平板的配制及用途
琼脂平板测定法
琼脂平板测定法1. 简介琼脂平板测定法是一种常用的微生物检测方法，用于定量测定液体中微生物的数量。
其原理是将待测样品与含有琼脂的培养基混合，然后将混合液倒入琼脂平板中，在适当条件下培养微生物，通过观察生长的菌落数量来估计样品中的微生物数目。
琼脂平板测定法广泛应用于食品、饮料、药品等领域，以及环境监测和医疗卫生等领域。
它具有操作简便、结果可靠、灵敏度高等优点，并且可以同时检测多种不同类型的微生物。
2. 实验步骤2.1 准备工作•清洁实验台面和仪器设备，消毒操作区域。
•准备所需材料：琼脂平板、待测样品、无菌移液器、无菌试管、无菌培养皿等。
•配制适当的琼脂培养基，并进行无菌处理。
2.2 样品处理•将待测样品进行适当的预处理，如稀释、均匀搅拌等。
•取适量的样品，使用无菌移液器将其滴入无菌试管中。
2.3 倒平板•将琼脂培养基加热至液态状态，并保持在适宜的温度。
•将琼脂培养基倒入无菌培养皿中，约15-20ml左右。
•等待琼脂培养基凝固。
2.4 涂布样品•将待测样品与琼脂培养基混合均匀。
•将混合液倒入凝固的琼脂平板中。
•使用无菌棉签或针头，在平板表面上均匀地涂布样品。
•注意避免压力过大，以防止伤害琼脂平板表面。
2.5 培养•将涂布好的琼脂平板倒置放置于恰当的培养条件下（如适宜的温度、湿度等）。
•根据需要选择不同的培养时间和环境条件。
2.6 菌落计数•在适当的时间后，观察琼脂平板上的菌落生长情况。
•使用无菌计数器或放大镜进行菌落计数。
•记录菌落数量并进行统计分析。
3. 实验注意事项•操作过程中要保持严格的无菌操作，避免样品受到外界污染。
•遵守实验室安全规范，使用个人防护装备。
•注意培养条件的控制，如温度、湿度等。
•注意样品的合适稀释，以确保在合适范围内进行菌落计数。
•记录实验过程中的操作细节和结果，以备后续分析和验证。
4. 实验结果分析通过琼脂平板测定法得到的结果可以用于估计待测样品中微生物的数量。
根据菌落数量和相应的标准曲线或经验值，可以确定样品中微生物的含量是否符合相关标准要求。
医学微生物学：实 验 二 细菌的接种和培养
2.半固体培养基：培养基量为管长的1/4--1/3
3.斜面培养基： 斜面长度为管长的2/3
4.平板：
将琼脂冷至56℃，倾倒平皿而成
肉汤
半固体
1CM
斜面
普通琼脂平板
血琼脂平板
巧克力平板
SS平板
配制培养基的干粉
培养基的用途
1.平板：分离出单个菌落 2.半固体培养基：动力观察 保存菌种 3.斜面培养基： 纯培养 保存菌种 4.液体培养基： 增菌
医学微生物学 实验二
实 验 二 细菌的接种和培养
实验内容:
1、平板分区划线 2、斜面接种法 3、半固体接种法 4、液体接种法
目的要求：
1、掌握常用培养基种类、用途 2、掌握细菌的各种培养基接种法 3、掌握细菌在培养基生长表现
培养基的种类（按性状分类）
1.液体培养基： 液体量为管长的1/4--1/3
2、肉汤：表面生长、浑浊生长、沉淀生长 3、半固体：
动力阴性：穿刺线清晰、沿穿刺线生长 动力阳性：穿刺线模糊或呈根须状、沿穿刺线向
四周扩散生长、培养基变混浊 4、斜面：均匀的菌苔
结果请看示教
细菌生长现象观察
表面 沉淀 混浊察
细菌的接种方法 电教 实验报告
1.描述今天接种的四种培养基上相应接种菌的生长现象 2. 描述今天接种的四种培养基的用途
平板分 区划线
斜面、半固体接种
从试管取细菌
斜面
半固体
液体接种
接种环
液体培养基
实验内容－－接种培养基
普通平板： 1个/人（菌种大肠杆菌或金葡或铜绿）
肉汤： 2支/人（菌种铜绿、链球菌） 半固体： 2支/人（菌种变形杆菌、金葡菌） 斜面： 1支/人（菌种大肠）
Baerd Parker 平板配方与配制方法
Baerd Parker 平板配方与配制方法（1L）
成分：
胰蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
酵母浸膏1g
丙酮酸钠 10g
甘氨酸 12g
氯化锂(LiCl·6H2O) 5g
琼脂20g
蒸馏水 950ml
pH7.0±0.2
增菌剂的配制：30％卵黄盐水50ml与除菌过滤的1％亚碲酸钾溶液10ml&127;混合，保存于冰箱内。
制法：将各成分到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷至25℃校正pH。
分装每瓶95ml，121℃高压灭菌15min。
临用时加热溶化琼脂，每95ml加入预热到50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5ml，摇匀后倾注平板。
培养基应是致密不透明的。
使用前在冰箱储存不得超过48h。
卵黄盐水配置：将鸡蛋放在95%酒精中浸泡1小时左右，用在95%酒精中浸泡的纱布或酒精棉擦拭蛋壳表面，打开鸡蛋取出卵黄置于灭菌平板中，用无菌注射器或吸管取一定卵黄加10%盐水中（比例看你的检测项目而定），混匀，记录调制时间，4℃保存，2个周内使用。
