培养基及其配制
培养基及配制
有机物和激素类等。其中维生素、氨基酸类可以分别
配制，也可以混在一起 配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和SO42-， Ca2+、Mg2+和PO43- 一起溶解后，会产生沉淀，一定 要充分溶解再放入母液中。 各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。 母液配好后放冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。
4.2 细胞分裂素（CTK）
（1）种类：Kt---激动素
BAP---苄氨基嘌呤 2－iP---异戊烯腺嘌呤 ZT-玉米素 TDZ
（2）作用：启动脱分化、细胞增殖，诱导愈伤组织芽分化、芽 Nhomakorabea殖，丛生芽。
（3）浓度：0.05－10.0mg/L （4）配制：溶于稀酸或稀碱
激素配比模式
生长素与细胞分裂素：它们的比例决定着发育的方向，是愈伤 组织、长根还是长芽。
6.2 抗生素
作用：抑制内生菌； 种类：青霉素、链霉素、庆大霉素、利福平、 卡那霉素等， 用量：用量5~20mg/L 注意：抗生素对组织生长有抑制作用，使 用要慎重。
多数需过滤灭菌。
6.3 抗氧化物
1)常用抗氧化剂：半胱氨酸、VC 2)用量：50－200mg/L， 3)作用：防止氧化 4)注意：可用抗氧化剂洗 涤外植体伤口表面。
不凝原因：①pH<5不凝；②长时间高压灭菌； ③长期存放，易变质；④厂家不同，杂质含量不同 ⑤配制时融解不充分，分装不均匀；
5.2.其它
玻璃纤维 滤纸桥 海绵、卡拉胶等
6 辅 助 性 物 质
6.1 活性炭 6.2 抗氧化物 6.3 抗生素
6.1 活性炭
1)作用：具吸附作用； • 茎尖初代培养可防褐化；促进新梢增殖（浓度0.1 -0.2%）； • 促进生根,根避光生长； • 防止组培苗玻璃化（浓度0.3%）； • 有利于胚胎培养。 2)常用浓度：0.5－10g/L 3)注意：活性炭具副作用。选择 吸附性差，导致营养损耗和 pH↓， 应适当调高营养物质与激素水平， 并加大Agar用量。
植物组培培养基及其配制
植物组培培养基及其配制培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。
因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。
一、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。
蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。
3.维生素在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B 族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。
4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。
最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。
另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。
5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。
如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。
(2)细胞分裂素。
如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。
(3)赤霉素。
组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。
二、常用培养基配方及其特点1.常用培养基配方组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。
培养基配制
