柚苷酶活力测定方法的研究
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透明圈法筛选柚苷酶高产菌株
Ｋ ｅ ｒ ｓ： ｒｎ ｉａ ｅ， ｒ ｓ ｒ ｎ ｒ ｌ ｙ ｗｏ ｄ Ｎａ ｉ ｇｎ ｓ Ｔ ａ ｐａｅ ｔＣｉｃ ｅ ｎ
Ｏ 前言
柑 桔类 水果 是世 界上 最 主要 的亚热 带水果 之
一
广 泛应 用 ， 主要原 因是 柚 苷 酶 工 业 化 生 产 中 尚 其
缺乏适合的高产酶菌株 ， 因此高产菌株的筛选是 当务之 急 。开 展新 的筛 选方 法 、 型研 究工 Ｊ 模 作， 高效地从成千上万 的诱变后代 中选 出优秀突 变株十分重要 。本文依据柚苷酶酶活测定原理 ， 利 用 Ｄ Ｓ在 碱 性 条 件 下 与培 养 基 中未 分 解 的底 Ｅ
物 柚皮 苷发 生黄 色 显 色 反 应 ， 究 设 计 出一种 较 研
，
在 我 国柑 桔资 源 丰 富 ， 产量 巨大 ， 其果 实 中含
多种 营养 成 份 ， 丰 富 的葡 萄糖 、 有 果糖 等 ， 含 有 还
一
定 量 的硫 胺 素 、 黄 素 、 核 生物 类 黄酮 、 胡 罗 卜 类
素等生 理 活性物 质 。因此 开展柑 桔加 工 和综合 利
用很有必要 。柑桔加 工过程 中会出现 明显苦 Ｊ 味， 其中柚皮苷是苦味 的主要成分 。由于柚苷酶
能分 解 柚 皮 苷 得 柚 配 质 （ ａｉｇｎ ） 葡 萄 糖 和 Ｎ ｒ ｅｉ 、 ｎ ｎ
高层试管法更易观察的柚苷酶生产菌初筛方法。
维普资讯
第２卷 第１ ５ 期
２０ ０ ７年 ２月
江
西
科
学
Ｖｏ ． ５ Ｎｏ １ ２ ．１ Ｆｅ ２ ７ ｂ． ００
ＪＡＮＧ Ｓ Ｉ ＮＣ Ｉ ＸＩ ＣＥ Ｅ
文 章 编 号 ：０ １ ６ ９ ２ ０ ） １— ０ ７一ｏ １０ —３７ （ ０ ７ ０ ０ ２ ３
Ｏ 前言
柑 桔类 水果 是世 界上 最 主要 的亚热 带水果 之
一
广 泛应 用 ， 主要原 因是 柚 苷 酶 工 业 化 生 产 中 尚 其
缺乏适合的高产酶菌株 ， 因此高产菌株的筛选是 当务之 急 。开 展新 的筛 选方 法 、 型研 究工 Ｊ 模 作， 高效地从成千上万 的诱变后代 中选 出优秀突 变株十分重要 。本文依据柚苷酶酶活测定原理 ， 利 用 Ｄ Ｓ在 碱 性 条 件 下 与培 养 基 中未 分 解 的底 Ｅ
物 柚皮 苷发 生黄 色 显 色 反 应 ， 究 设 计 出一种 较 研
，
在 我 国柑 桔资 源 丰 富 ， 产量 巨大 ， 其果 实 中含
多种 营养 成 份 ， 丰 富 的葡 萄糖 、 有 果糖 等 ， 含 有 还
一
定 量 的硫 胺 素 、 黄 素 、 核 生物 类 黄酮 、 胡 罗 卜 类
素等生 理 活性物 质 。因此 开展柑 桔加 工 和综合 利
用很有必要 。柑桔加 工过程 中会出现 明显苦 Ｊ 味， 其中柚皮苷是苦味 的主要成分 。由于柚苷酶
能分 解 柚 皮 苷 得 柚 配 质 （ ａｉｇｎ ） 葡 萄 糖 和 Ｎ ｒ ｅｉ 、 ｎ ｎ
高层试管法更易观察的柚苷酶生产菌初筛方法。
维普资讯
第２卷 第１ ５ 期
２０ ０ ７年 ２月
江
西
科
学
Ｖｏ ． ５ Ｎｏ １ ２ ．１ Ｆｅ ２ ７ ｂ． ００
ＪＡＮＧ Ｓ Ｉ ＮＣ Ｉ ＸＩ ＣＥ Ｅ
文 章 编 号 ：０ １ ６ ９ ２ ０ ） １— ０ ７一ｏ １０ —３７ （ ０ ７ ０ ０ ２ ３
蜜柚多酚氧化酶的酶学特性与活性测定研究
１２４ Ｐ Ｏ 最 适 ｐ ．． Ｐ Ｈ 配 制 不 同 ｐ 的 磷 酸 氢 二 钠 一 Ｈ 磷 酸 二 氢 钠缓 冲液 ， 酶 液 １ｍＩ ０ １Ｍ 邻 苯 二 酚 １ｍ 取 … Ｉ
