紫外分光光度法测汇总
紫外-可见分光光度法总结
光学分析法：根据物质发射的电磁辐射或电磁辐射与物质相互作用而建立起来的一类分析化学方法。
电磁辐射与物质相互作用的方式：发射、吸收、反射、折射、散射、干涉、衍射、偏振等。
光学分析法的分类：1.光谱法：基于物质与辐射能作用时，测量由物质内部发生量子化的能级之间的跃迁而产生的发射、吸收或散射辐射的波长和强度进行分析的方法。
2.非光谱法：基于物质与辐射相互作用时，测量辐射的某些性质，如折射、散射、干涉、衍射和偏振等变化的分析方法。
非光谱法不涉及物质内部能级的跃迁，电磁辐射只改变了传播方向、速度或某些物理性质。
光谱法的分类：原子光谱：由原子外层或内层电子能级的变化产生的。
表现形式：线光谱分子光谱：由分子中电子能级、振动和转动能级的变化产生的。
表现形式：带光谱原子光谱分析法：原子发射光谱法（AES)、原子吸收光谱法（AAS)、原子荧光光谱法（AFS)、X射线荧光光谱法（XFS)分子光谱分析法：紫外-可见分光光度法（UV-Vis）、红外光谱法（IR）、分子荧光光谱法（MFS）、分子磷光光谱法（MPS)电磁辐射的基本性质：波动性、粒子性波动性：电磁辐射以波动形式传播，例如：折射、衍射、偏振和干涉等现象。
粒子性：电磁辐射的波动性不能解释辐射的发射和吸收现象，需要把辐射看作是微粒（光子）才能满意地解释。
电磁辐射的能量是“量子化”的。
这种能量的最小单位即为“光子”。
紫外—可见区的光谱是由原子和分子外层电子的跃迁产生的。
描述电子运动状态的四个变：主量子数(n)、角量子数(l)、磁量子数(ml)、电子自旋量子数(ms) 最低能量原理：np＞（n－1）d＞（n－2）f＞ns泡利不相容原理：在同一个原子中没有也不可能有运动状态完全相同的两个电子存在，这就是泡利不相容原理。
分子轨道和原子轨道的主要区别：1. 在原子中，电子的运动只受1个原子核的作用，原子轨道是单核系统；而在分子中，电子则在所有原子核势场作用下运动，分子轨道是多核系统。
02-紫外可见分光光度法全
例：Cd2+浓度为140 umol ·L-1 ，双 硫腙法显色测定波长为520nm，液
层厚度2cm，吸光度为0.22，求 和
透光率T。
解： (1) A = b c
0.22 = 2 140 10-6
= 785.7 L ·mol-1 ·cm-1
(2) A =－lgT = 0.22 lgT = －0.22 T = 10－0.22 = 0.60 = 60%
（ε=200-2000L /（mol*cm ），如苯环。
（4） 210-250 nm有强吸收峰，表明可能含有2个共轭双键 ；在260nm,300 nm,330 nm有强吸收峰，说明是3个或3个以 上双键的共轭体系。
（5)若吸收峰延伸至可见光区，则可能是长链共轭或稠环 化合物
习题P46第21,22题
第三节 紫外可见分光光度法的定量分析 P9
照射分子，由于分子、原子或离子的能级是量子化的，不
连续的，只有光子的能量(h)与被照射物质粒子的基态和
激发态能量之差(E)相等时，才能被吸收。
△ E = h （ h为普朗克常数）
不同物质的基态和激发态的能量差不同，选择吸收光
子的能量也不同，即吸收的波长不同。
2、光的种类 P7
➢具有单一波长的光叫单色光，比如红，蓝光等。 ➢由不同波长的光组成的光叫复色光。比如日光等 ➢如两种适当颜色的单色光按适当的强度比例混合 能得到白光，则这两种颜色的光叫做互补色光。
A = K·b ·c
c：物质的量浓度(mol ·L-1) K:吸光系数。
b：为液层厚度(cm)
应用的条件：
