固定剂的配方及性能介绍
常用细胞固定剂及其优缺点比较
经常使用细胞固定剂及其优缺点比较之樊仲川亿创作1、95%酒精：最经常使用的细胞学固定液，能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，但核蛋沉淀后，能溶于水，因此，经95%酒精固定的涂片，染色前没有需要经过水洗。
此固定液适用于苏木素-伊红染色和巴氏染色。
固定时间根据标本的分歧，时间也不尽相同，一般标本固定时间为15-30分钟，痰标本需要更长一些时间。
经过95%酒精固定的标本，细胞核保管较好，结构清晰，颜色鲜艳。
如果在95%酒精液内加入聚乙二醇更佳，可以呵护细胞免受空气干燥后的人工假象。
2、乙醚酒精液（1：1）：其效果与95%酒精相似，但由于乙醚有很强的吸水性和特有的刺激性气味，容易挥发，长期低浓度吸入，有头痛、头晕、疲倦、嗜睡、蛋白尿、红细胞增多等不良反应。
长期皮肤接触，可发生皮肤干燥、皲裂。
所以现在已经逐渐被95%酒精所代替。
3、甲醇：固定时间快，细胞收缩小，细胞核保管较好，结构清晰，染色鲜艳。
常作为穿刺细胞涂片的固定液。
对抗原保管较好，可作为细胞涂片免疫组化的固定液。
缺点是具有挥发性和毒性，大量接触与吸入对中枢神经有一定的伤害。
甲醇的毒性与其代谢产品甲醛和甲酸的蓄积有关。
以前认为毒性作用主要为甲醛所致, 甲醛能抑制视网膜的氧化磷酸化过程,使膜内不克不及合成ATP,细胞发生变性,最后引起视神经萎缩。
近年研究标明,甲醛很快代谢成甲酸,急性中毒引起的代谢性酸中毒和眼部损害，主要与甲酸含量相关。
4、冰醋酸：5%水溶液可作固定用。
不克不及沉淀白蛋白，但能沉淀核蛋白。
渗透性强，固定快，能使红细胞膨胀而破碎，常与其它液体配合使用。
5、无水酒精：对糖原保管较好，容易使细胞收缩，其性能与95%酒精相似，很少单独使用，一般只用于糖原的固定。
6、丙酮：为易挥发的无色液体，有刺激性气体。
可使蛋白质沉淀，渗透性强，细胞收缩严重，对核的固定差。
很少用于惯例细胞学的固定。
广泛用于酶组织化学中的各种酶的固定，也有人用于抗原的保管，作为细胞涂片免疫组化的固定液。
常用固定液及其配制
一、常用固定液及其配制固定液分单纯固定液和混合固定液。
1.甲醛（formaldehyde）是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。
易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37％～40％得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin）。
用作固定的浓度习惯为10％福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4％。
10％福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。
对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。
经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。
2.乙醇无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可作为脱水剂，对组织有硬化作用。
固定用一般是80%~95%浓度，乙醇渗透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后，仍能溶于水，因此核的着色不良。
3.中性甲醛液（混合固定液）甲醛（浓）120ml，加蒸馏水880ml,磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）4g，磷酸氢二纳（Na2HPO4）13g。
此液固定效果比单纯10％福尔马林要好。
4.AF液（混合固定液）95％乙醇90ml，甲醛(浓)10ml。
也有配方是95％乙醇85ml，甲醛（浓）10ml，冰醋酸5ml。
此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水。
以上4种固定液中，以中性甲醛为首选，其次为10％福尔马林，乙醇应尽量不用。
