线粒体 裂解液
裂解液配制方法
裂解液配制方法 The document was finally revised on 20211、红细胞裂解液（去除红细胞）配制试剂所需材料：1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solutiona) NH4Cl (1.5 M) 80 gb) KHCO3 (100 nM) 10 gc) Na4EDTA (10 nM) 3.7 gd) Distilled H2O 1000 mL2. 1N HCl or 1N NaOH（调节pH值用）配制步骤：1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml 去离子水中；2.调节溶液pH值到，加去离子水定容到1000ml；3.在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用。
保存：储存液储存于2-8°C不能超过半年（六个月）；2.在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉。
2、ripa裂解液NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟） L(100μg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 μmol/Lμg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） mlAprotinin（抑蛋白酶肽）μmol/L(1μg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于LHEPES；Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）3、细胞裂解液（Tris－HCL）1．1M Tris 溶液的配置取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。
2．1M Tris－HCL Ph=溶液的配置取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=（需浓盐酸约），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。
不同亚细胞定位的蛋白提取
不同亚细胞定位的蛋白提取蛋白质是维持细胞生命活动所必需的重要分子，在细胞内扮演着重要的角色，如酶催化、信号传导、结构支撑等。
在细胞内，蛋白质不仅分布在不同的细胞区域，而且还可能会发生分子构象的改变，从而确保其功能的实现。
因此，如何从细胞定位的角度对蛋白质进行有效提取，是现代细胞生物学研究的重要问题之一。
一、前处理在进行细胞蛋白提取之前，需要进行一些前处理，如细胞破碎、裂解和去除细胞碎片等。
破碎方法可以采用机械破碎、超声破碎、高压破碎等方法。
机械破碎法是将细胞置于磨碎器中，通过高速旋转产生剪切力和冲击力，使细胞破碎。
超声破碎法则是利用超声波的高能量，产生强烈的物理震荡，将细胞破碎。
高压破碎法则是将样品置于高压设备中，通过高压力将细胞压碎。
另外，裂解液的选择也是影响细胞蛋白提取的重要因素。
裂解液可以针对特定的亚细胞定位，选择不同的配方，如核裂解液、线粒体裂解液、质膜裂解液等。
1. 全细胞蛋白提取全细胞蛋白提取即将裂解过的细胞全体蛋白完整提取出来，是最为常见的蛋白质提取方法之一。
全细胞蛋白可以用于一些基础生物学研究，如基因表达、蛋白结构和功能等的研究。
全细胞蛋白提取液中含有细胞质和核蛋白，因此在分离某些亚细胞定位蛋白时，需要选择其他的蛋白质提取方法。
质膜是细胞内重要的亚细胞结构之一，它可以分隔细胞与外界，并调节物质的进出。
因此，许多药物和生物活性分子靶向作用于细胞质膜上的蛋白质。
质膜蛋白的提取相对比较困难，需要一定的技术手段。
通常，使用含有蛋白酶抑制剂的裂解液，并加入口袋磷脂或三十烷基硫酸钠（SDS）等表面活性剂来同化质膜层，以便使质膜蛋白直接暴露于裂解液中。
3. 内质网蛋白提取内质网是负责调查和处理细胞内蛋白的网络系统之一。
去除胞外环境中的复杂蛋白质干扰，可以更好地分离和富集内质网蛋白。
内质网膜靠近核膜并与高基质质粒相连，因此内质网膜的提取通常称为核内微粒体蛋白提取，包括内质网膜和高基质质粒。
内质网膜可使用胰酶、DNase等酶来裂解，并在液体中添加10%的蔗糖，可以加速内质网膜的沉淀，并放置在4°C下进行长时间离心。
线粒体蛋白提取方法
有效期： 一年。
产品简介： 贝博线粒体蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞和各种实体