入射光必须是单色光； 吸收发生在稀的均匀的介质中； 吸收过程中，吸收物质互相不发生作用。
3、吸光系数（K）
紫外可见分光光度法(鉴别、检查、含量测定)
紫外-可见分光光度法紫外分光光度：紫外光区特定波长内的吸收度，被测物质或杂质的定性和定量紫外-可见分光光度计的工作波长：190-900nm近紫外区（氘灯）200-400nm 可见光区（碘钨灯）400-850nm定量分析:①最大吸收波长处测出吸收度②对照品或百分吸收系数算出被测物或杂质的含量双光束光栅型紫外-可见分光光度计波长准确度误差±0.5nm一、样品测定：⑴吸收系数测定:①按食品药品监督管理局标准的该药品项下规定的方法配制供试液②在规定的波长测定其吸收度③计算吸收系数，应符合规定范围⑵鉴别与检查：按食品药品监督管理局标准的该药品项下规定测定供试品在有关波长处的最大或最小吸收，或最大吸收峰值或最大或最小吸收的比值，应符合规定⑶含量测定：①对照品比较法㈠按食品药品监督管理局标准的该药品项下规定的方法分别配制对照品和供试品溶液注：对照品中所测成分的量应在供试品中所测成分标示量的(100±100)%以内㈡用同一溶剂，在规定的波长处测定供试品和对照品的吸收度②吸收系数法㈠按食品药品监督管理局标准的该药品项下规定的方法配制供试品溶液㈡在规定波长（±1nm）处测定其吸收度㈢按食品药品监督管理局标准的该药品在规定的条件下给出的吸收系数计算含量具体过程对照品比较法①调节波长测吸光度（吸光度最大波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内）②A样品的吸光度:A对照品的吸光度= C样品:C对照品(C为浓度，mg/ml)C样品=A样品的吸光度×C对照品/A对照品的吸光度C样品×A对照品的吸光度= A样品的吸光度×C对照品P﹪（所含物质占标示量的百分比）= C供试品-稀释后的对照品×A对照品的吸光度/ A 样品的吸光度×C对照品×供试品的标示含量例1奥硝唑含量（紫外分光光度计）：⑴对照品①取0.0113g奥硝唑溶于100ml的容量瓶中稀释至100ml②从容量瓶中取出5ml③再用蒸馏水稀释至50 ml在319nm处测得对照品A（吸光度）=0.465⑵供试品①取5ml供试品于100lml的容量瓶中稀释至100ml②从容量瓶中取出5ml③用蒸馏水稀释至25ml319nm处供试品A1=0.413 供试品A2=0.417⑶①P﹪（所含物质占标示量的百分比）=0.413供试品的吸光度ⅹ(0.0113g/100ml)对照品浓度ⅹ(5/50) / 0.465对照品的吸光度ⅹ(5ml/100ml) ⅹ(1/25ml)ⅹ0.5g﹪ml标示含量供试品浓度ⅹ 100﹪=100.36﹪注：0.5﹪（供试品的标示含量）表示100ml 0.5g②P﹪= P1﹪+ P2﹪ /2。
紫外可见分光光度分析基础知识总结
紫外可见分光光度分析基础知识总结绝大多数的物质都有其本身的特征光谱，利用物质的特征光谱对光的吸收来测量物质的含量可称为比色分析和分光光度分析。
承担这些分析的仪器有光电比色计、紫外可见分光光度计、红外分光光度计及原子吸收分光光度计。
液相色谱仪中的紫外检测器实际上就是一种特殊的紫外分光光度计，其工作原理与紫外分光光度计完全相同。