二、组织脱水脱水用的乙醇浓度一般从70％~75％开始，然后依次80％→95％→100％，即由低浓度逐步到高浓度。
脱水的时间与组织大小、厚薄有很大关系、组织厚大，脱水时间要长些；而小薄的组织脱水时间相对的可以短些。
组织脱水时间在低浓度乙醇中可以长些（如70％~80％），而在高浓度乙醇中要短些，这是因为高浓度的乙醇渗透力不强，延长脱水时间无益，相反高浓度乙易使组织收缩、变脆，致使以后切片和观察困难。
⑴70％乙醇1h。
⑵80％乙醇1h。
⑶95％乙醇Ⅰ1h。
⑷95％乙醇Ⅱ1h。
⑸95％乙醇Ⅲ1h。
常用固定液的配制
常用固定液的配制1. 福尔马林-醋酸-酒精固定液(FAA)50%或70%酒精90ml + 冰醋酸5ml + 福尔马林(37%~40%甲醛)5ml可用作固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类,也不适宜作细胞学研究。
幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，可防止材料收缩。
若材料坚硬，可略减冰醋酸，略增福尔马林。
若材料易收缩，可稍增加冰醋酸。
久置时另加入5ml甘油以防蒸发和材料变硬。
此液又可作保存液。
固定时间最多10h。
如果用在植物胚胎的材料上，改用下面的配方，效果较好：50%酒精89ml + 冰醋酸6ml + 福尔马林5ml2. 福尔马林-丙酸-酒精固定液（FPA）福尔马林5ml + 丙酸5ml + 70%酒精90ml固定一般的植物组织，通常固定8~24h，可长久保存。
3. 酒精-醋酸-氯仿固定液（卡诺固定液，Carnoy fixative）配方Ⅰ：纯酒精3份+ 乙酸1份配方Ⅱ：纯酒精6份+乙酸1份+ 氯仿3份配方Ⅲ：甲醇6份+乙酸1份+ 氯仿3份适用于植物组织和细胞学材料，为研究细胞分裂和染色体的优良固定液。
固定时间不宜过久。
4. 酒精-福尔马林固定液福尔马林2~6（6~10）ml + 70%酒精100ml固定植物一般组织，尤其适用于萌发的花粉管的固定。
通常固定24h，亦可长久保存。
5. 酒精-福尔马林-甘油固定液95%酒精150ml + 5%福尔马林100ml + 甘油50ml此液也可长期储存材料。
6. 铬酸-醋酸固定液根据固定对象的不同，可分为强、中、弱3种配方：（1）弱液配方：10%铬酸2.5ml + 10%醋酸5ml + 蒸馏水92.5ml（2）中液配方：10%铬酸7ml + 10%醋酸10ml + 蒸馏水83ml（3）强液配方：10%铬酸10ml + 10%醋酸30ml + 蒸馏水60ml弱液配方用在固定较柔软的材料，如藻类、苔藓和蕨类的原叶体等。
固定时间较短，一般为。
1h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟至12~24h数小时，最长可固定中液配方用于固定根尖、茎尖、未成熟子房和胚珠等。
固定剂 (2)
1.甲醛：非沉淀，渗透强，固定均匀组织收缩小。
固高尔基线粒体，糖。
含粘液时间长。
去除甲醛色素；Schridde,Verocay.2.重铬酸钾：有毒橘红色，固高尔基线粒体穿透快，固定的组织几乎完全不收缩，乙醇脱水后明显收缩，流水12-24h。
常用于混合固定液：Zenker,Helly,Maximov,Regaud.3.苦味酸：黄色，易燃易爆，穿透慢，组织收缩明显，无硬化，对脂肪和类脂无作用，可软化火棉胶，可使皮肤软化，固定时间＜24h，乙醇中加碳酸锂水或浓氨水去苦味酸产生的黄色。
4.升汞：穿透低，固蛋白质，临用加冰醋酸，用0.5%碘酒去汞，0.5%硫代硫酸钠脱碘。
5.醋酸：刺激气味无色液体，沉淀核蛋白，保存染色体6.铬酸：强氧化剂，固定的组织避光。
7.锇酸：强氧化剂，剧毒，电镜必须固定剂。
线粒体内质网固定，后流水洗12-24h8.丙酮：易挥发易燃，常用于酶的固定9.三氯醋酸：无色易潮解，易溶于醇和醚，良好的脱钙剂。
10.乙醇：固定兼脱水作用。
是还原剂，85-95%用于糖原，肝组织，阿米巴原虫尤文瘤染色。
渗透力差，组织收缩，易挥发和吸收水分。
11.B-5：醋酸钠升汞甲醛。
固定淋巴组织。
12.Bouin：外科标本良好固定液，结缔组织，对脂肪好，含脂肪的淋巴结核脂肪瘤，三色染色最好，胞核鲜明，胞质差，24h,有毒，乙醇洗，苦味酸：甲醛：冰醋酸15:5:113.Carnoy：染色体，DNA,RNA好，糖原尼氏体，糖原蓄积病，速度快，＜4h，冰醋酸氯仿无水乙醇。