１ 材 料 与 方 法
１１ 试 验材 料 ．
分别加入不 同 ｐ 的磷酸缓 冲液 ４ｍＬ 立 即在 ４０ｎ Ｈ ， ２ ｍ 下测定吸光度值 。以不 同 ｐ 但不加酶提取液的反应液 Ｈ
第 一作者 简介 ： 纪淑娟 （ ９ ｏ） 女 ， 士 ， １ ６一 ， 博 教授 ， 主 要从 事食 品质 现 量控 制教 学和 研 究工作 。
８ ￣ ９ ℃水浴 中分别保 温 ５ １ 、０ｍ ｎ 将反应 液迅速 ０ Ｃ、０ 、０ ２ ｉ， 冷却至室温 ， 加入酶提取 液 １ｍＩ 参照 １２ ２的方法测 ， ．． 定残余酶的吸光度值变化 。
取液 。
１２ ２ Ｐ Ｏ 活性 测 定 ．． Ｐ
采 用 比色法 测 定 。将 １ｍ ０ １ Ｉ ． （
主要是多酚氧化酶 （ Ｐ 引起 的［。 Ｐ Ｏ） ３］ 。 。多 酚氧化 酶是一 类含 Ｃ 元素 的膜结 合蛋 白， ｕ 它催化 果蔬体 内的多酚类 物质氧化形 成醌 ， 者 自身缩 合 或 与细 胞 内蛋 白质 结 后
合 ， 成褐 色 或 黑 色 物质 。多 酚 氧 化 酶 活 性 测 定 已成 为 形
ｍ ｌＬ ￣ 苯 二 酚加 入 ４ｍＩ磷 酸缓 冲 液 （Ｈ ６４ 中 ， ｏ／ ）ｇ ｐ ． ） 加 入 １ｍ 液 ， 即 于 波 长 ４ ０ｎ 下 测 定 吸 光 度 的 变 Ｉ酶 立 ２ ｍ
化， 每隔 ２ 记录 １ ， ０Ｓ 次 共记录 ３ｍｉ。以不加酶提取液 ｎ 的反应 液 做 对 照， 以每 分 钟 吸 光度 变 化 ０ ０ ． １为 １个 Ｐ Ｏ 酶活性 单位 。 Ｐ
１ 材 料 与 方 法
１１ 试 验材 料 ．
分别加入不 同 ｐ 的磷酸缓 冲液 ４ｍＬ 立 即在 ４０ｎ Ｈ ， ２ ｍ 下测定吸光度值 。以不 同 ｐ 但不加酶提取液的反应液 Ｈ
第 一作者 简介 ： 纪淑娟 （ ９ ｏ） 女 ， 士 ， １ ６一 ， 博 教授 ， 主 要从 事食 品质 现 量控 制教 学和 研 究工作 。
８ ￣ ９ ℃水浴 中分别保 温 ５ １ 、０ｍ ｎ 将反应 液迅速 ０ Ｃ、０ 、０ ２ ｉ， 冷却至室温 ， 加入酶提取 液 １ｍＩ 参照 １２ ２的方法测 ， ．． 定残余酶的吸光度值变化 。
取液 。
１２ ２ Ｐ Ｏ 活性 测 定 ．． Ｐ
采 用 比色法 测 定 。将 １ｍ ０ １ Ｉ ． （
主要是多酚氧化酶 （ Ｐ 引起 的［。 Ｐ Ｏ） ３］ 。 。多 酚氧化 酶是一 类含 Ｃ 元素 的膜结 合蛋 白， ｕ 它催化 果蔬体 内的多酚类 物质氧化形 成醌 ， 者 自身缩 合 或 与细 胞 内蛋 白质 结 后
合 ， 成褐 色 或 黑 色 物质 。多 酚 氧 化 酶 活 性 测 定 已成 为 形
ｍ ｌＬ ￣ 苯 二 酚加 入 ４ｍＩ磷 酸缓 冲 液 （Ｈ ６４ 中 ， ｏ／ ）ｇ ｐ ． ） 加 入 １ｍ 液 ， 即 于 波 长 ４ ０ｎ 下 测 定 吸 光 度 的 变 Ｉ酶 立 ２ ｍ
化， 每隔 ２ 记录 １ ， ０Ｓ 次 共记录 ３ｍｉ。以不加酶提取液 ｎ 的反应 液 做 对 照， 以每 分 钟 吸 光度 变 化 ０ ０ ． １为 １个 Ｐ Ｏ 酶活性 单位 。 Ｐ
柚苷酶的应用及发酵生产研究
为 ： 酵 温度 ２ 发 ５℃ ～ ２ ８℃ 左 右 ； 度 控 制 在 ０ ５～０ ８ｇ 酸 ． ． ／
１０ ０ ｍＬ左 右 ； 柚苷 酶加量 以 １ ／ ５ｕｍＬ为宜 ； 酒精度为 ６ ８％～ ８ ０％（ 时 ， Ｖ） 有利于醋酸发酵 ， 制得 的果醋清亮透 明 ， 酸甜可 口 ， 香明显 ， 果 基本无苦 味 。励建荣 等［］ ８以黄 岩蜜 桔为 原料
