饲料中粗蛋白的测定教学课件
23农事学(3)第二十三讲“作物子粒粗蛋白含量测定”资料PPT课件
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三、作业
1、测定几种粮食作物的粗蛋白含量， 比较分析测定结果。
2020年9月28日
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6、测定结果的计算
粗 蛋 白 质 %( 干 基 ) ＝ 140 [(V2V1)×N×K]]/[W×(100-X)]
式中：V2 滴定试样时消耗酸标准溶液的体积(ml)； V1 滴定空白时消耗酸标准溶液的体积(ml)；
N 酸标准溶液的摩尔浓度(mol/L)；
K 氮换算成粗蛋白质的系数；
W 试样重量(g)；
X 试样水分含量。
2020年9月28日
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不 同 作 物 种 子 含 氮 量 换 算 成 粗 蛋 白 质 的 系 数
种 子 名 称麦 类 、 豆 类水 稻 高 梁其 他 谷 类大 豆
换 算 系 数 K 5 . 7 0
5 . 9 5 5 . 8 3 6 . 2 5 6 . 2 5
2020年9月28日
2020年9月28日
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4、蒸馏、消煮液稍冷后加少量蒸馏水，轻振 摇匀。移入半微量蒸馏装置的反映室中，用适 量蒸馏水冲洗凯氏瓶4～5次。蒸馏时将冷凝管 末凋端插到盛有10ml硼酸-指示剂混合液的锥 形瓶中，向反应室中加入40%Na2OH溶液15ml， 然后通蒸气蒸馏。当馏出液体积约达50ml时， 降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸 馏1～2min。用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液
饲料中粗蛋白的测定-凯氏定氮法
凯氏定氮仪测定步骤
影响因素分析
1.取样
试样粉碎后一般过40 目筛，且一定要把粉碎后的试样及粉碎机中残留的部分清扫后充 分混合均匀，避免粉碎的试样分级而影响分析结果的准确性。
2.催化剂及其用量
国标为0.4g 硫酸铜和6g 无水硫酸钾( 或无水硫酸钠)。若 添加量大，消化液容易结晶； 添加量减少，会延长消化时间或消化不完全。
仪器设备及试剂
样品粉碎机 40目分析筛 分析天平 消化炉 消化管 凯氏蒸馏装臵 滴定管
98%浓硫酸 硫酸钾 硫酸铜 硼酸溶液 标准盐酸溶液 混合指示剂
凯氏定氮仪测定步骤
1.试样的消化 称取0.3~0.4g试样，准确至0.0001g，放入消化管中， 加入催化剂，与试样混合均匀，再加浓硫酸12ml， 将消化管放臵在消化炉上加热，温度420 ℃ （此装臵需 安装在通风橱内），直至溶液呈透明的蓝绿色。将试样 消化液冷却，冷却后加入蒸馏水20ml稀释，摇匀，则为 试样分解液。
3.消化温度
刚开始时以低温(200 ～ 300℃ ) 加热，待试样焦化泡沫消失后，逐步缓慢提高温度 (360～410℃ )。起初低温加热是为防止试样起泡沫，而溢出烧瓶外或碳化后的颗粒 附于烧瓶壁，导致消化不完全，所测结果偏低。
4.消化时间
可根据试样的重量、蛋白含量的多少以及消化的难易程度而适当调整消化液澄清后的 消化时间。对于所称试样质量较多、蛋白含量高于蚕蛹或者难消化的试样，消化液澄 清后继续消化的时间可控制在45m i n ～ 2h 不等，具体时间化验工作者可根据自己的 工作经验而自行定夺。
饲料中粗蛋白质含量的测定
凯氏定氮法
目录
1. 适用范围
2. 测定原理Biblioteka 3. 仪器设备及试剂4. 测定步骤
饲料中粗蛋白质的测定
畜禽消费与疾病防治畜禽营养与饲料加工技术
2.分样筛孔径0.45 mm(40目)。
3.分析天平感量0.000 1 g。
4.凯氏烧瓶 100 mL。
5.凯氏蒸馏装置半微量水蒸气蒸馏式
6.容量瓶 100 mL。
7.移液管 10 mL。
8.锥形瓶150 mL或250 mL。
9.滴定管25 mL。
10.其他试剂瓶、洗瓶、消煮炉或电炉。
五、化学试剂
1.硫酸(GB 625) 分析纯，含量为98%，无氮。
2.混合催化剂 O．4g硫酸铜，5个结晶水(GB 665)，6g硫酸钾( HG3 -920)或硫酸钠(HG3-908)，均为分析纯，磨碎混匀。
3.氢氧化钠(GB 628)分析纯，配成40%氢氧化钠溶液。
4.硼酸(GB 628) 分析纯，配成2%硼酸溶液。
5.混合指示剂甲基红(HG3-958)0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿(HG3 -1220)%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为3个月。
6.盐酸标准溶液硼砂或无水碳酸钠标定
0.1 mol/L盐酸(HCl)标准溶液： mL盐酸(GB 622)，分析纯，注入1000 mL蒸馏水中。
0.02 mol/L盐酸( HCl)标准溶液：1.67 mL盐酸(GB 622)，分析纯，注入1000 mL蒸馏水中。
