222-226)【关键词】葡萄糖-6-磷酸脱氢酶;基因突变;单管多重聚合酶链反应;反向点杂交【作者】肖奇志;李哲;周玉球;郑勤【作者单位】珠海市妇幼保健院检验科,珠海市医学遗传研究所,广东,珠海,519001;珠海市金湾区三灶医院检验科,广东,珠海,519040;珠海市妇幼保健院检验科,珠海市医学遗传研究所,广东,珠海,519001;珠海市妇幼保健院检验科,珠海市医学遗传研究所,广东,珠海,519001【正文语种】中文葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PD)广泛存在于各种生物体内,它是糖酵解磷酸戊糖旁路中的一个关键酶和限速酶,其主要的功能是产生NADPH。
而NADPH对于维持细胞的正常生理功能和形态具有极为重要的作用。
G6PD缺乏症是世界上最常见的一种遗传性红细胞酶缺陷病,全球约有4亿人受累,该病高发于热带和亚热带地区,中国南方也是该病的高发区[1]。
分子生物学课件-基因操作7节节核酸杂交revised

2、尼龙膜:
对单链和双链DNA及RNA的结合能力达到 350-500μg/cm2。对小分子量的核酸片段也有 较强的结合能力。不一定通过真空干烤,只需短 时间紫外线照射,核酸中的部分嘧啶碱即可与膜 上带正电荷的氨基相互交联,从而使结合更加牢 固。
优点 吸附力强(共价结合)、机械性能好(不易破 碎、可重复使用)。
第七节 核酸分子杂交
(molecular hybridization)
特点: 灵敏度高(<1pg互补序列) 速度快(<24h) 简单易行 应用: 基因克隆的筛选 酶切图谱制作 基因组中特定基因序列的定量和定性检测 基因突变分析 疾病的诊断、微生物病原体检测
核酸分子杂交
用标记的已知DNA或RNA片段(探针) 来检测样品中未知核酸序列,通过核苷酸 间碱基互补的原则发生异源性结合,再经 显影或显色的方法,将结合核酸序列的位 置或大小显示出来。
Northern 杂交
原理:RNA经过变性琼脂糖凝胶电泳分离后, 转移到硝酸纤维膜或尼龙膜上,经过杂交, 分析mRNA的大小及含量。
应用:半定量分析mRNA的含量;确定mRNA分 子的大小。
方法:提取组织细胞总RNA→RNA定量→变性 胶电泳→转膜→干膜→预杂交→杂交→洗 膜→压片→洗片→图像分析
⑤ 离子强度(盐浓度):适当的离子强度可中和核酸 分子上磷酸基团所带的负电,减少双链间的静电斥 力,有利于复性。离子强度过高则不利于复性。
3、杂交
来源不同的两条单链核酸分子通过碱基互 补形成异源双螺旋分子,称为核酸分子杂 交。
杂交可分成:DNA与DNA、RNA与RNA、 DNA与RNA之间的杂交。
❖ Northern印迹杂交 (Northern blot hybridization)
新芝分子杂交炉使用方法

新芝分子杂交炉使用方法介绍:新芝分子杂交炉是一种用于分子生物学实验的仪器,可以用于DNA 或RNA的杂交反应。
本文将介绍新芝分子杂交炉的使用方法,包括仪器的准备、操作步骤以及注意事项。
一、仪器准备1.1 清洁:使用前应先清洁新芝分子杂交炉,确保无尘和杂质。
可使用无菌棉球蘸取75%酒精擦拭内外表面,然后用干净的纸巾擦干。
1.2 加热元件:将加热元件(通常为玻璃棒或石英管)插入芯座。
检查加热元件是否完好,如有损坏应及时更换。
1.3 温度控制器:将温度控制器连接到新芝分子杂交炉的电源上,并将探头插入加热元件的中心位置。
二、操作步骤2.1 样品准备:根据实验需要,准备好待杂交的DNA或RNA样品。
样品应具备高纯度和浓度,以确保杂交反应的准确性和灵敏度。
2.2 杂交缓冲液:根据实验方案,准备好适当的杂交缓冲液。
常用的杂交缓冲液包括SSC缓冲液、Denhardt's缓冲液等。
注意确保缓冲液的pH值和离子浓度符合实验要求。
2.3 杂交条件设置:根据实验需求和样品特性,设置好杂交的温度和时间。
通常情况下,杂交温度在50-70°C之间,时间为2-24小时。
2.4 杂交反应:将杂交缓冲液和样品混合均匀,加入到预先清洁的杂交炉中。
确保样品完全浸泡在缓冲液中。
关闭杂交炉的盖子,并将温度控制器设定到所需的温度。
2.5 杂交结束:杂交时间结束后,将温度控制器设定为室温。
小心打开杂交炉的盖子,取出样品。
注意避免样品受到外界污染。
三、注意事项3.1 安全操作:在操作过程中,应遵守实验室安全规范,戴上实验手套和口罩,避免接触有害物质和高温表面。
