枯草芽孢杆菌常用培养基配方
高产碱性磷酸酶的枯草杆菌培养基优化方案
菌落表面粗糙不透明，污白色或微
黄色，在液体培养基中生长时，常形
成皱醭，需氧菌。可利用蛋白质、多
种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。
碱性磷酸酶
碱性磷酸酶能催化几乎所有的磷酸单脂的水解反 应，产生无机磷酸。该酶广泛存在直接参与磷酸基团
的转移和钙磷代谢，维持体内适宜的钙磷比例，在脊
椎动物的骨化作用中起着重要作用。而且还与角蛋白 等蛋白质的分泌有关。本PPT是以研究枯草杆菌在不
高产碱性磷T制作： 资料查找：
枯草芽孢杆菌简介
枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种。单个细
胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，
周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢 0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于
菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
结果进行统计分析，筛选出枯草杆菌最佳培养的
试验结果
目的
正交试验的条件下，优化出菌株生长配方。由于各试验 组配方的酵母膏和蛋白胨含量不同。培养基颜色也不同， 导致接种后检测的初始 过对初始 值存在着较大差异。通 =2.65，即 值 值进行方差分析，F=7.17>
P〈0.01，因此，差异极显著。为了减少这种差异，本试 验所有试验组初始 为零，将菌株生长所测得的 为相对值。试验结果见表3。
试验结果表明，当培养基 的配方为无水葡萄糖
3.50g/L、蛋白胨0.83g/L、
酵母膏0.5g/L、磷酸二氢 钾0.35g/L、碳酸钙 0.25g/L.根据数理统计分 析，优化的枯草杆菌培养
条件能有效促进枯草杆菌
生长，提升枯草杆菌产量。
谢谢
同条件培养纸杯碱性磷酸酶，确定枯草杆菌碱性磷
酸酶制备的最佳方案。
主要试剂和仪器
芽孢杆菌常用培养基配方
芽孢杆菌常用培养基配方（按理说，该实验的所有培养基都在这了，后红字更为清楚些。
摘自百度）一、肉汤琼脂培养基：蛋白胨10g ，牛肉膏15g ，NACL15g ，蒸馏水1000ml ，琼脂18g 。
调节PH7.2,0.1MPA20min 灭菌。
如果用液体做培养基，则去掉琼脂即可。
100 mL/组，其中20 mL 液体培养基/250 mL△中（内装玻璃珠10颗）；50 mL固体斜面培养基分装在试管中：5mL/支，10支。
2、或是（J-琼脂培养基：胰蛋白胨5g,酵母膏15g,磷酸氢二钾3g,葡萄糖2g, 琼脂20g, 蒸馏水1000ml。
调节PH7.3—7.5Mpa 30min灭菌。
）二、过氧化氢酶测定1、试剂：3-10%过氧化氢2、接种与培养：一般将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30度下培养1-2天。
3、试验方法：取一干净载玻片，在上面加一滴3-10%的双氧水，挑取1环1-2天的的菌苔，在双氧水溶液中涂抹，如有气泡出现（O2），作为过氧化氢酶阳性，无泡为阴性。
也可以将过氧化氢液直接加入斜面上，观察气泡的产生。
三、需氧性测定1、培养基：酪素水解物20g,葡萄糖10g, ,NACL5g,HOCH2SO3Na1g,HSCH2COONa2g,琼脂15g,蒸馏水1L。
调节PH7.2，分装试管，0.06Mpa，30min灭菌，培养基不摆斜面。
2、接种与观察：用一小环的肉汤菌液，穿刺接种到上述培养基中（穿刺管底），一般与30 度培养3-7天观察结果。
若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿穿刺线生长则为厌氧菌。
四、酪素水解（用于检测不同种类的芽孢杆菌是否具有分解酪素的特点）1、培养基（1）脱脂牛奶制备取新鲜牛奶，煮沸后去掉上层油脂，再经离心脱脂（3000r/min,10min）,除去上层油脂，即为脱脂牛奶。
（2）牛奶平板的制备取50ml的脱脂牛奶放入一只三角瓶中，另外称1.5g琼脂置于含有50ml蒸馏水的另外3只三角瓶中，然后将两液分开灭菌，0.06Mpa-20min，带冷至45-50摄氏度时，速将两液混匀倒平板，即为牛奶平板。
枯草芽孢杆菌液体培养基生长现象
枯草芽孢杆菌液体培养基生长现象一、引言枯草芽孢杆菌是一种广泛存在于土壤中的芽孢杆菌，它具有很高的耐受性和适应性。
枯草芽孢杆菌液体培养基生长现象是研究该菌种生长特性和代谢途径的重要内容。
本文将从培养基成分、生长条件、生长曲线、代谢产物等方面对枯草芽孢杆菌在液体培养基中的生长现象进行探讨。
二、培养基成分1. 碳源枯草芽孢杆菌可以利用多种碳源进行生长，如葡萄糖、乳糖、麦芽糖等。