7.硫酸铵(GB 1396)分析纯，枯燥。
饲料中粗蛋白质的测定课件(共25张PPT)《畜禽营养与饲料》
单元二 饲料中粗蛋白质的测定
一、适用范围
二、测定原理
凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破 坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨 逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘 以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
三、所需试剂
1、硫酸（GB 625） 2、混合催化剂 3、氢氧化钠（GB 629） 4、硼酸（GB 628） 5、混合指示剂 6、0.02mol/l盐酸标准溶液 7、蔗糖（HG 3—1001） 8、硫酸铵（GB 1396） 9、硼酸吸收液
六、分析步骤
（1）试样的消毒： 称取试样0.5~1g(含氮量5~80 mg)准确至0. 0002 g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均 匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热， 开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力(360~410℃ ) 直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
取蔗糖 0.5g，代替试样，按以上步骤进行空白测定，消耗 0.02mol/L的盐酸标准溶液体积不得超过 0.3ml。
（三）分析结果的表述
1、计算结果如下式
2、重复性
每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 当粗蛋白质含量在25%以上时，允许相对偏差为 1%。 当粗蛋白质含量在10%-25%之间时，允许相对偏差为2%。 当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差为3%。
混合催化剂氧化钠溶液
蒸馏水
四、仪器设备
电子天平
滴定筒
牧医工程学院精品在线课程
通风橱内电炉及消煮架
锥形瓶
容量瓶
凯氏烧瓶
洗瓶
刻度吸管
移液管
饲料中粗蛋白质的测定
饲料中粗蛋白质的测定一、目的掌握饲料中粗蛋白质的测定方法，并测定饲料中粗蛋白质的含量。
二、原理饲料中纯蛋白质和非蛋白氮总称粗蛋白质。
凯氏法的基本原理是用浓H2SO4在还原性催化剂(CuSO4、K2SO4、Na2SO4等)的催化作用下消化饲料样本，使其中的蛋白质和非蛋白氮都变为NH４＋，NH４＋立即被浓H2SO4吸收成为(NH4)2SO4，(NH4)2SO4在浓碱作用下放出NH3，通过蒸馏，氨气随水蒸汽沿冷凝管流入硼酸吸收液被硼酸吸收并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红溴甲酚绿混合指示剂作指示剂，用标准HCL溶液滴定，求出氮含量，根据不同饲料再乘以一定的换算系数(通常用6.25计算)，即为粗蛋白质的含量。
上述原理的主要化学反应如下：2.(NH4)2SO4+2NaOH→2NH3↑+2H2O+Na2SO43.H3BO３+NH3→NH4H2BO34.NH4H2BO3+HCL→NH4CL+H3BO3三、仪器设备1.实验室用样品粉碎机：40目网筛。
2.分析天平：感量0.0001。
3.电子天平: 感量0.001。
4. 六联电炉: 6×1000W。
5.改良式半微量凯氏定氮仪(图1)。
6.酸式滴定管:25ml。
7.凯氏烧瓶:100ml。
8.烧杯:250ml。
9.三角瓶:150ml。
10.容量瓶:100ml。
11.移液管:10ml。
12.量筒: 10ml 。
13.量筒:25ml。
四、试剂1.浓H2SO4：化学纯,含量为98%，无氮。
2.混合催化剂：CuSO4:Na2SO4=1:10 化学纯。
3.甲基红—溴甲酚绿混合指示剂：0.1%甲基红酒精溶液与0.5%溴甲酚绿酒精溶液等体积混合，阴凉处保存期不超过三个月。
此混合指示剂在碱性溶液中呈蓝色，中性溶液中呈灰色，强酸性溶液中呈红色。
在硼酸吸收液中呈暗紫色，在吸收氨的硼酸溶液中呈兰色。
4.2%硼酸吸收液：溶2g化学纯硼酸于100ml蒸馏水中，加甲基红—溴甲酚绿混合批示剂0.4ml。
饲料中粗蛋白的测定(精)
饲料中粗蛋白的测定一、实验目的通过饲料样品中粗蛋白的测定，掌握饲料粗蛋白质含量的测定方法。
二、适用范围本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。
三、实验原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数，计算出粗蛋白含量。
四、试剂（1）硫酸：化学纯，含量为98%，无氮。
（2）混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水；6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀。