14.Muller：缓慢，用于媒染和硬化神经组织，固定时间可以很长，过程需常更换液体，重铬，硫酸钠，蒸馏水。
15.Orth：胚胎，神经脂肪组织，临时配制，暗处固定，24h,固定液黑色不能再用。
水洗12-24h，重铬，硫酸钠，蒸馏水，甲醛用时加16.PFG：多肽类抗原，免疫电镜研究，对细胞抗原性结构保存好，对苯醌，多聚甲醛，戊二醛二甲胂酸钠缓冲液17.PLP,PLPD：过碘酸钠，富含糖类固定，6-8h，过碘酸盐，赖氨酸，多聚甲醛，磷酸缓冲液，PLPD配方PLP液，重铬酸钾，4°C固定36-54h18.Rossman:糖原固定12-24h95%乙醇洗，无水乙醇，苦味酸饱和液，甲醛19.Zenker：形态学常用固定，胞核胞质染较清晰，常三色染，免疫球蛋白染最好，横纹肌肉瘤恶性畸胎瘤，病毒包涵体尼氏小体，对含血量多的脾脏肺梗不合适，12-36h，脱汞。
固定液
1．经过固定的组织可保持在10%福尔马林或70%乙醇中。
2．染色前脱掉组织中的苦味酸①自来水冲洗②50%乙醇③或70%乙醇饱和碳酸锂
乙醇BOUIN’S液（DUBOSCQ-BRAZIL FLUID）
用途：用于固定肾活检，组织学制备固定液。
试剂：
乙醇Bouin’s贮存液:
80%乙醇750.0ml
甲醛300.0ml
步骤：
1．活检标本要立即放入Hollande’s固定剂中，标本容器上注明时间。
2．标本完成固定后保持在70%乙醇中。
3．不能让Hollande’s液固定的标本与磷酸缓冲福尔马林接触，否则会出现蓝色沉淀。
ORTH’S液
用途：用于证实肾上腺胞浆中嗜络微粒，这种证明可能对嗜络细胞瘤的诊断很重要。不是一种好的多用途的固定剂。
苦味酸5.0g
充分混合，液体稳定性2年，标明配制日期。
工作液：
贮存液70.0ml14.0ml
醋酸5.0ml10.0ml
使用前加醋酸。
固定时间：1～4小时。
步骤：
1．把新鲜组织标本放进乙醇Bouin’s工作液中。
2．充分固定后把组织移到70%的乙醇中。
HOLLANDE’S固定液
用途：作为胃肠和前列腺活检基本固定剂，这种固定剂让H.E染色更清晰，它“软化”组织避免切片脆裂。苦味酸会溶解掉红细胞。
ZENKER’S液
用途：Zenker’s液是一种核固定剂。该液是细胞学及病理学常用的固定剂，对细胞核固定最好，最适合于造血和网状内皮组织的固定。也常作为三色染色的组织固定剂，在三色染色中还作为媒染剂使用。但对于含血量较多的组织标本尽量不要选Zenker’s液固定。
试剂：
Zenker’s贮备液：
常用固定液的性质、用途
常用固定液的性质、用途和配置1．单一固定液的性质和用途（1）乙醇（C2H5OH）（ethylalcohol）：又名酒精，可沉淀白蛋白、球蛋白、核蛋白，后者易溶于水，所以经酒精固定的标本对细胞核染色不良。
酒精可溶解脂肪、类脂体，所以不能用酒精固定脂肪。
酒精可沉淀肝糖，但仍可溶解于水，因此肝糖经酒精固定后不能在低于70％酒精中保存。
单独固定使用酒精的浓度应为95—100％。
无水酒精渗透力较差，并且能使组织收缩，在与醋酸、氯仿混合使用时，可增强它们的穿透力。
酒精除固定作用外，还具有硬化和脱水的作用，固定后的组织可保存于70％酒精中，所以酒精在制片过程中用途很大。
无水乙醇容易挥发，又容易吸收空气中的水分，所以瓶盖必须塞紧，为了吸去其中水分，最好在无水乙醇瓶内放入少量无水硫酸铜粉末。
酒精是一种还原剂，不能与重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合使用。
（2）甲醛（HCHO）（formeldehyde）：是一种气体，溶于水成为甲醛水溶液或称福尔马林，一般使用浓度为10％福尔马林（formalin）液，其配法是取市售的甲醛液10ml 与90ml 蒸馏水混合即可，实际上其含量只有4％甲醛。
这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。
甲醛不能沉淀白蛋白及核蛋白，但能与蛋白质化合。
它是一种应用广泛，使用简单的固定液，具有穿透力强、固定均匀、组织收缩小、硬度适当，适用于一般器官组织的固定及保存。
尤其对脂肪、神经组织固定效果较好。