我 国 柑 桔 资 源 丰 富 ， 展 柑 桔 加 工 和 综 合 利 用 很 有 必 开
柚苷酶可 以应用 于柑桔 汁脱苦 。汪钊 等＿ 发现 加酶量 ４ Ｊ １ ／ ０ ｐ ６ｕ １０ｐ ｍ柚皮 苷 ，Ｈ ． ～４ ６ ５ ｐ ３ ６ ． ，０℃作 用 ２ ， ～３ｈ 无核 桔 汁苦味基本 消失 。王鸿飞 等＿ 采 用正 交试验 进行柚 皮苷 ５ ｊ 酶对 胡柚汁脱苦工 艺条件 的优化 ， 出其最适 工 艺条件 为 ： 得
指出柚苷 梅生 产中存在 的问题及对策 。
关键词 ：柚苷酶 ； 应用； 发酵； 进展
Ｓ ｕ ｙ ｏ ｔ ｐｌｃ ｔｏ ａ ｒ ｅ ａ ｉ ｎ ｏ ｒ ｎｇ ｎ ｓ ｔ ｄ ｎ ｈｅ Ａｐ ｉ ａ ｉ ｎ ｎｄ Ｆｅ ｍ ｎｔ ｔｏ ｆ Ｎａ ｉ ｉ ａ ｅ
Ｚ ４ＮＧ Ｈ ．ＬＩ Ｕ Ｚｈｉｕ —
合 物 的柚 皮苷 水解 成 鼠李糖 和普 鲁 宁 ， 鲁 宁 的苦 味 约 为 柚 普
柚苷酶还 可 以应 用 于其 它 柑桔 制 品 生产 过程 的脱苦 。
何晋浙等 ｒ 证实柚苷酶在柑桔果醋制备 的生产工艺 中， 能有
效地除去柑 桔醋 中的柚皮 苷 苦味 物质 ， 最 适 的工 艺条 件 其
果汁进行 了脱 苦性 实验 ， 发现 ４ ０℃时其最适 的加 酶量为 ２ ． ８ ２ ｍＬ， ４Ｕ／ 最适 ｐ Ｈ值 为 ３ ５ ． ， 少作 时间 ６ ｎ 脱 ． ～４ ５ 最 ０ｍｉ，
１０ ０ ｍＬ左 右 ； 柚苷 酶加量 以 １ ／ ５ｕｍＬ为宜 ； 酒精度为 ６ ８％～ ８ ０％（ 时 ， Ｖ） 有利于醋酸发酵 ， 制得 的果醋清亮透 明 ， 酸甜可 口 ， 香明显 ， 果 基本无苦 味 。励建荣 等［］ ８以黄 岩蜜 桔为 原料
我 国 柑 桔 资 源 丰 富 ， 展 柑 桔 加 工 和 综 合 利 用 很 有 必 开
柚苷酶可 以应用 于柑桔 汁脱苦 。汪钊 等＿ 发现 加酶量 ４ Ｊ １ ／ ０ ｐ ６ｕ １０ｐ ｍ柚皮 苷 ，Ｈ ． ～４ ６ ５ ｐ ３ ６ ． ，０℃作 用 ２ ， ～３ｈ 无核 桔 汁苦味基本 消失 。王鸿飞 等＿ 采 用正 交试验 进行柚 皮苷 ５ ｊ 酶对 胡柚汁脱苦工 艺条件 的优化 ， 出其最适 工 艺条件 为 ： 得
指出柚苷 梅生 产中存在 的问题及对策 。
关键词 ：柚苷酶 ； 应用； 发酵； 进展
Ｓ ｕ ｙ ｏ ｔ ｐｌｃ ｔｏ ａ ｒ ｅ ａ ｉ ｎ ｏ ｒ ｎｇ ｎ ｓ ｔ ｄ ｎ ｈｅ Ａｐ ｉ ａ ｉ ｎ ｎｄ Ｆｅ ｍ ｎｔ ｔｏ ｆ Ｎａ ｉ ｉ ａ ｅ
Ｚ ４ＮＧ Ｈ ．ＬＩ Ｕ Ｚｈｉｕ —
合 物 的柚 皮苷 水解 成 鼠李糖 和普 鲁 宁 ， 鲁 宁 的苦 味 约 为 柚 普
柚苷酶还 可 以应 用 于其 它 柑桔 制 品 生产 过程 的脱苦 。
何晋浙等 ｒ 证实柚苷酶在柑桔果醋制备 的生产工艺 中， 能有
效地除去柑 桔醋 中的柚皮 苷 苦味 物质 ， 最 适 的工 艺条 件 其
果汁进行 了脱 苦性 实验 ， 发现 ４ ０℃时其最适 的加 酶量为 ２ ． ８ ２ ｍＬ， ４Ｕ／ 最适 ｐ Ｈ值 为 ３ ５ ． ， 少作 时间 ６ ｎ 脱 ． ～４ ５ 最 ０ｍｉ，
微生物柚苷酶的研究进展
微生物柚苷酶的研究进展
宋金鹏;仲秀芳;胡晓晴;田淑斌;范光森
【期刊名称】《河南工业大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2024(45)2
【摘要】柚苷酶是一种具有α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶两种酶学活性的酶,在柑橘类产品脱苦、鼠李糖和普鲁宁制备及类固醇的生物转化等方面具有广泛的应用前景。