1 紫外分光光度分析的特点1.1灵敏度高，最小检测浓度约10－5～10 －6mol/L 相当于1ppm1.2准确度高，相对误差约2％～3％1.3操作简便、分析速度快，一个分析结果约需几分钟1.4应用广泛，有机物和无机物均可分析1.5缺点：对复杂有机物的分析能力弱2光的特性光是一种电磁辐射，具有波和粒子的双象性，光的最小单位是光子，光子具有一定的能量（E ），它和光波频率（γ）和波长（λ）的关系为： 式中： E －能量，ev(电子伏特)h －普朗克常数，6.626×10-34J*S(焦耳*秒） C －光速，30千米/秒γ－频率，单位Hz （赫兹）λ－波长，单位nm （纳米 10－9米）3光的特性λγCh h E ==紫外分光光度计（检测器）怎样分析样品定性分析－－利用物质不同的特征波长定量分析－－物质对特征光的吸光度光的吸收定律 朗伯定律（Lambert)当一束平行的单色光通过液层厚度为L 的均匀非散射 溶液后， 由于溶液吸收了一部分光能， 光的强度就要减 弱。
这个透过溶液射出的光It 与射入溶液的光Io 的比值我 们称之为透过率T 或透光度，它是一个无量纲的数，常用 百分数来表示：这个T 还不能代表溶液对光的吸收度，溶液对光的 吸收度为：IoItT当有色溶液厚度和入射光强度一定时，光吸收的程度 与溶液的浓度成正比：A ＝Kc朗伯－比耳定律：如果溶液浓度和液层厚度都发生变化， 则上述2个定 律可合并为朗伯－比耳定律：A ＝KcL式中：A －吸光度；K －比例常数，与入射光的波长、 物质的性质和溶液的温度有关；c －物质的浓度；L －液层 的厚度。
紫外-可见分光光度法测定
紫外-可见分光光度法测定1. 引言1.1 引言紫外-可见分光光度法是一种常用的分析化学方法，通常用于测定物质的浓度或测定物质的吸光度。
该方法利用紫外-可见光谱仪测量样品对紫外和可见光的吸收情况，从而推断样品中所含物质的浓度或结构。
在化学分析实验中，紫外-可见分光光度法具有灵敏度高、准确性高和简便易行的优点，因此被广泛应用于药物分析、环境监测、食品检测等领域。
本实验旨在通过该方法测定样品中目标物质的浓度，并探讨影响测定结果的因素。
通过对仪器原理、操作步骤、实验结果、数据分析和影响因素的详细讨论，我们将深入了解紫外-可见分光光度法的原理和应用，并为今后在相关领域的研究提供参考和借鉴。
希望本实验能够为我们提供更多关于分光光度法的实际操作经验，提升我们的实验技能和分析能力。
1.2 背景介绍紫外-可见分光光度法是一种广泛应用于化学分析领域的分析方法，通过测定物质在紫外-可见光区域的吸收特性，从而确定物质的浓度或者进行定性分析。
紫外-可见分光光度法具有操作简单、灵敏度高、选择性强的特点，被广泛应用于环境监测、食品安全检测、药品质量控制等领域。
随着科学技术的不断发展，紫外-可见分光光度法在实验室分析中扮演着越来越重要的角色。
通过测定物质在特定波长范围内的光吸收情况，我们可以获得关于物质性质的重要信息，如浓度、溶解度、稳定性等。
掌握紫外-可见分光光度法的原理和操作方法，对于提高实验准确性和效率具有重要意义。
在本文中，我们将介绍紫外-可见分光光度法的仪器原理、操作步骤、实验结果、数据分析和影响因素，希望能够为读者提供一份系统全面的紫外-可见分光光度法测定指南。
通过总结和展望，我们也希望能够进一步探讨该方法在化学分析领域的应用前景。
1.3 研究目的紫外-可见分光光度法是一种常用的分析化学技术，可以用于测定物质的吸光度，从而推断物质的浓度。
本实验的研究目的主要分为以下几点：1. 研究紫外-可见分光光度法在测定物质浓度方面的应用。
紫外可见分光光度法实验
紫外可见分光 光度法实验
实验2 鉴定和识别有机化合 物中的电子跃迁类型
实验3 紫外分光光度法同时测 定维生素C和维生素E
指导老师：马少妹
实验4 三氯苯酚存在时苯 酚含量的紫外分光 光度法测定
实验5 紫外可见吸收光谱法 测定双组分混合物