（3）氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（m/V）。
（4）硼酸：化学纯，2%水溶液（m/V）。
（5）混合指标剂：甲基红%乙醇溶液，溴甲酚绿%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为3个月。
（6）盐酸标准溶液：基准无水碳酸钠法标定；① L盐酸标准溶液：盐酸注入1000ml蒸馏水中。
② L盐酸标准溶液：盐酸注入1000ml蒸馏水中。
（7）蔗糖：分析纯。
（8）硫酸铵：分析纯，干燥。
（9）硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1000mL，加入%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，%甲基红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液，混合，置阴凉处保存期为1个月（全自动程序用）。
五、仪器设备（1）实验室用样品粉碎机或研钵。
（2）分样筛：孔径0.45mm（40目）。
（3）分析天平：感量0.0001g。
（4）消煮炉或电炉。
（5）滴定管：酸式，10、25mL。
（6）凯氏烧瓶：250mL。
（7）凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏式。
（8）锥形瓶：150、250mL。
（9）容量瓶：100mL。
（10）消煮管：250mL。
（11）定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。
六、分析步骤试样的选取和制备: 选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。
（1）仲裁法①试样的消煮称取试样～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
实验三 饲料中粗蛋白的测定
实验三 饲料中粗蛋白的测定一、适用范围本标准适用于配合饲料，浓缩饲料和单一饲料。
二、原理凯氏法测定试样中的含N 量，即在催化剂作用下，用H 2SO 4破坏有机物，使含N 物转化成（NH4）2SO 4，加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出N 含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出CP 含量。
三、试剂1、H 2SO 42、混合催化剂3、NaOH4、硼酸5、混合指示剂6、HCl 标准液7、蔗糖8、硫酸铵9、硼酸吸收液四、仪器设备1、粉碎机2、分样筛3、分析天平4、消煮炉5、滴定管6、凯式定N 仪7、锥形瓶 9、容量瓶 10、消煮管五、分析步骤1、试样的消煮，称取试样0.5g ，准确至0.0202g ，放入消煮管中加入6.4g 混合催化剂与试样混合均匀，再加入12ml H 2SO 4将消煮瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化、泡沫消失后，再加强火力（360-410℃）直至吴透明的蓝绿色，然后再继续加热至少2h 。
2、NH 3的蒸馏将装有硼酸吸收液和指示剂的锥形东半球，放在冷凝管末端，装好消煮管，打开碱并关，至消煮管中变为黑色，并闭碱开关，打开气天关，至锥形瓶内液体由粉红色变为橙黄色，到流出液体体积为150ml 时停止，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。
3、滴定蒸馏后的吸收液用HCl 标准溶液滴定，溶液由橙黄色变为粉红色为终点。
3、空白测定称取蔗糖0.5g 代替试样进行空白测定七、计算 CP=%100M25.60140.0C )V V (12⨯⨯⨯⨯-V 2：滴定试样时所需标准溶液体积mlV 1：滴定空白时，所需标准溶液体积mlC ：盐酸标准溶液浓度mol/lM ：试样质量 g0.0140：与1mol HCl 标准溶液相当的以g 表示的N 的质量。
6.25：N 换算成Br 的平均系数。
饲料中粗蛋白的测定-凯氏定氮法
凯氏定氮仪测定步骤
影响因素分析
1.取样
试样粉碎后一般过40 目筛，且一定要把粉碎后的试样及粉碎机中残留的部分清扫后充 分混合均匀，避免粉碎的试样分级而影响分析结果的准确性。
2.催化剂及其用量
国标为0.4g 硫酸铜和6g 无水硫酸钾( 或无水硫酸钠)。若 添加量大，消化液容易结晶； 添加量减少，会延长消化时间或消化不完全。
饲料中粗蛋白质含量的测定
凯氏定氮法
目录
1. 适用范围
2. 测定原理 3. 仪器设备及试剂
4. 测定步骤
5. 影响因素分析
适用范围
蛋白氮 （真蛋白质提供氮源 ）
粗蛋白质
非蛋白氮（氨基酸、酰胺、铵盐 ）
测定原理
凯氏法测定试样中含氮量，即在催 化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含 氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏 使氨逸出，用硼酸吸收后，在用标准浓 度的酸滴定，测出氮含量，将结果乘以 换算系数6.25，计算出粗蛋白质含量。