茎尖培养可看作是这方面较为特殊的一种方式。它采用极其幼嫩的顶芽的茎 尖分生组织作为外植体进行接种。在实际操作中，采用包括茎尖分生组织在内 的一些组织来培养，这样便保证了操作方便以及容易成活。 用靠培养定芽得到的培养物一般是茎节较长，有直立向上的茎梢，扩繁时主要 用切割茎段法，如香石竹、矮牵牛、菊花等。但特殊情况下也会生出不定芽，形 成芽丛。 2）不定芽的发育 在培养中由外植体产生不定芽，通常首先要经脱分化过程，形成愈伤组织的细 胞。然后，经再分化，即由这些分生组织形成器官原基，它在构成器官的纵轴 上表现出单向的极性（这与胚状体不同）。多数情况下它形成芽，后形成根。 另一种方式是从器官中直接产生不定芽，有些植物具有从各个器官上长出不 定芽的能力如矮牵牛、福禄考、悬钩子等。当在试管培养的条件下，培养基中 提供了营养，特别是提供了连续不断植物激素的供应，使植物形成不定芽的能 力被大大地激发起来。许多种类的外植体表面几乎全部为不定芽所覆盖。在许 多常规方法中不能无性繁殖的种类，在试管条件下却能较容易地产生不定芽 而再生，如柏科，松科，银杏等一些植物。许多单子叶植物储藏器官能强烈地 发生不定芽，用百合鳞片的切块就可大量形成不定鳞茎。 在不定芽培养时，也常用诱导或分化培养基。用靠培养不定芽得到的培养物， 一般采用芽丛进行繁殖，如非洲菊、草莓等。
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（4）配制MS铁盐母液
一般配制成100倍MS铁盐母液。 依次称取 EDTA二钠 3.73g FeSO4·7H2O 2.78g
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐 母液，共8种母液。 激素母液的配制 各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用
第三章培养基及其配制
⑷2，4—D(2，4—二氯苯氧乙酸)起动能力比IAA高10倍， 特别在促进愈伤组织的形成上活力最高，但它强烈抑制芽 的形成，影响器官的发育。适宜的用量范围较狭窄，过量 常有毒效应。
5.2细胞分裂素类
细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化和茎、苗的增殖，而 在生根培养时使用较少或用量较低。这类激素是腺嘌吟的 衍生物，包括6－BA(6－苄基氨基嘌呤)、Kt (kinetin 激动 素)、Zt (zeatin 玉米素)等，细胞分裂素0.05－10mg／L。 其中Zt活性最强，但非常昂贵，常用的是6—BA。
（三）母液配制的药品与器材
1、药品：配制MS培养基所需的药品、生长调节 物质、蒸馏水、0.1mol/L的NaOH，0.1mol/L的 HCL 2、器材：各类天平、烧杯、容量瓶、量筒、 母液瓶、标签、冰箱等。
（四）母液配制（以MS培养基为例）
无机大量 母液
有机物母液
激素母液
无机微量母液
铁盐母液
配制MS培养基时母液的计算Fra bibliotekGA (赤霉素)： 有20多种，生理活性及作用的种类、部位、效应等各有不 同、培养基中添加的是GA3，主要用于促进幼苗茎的伸长 生长，促进不定胚发育成小植株；赤霉素和生长素协同作 用，对形成层的分化有影响，当生长素／赤霉素比值高时 有利于木质部分化，比值低时有利于韧皮部分化；此外， 赤霉素还用于打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌 发。一般在器官形成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体 的生长。
在培养基中添加细胞分裂素有三个作用：
①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。 ②促进细胞分裂与扩大。 ③抑制根的分化。
5.3激素配比模式
生长素与细胞分裂素：它们的比例决定着发育的方向，是愈伤 组织、长根还是长芽。如为了促进芽器官的分化，应除去或降 低生长素的浓度，或者调整培养基中生长素与细胞分裂素的比 例。 高：有利于根的形成和愈伤组织的形成； 适中：有利于根芽的分化； 低：有利于芽的形成
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文培养基是一种用于微生物培养的基础物质，能够为微生物提供所需的营养和环境条件。
不同的微生物在其生长过程中需要不同的养分和环境条件，因此培养基的配方需要根据微生物的需求来进行调整。
下面是几种常见的培养基配方。
