细胞培养常用培养基
ms培养基配方表
ms培养基配方表ms培养基是一种常用的细胞培养基，用于无菌条件下培养哺乳动物细胞，特别是鼠胚胎成纤维细胞（Mouse Embryo Fibroblast,MEF）。
它是由多种有机和无机化合物组成的复杂混合物，可以提供细胞生长所需的必需氨基酸、糖类、维生素和微量元素等营养物质。
同时，它还包含有机缓冲剂和盐类，可以调节培养品的 pH 值和离子浓度，保持培养条件的稳定性。
下面介绍 ms培养基的配方表：MS培养基水相1. 将1L 去离子水（DI水）加入1mol/L NaCl 至5mL2. 加入HEPES缓冲液（1mol/L）27.7g，调节至pH7.2-7.43. 加入葡萄糖25.0g，混合直至葡萄糖完全溶解4. 加入 L-谷氨酸1.42g，细胞培养I 类和 II 类所需濃度5. 加入 L-苏氨酸0.07g，细胞培养所需濃度6. 加入 L-半胱氨酸0.16g7. 加入 L-赖氨酸0.07g8. 加入 L-缬氨酸0.07g9. 加入L-异亮氨酸0.07g10. 加入L-亮氨酸0.14g11. 加入L-丙氨酸0.14g12. 加入L-天冬氨酸0.15g13. 加入L-芸香氨基酸0.42g14. 加入 L-色氨酸0.03g15. 加入 L-酪氨酸0.03g16. 加入 L-精氨酸0.17g17. 加入 L-组氨酸0.03g18. 加入 L-甘氨酸0.10gMS培养基固相1. 加入 NaHCO3（7.5%）4mL，细胞培养所需濃度2. 加入 4-(2-羟乙基)吡啶盐酸盐（HEP）2g，细胞培养所需濃度；过度使用可导致凝块形成3. 加入 MgSO4（7H2O）0.94g，细胞培养所需濃度4. 加入 KH2PO4 0.17g，细胞培养所需濃度5. 加入 NaH2PO4（H2O，2. H2O）0.19g，细胞培养所需濃度6. 加入 Na2HPO4（7H2O）3.05g，细胞培养所需濃度7. 加入次黄嘌呤（NEAA）1mL，必需的非必需氨基酸，促进细胞生长8. 加入乳酸钠2.72g，利用减少氧淤积，促进细胞生长9.加入硫酸铜子（10-5M)）1mL，为MEF的细胞类型提供最佳的增生所需注：以上配方根据MS原始文献略作调整，如果在实验中出现差异，请根据实际情况微调。
细胞培养期末考试试题
细胞培养期末考试试题一、选择题（每题2分，共20分）1. 细胞培养中常用的培养基是：A. 蒸馏水B. 营养琼脂C. RPMI 1640D. 细菌培养基2. 细胞培养中，以下哪项不是细胞生长必需的：A. 温度B. 氧气C. 二氧化碳D. 紫外线3. 以下哪种细胞培养技术不涉及细胞的遗传改造：A. 转染B. 转导C. 克隆D. 原代培养4. 细胞培养中，pH值的维持主要依赖于：A. 细胞自身的代谢B. 培养基中的缓冲系统C. 培养箱的温湿度控制D. 定期更换培养基5. 细胞培养中，细胞传代的频率通常取决于：A. 细胞的密度B. 细胞的类型C. 培养基的成分D. 培养箱的CO2浓度二、填空题（每空2分，共20分）6. 细胞培养中，细胞的贴壁依赖于细胞表面的_________与培养基表面的_________。
7. 细胞培养过程中，细胞的增殖速率通常用_________来表示。
8. 细胞培养中，常用的细胞计数方法包括_________和_________。
9. 细胞培养时，细胞的形态变化可能预示着_________。
10. 细胞培养中，细胞的冻存通常使用含有_________的冷冻保护剂。
三、简答题（每题10分，共30分）11. 简述细胞培养中常用的传代方法及其优缺点。
12. 描述细胞培养过程中可能出现的污染类型及其预防措施。
13. 解释细胞培养中为什么要维持适宜的pH值，并说明如何调节。
四、论述题（每题15分，共30分）14. 论述原代细胞培养与次代细胞培养的区别及其在生物医学研究中的应用。
15. 讨论细胞培养技术在药物筛选和毒性测试中的应用及其重要性。
五、实验设计题（共30分）16. 设计一个实验方案，以评估不同培养条件对特定细胞株生长的影响。
请包括实验目的、原理、材料与方法、预期结果和可能的实验变量。
常见细胞系使用的培养基
常见细胞系使用的培养基细胞系培养基是在细胞体外培养时提供营养、调节生理功能和维持细胞生长所必需的基础培养液。
常见的细胞系培养基包括以下几种：1.基本培养基：(a) Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)：DMEM是最常用的细胞培养基之一，可以满足大多数哺乳动物细胞的生长需求。
它包含丰富的氨基酸、维生素和硒等营养物质，pH 为7.4，细胞因子和血清可以根据需要添加。
(b)RPMI1640：RPMI1640是一种适用于淋巴细胞等肿瘤和免疫细胞的培养基。
它还包含可溶性蛋白、胎牛血清、植物血清和病毒适配因子等。
(c) Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM)：EMEM是一种全面的培养基，适用于广泛的细胞系，并可添加血清、血清替代物或血清补充物来满足特定细胞系的需求。
(d) Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM)：IMDM是用于骨髓细胞和其他白细胞的培养基，也适用于一些其他特定的细胞系。