组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔 组织等哺乳动物组织中提取线粒体蛋白。提取过程简单方便。制备的线粒体蛋白不仅纯度 高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于 Western Blotting、转录活性分析、 Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3401 BB-3721 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703
线粒体蛋白提取试剂盒
产品组成：
产品组成 规格
线粒体试剂 A 线粒体试剂 B 蛋白裂解液 蛋白酶抑制剂混合物
BB-3171-1 50T 10ml 10ml 5ml 100ul
BB-3171-2 100T 20ml 20ml 10ml 200ul
储存条件： 线粒体试剂 AB 于 2-8℃保存，长期存放于-20℃保存； 蛋白裂解液室温保存； 蛋白酶抑制剂-20℃保存。
每隔 5 分钟高速涡旋振荡 15 秒。 11. 即得线粒体蛋白。 12. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
相关产品：
产品 总蛋白提取试剂盒 核蛋白提取试剂盒 Bradford 蛋白定量试剂盒 ECL 化学发光检测试剂盒 细胞蛋白提取试剂盒 组织蛋白提取试剂盒 细菌蛋白提取试剂盒 酵母蛋白提取试剂盒 磷酸化蛋白提取试剂盒 SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒
产品号 BB-3101 BB-3102 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3105 BB-3702
分离线粒体蛋白和胞质蛋白
线粒体分离试剂盒说明PMSF一定要在线粒体分离试剂或线粒体裂解液加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF 在水溶液中很快失效。
分离线粒体的所有步骤均需在冰上或4℃进行，所用溶液需冰浴或4℃预冷。
1 准备溶液：室温融解试剂盒中的各种溶液，溶解后立即置于冰上并混匀。
第一次使用时，把1.5ml PMSF(溶剂)加入到PMSF(晶体)中，溶解并混匀，即得到1.5ml 100mM PMSF。
配制好的100mM PMSF溶液-20℃保存。
如果最终目的是制备线粒体蛋白样品，根据样品数量，取适量线粒体分离试剂备用，在线粒体分离试剂加入到细胞样品中前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
取适量线粒体裂解液备用，在线粒体裂解液加入到线粒体样品中前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用胰酶细胞消化液(Trypsin-EDTA Solution)消化细胞，离心收集细胞。
3 洗涤细胞：用冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞600g，4℃离心5分钟沉淀细胞。
弃上清。
4 预处理：加入1-2.5ml临用前添加了PMSF的线粒体分离试剂至2000-5000万细胞中，轻轻悬浮细胞，冰浴放置10-15分钟。
5.匀浆：把细胞悬液转移到一适当大小的玻璃匀浆器中，匀浆10-30下左右。
6 匀浆效果的鉴定：不同细胞不同匀浆器所需的匀浆次数有所不同，需自行优化。
通常可以在匀浆10次后取约2微升细胞匀浆，加入30-50 微升台盼蓝染色液，混匀后显微镜下观察台盼蓝染色阳性( 蓝色) 细胞的比例。
如果阳性细胞比例不足50%，增加5次匀浆。
随后再同前取样进行台盼蓝染色鉴定。
当阳性比例超过50%时即可停止匀浆进入下一步。
请勿过度匀浆，过度匀浆会导致线粒体的机械损伤。
同时记录对于该细胞的匀浆次数，通常在后续实验时不必再摸索匀浆次数。
7.把细胞匀浆在600g，4℃离心10分钟。
线粒体DNA的提取方法
A buffer: 10 mmol/L Tris-HCL ， pH 7.4 ； 500 mmol/L ； 20 mmol/LEDTA；0.2%BSA；0.2%β-mercaptoethanol B buffer: 10 mmol/L Tris-HCL ，pH 7.4；600 mmol/L sucrose; 20 mmol/L EDTA
实验原理
1、4000rpm 离心可以沉淀分离出叶绿体、 细胞核和组织碎片，12, 000 rpm离心才可 沉淀分离线粒体。 2、用蔗糖浓度梯度纯化线粒体，不同浓度 蔗糖的缓冲液因比重不同而分层。
3、SDS可以从植物各样组织类型中释放和 结合的细胞核酸。
仪器设备： Apparatus:
研钵和研杵；冷冻离心机；过滤装置（漏 斗，玻棒） pH 计；移液器；水浴箱； 50mL 离心管；2；1.5 mL离心管。 mortar (cold); Centrifuged; filter; pH meter; water bath boiler; 50mL centrifugal tube; eppendorf tube .