1.大肠杆菌液体培养基配方：-蛋白胨或复合氮源：10g-酵母浸出物：5g-葡萄糖：1g-NaCl：5g-K2HPO4：2g-MgSO4：0.2g-pH调节至7.0后加水至1000mL2.牛心提取物琼脂糖培养基配方：-牛心提取物：3g-高级琼脂糖：15g-葡萄糖：10g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL3.玉米浸出物琼脂糖培养基配方：-玉米浸出物：4g-高级琼脂糖：15g-酵母浸出物：1g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL4.LB琼脂糖培养基配方：-液体LB培养基：10mL-高级琼脂糖：15g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL 5.血寒养基配方：-羊血：50mL-肉浸出物：3g-酵母浸出物：3g-肉汤培养基：1L-红细胞素：5g-高级琼脂糖：3g-pH调节至7.0后加水至1000mL6.厌氧培养基配方：-肉浸出物：5g-酵母浸出物：5g-NaCl：5g-蒸馏水：900mL- 加入0.1%的L-cysteine：10mL-pH调节至7.0后用氮气替换空气注意事项：-培养基中的成分应严格按照配方比例加入，并保持无菌。
-配制好的培养基需要高温高压灭菌以保证无菌。
-不同的微生物可能对一些成分非常敏感，需要根据实际情况进行微调。
-培养基的pH值应根据微生物环境要求进行调整，一般在7.0左右。
-配好的培养基应存放在4℃的冰箱中，避免阳光直射以防止成分分解。
这只是一些常见的培养基配方，不同的微生物有不同的需求，可以根据具体的情况进行配方的调整。
在实际使用中，还需要根据微生物的特性和实验目的来选择合适的培养基。
植物组织培养培养基及其配制
（四）天然复合物
• 其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、
酶等一些复杂化合物。它对细胞和组 织的增殖与分化有明显的促进作用，
于双子叶植物特别是木本植物。
• (3) White培养基 1943年，White，培养番茄根尖。 • 特点：无机盐数量较低，适于生根培养。
（养4。）N6培养基 1974年，朱至清等，水稻等禾谷类作物花药培
广特泛点应：用成于分小较简麦单、，水K稻N及O其3和他（植N物H4的）花2S药O4培含养量和高其。他在组国织内培已 养。
种代谢活动，对生长、分化等有很好的促 进作用。
• V活B力l(盐有酸重硫要胺作素用)。：对愈伤组织的产生和生
• VB6(盐酸吡哆醇)：能促进根的生长。 • Vpp(烟酸)：与植物代谢和胚的发育有一定
关系。
• Vc（抗坏血酸）：有防止组织变褐的作用。 (酚类物质-醌)
一般用量：0．1—1．0mg／L。有时用量 较高。有时还使用生物素、叶酸、VB12等。
提供能量，而且也促进对N的吸收，增加蛋白质在植物体中的积 累。
• (3)K • 作用：对碳水化合物合成、转移、以及氮素代
谢等有密切关系。一般为1—3mg／L为好。 • 供应物质：KCI、KN03等盐类提供。
• (4)Mg、S和Ca • Mg-是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；
S-是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。 • Ca-是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、
常用的培养基及特点如下：
• (1) MS培养基 1962年，Murashige和Skoog，培养烟草细胞。 • 特点：无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液；硝酸
配置培养基的步骤
配置培养基的步骤1、准备培养基：根据培养细菌或霉菌所需养分，准备添加合适量的养分和水份。
可以选用已准备好的快速培养基，或者通过实验中调整成分组成和比例来配置不同养分质量和浓度的培养基。
2、配料步骤：根据配方要求，根据具体实验配置合适的原料质量和量，以谷物粉状的一般原材料为例，如糖、蛋白质、粘粉和滑石粉等，分别从各种原料容器中取出适量原料，放入适当容器中混合，组装成一体。