3.2 温度控制:在设定杂交温度时,注意不要超过杂交元件的最高温度承受范围。
过高的温度可能导致杂交效果不理想或破坏杂交元件。
3.3 缓冲液浓度:在准备杂交缓冲液时,确保离子浓度和pH值的准确性。
过高或过低的离子浓度可能影响杂交反应的效果。
3.4 杂交时间:根据实验需求设置合适的杂交时间。
生物化学实验室主要仪器设备配置情况清单(doc X页)
生物化学实验室主要仪器设备配置情况清单(doc X页)以下为生物化学实验室主要仪器设备配置情况清单:1.高效液相色谱仪(进口):购买时间2003.02,数量1台,单价17.23万元,总值17.23万元。
2.液相色谱仪(国产):购买时间2008.9,数量1台,单价15万元,总值15万元。
3.原子吸收分光光度计(国产):购买时间2004.08,数量1台,单价11.25万元,总值11.25万元。
4.凝胶成像系统(进口):购买时间2006,数量1台,单价8.8万元,总值8.8万元。
5.紫外可见分光光度计(国产):购买时间2006,数量1台,单价8.6万元,总值8.6万元。
7.气相色谱仪(国产):购买时间2003.08,数量1台,单价6.16万元,总值6.16万元。
8.自动核酸蛋白层析仪(国产):购买时间2004.08,数量1台,单价5.94万元,总值5.94万元。
9.石墨炉自动进样器(国产):购买时间2004.11,数量1台,单价4.62万元,总值4.62万元。
12.酶标仪(进口):购买时间2006,数量1台,单价2.8万元,总值2.8万元。
14.高速冷冻离心机(国产):购买时间2006,数量1台,单价2.63万元,总值2.63万元。
15.人工气候箱(国产):购买时间2006,数量2台,单价2.56万元,总值5.12万元。
17.低速冷冻离心机(国产):购买时间2006,数量1台,单价2.31万元,总值2.31万元。
18.旋转蒸发仪(国产):购买时间2008.9,数量1台,单价2.05万元,总值2.05万元。
19.基因枪(国产):购买时间2006,数量1台,单价2万元,总值2万元。
20.自动核酸蛋白层析仪(国产):购买时间2006,数量1台,单价2万元,总值2万元。
21.电子精密天平(国产):购买时间2006,数量1台,单价1.99万元,总值1.99万元。
25.紫外分光光度计(国产):购买时间2003.12,数量1台,单价1.47万元,总值1.47万元。
分子生物学常用技术(简化版)
Northern blot
类似于 Southern 印迹杂交的方法,用于 RNA 检测
in situ hybridization
原位杂交:特定 mRNA 的组织细胞分布
FISH Fluorescence in situ hybridization (FISH):特定基因的染色体定位
反 Northern 杂交与 DNA 芯片
DNA解旋解链
DNA的体内复制
ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC
5’
3’
TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG
3’
5’
GGAUCG
5’
AUCGCG
5’
引物酶
引物酶
RNA引物
RNA引物
DNA解旋解链
引物合成
DNA的体内复制
ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC
核酸:测序、印迹、杂交、体外扩增技术 蛋白质:电泳与印迹、组学技术、相互作用
基本技术:
基因工程技术 转基因生物与基因敲除技术
综合技术:
基因诊断 基因治疗
应用技术:
第一节:核酸分子杂交
Molecular hybridization: 利用已知核酸序列 (探针/probe) 检测与其互补的未知核酸序列 用途: 确认核酸序列间同源性 对特定核酸序列进行定量 自核酸混合体中辨认特定核酸序列
1.什么是耐热 DNA 聚合酶
早期 PCR 曾使用 DNA 聚合酶 I
在高温时发生变性,每一循环都需要重新添加酶 延伸反应温度为 37℃,非特异性太多
目前常用 Taq DNA 聚合酶
纯化自嗜热水生菌 (Thermus aquaticus) 可耐受 95℃ 高温,最适反应温度为 72℃ 左右
重点实验室万元以上仪器设备清单(最新)