2.补充因子：(a)L-谷氨酸：可以通过促进蛋白质合成以及为细胞提供能量，促进细胞生长。
(b)胱氨酸：可以作为抗氧化剂，保护细胞免受氧化损伤。
3.血清和血清替代品：(a)胎牛血清(FBS)：FBS是最常用的培养基补充物之一，因为它含有多种生长因子、蛋白质和营养物质，可以促进细胞生长和增殖。
(b)马血清：适合一些特定的细胞系，可以替代FBS。
(c)血清替代品：血清替代品通常是人类血浆衍生物，不含动物血清，可以减少细胞系受到的外源性感染风险。
4.碳源和氮源：(a)葡萄糖：葡萄糖是最常用的碳源，可以提供细胞的能量需求。
(b)氨基酸：提供细胞各种生物合成的原料。
(c)谷氨酸/谷氨酰胺：作为氨基酸的前体，是合成蛋白质和核酸的重要物质。
5.生长因子和维生素：(a)血液集落刺激因子(CSFs)：CSFs可以促进造血系统细胞系的增殖和分化。
细胞培养各种培养基简介
DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。
一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。
最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。
MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。
Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM 含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。
选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。
例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。
F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。
在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。
对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。
MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。
这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。
实际操作中并非如此简单。
显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。
DMEM培养基配方
DMEM培养基配方DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）是一种常用的培养基，常用于细胞培养和病毒培养中。
该培养基是由Eagle在1961年发展而来的，并在之后被Dulbecco所改进，增加了可以用于细胞培养的组分。
DMEM培养基具有良好的细胞生长和维持能力，适用于多种细胞系的培养。
以下是DMEM培养基的标准配方：成分（每1升DMEM培养基）：-无菌去离子水1000mL- 葡萄糖（D-葡萄糖） 1000 mg- L-谷氨酰胺 584 mg-青霉素/链霉素100单元/mL-菌脂体抗生素混合物（氰胺苯胂和核黄素酮）10mL-青霉素/链霉素抗生性混合物10mL- 乳酸 660 mg- 杂酸钠 200 mg- 高氨基酸（L-谷氨酸，L-赖氨酸，L-Leu，L-异亮氨酸，L-Lys，L-Met，L-Phe，L-Thr，L-Trp，L-Arg，L-His，L-Ile，L-Val） 2 mL - L-胱氨酸 4 mg- 胖利钠 392 mg-维生素溶液（1X）10mL-必需氨基酸溶液10mL-非必需氨基酸10mL-小牛血清10%各组分的详细介绍如下：1.无菌去离子水：用于稀释和制备培养基，确保培养基的无菌。
4.青霉素/链霉素：抗菌药物，避免培养基中细菌的污染，浓度为100单元/mL。
5.菌脂体抗生素混合物：混合了氰胺苯胂和核黄素酮，提供对细菌和真菌的广谱抗生素覆盖。
6.青霉素/链霉素抗生素性混合物：对细菌的广谱抗生素覆盖。
7.乳酸：调节培养基的酸碱平衡，以维持适宜的细胞生长环境。
8.杂酸钠：提供缓冲剂，维持培养基的pH值稳定。
9.高氨基酸：添加了多种必需氨基酸，为细胞提供生长所需的氨基酸。
10.L-胱氨酸：提供了硫含量丰富的氨基酸，对细胞代谢和抗氧化有重要作用。
11. 填充无机盐 392 mg：提供一些无机盐，维持细胞代谢所需的电解质平衡。
12.维生素溶液（1X）：提供维生素，满足细胞生长过程中的营养需求。
ms培养基配方表
ms培养基配方表MS（Murashige and Skoog）培养基是细胞培养中常用的基础培养基，其命名来源自培养基组合者Murashige和Skoog。
MS培养基呈现出广泛的适用性，可用于各种组织培养和植物组织培养的研究。
其配方主要采用无机盐和有机物的混合物，以下是MS培养基的详细配方表。