2.线粒体在37℃下裂解4 h后(或60℃下裂解40min)，往裂解液中加 入等体积的酚-氯仿异戊醇，轻轻混匀，静置5 m in。在12 000rpm 4℃下离心 10 min。吸出上清，再用酚 - 氯仿 / 异戊醇抽提，吸取上 清，加入?RNase,在37℃下保温30m in后,加入酚-氯仿/异戊醇抽提， 吸出上清，再用氯仿 /异戊醇抽提。吸出上清 ,加入1/10 体积的乙 酸钠和两倍体积的异丙醇，置- 20 ℃ 2 h 或过夜。 2. The material were lysed in 2% SDS, constantly shaking the mixture. If the tissue coalesces, warm the tubes in a 60℃water bath for 40 min (or in a 37℃water bath for 4h) until the organelles are fully lysed. Shake the mixture intensively for 10min with an equal volume of equilibrated phenol. Centrifuge for 10min at 12,000 rpm. Remove the upper aqueous phase. The RNase treatment was done at 37℃ for 30minutes. Then add phenol∶chloroform∶isoamyl alcohol （ 25∶24∶1 ） . Repeat the procedure. Add chloroform∶isoamyl alcohol （24∶1）. Repeat the procedure. Precipitate the DNA with 1/10 vol of 3M NaAC and 2 vol of isopropanol at -20℃ for 2-3h or overnight.
裂解液配制方法
裂解液配制方法 The manuscript was revised on the evening of 20211、红细胞裂解液（去除红细胞）配制试剂所需材料：1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solutiona) NH4Cl (1.5 M) 80 gb) KHCO3 (100 nM) 10 gc) Na4EDTA (10 nM) 3.7 gd) Distilled H2O 1000 mL2. 1N HCl or 1N NaOH（调节pH值用）配制步骤：1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml 去离子水中；2.调节溶液pH值到，加去离子水定容到1000ml；3.在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用。
保存：储存液储存于2-8°C不能超过半年（六个月）；2.在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉。
2、ripa裂解液NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟） L(100μg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 μmol/Lμg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） mlAprotinin（抑蛋白酶肽）μmol/L(1μg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于LHEPES；Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）3、细胞裂解液（Tris－HCL）1．1M Tris 溶液的配置取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。
2．1M Tris－HCL Ph=溶液的配置取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=（需浓盐酸约），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。
线粒体dna分离试剂盒原理
线粒体dna分离试剂盒原理全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：线粒体DNA（mtDNA）是细胞内的一种特殊DNA，主要存在于细胞的线粒体中。
它是由母亲遗传给子代的，与细胞核DNA有着不同的特征和功能。
线粒体DNA在细胞的能量产生过程中起到关键作用，因此对其进行研究对于理解细胞功能和疾病的发生具有重要意义。
为了研究线粒体DNA，需要将其从细胞中分离出来。
而线粒体DNA分离试剂盒就是为了这个目的而设计的。
它包含了借助化学试剂和特殊操作步骤将线粒体DNA从细胞中提取出来的各种试剂和工具。