配制过程中，卵黄应保持完整，以免吸入蛋清。
大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40％甘油，—80o C冻存。
二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）:10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5g/L；NaCl：10g/L；pH7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10。
0g酵母粉 5。
0g氯化钠10。
0g水 1000mlpH 7。
4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5%－2。
0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10。
0g，酵母粉5。
0g，NaCl 10.0g,加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7。
4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7。
4，用1mol/L HCl回调）.2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。
如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂)。
3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。
所有锥形瓶如上述操作。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。
5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干,待锥形瓶的封口纸干燥后取出.液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10—15mL（直径90mm),在培养皿中厚度大约4mm左右。
将平皿叠放在无菌操作台上,放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。
6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。
四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。
2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈,最后中间划之字;接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上,用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字,涂布平板。
稀释涂布平板法操作步骤
稀释涂布平板法操作步骤在制备微生物菌落计数板时，常采用稀释涂布平板法。
这种方法操作简单，能够快速、准确地测定微生物的数量，是微生物学中常用的方法之一。
下面将详细介绍稀释涂布平板法的操作步骤。
一、准备工作1.准备好所需的培养基：根据需要选择适当的培养基，如营养琼脂培养基、大肠杆菌选择性培养基等；2.准备好培养基的配制液：根据培养基的配方，将所需的成分按比例配制好，然后加入适量的蒸馏水，混匀后进行高温高压灭菌处理；3.准备好培养基的平板：将灭菌后的培养基分装到培养皿中，用无菌胶头棉条擦拭培养皿口，然后将培养皿倒置在平板支架上，待培养基凝固后，将平板倒置，存放在4℃冰箱中备用；4.准备好所需的材料和器具：如移液管、量筒、无菌吸管、酒精灯、无菌培养皿等。
二、稀释涂布1.取适量的样品：根据需要，取适量的样品进行稀释，样品的量要根据预期菌落数和样品的浓度来确定。
一般来说，取1ml样品，加入9ml生理盐水进行10倍稀释，再取1ml加入9ml生理盐水进行100倍稀释，以此类推；2.标记培养皿：在培养皿底部用无菌笔标记上样品名称、稀释倍数和日期等信息；3.取稀释液：用移液管或量筒取出适量的稀释液，加入到培养皿中，一般每个培养皿加入约1ml稀释液；4.均匀涂布：用无菌吸管取一定量的样品，滴在培养基表面，然后用无菌铁环或无菌玻璃棒均匀涂布，使样品均匀分布在培养基表面；5.重复操作：对于高浓度样品，可以进行多次稀释涂布，以得到合适的菌落数。
三、培养和计数1.培养：将涂布好的培养皿用胶头棉条擦拭培养皿口，然后倒置存放在恒温培养箱中，一般在30℃左右进行培养，不同的菌种有不同的培养条件；2.计数：经过一定时间的培养，菌落会在培养皿表面生长出来，需要进行计数。