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仪器分析实验报告写法
1.每个实验于下个实验之前交，每人交一份。报告要书写整齐清楚。 2.报告不可剽窃或抄袭他人之作，更不可造假数据。 3.报告以A4大小纸张撰写，格式如下: 封面 : 记载实验序号、实验项目、实验日期及报告人姓名。 內容 : 按“前言→实验方法及步骤→实验結果→ 讨论→结语→参考文献→ 附录”等。 (I)在“前言”(或“绪论”)部份，扼要敘述实验目的，所使用之仪器的特 性，分析的基本原理，理论背景等，并用几句话归纳所作的实验项目及所 获得的结果。
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（6）气态苯和溶液中苯的吸收曲线有何个同？为什么？ （7）助色团—NH2将如何影响苯胺？质子化作用后，产高等教育出版社 赵文宽等编，《仪器分析实验》）
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实验3 同时测定维生素C和维生素E 2．实验目的 掌握在紫外区中同时测定—个双组分体系[抗坏血酸(维生素C) 和α-生育酚(维生索E)的实验方法。 2．仪器和试剂 916型紫外-可见分光光度计； ，石英比色皿2只，容量瓶移和 液管若干。抗坏血酸（AR）：0.0132g／L在无水乙醇中(7.50 ×l0-5mol/L)；α-生育酚(维生素E)：0.0488g/L在无水乙醇中； 无水乙醇；未知溶液：在无水乙醇中含有抗杯血酸和α-生育酚 溶液。
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为292nm)，以吸光度对浓度作图。
（2）计算抗坏血酸和α-生育酚在最大吸收波长（246nm和 292nm）时的摩尔吸光系数：即标准曲线图的斜率。
紫外分光光度法测细菌OD值
紫外分光光度法测细菌OD值
注意事项：
1.一般测菌体密度的OD的波长范围是580nm-660nm，波长在紫外范围内才能够
测量
2.如用水做空白，需要离心洗涤菌体（不会做）；如用不接种的培养基做空白
就不需要洗涤,不接种的培养基要和接种的同时培养,以求条件一致
3.OD值最好控制在0.1-0.4内，在这个区间得到的值很可靠，最好不要超过
1.0；如果大于
2.0，要稀释后再测，OD太大时，分光光度计的灵敏度会显
著降低
4.测吸光值的整个实验过程中，要保持发酵液或菌体的稀释倍数一致，可保证
整个实验点有可比性（吸光值与稀释倍数不一定成正比）；取值的时候要连续读数，重复3次的数最好
5.进行OD值测定时，分光光度计上显示的数值为每毫升溶液中的OD值。
当测
定200 ml溶液中的OD值为1.5时，溶液整体的OD量应该为1.5OD/ml ×
0.2L = 0.3OD
测菌体密度的OD的波长可以自己摸出来，看看用哪个波长有最大吸收就可以了。
1紫外可见分光光度法精选全文
可编辑修改精选全文完整版1．紫外可见分光光度法1.1 概述物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律。
即物质在一定波长的吸光度与它的吸收介质的厚度和吸光物质的浓度呈正比。
当分子中含有一个或更多的生色基团（即具有不饱和键的原子基团），辐射就会引起分子中电子能量的改变。
常见的生色团有：如果两个生色团之间只隔一个碳原子，则形成共轭基团，会使吸收带移向较长的波长处（即红移），且吸收带的强度显著增加。
当分子中含有助色基团（有未共用电子对的基团）时，也会产生红移效应。