线粒体DNA分离试剂盒的原理主要可以分为以下几个步骤：第一步：细胞裂解细胞裂解是线粒体DNA分离过程中的第一步。
通过加入裂解缓冲液和蛋白酶，使细胞膜和细胞核膜失去完整性，从而释放出细胞内的线粒体和线粒体DNA。
第二步：线粒体分离在细胞裂解后，线粒体需要从细胞中分离出来。
这一步通常需要使用离心过程，通过调节不同离心速度和时间来沉淀线粒体，从而与其他细胞器分离。
第三步：DNA提取在成功分离出纯净的线粒体后，就需要进行DNA提取。
通过加入相应的试剂和离心操作，将线粒体DNA从线粒体中提取出来。
这一步需要注意避免DNA的降解和污染。
第四步：DNA纯化提取出的线粒体DNA可能还含有其他杂质，需要进行纯化操作。
通过加入适当的试剂和离心操作，将线粒体DNA纯化成较纯的形式，以便后续的实验操作。
线粒体DNA分离试剂盒的原理就是通过上述步骤将线粒体DNA 从细胞中提取出来，并经过分离、提取和纯化等操作得到纯净的线粒体DNA样品，以供进一步的实验研究。
线粒体DNA在人类疾病的研究中具有重要的应用价值。
许多遗传性疾病和退行性疾病都与线粒体DNA的突变和功能异常有关，因此通过研究线粒体DNA可以更好地理解这些疾病的发生机制，并为临床诊断和治疗提供新的思路和方法。
总的来说，线粒体DNA分离试剂盒的原理是通过一系列化学试剂和操作步骤将线粒体DNA从细胞中提取出来并进行纯化，为线粒体DNA的研究提供了重要的技术支持和工具。
裂解液和保存液成分及作用
裂解液和保存液成分及作用以裂解液和保存液成分及作用为标题，本文将介绍裂解液和保存液的成分和作用。
一、裂解液的成分及作用裂解液是一种常用的实验试剂，用于提取细胞或组织中的细胞器、蛋白质、核酸等生物分子。
它的主要成分包括缓冲溶液、蛋白裂解酶、蛋白质稳定剂等。
1.缓冲溶液缓冲溶液是裂解液中的主要成分之一，其作用是维持溶液的pH值稳定，使细胞或组织中的生物分子在裂解过程中不受pH值的影响而发生变性。
常用的缓冲溶液有磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液等。
2.蛋白裂解酶蛋白裂解酶是裂解液中的关键成分之一，它能够降解细胞或组织中的蛋白质，使其分解为氨基酸。
常用的蛋白裂解酶有胰蛋白酶、Trypsin等。
3.蛋白质稳定剂蛋白质稳定剂是裂解液中的一种辅助成分，它能够保护裂解液中的蛋白质不受蛋白酶的降解，从而保持蛋白质的完整性和稳定性。
常用的蛋白质稳定剂有BSA（牛血清白蛋白）、EDTA等。
裂解液的作用是通过破坏细胞膜和细胞壁，释放细胞内的生物分子。
缓冲溶液维持溶液的pH值稳定，使裂解过程中的生物分子不受pH 值的影响。
蛋白裂解酶降解细胞内的蛋白质，使其分解为氨基酸，从而方便后续的分析和测定。
蛋白质稳定剂保护裂解液中的蛋白质不受蛋白酶的降解，保持蛋白质的完整性和稳定性。
二、保存液的成分及作用保存液是一种用于保存生物样品的液体，它的主要成分包括缓冲溶液、防腐剂等。
1.缓冲溶液保存液中的缓冲溶液起到维持液体pH值稳定的作用，防止生物样品在保存过程中发生腐败和分解。
常用的缓冲溶液有磷酸盐缓冲液、PBS缓冲液等。
2.防腐剂防腐剂是保存液中的重要成分，它能够抑制细菌和其他微生物的生长繁殖，防止生物样品的腐败和变质。
常用的防腐剂有甲醛、氯化汞等。
保存液的作用是保持生物样品的原始状态，防止其在保存过程中发生腐败和变质。
缓冲溶液维持液体的pH值稳定，防止生物样品的分解和腐败。
防腐剂抑制微生物的生长，保持生物样品的完整性和稳定性。
裂解液和保存液在生物实验中起着重要作用。
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技术背景
线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体中含有丰富 的细胞色素氧化酶系统、细胞凋亡相关蛋白和独立的核外 DNA。通过线粒体溶解，可以进行相关蛋白的独 立分析。
产品内容
GENMED 裂解液（Reagent A） 产品说明书
毫升 1份
保存方式
保存在 4℃冰箱里，有效保证 6 月
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A
GMS12055 v.A
GENMED 裂解液 VI：线粒体裂解液产品说明书（中文版）
主要用途
GENMED 裂解液 VI：线粒体裂解液是一种旨在通过非离子性化学裂解处理，使线粒体膜结构破坏而获得 线粒体内的活性蛋白酶系统的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。 其适用于各种线粒体（动物、人体、植物、昆虫等）的内容物预制备。可以被用于细胞凋亡、信号传递、 古生物、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
1
8． 转移到 1.5 毫升离心管
9． 放进微型台式离心机离心 2 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
10．小心移取上清液到新的
毫升离心管――此为所有可溶性线粒体蛋白系统
11．若暂时不予后续处理，保存在－20℃冰箱里
12．继续进行下列操作：
操作一、可溶性线粒体蛋白电泳
2． （选择步骤）如果线粒体样品不是颗粒状态，而是液体状态且容积过大，置入 4℃超速离心机离心 20