10003374 03010980 10004854 08002032 04004504 08002030 06003358 01001076 08002015 10000902 03011109 06009066 05003207 03011006 11001307 08002026 03007795 04004471 03010975 00006112 03011009 11007845 11007846 08002027 07005538 11001507 11001508 12000138 04004513 03010979 08001997 11001509 11001510 02005093 11007844 06003926 05002786 04003217 07005302 04004512 09004535 11007841 11007842
06002493 09000446 02013609 11001588 06005653 12001046 98000978 98000979 09002225 01000795 02013611 05003215 06002462 03010977 08002009 08002010 03010978 11001590 08002001 08002028 03010976 11004364 05003208 08002029 05002787 10002334 04001409 04001410 11001587 11001306 03011124 12000840 12000841 12000842 02013608 10000903 02013605 03011119 08002020 11004365 04004483 02005109 08002000
LF炉
Taniguchiof Lab. University Science and Technology Beijing
LF炉的发展
LF(Ladle Furnace)精炼技术的研究始于1968年,当时发现 用电弧炉预造还原渣、钢渣混出、钢包吹氩处理,还原精 炼效果显著,因此进行了以省略电弧炉还原期为目的的有 电弧加热功能的钢包精炼技术的开发。 1971 年,日本大同特殊钢厂第一台钢包精炼炉 (LF) 投入使 用)。 1973年,新日铁八幡制铁所在转炉厂设置LF。
高碱度合成渣精炼
LF炉利用还原气氛下造高碱度合成渣进行精炼,通过合成 渣的精炼作用可以降低钢中氧、硫及夹杂物含量。它可以 把[O] 降至0.002%、 [S]降至0.005%甚至0.003%。合成 渣在LF炉内具有很强的还原性,这是LF炉内良好的还原气 氛和氩气搅拌,互相作用的结果。一般渣量为钢液量的 2 ~ 8 %。 LF 炉冶炼时 可以不用加脱氧剂,而是靠合成渣对 氧化物吸附而达到脱氧的目的。
Taniguchiof Lab. University Science and Technology Beijing
LF炉的发展
LF用于转炉流程生产特殊钢,淘汰了过去用炼钢方法来区别 钢质量的方式,确立了“初炼:电炉(或转炉)+LF精炼+连铸” 的生产多品种、高质量钢的思想。 LF技术开发成功后,向多 功能方向发展, 1981 年在日本钢管福山制铁所开发了 NK-AP 法,即插入式 喷枪代替透气砖进行气体搅拌法, 1987年开发了有喷吹设备和真空设备的LF法。 由于LF设备结构简单,具有多种冶金功能和使用中的灵活性, 精炼效果显著,具有较高的圣济效益,成为钢铁生产流程中 的重要设备。
Taniguchiof Lab. University Science and Technology Beijing
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标题:DS-1高速组织捣碎机
DS-1高速组织捣碎机适用于生物制药、基因研究、病理分析、聚合反应等液体/软质固体的分散、均质、浆化实验领域。是科研机构、大专院校、卫生防疫和产品制造等进行科学研究、产品开发、品质控制及生产过程应用的理想实验设备。产品设计理念新颖,结构合理紧凑,制造工艺先进。捣碎驱动电机采用高密度压铸铝合金机壳的微型电机,输出功率大、运行转速高,安全可靠;运行状态控制采用高、低二档调速器,调速方便;玻璃捣碎瓶体采用优质原料制成,透明度佳,实验效果观察清楚;不锈钢捣碎刀轴采用联轴器与驱动电机连接,拆装简便灵活等特性。铝质金属机壳:——确保持久使用的机械精度;——确保连续使用的电气性能;——确保运行状态稳定、噪声低。玻璃捣...