3、热处理：将搅拌好的原料放入加热装置中，在70℃-80℃的温度下持续加热和搅拌（根据原料不同可能略有改变）10分钟，以除去杂质和有害物质，保证培养基的质量。
4、冷却：培养基热处理搅拌完毕后，送入冷却设备中进行冷却。
控制水温，使温度从100℃～30℃降低，当培养基温度降至30℃～35℃时，可尽快停止加热，不要使培养基在高于50℃的温度下停留时间太长。
5、灭菌：当培养基温度降至50℃以下后，放入灭菌设备中进行滤过灭菌，灭菌温度设置为95℃～105℃，灭菌有功率设置为12W / cm2。
培养基中优先蒸馏或吸附的微生物在温度较低的情况下，然后再进行灭菌。
6、成型：灭菌完毕后，将其中的培养基通过滤装置进行筛选，排除大的杂质，然后将培养基倒入模具中成型，并调节压力，以控制成型品的形状和大小，达到要求。
7、灌装：灌装时，将培养基放入适当的容器，如瓶、盒等，灌装至一定位置，然后进行装封，保证培养基充分被封口，以保持产品质量稳定，防止空气中的细菌进入塑料袋，从而防止培养基污染。
8、包装：通过灌装完毕后，将培养基用内衬袋和外衬袋包装，方便产品的运输和存储，防止空气和光线的污染，同时还可以防止外界杂质进入。
9、检测：将包装完毕的培养基置于检测室中，进行分析检测。
检测产品质量及其各项性能，主要包括微生物活性、消毒效果、润湿性、颗粒大小等。
检测结果与产品要求一致时，即证明培养基产品符合国家标准要求，可以进行量产。
DMEM培养基配方
DMEM培养基配方DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）是一种常用的细胞培养基，广泛用于体外细胞培养和研究。
下面是一种常见DMEM培养基的配方，以及其组成成分和原理解析。
1.DMEM基础培养基：-DMEM混合物：420mL-热灭菌的双蒸馏水：500mL2.补充物：-胎牛血清（FBS）：100mL-青霉素和链霉素：1mL-10%海马酸溶液：5mL配方的组成成分和原理解析：1.DMEM基础培养基：DMEM是Eagle培养基的一种改良版，其中包含了额外的氨基酸、维生素和无机盐。
DMEM是无血清培养基，不含胎牛血清，可减少实验结果受到外界因素的影响。
2.热灭菌的双蒸馏水：双蒸馏水是通过蒸馏过程去除水中的杂质和微生物，保证细胞培养过程中的无菌状态。
3.胎牛血清（FBS）：胎牛血清是培养细胞所必需的重要补充物，其中含有许多生长因子、激素和蛋白质，可以提供细胞所需的养分。
4.青霉素和链霉素：青霉素和链霉素是两种广谱抗生素，用于预防和控制细胞培养中的细菌污染。
5.10%海马酸溶液：海马酸（L-glutamine）是一种重要的氨基酸，对细胞的生长和分裂非常关键。
10%的海马酸溶液用于提供细胞所需的L-谷氨酰胺。
补充物中的FBS用于提供细胞所需的生长因子、激素和蛋白质。
青霉素和链霉素的加入可以预防细菌感染，确保细胞培养的纯度和健康度。
海马酸溶液则提供细胞所需的L-谷氨酰胺，促进细胞的生长和分裂。
总结：DMEM培养基是一种常用的细胞培养基，配方中包含基础培养基、水和补充物。
基础培养基提供细胞所需的基本成分，而补充物则提供细胞所需的生长因子、抗生素和氨基酸。
这种培养基的配方可以为细胞提供稳定的生存环境，促进细胞的生长和分裂。
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4、培养皿 规格：9、12cm直径； 适于：游离细胞、 原生质体、花粉等的静置培养、 看护培养、无菌种子的发芽、植物材料的分离等。 5、果酱瓶 规格：200ml罐头瓶，加盖半透明的塑料盖； 特点：成本较低，操作方便，也减少了培养材料的
损伤；缺点是易引起污染。
6、瓶口封塞
要求：要具有一定的通气性和密闭性， 以防止培养基干燥和杂菌污染。
MS salts reduced to 0.47 g. l-1
Some root growth but reduced development of shoots
MS salts increased to 9.52 g. l-1
Shoots developed on upper surface of
Profuse development of roots over the explant upper and lower surface, and few shoots. Some callus
No MS salts
No sign of regeneration from explant
at all.