使用计数板计数时，应注意板子上的菌落数量不能过多，一般在30-300个之间，如果过多，则需要再进行稀释。
计数时，应使用放大镜或显微镜，将菌落数量记录下来，用公式计算出样品中微生物的数量。
实验室平板培养基配方
实验室用平板培养基配方
1.MRS培养基：
液体：蛋白胨 10g 牛肉膏 10g 柠檬酸铵2g 乙酸钠 5g(无水乙酸钠3g) 酵母粉 5g 葡萄糖 20g
磷酸氢二钾 2g 吐温 1.0ml
盐液甲 5.0ml 蒸馏水： 1000ml
溴甲酚紫 0.8g
[备注]盐液甲的配制：MgSO
4.7H
2
O 11.5g ，MnSO
4
.4H
2
O 2.8g
蒸馏水 100ml
固体：在MRS液体培养基中加入1.6%~2%的琼脂
PH=6.5~7.0 121℃灭菌30min
2.YB培养基：
液体:蛋白胨 5g 葡萄糖 5g 酵母粉 5g 磷酸氢二钾4g
3.08%硫酸锰 1.0ml 蒸馏水 1000ml
固体：在YB液体培养基中加入1.4%~1.7%的琼脂
PH=6.0~7.0 121℃灭菌30min
3.PYD培养基：
液体：酵母粉 10g 蛋白胨 20g
葡糖糖20g 蒸馏水1000ml
固体：在PYD液体培养基中加入2%的琼脂
[备注]灭菌时要将葡萄糖和蛋白胨、酵母粉分开，溶解后单独灭菌，防止三者在高温下发生化学反应。
PH自然121℃灭菌30min
中国农业大学动物科技学院
饲料生物技术实验室
张得龙
2013.10.31。
巧克力色血琼脂平板说明书
巧克力色血琼脂平板培养基使用说明书【产品名称】通用名称：巧克力色血琼脂平板培养基英文名称：Chocolate Blood Agar Plate Medium【包装规格】Φ90㎜和Φ70㎜，5块／包。
【预期用途】主要用于奈瑟氏菌(如脑膜炎球菌，淋病球菌)、流感嗜血杆菌等的增菌培养。
【检验原理】培养基（Medium）是指由人工方法配制而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存用的混合营养制品。
培养基按用途分为基础培养基、增菌培养基、选择性培养基、鉴别培养基和厌氧培养基等，按原料来源分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基。
按形态分为液体培养基、流体培养基、半固体培养基和固体培养基等。
本产品是以人工的方法配制而成的，除基础培养基外另外还添加了脱纤维羊血，以增加营养性能，并根据具体的要求经过特殊处理使成巧克力色，补加嗜血杆菌生长所须的各种生长因子，以适应营养要求苛刻的微生物的特殊营养要求。
【主要组成成份】巧克力色血琼脂平板培养基由蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、琼脂等培养基原料经配制、高压灭菌，加入动物血和添加液定量灌入一次性塑料培养基内而成。
【贮存条件及有效期】2-8℃，避光保存，有效期3个月，用前复温。
【样本要求】标本可以是液体也可以是固体，液体标本可以直接使用，固体标本需用适量无菌生理盐水溶解后，取溶液使用。
根据浓度需要决定是否采用10倍稀释法进行稀释。
【检验方法】用接种环或棉签以无菌方法取标本直接画线接种于培养基中，或无菌吸取0.1ml适当浓度的标本溶液用玻璃涂布棒均匀涂布于培养基中，置35~37℃温箱中培养。
【检验结果的解释】流感嗜血杆菌菌落微小，无色、透明、光滑整齐、似露滴状，48小时后达1.5mm，从血液或脑脊液中分离到的菌落往往形成液状，菌落较大，老培养物菌落中心凹陷；淋球菌菌落较小，菌落呈灰白色。
【检验方法的局限性】正确的标本采集及良好的细菌划线分离技术是检出细菌的基础，所检出细菌要经镜检、生化鉴定来确认。
各种琼脂平板
HE琼脂成分脙胨12g牛肉膏3g乳糖12g蔗糖12g水杨素2g胆盐20g氯化钠5g琼脂18～20g蒸馏水1000mL0.4%溴麝香草酚蓝溶液16mLAndrade指示剂20mL甲液20mL乙液20mLpH7.5制法将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液；将琼脂加入于600mL蒸馏水内，加热溶解。
加入甲液和乙液于基础液内，校正pH。
再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷至50～55℃，倾注平板。
注：①此培养基不可高压灭菌。
②甲液的配制硫代硫酸钠34g柠檬酸铁铵4g蒸馏水100mL②乙液的配制去氧胆酸钠10g蒸馏水100mL②Andrade指示剂酸性复红0.5g1mol/L氢氧化钠溶液16mL蒸馏水100mL将复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液。
数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1～2mL。