柚苷酶来源广泛,其主要来源为微生物。
不同来源柚苷酶的酶学性质往往会存在差异,从而影响其应用领域。
系统地从柚苷酶来源、微生物产酶、活力测定、分离纯化与性质、克隆表达、结构、固定化及应用等方面对柚苷酶进行了综述,有助于指导其更好地科学研究和工业化应用。
【总页数】12页(P19-30)
【作者】宋金鹏;仲秀芳;胡晓晴;田淑斌;范光森
【作者单位】德州市纤维检验所;北京工商大学食品与健康学院;淄博新糖源营养健康研究院;北京工商大学北京市食品添加剂工程技术研究中心
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.2
【相关文献】
1.柚苷酶产生菌的选育及其酶特性研究进展
2.柚(皮)苷酶的研究进展
3.柚苷酶的生产及其在食品工业中的研究进展
4.微生物来源柚苷酶的研究进展及应用
5.产柚苷酶菌株改良、性质及其在柑橘酒中的应用研究进展
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柚皮苷酶对柑橘类果汁脱苦效果的研究
采用戴维斯 (D av is) 法[7, 17- 20 ]。①样品处理: 量取一 定量的汁液, 添加 0. 1 m o l·L - 1 N aO H 10 mL , 用 4 m o l ·L - 1 N aO H 调 至 pH 12, 浸 泡 30 m in 后, 再 用 20% 柠檬酸调至 pH 6, 加水定容至 100 mL , 经滤纸过 滤收集澄清液成为样液, 备测。
根据柚皮苷酶作用的特性, 分别研究酶剂量对脱苦 效果的影响 (在果汁温度为 45℃、果汁 pH 3. 5、作用时 间 60 m in 的条件下) ; 果汁的 pH 值对脱苦效果的影响 (在酶量为 0. 5 g·L - 1、果汁温度为 45℃、作用时间 60 m in 的条件下) ; 果汁温度对脱苦效果的影响 (在酶量为
© 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
176
农业工程学报
2004 年
影响果汁本身的质量, 就必须在较短的时间内完成酶处 理脱苦的任务。
图 3 果汁的 pH 值与脱苦率的关系 F ig. 3 R elation sh ip betw een ju ice pH value and deb ittering rate
图 1 标准曲线图 F ig. 1 Standa rd cu rve
图 2 柚皮苷酶用量与脱苦率的关系 F ig. 2 R ela tion sh ip betw een na ring ina se u sage
am oun t and deb ittering ra te
③样液测定: 准确吸取待测液 3 mL 2 份, 于 2 支具 塞试管中, 加试剂空白液至 5. 0 mL , 各加 90% 二甘醇 5. 0 mL , 再分别加 4 m o l·L - 1 N aO H 0. 0 和 0. 1 mL , 摇匀, 以标准曲线同样的方法进行发色、测定, 以加碱管 的吸光度减去不加碱管中的吸光值, 查标准曲线, 即得 所取样液中柚皮苷含量毫克数。
根据柚皮苷酶作用的特性, 分别研究酶剂量对脱苦 效果的影响 (在果汁温度为 45℃、果汁 pH 3. 5、作用时 间 60 m in 的条件下) ; 果汁的 pH 值对脱苦效果的影响 (在酶量为 0. 5 g·L - 1、果汁温度为 45℃、作用时间 60 m in 的条件下) ; 果汁温度对脱苦效果的影响 (在酶量为