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名称:高速组织捣碎机DS-1介绍:产品简介:DS-1高速组织捣碎机适用于生物制药、基因研究、病理分析、聚合反应等液体/软质固体的分散、均质、浆化实验领域。是科研机构、大专院校、卫生防疫和产品制造等进行科学研究、产品开发、品质控制及生产过程应用的理想实验设备。产品设计理念新颖,结构合理紧凑,制造工艺先进。捣碎驱动电机采用高密度压铸铝合金机壳的微型电机,输出功率大、运行转速高,安全可靠;运行状态控制采用高、低二档调速器,调速方便;玻璃捣碎瓶体采用优质原料制成,透明度佳,实验效果观察清楚;不锈钢捣碎刀轴采用联轴器与驱动电机连接,拆装简便灵活等特性。铝质金属机壳:——确保持久使用的机械精度;——确保连续使用的...
LF-I分子杂交炉和分子杂交炉价格
LF-I分子杂交炉
标题:LF-I分子杂交炉
LF-I LF-III分子杂交炉主要包括:LF-III和LF-I两种型号,其中LF-III是目前使用较为普遍的仪器。主要技术参数:恒温范围:室温+5℃-100℃控温精度:±0.5℃温度均匀性误差:±0.03℃温度显示分辨率:0.1℃温度平衡时间:<20min旋转速度:LF-III 5-20r/min,数显连续可调LF-I 6.5±0.5r/min连续工作时间:24小时杂交管规格: ф35×220mm可选配外型尺寸(长x宽x高):420x380x380(mm)电源电压:220VAC,50HZ功率:<600VA净重:21KG ...
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MK100-4A微孔板恒温孵育器采用微处理技术结合PID控制方式而形成的微孔板孵育器。主要用于酶标板(96孔/384孔板)、细胞培养板(24孔板、48孔板、96孔板等)等溶液在适当温度下进行培养孵育。产品特点1. LCD液晶显示,人机友好的触摸式操作界面2.对微孔板进行上下加热功能,使得微孔板的每个孔能够均匀地被加热3.微处理器控制温度和时间,温控线性好、波动小4.可同时显示设置和实际温度、时间参数5.可放4个标准酶标板和微孔板,程序运行结束后发出声音报警讯号性能指标1.温度控制范围:室温+5~70℃2.温度均匀性:≤±0.5℃3.温度稳定性:≤±0.2℃4.加热平台温度准确度:<0.5℃(在37℃下检测)5.升温速度:<25 min (从20℃to 70℃) ...
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标题:JJ-2组织捣碎机
JJ-2组织捣碎匀浆机的主要特点是容量大,功率大,转速高,设有机械定时,操作简便,特别适用于各种肝脏组织的捣碎。捣碎的匀浆杯的选材有不锈钢和玻璃捣碎杯有优越的抗腐蚀性能,清洗,消毒十分方便,是生物、遗传、病毒、医学、环保、水产、实验室、分析室、教育科研的必备工具。型号外形尺寸(mm)电机功率调速范围定时范围JJ-2 300×300×510 120W起动~12000R/MIN 0-60min(或常开) ...
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标题:K37-24试剂卡孵育器
K37-24试剂卡孵育器采用用微处理技术结合PID控制方式而形成的37℃血型卡专用孵育器。适用于血型试剂卡载体内溶液在37℃温度下进行培养孵育。产品特点1. LED显示,温度、时间参数可设置2.两个独立孵育仓,自动定时,互不影响,每个孵育仓可同时存放12卡,处理样品快速高效3.可对6联柱/8联柱血型试剂卡进行加热恒温4.微处理器控制温度、时间,温度线性好、波动小5.时间可设置:0~99mini59s 6.开盖后,试剂卡自动提升功能,方便操作者提取试剂卡7.使用安全,性能可靠,自动计时并有报警提示8.外观简洁大方,透明上盖,实验过程一目了然性能指标1.温度控制范围:37℃2.温度均匀性:≤±0.5℃3.温度稳定性:≤±0.2℃4.温度准确度:<0....