1. MS微量元素添加剂：ZnSO4.7H2O = 8.6 mg/LH3BO3 = 3.1 mg/LMnSO4.4H2O = 0.25 mg/LCuSO4.5H2O = 0.025 mg/LKI = 0.83 mg/LNa2MoO4.2H2O = 0.025 mg/LCoCl2.6H2O = 0.025 mg/LFeSO4.7H2O = 27.8 mg/L2. MS盐基：NH4NO3 = 1650 mg/LKNO3 = 1900 mg/LCaCl2.2H2O = 440 mg/LKH2PO4 = 170 mg/LMgSO4.7H2O = 370 mg/L3. MS综合维生素添加剂：Myo-inositol = 100 mg/LNicotinic acid = 50 mg/LPyridoxine.HCl = 10 mg/LThiamine.HCl = 10 mg/LGlycine = 2 mg/LL-Asparagine.H2O = 150 mg/L4. MS植物生长调节剂添加剂：2,4-Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) = 0.5 ~ 5 mg/Lα-Naphthaleneacetic acid (NAA) = 0.5 ~ 5 mg/L6-Benzylaminopurine (BA) = 0.5 ~ 5 mg/LKinetin (Kin) = 0.5 ~ 5 mg/LGibberellic acid (GA3) = 0.1 ~ 10 mg/LAbscisic acid (ABA) = 0.1 ~ 10 mg/L以上是MS培养基的配方表，各种配方的配比可以根据实验需要适当调整。
细胞实验试题及答案
细胞实验试题及答案1. 细胞培养中常用的培养基有哪些？- 答案：常用的细胞培养基包括DMEM、RPMI-1640、MEM、F12等。
2. 细胞传代时应注意哪些事项？- 答案：细胞传代时应注意以下事项：1. 使用无菌操作技术。
2. 确保培养基新鲜且无污染。
3. 传代时细胞应处于健康生长状态。
4. 传代比例要适当，避免细胞过于拥挤或过于稀疏。
3. 细胞冻存液的主要成分是什么？- 答案：细胞冻存液的主要成分包括：1. 基础培养基。
2. 冷冻保护剂（如DMSO）。
3. 血清。
4. 细胞凋亡的形态学特征有哪些？- 答案：细胞凋亡的形态学特征主要包括：1. 细胞体积缩小。
2. 细胞核浓缩。
3. 细胞膜泡化。
4. DNA片段化。
5. 细胞周期各阶段的特点是什么？- 答案：细胞周期各阶段的特点如下：1. G1期：细胞生长，进行RNA和蛋白质的合成。
2. S期：DNA复制。
3. G2期：细胞继续生长，准备进行分裂。
4. M期：细胞分裂。
6. 细胞转染常用的方法有哪些？- 答案：细胞转染常用的方法包括：1. 脂质体介导的转染。
2. 电穿孔。
3. 病毒载体转染。
7. 细胞克隆形成实验的步骤是什么？- 答案：细胞克隆形成实验的步骤包括：1. 细胞消化。
2. 细胞计数。
3. 细胞稀释。
4. 细胞培养。
5. 克隆选择。
6. 克隆扩增。
8. 细胞培养中常见的污染类型有哪些？- 答案：细胞培养中常见的污染类型包括：1. 细菌污染。
2. 真菌污染。
3. 支原体污染。
4. 病毒污染。
9. 细胞培养箱的基本条件是什么？- 答案：细胞培养箱的基本条件包括：1. 恒温。
2. 恒湿。
3. 5% CO2环境。
4. 无菌。
10. 细胞毒性实验中常用的检测方法有哪些？- 答案：细胞毒性实验中常用的检测方法包括：1. MTT法。
2. LDH释放法。
3. 细胞克隆形成实验。
4. 细胞存活率检测。
以上是细胞实验试题及答案的排版和格式示例。
细胞培养基种类及用途
细胞培养基种类及用途1. DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）：DMEM 是最常用的无血清培养基之一，是以鹰的鸟胚为基础改进而来的，含有大量氨基酸、糖类、维生素和一些重要的生长因子。
适用于大多数哺乳动物细胞的培养，具有优良的细胞增殖和生长效果。
2.RPMI1640：RPMI1640是一种由罗斯韦尔公立医院制备的细胞培养基，主要用于淋巴细胞、淋巴瘤和骨髓细胞的培养。
它具有高浓度的氨基酸和维生素，适合长期的培养以及体外细胞繁殖实验。
3. MEM（Minimum Essential Medium）：MEM 是一种最简单的细胞培养基，含有大量的必需氨基酸、维生素和果糖。
它广泛用于原代细胞和肿瘤细胞的培养，具有适应性强、成本低的优势。
4. FBS（Fetal Bovine Serum）：FBS 不是一种细胞培养基，而是培养基中添加的血清。
FBS 富含细胞生长因子、激素和营养物质，可提供所需的细胞补体和血浆蛋白。
它被广泛用于细胞培养中，可以促进细胞的增殖和生长。
5. StemPro MSC SFM：StemPro MSC SFM 是一种专门设计用于人类间充质干细胞（MSC）培养的无血清培养基。
它富含生长因子和维生素，可以维持 MSC 的干性状态，有利于其增殖和多向分化。
6. Neurobasal medium：Neurobasal 是一种特殊的神经元细胞培养基，用于神经元细胞的培养。
它含有许多神经营养因子和激素，能够促进神经细胞的生长和分化。