更适于病理组织的制片及大体积标本的保存，一般组织需固定24 小时以上，固定后的组织可移入50％酒精中逐步脱水。
甲醛是一种强还原剂，不能与铬酸、重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合，因极易被氧化为甲酸。
在配混合固定液时，如海利氏液等需临用前再加入，24 小时后失效。
甲醛由于长期贮存，特别是低温气候，容易产生多聚甲醛，即溶液中的白色沉淀，在高温下又成为甲醛。
不纯的甲醛易产生甲酸，使溶液变为酸性，影响核的染色。
所以在备用的福尔马林中加入小量的醋酸钙、碳酸镁或大理石作为中和剂。
细胞固定剂及性能
常用细胞固定剂及其性能1、95%酒精是最常用的细胞学固定液，能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，但核蛋沉淀后，能溶于水，因此，经95%酒精固定的涂片，染色前没有必要经过水洗。
此固定液适用于苏木素-伊红染色和巴氏染色。
固定时间根据标本的不同，时间也不尽相同，一般标本固定时间为15-30分钟，痰标本需要更长一些时间。
经过95%酒精固定的标本，细胞核保存较好，结构清晰，颜色鲜艳。
如果在95%酒精液内加入聚乙二醇更佳，可以保护细胞免受空气干燥后的人工假象2、乙醚酒精液（1：1）：其效果与95%酒精相似，但由于乙醚有很强的吸水性和特有的刺激性气味，容易挥发，长期低浓度吸入，有头痛、头晕、疲倦、嗜睡、蛋白尿、红细胞增多等不良反应。
长期皮肤接触，可发生皮肤干燥、皲裂。
所以现在已经逐渐被95%酒精所代替p3、甲醇：固定时间快，细胞收缩小，细胞核保存较好，结构清晰，染色鲜艳。
常作为穿刺细胞涂片的固定液。
对抗原保存较好，可作为细胞涂片免疫组化的固定液。
缺点是具有挥发性和毒性，大量接触与吸入对中枢神经有一定的伤害。
甲醇的毒性与其代谢产物甲醛和甲酸的蓄积有关。
以前认为毒性作用主要为甲醛所致, 甲醛能抑制视网膜的氧化磷酸化过程,使膜内不能合成ATP,细胞发生变性,最后引起视神经萎缩。
近年研究表明,甲醛很快代谢成甲酸,急性中毒引起的代谢性酸中毒和眼部损害，主要与甲酸含量相关4、冰醋酸：5%水溶液可作固定用。
不能沉淀白蛋白，但能沉淀核蛋白。
渗透性强，固定快，能使红细胞膨胀而破碎，常与其它液体配合使用。
5、无水酒精：对糖原保存较好，容易使细胞收缩，其性能与95%酒精相似，很少单独使用，一般只用于糖原的固定。
6、丙酮：为易挥发的无色液体，有刺激性气体。
可使蛋白质沉淀，渗透性强，细胞收缩严重，对核的固定差。
很少用于常规细胞学的固定。
广泛用于酶组织化学中的各种酶的固定，也有人用于抗原的保存，作为细胞涂片免疫组化的固定液。
丙酮具有挥发性和毒性，大量接触与吸入对肝、肾及中枢神经有一定的伤害。
二甲基聚硅氧烷固定剂_理论说明
二甲基聚硅氧烷固定剂理论说明1. 引言1.1 概述在现代工业制造领域中，固定剂被广泛应用于各种材料的加工和改良过程中。
而二甲基聚硅氧烷固定剂作为一种重要的功能性材料，其应用范围也逐渐扩展。
本文旨在深入探讨二甲基聚硅氧烷固定剂的理论原理和机制，进一步揭示其在实验研究中的表现及结果分析，并总结主要发现，探索未来可能的研究方向。
1.2 文章结构文章分为五个部分。
首先是引言部分，对整篇文章进行概述和背景介绍。
接着是二甲基聚硅氧烷固定剂的理论说明部分，包括化学组成和性质以及工业应用领域的讨论。
然后是理论原理和机制部分，详细解析了二甲基聚硅氧烷的结构特点、固定剂作用机制以及影响固定效果的因素等内容。
紧接着是实验研究及结果分析部分，在该部分我们将针对实验设计与方法、研究结果与讨论以及结果分析与实际应用进行详细的探讨。
最后是结论部分，总结本文的主要发现，并探讨二甲基聚硅氧烷固定剂研究的局限性和未来可能的研究方向。
1.3 目的通过本文的撰写，旨在提供关于二甲基聚硅氧烷固定剂理论说明的全面解读，明确其化学组成和性质、工业应用领域以及固定剂作用机制等方面的知识。
同时，本文将展示实验研究和结果分析，为进一步了解和应用二甲基聚硅氧烷固定剂提供有价值的参考。
最终，本文将总结主要发现并探讨未来可能的研究方向，为相关领域的学术研究提供指导和启示。
2. 二甲基聚硅氧烷固定剂的理论说明2.1 背景介绍:二甲基聚硅氧烷固定剂是一种常用的化学品，被广泛应用于各个工业领域。