© 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
176
农业工程学报
2004 年
影响果汁本身的质量, 就必须在较短的时间内完成酶处 理脱苦的任务。
图 3 果汁的 pH 值与脱苦率的关系 F ig. 3 R elation sh ip betw een ju ice pH value and deb ittering rate
图 1 标准曲线图 F ig. 1 Standa rd cu rve
图 2 柚皮苷酶用量与脱苦率的关系 F ig. 2 R ela tion sh ip betw een na ring ina se u sage
am oun t and deb ittering ra te
③样液测定: 准确吸取待测液 3 mL 2 份, 于 2 支具 塞试管中, 加试剂空白液至 5. 0 mL , 各加 90% 二甘醇 5. 0 mL , 再分别加 4 m o l·L - 1 N aO H 0. 0 和 0. 1 mL , 摇匀, 以标准曲线同样的方法进行发色、测定, 以加碱管 的吸光度减去不加碱管中的吸光值, 查标准曲线, 即得 所取样液中柚皮苷含量毫克数。
柚苷酶生产菌TC-01发酵培养条件的优化及其酶学性质的初步研究
素试验优化碳 、氮源对产酶的影响 ，利用 Ｐａｋｔ Ｂ ｒ ａ ｌｃｅ— ｕｍ ｎ设计筛选影响产酶的主要 因素 ，最 后通 过响应面分析法对 ｔ 液体发酵培养条件进行优化 ，优化后柚苷酶酶活 与初始相 比提高了 ２４倍 ，达到 １２ ６ ／ Ｌ － １． Ｕｍ 。对 Ｔ 一 １ ７ ｃ ０ 产柚苷酶 中 Ｏ一鼠李糖苷酶和 １一 ｔ ３ Ｄ葡萄糖苷酶 的酶学性质分别进行 了研究 ，２ 酶反应 的最适反应温度均为 ６ 个 ０℃，在 ５ ０℃以 下保温 １ｈ ，２个酶的活力基 本不受损失 ；２个酶最适 ｐ Ｈ值为 ４０ 一鼠李糖苷酶在 ｐ ．， Ｈ值 ４０ ８ ．— ． ０范围内稳定性较
柚苷酶生产 菌 Ｔ 一 １发酵培养条件 的优化 Ｃ ０ 及 其酶学性质 的初步研 究
邓 媛 ， 毛 勇，张 美丽 ，王 燕，李 飞 ，李 皎
（ 陕西省微生物研究所 ，陕西 西安 ７ ０ ４ ） １０ ３
摘 要 ：以黑 曲霉 Ｔ 一 １ Ｃ ０ 菌株 作 为 试 验 材 料 对 其 液 态 发 酵 条 件 及 初 步 纯 化后 的柚 苷 酶 的 酶 学性 质进 行 研 究 。采 用 单 因
Ａｂ ｔ ｃ ： Ｉ ｉ ａｔ ｌ ， ｔ ｅ ｇｌ ｓ ｒＴ Ｏ１ ｗ ｉ ｈ ｉ ｃｅ ｎ ｄ ａ ｘ ｅ ｍｅ ｔ ｍａ ｅ ｉｌ ， ｌ ｕｄ ｅ ｐ ｒ ｎａ ｐｉ ｓ ａ ｔ ｎ ｔ ｓ ｒ ｃｅ ｏＡｓ ｒ ｉ ｕ ．ｎ ｒ ｈ ｉ ｐ ｌ Ｃ－ ｈ ｃ ｓｓ ｒ ｅ ｅ ｓ ｅ ｐ ｒ ｎ Ｍ ｔ ｒ ｓ ｉ ｉ ｘ ｅ ｉ ｉ ａ ｑ ｍｅ ｔｌｏ ｔ －
Ａｓ ｒ ｉｌｓ ｒＴＣ－ ｐｅｇ ｌｕ ．ｎ Ｏ１
ＤＥ ＮＧ ｕ ｎ， ＭＡＯ Ｙｏ ｇ Ｚ Ｙ ａ ｎ ， ＨＡＮＧ ｉｌ， Ｗ ＡＮＧ Ｙａ Ｍｅ—ｉ ｎ，Ｌ ｅ， Ｌ ｉｏ ＩＦ ｉ Ｉ ａ Ｊ
柚子全果综合利用及生物活性研究进展
化效 果主要是通过消除 过氧 化物 、清 除羟 自由基 、抗 脂质过 氧
化活性来实现 。戴玉锦 等 制备 了富含黄酮 的柚皮 提取物 ，并 研究 了其抗氧化性 和对 大肠 杆菌及 黑曲霉 的抑菌作 用 ，表 明较 低浓度抗氧化作用 ，较高浓度 轻微助 氧化作 用 ，同时 对大肠 杆