3.消化温度
刚开始时以低温(200 ～ 300℃ ) 加热，待试样焦化泡沫消失后，逐步缓慢提高温度 (360～410℃ )。起初低温加热是为防止试样起泡沫，而溢出烧瓶外或碳化后的颗粒 附于烧瓶壁，导致消化不完全，所测结果偏低。
4.消化时间
可根据试样的重量、蛋白含量的多少以及消化的难易程度而适当调整消化液澄清后的 消化时间。对于所称试样质量较多、蛋白含量高于蚕蛹或者难消化的试样，消化液澄 清后继续消化的时间可控制在45m i n ～ 2h 不等，具体时间化验工作者可根据自己的 工作经验而自行定夺。
仪器设备及试剂
样品粉碎机 40目分析筛 分析天平 消化炉 消化管 凯氏蒸馏装臵 滴定管
98%浓硫酸 硫酸钾 硫酸铜 硼酸溶液 标准盐酸溶液 混合指示剂
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• 氮的蒸馏
采用定氮仪，将带消化液的管子插在蒸馏 装置上，以 25mL 硼酸为吸收液，加入两 滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要 浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化 管中加入 50mL 氢氧化钠溶液进行蒸馏。 蒸馏时间以流出的液体呈中性为宜，可用 pH试纸测试。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗 冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。
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滴定
用0.1mol/L的盐酸标准溶液进行滴定。
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结果计算
• 粗蛋白质含量（%）=
• NaOH：40% 水溶液，化学纯； • 硼酸：2% 水溶液，化学纯； • 混合指示剂； • 0.1mol/LHCl标准溶液； • 0.02mol/LHCl标准溶液； • 蔗糖：分析纯； • 硫酸铵：分析纯，干燥； • 硼酸吸收液。
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仪器
• 实验用样品粉碎机或研钵； • 40目分析筛； • 分析天平； • 电炉； • 酸式滴定管； • 凯氏蒸馏装置； • 凯氏定氮装置
释放出来，直接蒸馏到硼酸中，再用盐酸 溶液来滴定，根据盐酸消耗量来计算 DD 法所测得的表观含氮量。但是，由于 DD 法测定过程中的氨量的释放是不定量进行
的，因此必须根据经典的凯氏定氮法所标
定的校正数值，用一定的回归方程来计算 样品中的粗蛋白质的含量。
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试验步骤
• 消化 称量5.000g样品，粉碎经40目筛后放 500mL 凯氏烧瓶中，加 50mL 蒸馏水（边 加边摇），使充分混合。
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• 氨的蒸馏 试样消煮液冷却后加入20mL蒸馏水，转入 100mL 容量瓶内，冷却后用水稀释至刻度，摇匀， 作为试样分解液。将蒸馏装置的冷凝管末端浸入 装有 20mL 硼酸吸收液和 2 滴混合指示剂的锥形 瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数 滴、硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色， 否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL 注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进 样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL氢氧化钠 溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃 塞塞好，且在入口处加水密封，以防漏气。蒸馏 4min后降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面， 再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均 流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。
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结果计算
• 粗 蛋 白 质 含 量（%）= （V-V0 ）×N ×0.014×6.25×100 [M×(V 2／V 1)]