它具有良好的黏附性和稳定性，可以将不同材料粘合在一起或者将物体固定在表面上。
该固定剂在建筑、汽车制造、纺织、电子等行业得到了广泛应用，并取得了显著的效果。
2.2 化学组成和性质:二甲基聚硅氧烷固定剂主要由二甲基聚硅氧烷这一特殊化合物构成。
这种化合物具有高分子量和具体的结构特点，在室温下呈现出液态状态。
它具有良好的流动性和可溶性，可以与不同的材料相容，形成一个坚固而稳定的结合层。
固定
固定液的使用当前，应用于固定试剂的种类较多，它们对于固定不同的组织成分起着不同的作用，因此我们在使用时应该了解不同固定剂的效能，才能合理的固定组织。
根据Bencrof t的分类法，将不同的固定剂分为四种类型：Ⅰ类：醛类，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。
Ⅱ类：氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬酸钾等。
Ⅲ类：蛋白变性类，甲醇，乙醇，醋酸等。
Ⅳ类：其他，氯化汞，苦味酸等。
[5]上述四种类型的固定剂，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技术方面中用到。
下面根据使用的需要，将着重介绍几种常用的固定剂。
（1）甲醛甲醛商品名为福尔马林，一般市售的含甲醛37—40%，由甲醛气体饱和于水而成，比重为1.12。
它也可以稳定的固体形式存在，它的成分为高分子量的聚合体，称为多聚甲醛。
甲醛溶液较难纯化，在每批市售商品中，都含有不少的杂质如甲醇，这种在组织化学方法当中，能使酶钝化，影响其反应。
甲酸，它可使固定液变酸，在陈列标本或长时间固定的组织，由于酸的作用，往往细胞核染色欠佳。
甲醛有效固定作用的要点是，在蛋白质末端基团之间形成交联链。
参与甲醛固定蛋白质的基团，主要为氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环。
甲醛与组织蛋白类的反应是多样和复杂的，因为它能和多种不同的功能基团结合，在多数情况下在其间形成桥键。
甲醛有这种交联的功能，也是它的缺点，在用甲醛固定过的组织中，需要做免疫组化的，往往提倡用酶消化或热抗原修复法来使蛋白与甲醛交联的醛键断裂开，以利于后来的染色。
甲醛可配成简单的或混合的固定液，最简单和最容易掌握的方法，就是取10ml甲醛液，加水90ml，这就是10%的福尔马林.当然,现在使用的固定液要求较为严格些,最好是使用缓冲福尔马林固定液,这将有利于后来的免疫组化染色的需要.从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:1. 组织收缩较少,损伤少,保存固有物质好.2. 固定均匀,穿透力强.3. 能使组织硬化,增进组织弹性,有利于切片.4. 能保存脂肪及脂类物质.5. 成本较低.虽然甲醛有上述的优点,但这都是相对而言,任何物质都不可能十全十美的,它也有许多缺点:1. 杂质含量较多,如甲醇,可钝化酶类,影响反应.2. 含有微量甲酸,导致固定液酸变,影响染色.3. 可产生福尔马林色素,影响观察.4. 不能固定尿酸和糖类物质.5. 容易挥发,污染环境,可导致标本干涸.6. 可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验,组织用甲醛固定后在流水中冲洗5小时后,仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合,但需要经过长时间的流水冲洗(24天的冲洗)方能除去.可见存在于组织上的甲醛是不可能除去的.因为临床活检不可能有这么长的时间来冲洗组织.因此要特别指出的是,在其后的各种技术操作中,要特别注意到甲醛的存在,必须要想办法除去它,否则将会给各种染色造成影响,甚至导致失败。
固定液