菌具 有明显的抑制作用 ，甚 至比 ７ ０ ％乙醇抑菌作 用更强 ，但 对 纤维 中可溶性膳食纤维 的提取率 。贾冬英 也研究 了柚皮 中不 黑曲霉无 明显抑制作用 。赵 雪梅等 研究胡柚提取 物对 淋 巴细 溶性膳食纤维 （ Ｉ Ｄ Ｆ ） 的持水 力和膨胀 力及 对胆 固醇 的吸 附性 的 胞 的增殖试验发现胡柚 提取物 对 Ｔ 、Ｂ淋 巴细胞 的增殖 反应 均
ｖ ｉ ｔ ａ ｍｉ ｎｓ ，ｍｉ ｎ ｅ ｒ ａ ｌ ｓ，ａ ｎｄ ｉ ｎ ｓ ｕ ｌ ｉ ｎ ｃ ｏ ｍｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ，ｂ ｕ ｔ ａ ｌ ｓ ｏ ｈａ ｓ ｉ ｍｐｏ ｒ ｔ ａ ｎ ｔ ｂｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｆ ｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ． Ｇｒ ａ ｐ ｅ ｆ ｒ ｕ ｉ ｔ ｐ ｅ ｅ ｌ ａ ｃ ｃ ｏ ｕ ｎ ｔ ｓ ｆ ｏ ｒ
３ 柚 子皮提取物生理功效
３ ． １ 柚 皮苷 的抗 氧 化 、抗癌 、 降胆 固醇活 性
柚 皮 苷 是 一 种 存 在 于 西 柚 果 皮 中 的 多 酚 ，有 抗 氧 化 、分 解 血管脂肪酸 、提高免疫力 和抑 制食欲等 的作 用。柚皮 苷的抗 氧
１ ． ３ 膳 食 纤维
膳食纤维 （ Ｄ ｉ ｅ ｔ ａ ｒ ｙ Ｆ ｉ ｂ ｅ ｒ ） 按其 在水 中的溶 解性 可分 为 水溶
１ 柚 子 皮 综 合 利 用 现 状
１ ． １ 天然 色素
柚苷酶应用下食品工业
柚苷酶应用下食品工业1。
1Davis紫外分光光度计法如今多采纳改进后的Davis测酶活方法，该种方法也是测定酶活应用最多的一种。
但缺点是后期紫外分光光度计时会受究竟物颜色的限制，柚皮苷为黄色溶液，可能影响柚皮苷含量的测定，进而使测定的酶活不精确，并且仅是对底物柚皮苷的含量测定来获得柚苷酶的酶活力大小，无法知道组成该酶的其他酶α—L—鼠李糖苷酶和β—D—葡萄糖苷酶的酶活力状况。
1。
2高效液相色谱仪测定柚皮苷含量用高效液相色谱来测定柚苷酶水解的底物柚皮苷的含量，不仅可以测定柚苷酶的酶活力，同时还可以测得α—L—鼠李糖苷酶和β—D—葡萄糖苷酶的酶活力大小，使酶活测定精确详细化，检测柚皮苷的精确度高，误差小，提高了结果的精确性，但是操作较前一种Davis法繁琐，时间延长。
对于不同的柚苷酶，高效液相色谱法检测分析的试验条件不同。
陈月龙在其论文中采纳高效液相色谱测定酶活时的流淌相选取的是甲醇、水、乙腈并采纳不同梯度洗脱分别柚苷酶水解后的产物，从其结果中可看出实现了柚皮苷、柚皮素与普鲁宁的完全分别。
邓媛等也采纳高效液相色谱对柚苷酶活力以及普鲁宁酶活力进行测定，同时进行了酶促动力学讨论，得出柚苷酶酶解的最正确条件。
高效液相色谱法测定柚皮苷含量的优点是直接反映酶解作用的各种产物含量，可获得该酶所包含的各种酶的酶活力大小，方法精确直观，直接测得不同酶活力大小，缺点是操作较冗杂。
2微生物来源柚苷酶的制备2。
1柚苷酶产生菌株的筛选有效的微生物筛选方法可以大量节省菌株筛选的时间和本钱，因此在筛选柚苷酶产生微生物的过程中选择合适的筛选方法至关重要。
目前微生物的筛选方法有透亮圈法、高层试管法以及定性滤纸显色法，其中高层试管法和定性滤纸法误差较大，相较而言，透亮圈法操作简洁，观看便利，适用于定性筛选，是目前应用较为广泛的一种筛选微生物方法。
2。
1。
1透亮圈法透亮圈法是指微生物分解平板培育基中溶解性较差的底物，使菌落四周产生透亮圈，圈的大小初步反应当菌株利用底物的力量。