其中，葡萄糖是最常用的碳源之一，因为它可以提供足够的能量和碳源满足细胞代谢需求。
2. 氮源氮源对细胞合成蛋白质和核酸等重要物质具有重要作用。
枯草芽孢杆菌可以利用多种氮源进行生长，如氨基酸、尿素等。
在液体培养基中，通常使用的氮源是酵母提取物、蛋白胨等。
3. 矿物质矿物质对于细胞代谢和生长发育也具有重要作用。
在枯草芽孢杆菌液体培养基中，通常添加一定量的钠盐、钙盐、镁盐等矿物质。
4. 其他添加剂为了促进细胞生长和代谢，液体培养基中还可以添加一些其他的添加剂，如维生素、胆碱等。
三、生长条件1. 温度枯草芽孢杆菌的适宜生长温度为28-37℃。
在液体培养基中，通常选择适宜温度进行培养。
2. pH值枯草芽孢杆菌对pH值的适应范围比较广泛，一般在6.5-8.5之间。
在液体培养基中，通常调节pH值到适宜范围进行培养。
3. 氧气供应枯草芽孢杆菌是一种好氧菌，需要充足的氧气供应才能正常生长。
因此，在液体培养过程中需要进行充分的通气。
4. 摇床转速摇床转速对于液体培养基中细胞的生长和代谢有很大影响。
在枯草芽孢杆菌液体培养基中，通常选择适宜的摇床转速进行培养。
四、生长曲线枯草芽孢杆菌在液体培养基中的生长曲线一般可以分为四个阶段：潜伏期、指数增殖期、平台期和衰退期。
1. 潜伏期潜伏期是指细胞在刚开始培养时，由于适应环境和准备合成新细胞所需物质等原因，细胞处于一个相对静止状态。
在这个阶段内，菌落数量并没有显著增加。
2. 指数增殖期当细胞逐渐适应环境并开始合成新的细胞时，就进入了指数增殖期。
枯草芽孢杆菌用发酵培养基及其设备制作方法、枯草芽孢杆菌制剂的设备制作方法与设计方案
控制温度及风量，发酵共24h，所得枯草芽孢杆菌发酵液中活菌数最高为160亿cfu/mL，芽孢率最高为 96％。
现有发酵工艺所得的枯草芽孢杆菌发酵液中活菌数不高、芽孢率较低，并且培养时间长、稳定性较差， 枯草芽孢杆菌的发酵工艺水平急需提高。
技术内容
本技术的目的是提供一种枯草芽孢杆菌用发酵培养基，以解决现有的枯草芽孢杆菌用发酵培养基所得发 酵液中活菌数低、芽孢率低的问题。
温，发酵结束。
6.根据权利要求5所述的枯草芽孢杆菌制剂的制备方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌种子液的浓度 为1～10亿cfu/mL。 7.根据权利要求5所述的枯草芽孢杆菌制剂的制备方法，其特征在于，所述降温的速率为2～10℃/min。 8.根据权利要求5所述的枯草芽孢杆菌制剂的制备方法，其特征在于，所述接种的体积百分比为8～ 12％。 9.根据权利要求5所述的枯草芽孢杆菌制剂的制备方法，其特征在于，所述发酵培养的搅拌速度为170～ 240r/min。 10.根据权利要求5-9中任一项所述的枯草芽孢杆菌制剂的制备方法，其特征在于，所述种子液由包括以
本技术属于微生物发酵领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌用发酵培养基及其制备方法、枯草芽孢杆菌制 剂的制备方法。
背景技术
枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种，广泛分布在土壤及腐败的有机物中，因易在枯草浸汁中繁殖而得
枯草芽孢杆菌液态发酵的研究
枯草芽孢杆菌液态发酵的研究李情敏;何名芳;张凤英;张超凤;陈卫平【摘要】该研究选取了一株从无花果中分离出的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)作为试验菌株,它可以产生抗逆性强的芽孢,非常适合应用于益生菌饲料加工生产.在单因素试验基础上,进行L9(33)正交试验,获得芽孢产量高、原料成本低廉的液态发酵培养基最佳配方为碎米水解液6％、酵母粉0.7％、KH2PO40.5％;对该菌的摇瓶发酵条件进行了初步研究,确定了液态发酵的最佳条件为pH值为5,温度37℃,接种量6％,转速200 r/mm,培养时间19h.在此最佳培养基配方及发酵条件下,发酵液OD600mm值可达7.38.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2016(035)002【总页数】5页(P43-47)【关键词】枯草芽孢杆菌;液态发酵;培养基配方;培养条件;优化【作者】李情敏;何名芳;张凤英;张超凤;陈卫平【作者单位】江西农业大学食品科学与工程学院,江西南昌330045;赣州农业学校食品教研组,江西赣州341100;江西农业大学食品科学与工程学院,江西南昌330045;江西农业大学食品科学与工程学院,江西南昌330045;江西农业大学食品科学与工程学院,江西南昌330045【正文语种】中文【中图分类】TQ920.6益生菌的生理功能有很多，最重要的是可以促进肠道有益微生物的繁殖，降低病原菌数量，提高机体免疫的功能［1］。