分钟，离心速度为 10000g
3． （选择步骤）小心抽去上清液
4． 加入
微升 GENMED 裂解液（Reagent A）到线粒体颗粒样品中
5． 涡旋震荡 15 秒
6． 置入冰槽中孵育 15 分钟
7． 涡旋震荡 60 秒
规格
100 微升
100 微升 100 微升
20 次 20 次 20 次 100 次 500 毫升 20 次 50 次 20 次 50 次 20 次 100 微升
关于订购详情或技术支持，欢迎来电、来函、传真或电邮―― GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A 大中华区上海分公司 上海杰美基因医药科技有限公司 上海市浦东新区张江高科技园区哈雷路 1011 号 301 室 邮编：201203 技术部电话：+86（021）58559577 X 101； 13661801385 市场部电话：+86（021）58559577 X 102； 13311661756 订购电话：+86（021）58559577 X 104 传真：+86（021）58559383 Email：info@ 主页：
的步骤 3 至 6
6． 本公司提供系列线粒体和裂解液产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定 2． 本产品经鉴定无蛋白酶污染 3． 本产品经鉴定蛋白萃取产量和纯化程度高
使用承诺
杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货 后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定， 保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报 告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误 操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A 3
438 MASS AVENUE，SUITE 223 ARLINGTON，MA 02474 U.S.A. TEL：1-781-643-5940
4
注意事项
1． 本产品为 20 次操作
2． 整个操作过程在 4℃条件下进行
3． 建议使用 108 细胞或 1 克组织的线粒体量
4． 如果线粒体样品的液体容量少于 50 微升，可直接加入
微升 GENMED 裂解液（Reagent A）进
行操作，无需再次超速离心
5． 如果需检测不可溶性线粒体蛋白，可保留线粒体溶解后的沉淀物，直接加入上样液，然后继续操作一
联系我们
名称 GENMED 裂解液 VI：线粒体裂解液 GENMED 动物线粒体粗提分离试剂盒 GENMED Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒
规格 20 次 10 次 20 蛋白酶/磷酸酶 完全抑制混合剂 裂解液Ⅰ 裂解液Ⅱ 裂解液Ⅲ 裂解液Ⅳ 裂解液Ⅴ 裂解液Ⅵ 裂解液Ⅶ 裂解液Ⅷ 裂解液Ⅸ 裂解液Ⅹ
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
2
订购信息
编号 GMS12055 GMS10006.1 GMS30030.1
产品编号
GMS12032
GMS12101 GMS12102 GMS12054.1 GMS12054.2 GMS12054.3 GMS12054.4 GMS12031 GMS12055 GMS12056 GMS12060 GMS12061 GMS12062 GMS12057
10％AEBSF 溶液
用途
保留细胞内成分活性 A、 动物细胞 B、 细菌 C、 酵母菌 D、 植物
抑制磷酸化酶活性
抑制蛋白破坏性生物酶活性
制备活性化亚细胞结构 制备活性化细胞蛋白 各种活性化细胞制备处理 不确保细胞内活性的
成分制备 红细胞裂解液/白细胞分离
线粒体裂解液 细菌裂解液 细菌活性化蛋白制备 真菌/酵母细胞裂解液 真菌/酵母细胞活性化蛋白制备 完全保留细胞内成分活性
1） 移取 20 微升上清液到新的 1.5 毫升离心管，
2） 加入 20 微升用户自备的上样液
3） 涡旋震荡 15 秒
4） 放进微型台式离心机离心 10 秒，速度为 500g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
5） 煮沸 5 分钟
6） 上样，进行电泳操作和西方杂交
操作二、线粒体总蛋白定量检测 1） 移取 10 微升进行蛋白定量检测（建议使用 GENMED Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）
用户自备
GENMED 动物线粒体粗提分离试剂盒（GMS10006）：用于获得线粒体成分 上样液：用于蛋白电泳 1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器 （微型）台式离心机：用于沉淀线粒体和不溶性物质 涡旋震荡仪：用于混匀
实验步骤
1． 从－70℃冰箱里取出 1 克组织或 108 细胞中提取的线粒体颗粒样品，置入冰槽里