3SS为强选择性培养基.其成分除了有必要的胨、牛肉膏等氮、碳源外，其他则为选择性抑制剂和缓冲剂。
如柠檬酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用及煌绿共同来抑制肠道非病原性细菌及部分大肠杆菌的生长。
对志贺菌属及沙门菌属相对抑制性较弱。
硫代硫酸钠有助于大肠菌的着色，柠檬酸铁能缓解某些药物对病原菌的毒副作用，同时与细菌产物起反应呈黑色菌落。
中性红指示剂可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌鉴别开，前者为红色菌落，后者为无色菌落。
葡萄糖半固体发酵管葡萄糖半固体发酵管成分蛋白胨1g牛肉膏0.3g氯化钠0.5g1.6%溴甲酚紫酒精溶液0.1mL葡萄糖1g琼脂0.3g蒸馏水100mLpH7.4制法将蛋白胨、牛肉膏和氯化钠加入于水中，校正pH后加入琼脂加热溶解，再加入指示剂和葡萄糖，分装小试管，灭菌121℃ 15 min。
三糖铁琼脂三糖铁琼脂(换用方法)成分蛋白胨15g脙胨5g牛肉膏3g酵母膏3g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖1g氯化钠5g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.3g琼脂12g酚红0.025g蒸馏水1000mLpH7.4制法将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH。
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平板的配制及用途
血平板
（1）成分：普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），脱纤维羊血
（2）制法：取所需要量的普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），加蒸馏水溶解后，高压灭菌。
冷却至50℃，加入一定量（5%）的羊血，倾注平板。
（3）用途：适于各类细菌的生长。
巧克力平板
（1）成份：普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），氯化血红素，万古霉素，辅酶A
（2）制法：取所需要量的普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），加蒸馏水溶解后，高压灭菌。
冷却至60℃左右加入一定量的羊血，置85℃水浴中摇动10-15分钟，冷却到50℃左右后加入相应量的万古霉素和辅酶A，摇匀后倾注平板。
（3）用途：除可以分离奈瑟菌，嗜血杆菌外，由于加入了万古霉素，可抑制绝大多数的革兰阳性菌的生长，在分离培养上具有重要意义，而非楼主所说的可用血平板来替代。
血液中有V，X因子是位于红细胞中的，一般细菌不能利用，轻微的加热使红细胞破坏释放到细胞外方可利用。
YPD培养基
YPD 或YEPD，：Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)，又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD）琼脂培养基
用于酵母菌的培养
配方：1% Yeast Extract（酵母膏），2% Peptone（蛋白胨），2% Dextrose (glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉
配制方法：
1 溶解10gYeast Extract（酵母膏）, 20gPeptone（蛋白胨）于900ml水中，如制平板加入20g琼脂粉
2 高压 121度20min
3 加入100ml 20gDextrose (glucose)（葡萄糖），(葡糖糖溶液灭菌后加入)
注：葡萄糖，yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。
葡萄糖可以过滤除菌，也可以115℃15min灭菌。
YPD另外一种配方：
2%Trypton(胰化胨或称胰蛋白胨)、2%Dextrose (glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉，115℃15min灭菌。
液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。
加入Zeocin 100ug/ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～2 周。
YPEG：除了用3%乙醇和3%甘油代替葡萄糖作为碳源外，其他成分同YPD
YPDZ 是在YPD的基础上加上ZEOCIN抗生素。
YPDA 是在YPD的基础上加0.003%的腺嘌呤硫酸盐。