常见的助色基团有：-OH, -NH2, -SH, -Cl, -Br, -I。
紫外可见分光光度法从问世以来，在应用方面有了很大的发展，尤其是在相关学科发展的基础上，促使分光光度计仪器的不断创新，功能更加齐全，使得光度法的应用更拓宽了范围。
目前，分光光度法已为工农业各个部门和科学研究的各个领域所广泛采用，成为人们从事生产和科研的有力测试手段。
我国在分析化学领域有着坚实的基础，在分光光度分析方法和仪器的制造方面在国际上都已达到一定的水平。
1.2 特点分光光度法对于分析人员来说，可以说是最有用的工具之一。
几乎每一个分析实验室都离不开紫外可见分光光度计。
分光光度法的主要特点为：（1）应用广泛由于各种各样的无机物和有机物在紫外可见区都有吸收，因此均可借此法加以测定。
到目前为止，几乎化学元素周期表上的所有元素（除少数放射性元素和惰性元素之外）均可采用此法。
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• 紫外分光光度法测定水中的油, 是基于油中含有的 带有共轭键和苯环的芳香族化合物在紫外区有特 征吸收为基础, 因而可借助于该法测定具有共轭双 键结构的物质的含量来确定环境水中的含油量.
• 本方法的理论基础是基于朗伯-比尔光吸收定律 A =εbc
其中, A 为吸光度;ε为吸光系数;c 为浓度;b 为光程.
• 经过3 mL 硫酸溶液酸化过的水样20 mL 转入锥形 漏斗中, 取10mL 石油醚洗涤采样瓶后移入分液漏 斗中, 振荡2min , 超声震动除去气泡, 静置分层.将 下层水样放入原水样瓶中.用滤纸卷吸干分液漏斗 颈内水分, 石油醚萃取液移入50mL 容量瓶中.将萃 取过的水样倒回原分液漏斗中, 加10 mL 石油醚重 复萃取一次, 将萃取液合并于上述容量瓶中, 加石 油醚至标线, 混匀.在256nm处用紫外分光光度计 进行测定。
仪器
• 分光光度计(配1 cm 石英比色皿一套);100 mL 分液漏斗;20 mL 比色管;100mL 容量 瓶;50 mL 容量瓶.
药品
• 脱芳石油醚(馏分60 ～ 90 ℃) • 硫酸溶液(1 +3). • 油标准贮备液(1 000 mg L):准备称取
100mg 标准油于烧杯中, 加入少量石油醚, 溶解.全量转移到100 mL 容量瓶中, 并稀释 至标线, 混匀; • 油标准使用液(50 mg L):移取5 mL 油标准 贮备液于100 mL 容量瓶中, 用石油醚稀释至 标线, 混匀.
• 分别配制10 .0 , 20 .0 , 30 .0 , 40 .0 , 50 .0 mg/L的系列标准样品.用1 cm 石英比色皿, 以石 油醚为空白参比, 在256nm处用紫外分光光度计， 依次测定上述系列样品的吸光度, 所得数据列于 表1 . A =bC +a
系列号
123456
浓度值 C/(mg/L) 吸光度A
• 脱芳石油醚(馏分60 ～ 90 ℃):市售石油醚在
使用前应在分光光度计上检查, 在波长225 nm处 以水为参比, 透过率不足80 %需要脱芳处理.将 60 ～ 100 筛目的色层硅胶和70 ～ 120 筛目的中 性层析氧化铝在150 ～ 160 ℃活化4 h , 未冷前装 入直径为2 .5 cm 、长为75 cm 的玻璃管中, 保持 硅胶高60 cm , 上面再覆盖5 cm 厚的氧化铝.把 60 ～ 90 ℃沸程的石油醚通过此柱收集于试剂瓶 中, 以蒸馏水作空白, 检查合格后方可使用[ 3] .
• 平行三次测定, 由标准曲线计算出污水中油含量
• 完。