益生菌制剂以无毒、无残留、无副作用、不污染环境等优点，使其成为了有效的抗生素替代物，在防治动植物疾病，促进机体发育，延缓人类衰老等方面被人们广泛使用［2］，并成为生态循环农业中的一个重要纽带。
由于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）可形成抗逆性极强的芽孢，在稳定性方面具有先天优势，且枯草芽孢杆菌是我国农业部和美国食品药品监督管理局（Food and Drug Administration，FDA）允许作为饲料添加剂的菌种［3-4］，其可以产生抑菌活性物质［5-6］，也可以作为一种理想的抗生素替代物。
常用培养基配方
乳酸杆菌培养基（MRS）蛋白胨10.0 g牛肉膏10.0 g酵母膏 5.0 g柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7] 2.0 g葡萄糖(C6H12O6·H2O) 20.0 g吐温80 1.0 mL乙酸钠（CH3COONa·3H2O） 5.0 g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O） 2.0 g硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.50g硫酸锰（MnSO4·H2O）0.25 g琼脂15.0 g蒸馏水 1 000 mLpH 6.2~6.6 (115°20min灭菌)脱脂奶粉培养基配方：1.牛肉膏1g，蛋白胨2g，NaCl 1g，脱脂奶粉10-12%，琼脂2%，水200ml，pH 7.0～7.2 115度灭15min 110度15min 108度15min2.培养基分开灭菌.即牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl 0.5g，，琼脂2%，水100ml，pH 7.0～7.2 121度20min脱脂奶粉3g 115度20min酵母菌培养基(复壮)马铃薯200克自来水 1000毫升煮20min 过滤除渣葡萄糖 20克琼脂 20克补足至1000ml水自然PH（培养）YPD :1 溶解10g酵母膏, 20g蛋白胨于900ml水中，如制平板加入20g琼脂粉2 高压121度20min3 加入100ml 20g葡萄糖（葡糖糖溶液灭菌后加入）酵母菌种扩大培养步骤：1.恢复培养。
将深冻菌种在水浴中溶解，用接种环接种到斜面或者平皿，30℃下培养2-3d，这个步骤也可称为“复壮”。
2.从斜面或者平皿中挑取菌种，接到10mlYPD培养基中，30℃，180r/min 转速下恒温摇瓶24小时。
3.以1:100比例，将种子液接到YPD培养基中，以实施扩大培养。
枯草芽孢杆菌培养基（牛肉膏蛋白胨）1L蒸馏水20g葡萄糖15g蛋白胨5g氯化钠0.5g牛肉膏20g琼脂LB培养基的配方如下:胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L酵母提取物(Yeast extract) 5g/L氯化钠(NaCl) 10g/L另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4配制一升溶液，需要189mmoI FeSO4*6H2O；0.586mmoI EDTA*Na2 FeSO4*6H2O 189mmoI*L-1,EDTA*Na2 0.586mmoI*L-1然后用氨水把PH调到7.4，即可。
枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定
枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定一、目的：掌握芽孢杆菌属常见种的分离，鉴定方法和技术。
将土壤样品中分离的芽孢杆菌属未知种鉴定到属。
二、原理：芽孢杆菌能产生芽孢，在沸水中加热不会失去生理活性，但是不能产生芽孢的细菌会失去活性。
，因而得到芽孢菌属，经过进一步分离及生理生化鉴定得到枯草芽孢杆菌。
三、材料和器皿：显微镜、培养皿（12个）、试管（12个）、三角瓶（5个）、烧杯、移液管（）、涂布棒（6个）、载玻片、接种环、接种针、试管架、灭菌锅、培养箱培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、淀粉培养基、v.p.实验培养基、肉汤琼脂培养基孔雀绿溶液、番红复染液、NaOH溶液、草酸铵溶液、碘液、乙醇四、操作步骤菌种的分离和纯化（1）土壤的采集：取土壤表层5~10厘米下的肥土100g左右，把采得的土壤放入纸袋中带回实验室分离。
（2）平板的制备：融化三角瓶中的牛肉膏蛋白胨培养基，以每皿20ml左右倒入6个平板上。
（3）稀释分离法：秤取土壤5g放入含有45ml水的三角瓶中，摇动片刻，然后将此瓶用小火加热至悬浊液沸腾，维持15分钟，而后静止5分钟。