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Ｃ３
７３７ ８９６．３ １６３３．３ ８１６．６５
Ｃ２ ９４４．４ ９４２．８５ １８８７．２５ ９４３．６２５
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ Ａ Ａ Ａ Ａ Ａ Ａ Ａ Ａ Ａ
Ｃ３ ７６８．５ ７７４．７ １５４３．２ ７７１．６ Ｃｌ １０４９．４ ｌ０８８ ２１３７．４ １０６８．７ Ｃ３ ２９３．６ ２６７．１５ ５６０．７５ ２８０．３７５ Ｃ１ ６９５．８ ６６０．１ １３５５．９ ６７７．９５
江 西林 业科 技
２０１２年第 ３期
柚苷 酶活力测定方法 的研 究
龙俊 敏
（江西生物科技职业学 院动科 系，江西南 昌 ３３００２０）
摘 要 ：研 究在不 同酶活测定条件 下，黑曲霉 ３－９液体摇瓶培 养产柚苷酶的最佳测定条件组合。通过 （３ ）正交实验表 明：在水解温度 ４０℃，一缩二 乙二醇（ｃ４Ｈｍ０３）的加 量为 ５ ｍＬ，显 色时间 ５ ｍｉｎ的条件 组合 下酶活力最 高，达到 了 ｌ ０６８．７ Ｕ／
１ ｅｍ比色杯测定其光密度 ＯＤ值 ，详细操作步骤见表 ２。 ２）样品柚苷酶活力计算：①根据柚皮苷标准曲线 ，
首先计算 出管号 ２柚苷酶含量为 ｘ标。②然后分别根 据柚 皮 苷标 准 曲线计 算 出供测样 品残 留的柚 皮苷 的含 量 为 ｘ样。③ 样 品柚 苷酶 活力 ＝（ｘ标一Ｘ样）ｘＮ／ｔ，式 中
１０
０
１０ ０．１１０
１０ ０．３５８
１０ ０．５５２
１０ ０．７４２
１０ ０．９４２
１０ １ ２０７
１．２．５ Ｌ９（３ 试验 设计 。影 响柚 苷 酶 活力 测定 的因 素有 很 多 ，笔 者根 据 以往经 验 ，挑选 和确定 了若 干对 试验 指 标影 响最 大最 有 经济 意义 的 因素 。这 些 因素是 酶水 解 时 问 、一 缩二 乙二 醇用 量 和显色 时 间。本 试验采 取三 水 平三 因素 （３ ）试 验 ，试 验设 计见 表 ３、表 ４。 ２ 结果与分析 ２．１ 正 交试 验 酶 活 测 定 结 果及 直观 分析
表 １
柚皮苷标准 曲线的测定
试 ４００ ｍＬ柚皮 ９０％ 。ｌ／Ｌ 蒸 馏 ４ｏ 水 ０Ｄ 值
管 苷标准溶液 ＤＥＧ溶 Ｎａ（ 水 ．浴中 （入４２０
（ｘ标一ｘ样）为柚 苷 酶水解 柚皮 苷 的微克 数 ；ｔ为柚 苷酶 水 解柚 皮 苷 时问 ，本试 验 ｔ＝３０ ｒ ａｉｎ；Ｎ为柚 苷酶 样 品 的 稀 释倍 数 。
度 柚 皮 苷标 准 溶 液 的配 制及 测 定 ，见 表 １。表 １中 用 ０，４０，１２０，２００，２８０，３６０，４４０共 ７个 不 同 含 量 的柚 皮 苷 ，配 置标 准溶 液 。利 用柚 皮苷 在 碱性 条件 下 及 ４０℃
加 入 柚 皮 苷 酶 解 液 １ ｍＬ和 ９０％的 一 缩 二 乙二 醇 ５ ｍＬ，及 ４ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ 溶 液 ０．１ ｍＬ，蒸 馏 水 ３．９ ｍＥ（总 反应 体积 １０ ｍＥ），４０℃水 浴水 解 ｌ０ ｍｉｎ，同时以 １ ｍＬ对
号 ｍＬ
液／
１
０
０
５
２
０．１
４０
５
３
０．３
１２０
５
４
０．５
２００
５
５
０．７
２８０
５
６
０．９
３６０
５
７
１．１
４＿４０
５
／ｍＬ ０．１ ０．１ ０．１ Ｏ．１ ０．１ Ｏ．１ ０．】
／
间／ｍｉｎ ｎｍ）
４．９ ４．８ ４．６ ４．４ ４－２ ４．０ ３．８