固定液2010-03-15 12:55:52| 分类：实验小技术|字号订阅几种固定液：1. F.A.A固定液又称标准固定液,万能固定液.适用于一般根,茎,叶,花药,子房组织切片.在植物形态解剖研究上应用极广,此固定液最大优点是兼有保存剂作用,但对染色体的观察效果较差.配方:福尔马林(38%甲醛)5 ml: 冰醋酸5ml:70%酒精90 ml幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精,可防止材料收缩;还可加入5 ml甘油(丙三醇)以防蒸发和材料变硬.2. F.P.A固定液配制时用正丙酸代替冰醋酸,三种成分的比例同上液.效果比F.A.A好.3. 卡诺氏固定液(Carnoy's Fluid) 适用于一般植物组织和细胞的固定,常用于根尖,花药压片及子房石蜡切片等.有极快的渗透力,根尖材料固定15—20min即可,花药则需1h左右,此液固定最多不超过24h,固定后用95%酒精冲洗至不含冰醋酸为止;如果材料不马上用,需转入70%酒精中保存.配方:无水酒精3份:冰醋酸1份4.鲍因(Bouin)液：苦味酸饱和水溶液（0.9~1.2%）75 mL, 甲醛（37~40%）25 mL, 冰醋酸5 mL。
此液一般在临床用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。
5. 4%多聚甲醛固定液组织细胞中的大多数肽类激素、蛋白物质为水溶性，在进行免疫组织化学和免疫细胞化学研究之前必需固定。
由于肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。
在免疫组织化学和免疫细胞化学研究中，多聚甲醛（Paraformaldehyde）仍旧是实验室目前最常用的固定剂之一。
该固定剂较为温和，能很好地保存组织的抗原性和细微结构，适于组织标本和细胞片的较长期保存，非常适合组织和细胞的光镜免疫化学研究。
本产品为4%多聚甲醛的水溶液，广泛地用于免疫组织化学(IHC)和免疫细胞化学（ICC)实验中的组织和细胞的固定。
保存条件室温或4℃，密封保存，半年以上。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一些固定剂的配方及性能介绍固定，就是用某种方法双最快的速度将细胞杀死并保持组织及细胞原有的形态结构及其组成。
固定在组织制片中极为重要，因为机体死后血液循环停止，细胞逐渐死亡，如不立即处理，则细胞内的酶（水解酶）会使蛋白质分解为氨基酸渗出细胞，使细胞溶解破坏，组织变形，在无冰藏的条件下，更可因其病原微生物的迅速繁殖而腐败，组织结构破坏，不利于形态学的诊断。
组织固定的目的为1、迅速防止组织、细胞死后变化，防止自溶与腐败，以保持和细胞与正常生活时的形态相似；2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶解物质，以保持它原有的结构与生活时相仿；3、使组织中的各种物质沉淀和凝固起来而产生不同的折光率，造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察；4、固定剂兼有硬化作用，使组织硬化，增加组织硬度，便于制片；5、防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有的形态结构；经过固定的组织，能对染料产生不同的亲和力而着色清晰，便于辨认。
为了能够达到固定的目的，固定剂必须具备以下的性质和条件：1、迅速渗入组织而固定原生质，使短期解剖的组织细胞形态不至于有较大变化；2、固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定；3、使组织细胞中不至于因固定引起人为的改变；4、在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不至于因以后的处理，而使固定后的原生质变形；5、尽可能避免使组织膨胀或收缩（不致改变原生质原来的体积）；6、能使细胞内的成分（蛋白质）凝固或沉淀下来；7、增加细胞内含物的折光度，易于鉴别，增加媒染作用和染色作用；8、使细胞变硬，适于切片，但又不使材料太坚硬或松脆；9、使组织充分固定，便于保存。
[1][2]下面我们介绍中华医学会病理分会推荐的几种常用固定剂的性能[3]：1、4%中性甲醛（10%中性福尔马林）固定液配方：甲醛（40%）100ml，无水磷酸氢二钠6.5g，磷酸二氢钠4. 0g，蒸馏水900ml。
福尔马林不能使蛋白质及核蛋白凝固，但能保存脂类，可用于高尔基体、线粒体的固定，是糖的保护剂。
对大多数抗原物质保存较好，对细胞膜的通透性有影响，可能使某些大分子抗原失去活性。