吸取上层液0.5ml加入到含有4.5ml的无菌水的试管中，制成1:100浓度的悬液，然后分别吸取10-2和10-3土壤悬浊液个0.1ml滴加到上述牛肉膏蛋白胨培养基平板上，每种稀释2皿，用涂布棒均匀涂布，并将培养基倒置于37℃恒温培养1~2天。
（4）挑菌及纯化：从上述分离的平板上分别挑取2个单菌落中部分菌落，然后在牛肉膏蛋白胨培养基上划线纯化，经菌落特征的观察和镜检，确定是否是芽孢杆菌纯种后，从中选择一株转接于牛肉膏蛋白胨培养基斜面上，置37℃培养1~2天备用。
菌种的鉴定1、形态的观察（形状、颜色、质地、透明度等）（1）单个菌种的形态（2）菌种形态的观察2.革兰氏染色3.芽孢染色4.菌体大小测验5.枯草芽孢杆菌的生理生化鉴定一、淀粉水解一、原理许多芽孢杆菌产生淀粉酶，能将淀粉培养基中的淀粉水解成无色糊精等小分子物质或进一步水解为麦芽糖或葡萄糖，淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
芽孢杆菌培养基配方
芽孢杆菌培养基配方
芽孢杆菌（Bacillus）是一类常见的细菌属，具有广泛的应用和研究价值。
以下是一种常用的芽孢杆菌培养基的配方，称为Luria-Bertani培养基（LB培养基）：
1. 配方：
- 蛋白胨（tryptone）：10 g/L
- 酵母提取物（yeast extract）：5 g/L
- 氯化钠（sodium chloride）：10 g/L
- 琼脂（agar）（如果需要制备琼脂平板）：15 g/L
2. pH调节：
- 使用NaOH或HCl调节pH至约7.0（可以根据需要微调pH值）
3. 制备方法：
- 将蛋白胨、酵母提取物和氯化钠加入适量的蒸馏水中，充分溶解。
- 如果需要制备琼脂平板，将琼脂加入上述溶液中，加热搅拌使其溶解。
- 如果需要琼脂平板，将培养基分装至培养皿中，待凝固后，在室温下保存或在4摄氏度冷藏。
- 如果需要液体培养基，将培养基分装至培养瓶中，用适当的塞子或膜覆盖。
- 对于液体培养基，可通过高压灭菌或自动厌氧培养等
方法进行无菌处理。
LB培养基是一种常用的通用培养基，适用于很多细菌的培养和研究。
需要注意的是，具体的芽孢杆菌培养基配方可能因研究需求和菌株特性而有所不同。
因此，在具体的实验或应用中，建议根据需要进行适当的调整和优化。
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枯草芽孢杆菌常用培养基配方：
1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂
枯草芽孢杆菌原生质体的制备
1 培养枯草芽孢杆菌
取亲本菌株T4412、TT2 新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(CM)的试管中，36℃振荡培养14 h，各取1 mL 菌液转接入装有20 mL 液体完全培养基的250 mL 锥形瓶中，36℃振荡培养 3 h，使细胞生长进入对数前期，各加入25 u/mL 青霉素，使其终浓度为0.3 u/mL，继续振荡培养2 h。
2. 收集细胞
各取菌液10 mL，4000 r/min 离心10 min，弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液中，离心。
如此洗涤两次，将菌体悬浮10 mL SMM 中，每mL 约含108～109 活菌为宜。
3. 总菌数测定
各取菌液0.5 mL，用生理盐水稀释，取10-5、10-6、10-7 各1mL(每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基，36℃培养24 h 后计数。
此为未经酶处理的总菌数。
4. 脱壁
二株亲本菌株各取5 mL 菌悬液，加入5 mL 溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为100 ug/mL，混匀后于36℃水浴保温处理30 min，定时取样，镜检观察原生质体形成情况，当95%以上细胞变成球状原生质体时，用4000 r/min 离心10 min，弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5 mL 高渗缓冲液中。
立即进行剩余菌数的测定。
5. 剩余菌数测定
取0.5 mL 上述原生质体悬液，用无菌水稀释，使原生质体裂解死亡，取10-2、10-3、10-4 稀释液各0.1 mL，涂布于完全培养基平板上，36℃培养24～48 h，生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞。
计算酶处理后剩余细胞数，并分别计算二亲株的原生质体形成率。
原生质体形成率＝未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数。