式中： V—滴定样品吸收液时所消耗的盐酸标准溶（mL)；
V0
—空白测定吸收液所消耗的盐酸标准溶液（mL) V1 — 样品消化液总的体积（mL）；
；
V2 —从100mL消化分解液中吸取的消化液体积（mL)；
饲料中粗蛋白的测定
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常用方法
• 国标法 • 凯氏定氮仪法 • 强碱直接蒸馏法 • 双氧水法
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样品的采集、制备
• 生产单位有代表性的原料检样：鱼粉、玉 米蛋白粉、豆粕
• 采用四分法将检样缩至500g，粉碎后通过 40目筛，装于密闭容器中，防止试样成分 变化或变质
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国标法
实验原理 国标法测定试样中含氮量，即在催化剂作 用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化 为硫酸铵，加入碱进行蒸馏使NH3 逸出， 用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，测出含氮 量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋 白的含量。
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实验试剂
• 硫酸：化学纯，含量为98%，无氮； • 混均合为催化化 学剂 纯： ，磨0.4碎gC混u匀SO；4，6gK2SO4 或 Na2SO4
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滴定 空白测定 计算
（同国标法）
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强碱直接蒸馏法
强碱直接蒸馏法 (Direct Distillation， 俗称DD法)是间接测定饲料中粗蛋白质的一 种简便的方法。
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实验原理
其原理是将粉碎的饲料样品在强碱中消煮，
使饲料中的 α- 氨基、酰氨基以及某些特殊 基团上的氮素在强碱的作用下以氨的形式
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• 空白测定
• 称取蔗糖0.5g，代替试样，按照前面的消 化蒸馏方法进行空白测定，消耗0.1mol/L盐 酸标准溶液的体积不得超过 0.2mL，消耗 0.2mol/L 的盐酸标准溶液不得超过0.3mL。
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• 滴定
蒸馏后的吸收液立即用 0.1mol/L 或 0.2mol/L标准盐酸溶液滴定，溶液由蓝绿色 变成灰红色。同样滴定试剂空白消化液。
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操作步骤
• 试样消化 称取试样 0.5 ～ 1g（含氮量5 ～ 80mg），准确至0.0002g， 小心无损的将样本放入 100mL洗净烘干的凯氏烧瓶中。 加入 6.4g 混合催化剂与试样混合均匀，再加入 12mL 硫 酸和两粒玻璃珠。将凯氏烧瓶置于通风厨里的电炉上加热， 开始加热时，先用小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加 强火力，消化时经常转动消化瓶，使全部样本浸入硫酸内， 如有黑色油在瓶壁，应待烧瓶冷却后加少量蒸馏水冲洗， 再继续加热消化。如有黑炭粒不能全部消化，则待烧瓶冷 却后，补加少量硫酸加热，直至呈透明的蓝绿色，然后再 继续加热至消化完毕。
0.014—氮的毫克当量数；
M—样品的质量（g）；
N—盐酸标准溶液当量浓度
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凯氏定氮仪法
试剂 同凯氏定氮测粗蛋白法 仪器 自动或半自动定氮仪
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操作步骤
• 试样的消化
称取试样 0.5 ～ 1g（含氮量5 ～ 80mg）， 准确至0.0002g，放入消化管中，加两片消 化片（仪器自备）或6.4g混合指示剂、 12mL硫酸，于420℃在消煮炉上消化1h， 取出放凉后加入30mL蒸馏水。
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蒸馏
向凯氏烧瓶中加入 25mL 10% 氯化钡溶液， 振荡摇匀，再加120mL 40% 的氢氧化钠溶 液，立即连接蒸馏装置进行蒸馏。把蒸馏 装置冷凝管的末端浸入盛有 50mL 2% 的硼 酸溶液和 2 滴混合指示剂的锥形瓶中，轻 轻摇动凯氏烧瓶使溶液混匀，然后加热进 行蒸馏，待蒸馏出的液体体积达到100mL （总体积达到150mL）时停止蒸馏。