福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩较少。
2、乙醇-甲醛（酒精-福尔马林，AF）固定液配方：甲醛（40%）100ml，95%乙醇900ml。
酒精可以凝固蛋白质，但不能沉淀核蛋白，能溶解大部分脂类。
酒精渗透速度快，胶水性强。
除了固定作用外，还具有硬化和脱水作用。
缺点是渗透力差，能使组织收缩，易挥发，容易吸收空气中的水分。
酒精是一种还原剂，能被氧化成醋酸，不能与铬酸、锇酸及重铬酸钾等氧化剂配合成固定剂。
AF液兼有脱水作用，对皮下组织中肥大细胞固定好。
3、Carnoy固定液配方：无水乙醇60ml，氯仿30ml，冰醋酸10ml。
醋酸，又称乙酸、冰醋酸。
固定组织常用5%的溶液，能沉淀核蛋白，不能沉淀白蛋白、球蛋白，不能保存糖，也不能固定脂质，可使染色体保存较好。
其穿透力强，渗透快。
其缺点是使组织膨胀，特别对胶原纤维及纤维蛋白，高浓度的醋酸易破坏线粒体和高尔基体。
Carnoy液能固定胞浆和胞核，尤其适宜于染色体等。
常用于粮原及尼氏体的固定，对显示DNA、RNA的效果好。
固定液可防止乙醇的硬化及收缩作用，增加渗透力，特别适合外膜致密不易透入的组织。
4、Zenker固定液配方：升汞5.0g，重铬酸钾2.5g，硫酸钠1.0g，蒸馏水100ml。
升汞（HgCl2），能使蛋白质及核酸沉淀，对脂类及多糖无固定作用，也不破坏脂类及多糖。
其渗透速度快，穿透力较弱，对组织收缩较小。
组织固定后染色质强烈与碱性染料结合，胞质内的结构也能被酸性或碱性染料着色。
重铬酸钾是强氧化剂，和合固定材料的浓度为1-3%，本身不能沉淀蛋白质，但可使蛋白质产生沉淀，未酸化的虽不能沉淀蛋白质，但可使蛋白质变为不溶性，保持与生活状态相仿，能固定类脂体，所以可以固定高尔基体、线粒体、脂肪，能溶解染色体，所以对核染色不良。
酸化的使胞质及胞核沉淀呈网状，保存染色体，破坏线粒体。
Zenker固定液能使细胞核和细胞浆染色较为清晰。
对细胞质固定好，显示某些细胞质内特殊颗粒有独特优越性，对胰岛和垂体前叶各种细胞的显示效果好，对骨髓等造血器官的固定效果好，红细胞可得到良好保存，对心肌的闰盘保存也有良好效果。
5、Bouin固定液配方：饱和苦味酸水溶液（约1.22%）75ml，甲醛（40%）25ml，冰醋酸5ml。
苦味酸适合固定材料的浓度为饱和水溶液，能沉淀蛋白，对脂类无作用，不能固定多糖，渗透力弱，对组织收缩明显，不使组织硬化，固定组织容易着色。
Bouin固定液渗透力强，对组织固定均匀且收缩小，染色效果好，核着色鲜明，但细胞质着色差。
用于固定大多数器官和组织，适用于结缔组织染色。
6、B5（醋酸钠-升汞-甲醛）固定液：无水醋酸钠 1.25g，升汞6.0g，蒸馏水90ml，使用前加入甲醛1 0ml。
此液临时配制，适于固定胰腺组织，对鉴别胰岛细胞较好。
7、丙酮固定液丙酮能使蛋白质沉淀，对多糖无固定作用，对核固定欠佳，渗透力强，使组织剧烈收缩。
易挥发，易燃。
广泛用于酶组织化学方法中各种酸的固定。
在工作及实验中我们也可能用与下面一些固定液[4]：1、Altmann液配方：5%重铬酸钾水溶液10ml，2%锇酸水溶液10 ml。
用于固定线粒体，脂肪和白细胞。
2、Aoyama液配方：氯化镉1g，甲醛15ml，蒸馏水85ml。
适宜于固定高尔基复合体。
3、Champy液配方：3%重铬酸钾70ml，1%铬酸70ml，2%锇酸4 0ml。
用于固定线粒体和高尔基复合体。
4、Dafano液配方：硝酸钴1g，甲醛15ml，蒸馏水100ml。
用于固定高尔基复合体。
5、ECD-G液配方：0.05mol/L PB 500ml，0.01mol/L PBS 500 ml，Tris14g，浓盐酸少许，ECD10g，25%戊二酫 3.5ml。
对蛋白质的固定有良好作用，用于培养细胞免疫细胞免疫电镜的良好固定液。
6、Flemming液配方：强渡：1%铬酸水溶液75ml，2%锇酸水溶液20ml，冰醋酸5ml。
弱本1%铬酸水溶液25ml，1%冰醋酸（用前加入）10ml，蒸馏水60ml。
适宜于高尔基复合体和线粒体的固定，强液用于固定脂肪组织。
7、Goldsmith液配方：1%铬酸水溶液15ml，2%重铬酸水溶液4ml，冰醋酸1ml。
对鸟类胚胎固定佳。
8、Heidenhain液配方：升汞4.5g，氯化钠0.5g，蒸馏水80ml，三氯醋酸2g，冰酸酸4ml，甲醛20ml。