肌醇：使用浓度一般为100mg／L 氨基酸：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收
利用，常用甘氨酸。
4、植物生长调节物质
1）生长素类： 作用：诱导愈伤组织形成、根的分化和促进细
胞分裂、伸长生长。 IAA(indo acetic acid吲哚乙酸) NAA(naphthalene acetic acid萘乙酸) IBA(indolebutyri acid吲哚丁酸) 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸) 作用的强弱顺序：2,4-D > NAA > IBA >IAA
6-BA reduced to 0.1 mg. l-1
More balanced development of roots and shoots. However, undifferentiated callus is developing at the edges of the explant
No NAA
2）微量元素：浓度小于0.5mmol／L的元素
Fe B Mn Cu Mo Co
3、有机物质
碳源和能源：蔗糖、葡萄糖和果糖。蔗糖：2%— 5%，常用3%，可调节渗透压；
维生素：VBl(盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡哆醇)、 Vpp(烟酸)、Vc（抗坏血酸），生物素、叶酸、 VB12等。一般用量为0.1—10mg／L；
沿用，多数以发明人的名字来命名
二、培养基的成分
水 无机营养 有机物质 植物生长调节剂 培养材料的支持物 活性炭 抗生素类 天然复合物
1、水
2、无机营养（无机盐类） 1）大量元素：浓度大于0.5mmol／L N：NO3-N和NH4-N两种形式供应，如KNO3、
NH4NO3 P：KH2P04或NaH2P04 K：Kcl、KN03 Ca、Mg、S：MgSO4·7H20、CaCl2
2、铬酸液的配制
① 配制步骤： 选用合适容器； 按配方称量好重铬酸钾和蒸馏水，然后
将重铬酸钾完全溶于蒸馏水中； 缓缓加入浓硫酸，铬酸洗涤液（弱液）：重铬酸钾50g+蒸馏水 1L，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸90ml。
饱和铬酸洗涤液（中液）：用重铬酸钾50g加 入蒸馏水100ml，加热溶化，冷却后再缓慢加 入浓硫酸875ml。
2）细胞分裂素类 ( cytokinin )
作用①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长;②促 进细胞分裂与扩大;③抑制根的分化
6-BA(6-苄基氨基腺嘌呤) Kt (kinetin 激动素) Zt (zeatin 玉米素) 作用的强弱顺序：Zt>6-BA>Kt
3）GA(gibberellic acid赤霉素)
作用：促进幼苗茎的伸长生长，打破休眠， 促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发。
激素配比模式
生长素/细胞分裂素 高：有利于根的形成 适中：有利于愈伤组织形成或根芽分化 低：有利于芽的形成
No 6-BA
Profuse development of roots and a reduced number of shoots. Undifferentiated callus is developing at the edges of the explant
强铬酸洗涤液（强液）：与浓硫酸加热的同时 缓慢加入磨碎的重铬酸钾，直到重铬酸钾达到 饱和为止。一般浓硫酸1L加入重铬酸钾50g
第二章 培养基及其配制
第一节 培养基的成分 第二节 培养基的配制 第三节 常用培养基的配方
第一节 培养基的成分
一、培养基的产生及名称 1、培养基的产生 1680年和1681年：Sacks和Knop 1943年：white 1962年：Murashige和Skoog （MS） 2、培养基的名称
常用： 1） 棉塞； 2） 聚丙烯塑料薄膜； 3） 也可采用专用的封口膜
二、玻璃器皿的清洗
1、玻璃器皿的清洗步骤 浸泡：目的是软化和溶解附着物，新 5%盐酸 刷洗：放在洗涤剂中反复刷洗 浸酸： 酸液又称洗涤液；有强氧化作用 冲洗：“注满水-倒空”10次以上或注入“2/3
的水振荡冲洗”10次以上→蒸馏水冲洗2～3次
explant. No roots or callus.
5、培养材料的支持物
琼脂 用量：6—10g／L； 优点：操作简便，通气较好，便于观察； 缺点：含杂质，养分扩散慢，有毒物质聚集；
其他 有玻璃纤维、滤纸桥、海绵、卡拉胶等。
6、活性炭(active carbon)
用量：0.5—l0g／L。 作用：吸附 应用：
Poor shoot development and no roots
NAA reduced to 0.1 mg. l-1
Poor shoot development and no roots. Extensive callus generation
NAA increased to 5.0 mg. l-1