7.DMEM/F12：DMEM/F12是一种混合型细胞培养基，是DMEM和HAMF12培养基的混合产物。
它具有增强细胞的生存能力和增殖速度的优势，适用于许多类型的肿瘤细胞和原代细胞的培养。
细胞培养基的选择要根据具体实验目的和细胞类型来确定。
不同种类的细胞培养基在细胞生长、增殖和分化方面有不同的影响，因此合理的选择细胞培养基可以提高实验效果和数据可靠性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
细胞培养常用培养基
高博，苏州大学医学部药学院药理学系
1、ＲPMI-１6４0Medium
RPMI－1６40广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。
主要用于悬浮细胞培养。
其它像Ｋ-5６２、ＨL-60、Juｒkat、Daudi、IＭ－9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2、ＭinｉmuｍEssentiａl Medｉｕｍ(MEM)
也称最低必需培养基，它仅含有1２种必需氨基酸、谷氨酰胺和８种维生素。
成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
MEＭ-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MＥＭ来培养。
3、DMEM-高糖（标准型）
是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养，更适合高密度悬浮细胞培养。
适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4、DMEM-低糖（标准型）
是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
５、DMEM／F12
DＭＥM／F12培养基适于克隆密度的培养。
F1２培养基成分复杂,含有多种微量元素，和DMEＭ以1：1结合，称为DMEM／F12培养基（ＤME／F1２medium)，作为开发无血清配方的基础,以利用F１2含有较丰富的成分和DMEM 含有较高浓度的营养成分为优点。
该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。
为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F1２（１:1）
中加入１５mM HEPES缓冲液。
6、ＭcCoｙ’ｓ5A
ＭcCｏy’s ５A Mｅdiuｍ主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)的原代移植物的生长,除适于一般的原代细胞培养外,主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。
例如Jｅｎｓen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HＴ-29、ＢＨL-100等上皮细胞。
7、Ｉsｃove’s MｏdifiｅｄDｕlbｅｃco Medｉｕｍ(IMDM)
Guiｌbeｒ和Iscｏve将Dulbecｃｏ’Medium改良为Iｓcｏｖe’s Medｉｕm，用于培养红细胞和巨噬细胞前体。
此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HＥPES。
并用硝酸钾取代了硝酸铁。
IMDM还能够促进小鼠Ｂ淋巴细胞,LＰＳ刺激的B细胞，骨髓造血细胞,Ｔ细胞和淋巴瘤细胞的生长。
ＩＭDM为营养非常丰富的培养液,因此可以用于高密度细胞的快速增殖培养。
8、M-1９9 Meｄiｕm
19５0年,Ｍorｇaｎ成功研制出具有确定化学成分的细胞培养液，即M-199，主要用于鸡胚成纤维细胞培养。
此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。
M-199可用于培养多种种属来源的细胞,并能培养转染的细胞。
９、Leiｂｏvｉtz Ｍedium （L-15）
L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养,用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。
此培养液采用磷酸盐缓冲体系,氨基酸组成进一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。
1０、Ham’sＦ-10培养基
适应小鼠细胞、人类二倍体的培养。
1１、Ｈａｍ’s F-１2培养基
可以在加入很少血清的情况下应用，特别适合单细胞培养和克隆化培养,是无
血清培养中常用的基础培养液。
1２、Willｉａm’s Medｉum E
用于大鼠肝上皮细胞的长期细胞培养。
１3、MＣDB 131 培养液
用于培养内皮细胞。
１4、Ｏpti-ＭEM I Ｒedｕｃed SeruｍMedｉa 用于培养造血细胞。
15、植物血凝素(PHＡ)
增加细胞转化和DNA合成。