对含较厚角质层的组织固定较好，如皮肤，蛔虫、昆虫幼虫等。
9、Houseby液配方：甲醛10ml，蒸馏水90ml，对苯二酚7g。
对细胞质的微细结构保存好。
10、Kanovsky液配方：25%戊二醉醛10ml，40%甲醛5ml，0.2 mol/L二甲胂酸钠缓冲液49ml，无水氯化钠50mg，蒸馏水33.5ml。
适用于免疫电镜标本的固定，对细胞抗原性和细胞微结构的保存比用戊二酫好。
11、Maximow液配方：重铬酸钾2.5g，升汞5g，蒸馏水100ml，中性甲醛10ml。
此液用甲酫代替Zenker液中的冰醋酸，对细胞质固定好，也可用于造血器官等组织的固定。
12、Methacarn液配方：甲醇60ml，氯仿10ml，醋酸10ml。
适用于某些癌基因蛋白质产物和一些抗原的固定，如P53，PCNA的固定。
13、Romeis液配方：升汞饱和水溶液50ml，5%三氯醋酸水溶液40ml，甲醛10ml(用时加入)。
可作为一般固定液应用，也可用于其他固定液固定后的再固定。
有利于Heidenhain钱苏木精染色，有后媒染作用。
14、Rossman 配方：无水乙醇苦味酸饱和液90ml，甲醛10ml。
对糖原固定好。
15、Verhoeff液配方：甲醛水溶液10ml，95%酒精48ml，蒸馏水36ml，苦味酸1g。
用于固定眼球。
16、4%对苯醌配方：对苯醌4g，0.05mol/L PBS 100ml。
对抗原保存好，但对细胞超微结构有影响，一般应与醛类固定液混合使用。
17、 1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）配方：多聚甲醛40g，0.1mol/L磷酸缓冲液1000ml。
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。
另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。
18、PLP液（过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液配方：过碘酸钠，赖氨酸盐酸盐（或盐酸赖氨酸），多聚甲醛，蒸馏水。
配制方法：（1）贮存液A（0.1mol/L赖氨酸-0.5mol/l Na3PO4,pH7.4）：称取赖氨酸盐酸盐1.827g溶于50ml蒸馏水中，得0.2mol/L的赖氨酸盐酸盐溶液，然后加入Na2HPO4至0.1mol/L，将pH调至7.4，补足0. 1mol/L的PB至100ml，使赖氨酸浓度也为0.1mol/L,4℃冰箱保存，最好两周内使用。
此溶液的渗透浓度为300mOs mmol/L/kg。
（2）贮存液B（8%多聚甲醛溶液）：称8g多聚甲醛加入100ml蒸馏水中，配成8%多聚甲醛液（方法见前）。
过滤后4℃冰箱保存。
（3）临用前，以3份A液与1份B液混合，再加入结晶过碘酸钠（NaIO4），使NaIO4终浓度为2%。
由于AB两液混合，pH从约7.5降至6.2，故固定时不需再调p H值。
固定时间为6～18h。
该固定剂较适于富含糖类的组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。
其机制是借助于过碘酸氧化组织中的糖类形成醛基，通过赖氨酸的双价氨基与醛基结合，从而与糖形成交联。
由于组织抗原绝大多数都是由蛋白质和糖两部分构成，抗原决定簇位于蛋白部分，故该固定剂有选择性地使糖类固定，这样既稳定了抗原，又不影响其在组织中的位置关系。
19、甲醛-醋酸钠（钙）-升汞液配方：甲醛10ml，醋酸钠或醋酸钙2g，升汞6g，蒸馏水90ml。
用于固定胰腺组织，对鉴别胰岛细胞效果好。
20、甲醛-钙液配方：甲醛10ml，无水氯化钙1g，蒸馏水90ml。
特别适用于固定脂肪组织和组织化学染色。
21、甲醛-生理盐水配方：甲醛10ml，生理盐水90ml。
就用广泛的一种固定液，可保护脂类和细胞核。
在酸性染色或三重染色之前可作二次固定。
22、甲醛-溴化铵液配方：甲醛15ml，溴化铵2g，蒸馏水85ml。
为脑组织的良好固定液，可用于镀银和镀金染色。
23、乙醚-洒精液配方：95%洒精49.5ml，乙醚49.5ml，冰醋酸1ml。
固定液渗透性强，固定效果好，用于细胞涂片等固定。