柚 皮 苷 （Ｎａｒｉｎｇｉｎ），分 子 式 ｃ Ｈ ０ ，分 子 量 为 ５８０．５３。 图 １为柚 皮 苷 的结构 式 。
Ｈ２ＣＣｌＨ Ｏ
嘲
图 １ 柚 皮 苷 的 结构 式
消 除桔 子汁 的苦味 ，目前 主要 应 用 的有酶 法 、吸 附 法 、超临界流体萃取脱苦和代谢脱苦法等［３１。其中酶法 脱苦具有专一性强 ，对桔子汁的营养成分无破坏 、效果 好 、成本低等优点 ，是 目前较为理想的方法 。微生物中 能分解柚皮苷的菌种很多 ，其中以曲霉属为主。柚苷酶 可 以分 解柚 皮 苷 。柚 苷 酶 由鼠李 糖酶 和 黄 酮类 一Ｂ一葡
至 １００ ｍＬ，即成 ４００ Ｉｘｇ／ｍＬ的柚皮苷标准溶液。③４．０ ｒａｉｎ，同时 以 １ ｍＬ蒸 馏 水 作 同样 处 理 作对 照 （在理 论
ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ 溶 液 的配 制 ：准 确 称 取 氢 氧 化 钠 分 析 纯 上计算对照的柚皮苷溶液的浓度为 ４００ Ｉｘｇ／ｍＬｘ２ ｍＬ／
Ｏ ０
１００
２００
３００
柚 皮 苷 微 克 数
图 ２ 柚皮苷标准 曲线
４００
５００ ｕ ｇ
量瓶 中 即成 。其 次 ，分 别 将 溶液 Ａ ４１．０ ｍＬ和溶 液 Ｂ 柚皮 苷 的微 克数 表示 为一个 酶 活力单位 （ｕ）。
９．８ ｍＬ加 于 １００ ｍＬ同一 容 量 瓶 中 ，用蒸 馏 水 定 容至 １００ ｍＬ即成 。＠４００ Ｉｘｇ／ｍＬ柚皮苷标准溶液 的配制 ： 称 取 含 量 ９８％的柚 皮 苷 ４０．８２ ｍｇ于 １００ ｍＬ烧 杯 中 ，
Ｏ．２
Ａ，０．２ ｍｏｌ／Ｌ冰 醋 酸 （１１．５ ｍＬ冰 醋酸 于 １ ０００ ｍＬ容量 瓶 中 ，用 蒸 馏 水 定 容 至 １ ０００ ｍＬ即 成 ；溶 液 Ｂ，Ｏ．２ ｍｏｌ／Ｌ醋 酸 钠 ，称 取 醋 酸 钠 （ＣＨ ＣＯＯＮａ １．６４ ｇ或 ＣＨＣＯＯＮａ·３Ｈ：Ｏ ２．７２ ｇ），用蒸 馏 水定 容 在 １００ ｍＬ容
①样 品柚 苷 酶对柚 皮苷 的酶 解作用 ：柚 苷 酶样 品 的制 备 ：柚 苷酶 摇瓶 发 酵液 过滤 后用 ｐＨ ４．０醋 酸缓 冲 液稀 释 ５０倍 。在 １５ｘ１５０ ｍＬ试管 中分别 加入 ４００ ｇ／
用少 量 ０．２ ｍｏｌ／Ｌ醋 酸缓 冲溶 液 溶解 后 ，倒 入 １００ ｍＬ ｍＬ柚 皮 苷 标 准 液 ２ ｍＬ和 ０．２ ｍＬ／Ｌ ｐＨ ４．０醋 酸缓 冲
１．２
转 ／ｍｉｎ培养 ４～５ ｄ，发 酵液 过 滤 ，测定 滤 液 中柚 苷 酶 活
ｌ
力 。 １．２．４ 酶 活测 定的 原始 方 法 １．２．４．１ 相关溶液 的配制 。０３０．２ ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ ４．０醋酸缓
０ ８
詈 ０—６
。 Ｏ·４
冲溶 液 的 配制 【ｌｌ：首 先分 别 配好 溶液 Ａ和 溶液 Ｂ；溶 液
温 度 中 ，能 与一 缩 二 乙二醇 发生 反应 。柚 皮 苷起 显色 反 照液 代替 酶解液作 同样处理 以作 对照 ，在 ４２０ ｒｉｍ处理用
应 （黄色 ），生成 一 种 叫柚皮 苷 二氢查 尔 酮 的物质 。利 用 此 反应 ，可 以配 制 出柚皮 苷 的标 准溶 液 ，并 绘 制 出标 准 曲线 （图 ２）。 １．２．４．３柚苷 酶 活力测 定 。 １）柚 苷 酶活力 的定义 ：在 ４０ ｏＣ，ｐＨ ４．０条 件 下 ，每分 钟 每 毫 升 （或每 克 ）酶液 分 解
容量 瓶 中 ，再 用少 量 ０．２ ｍｏｌ／Ｌ醋酸 缓 冲液 冲洗 烧 杯 ， 液 ２ ｍＬ ４０ ｏＣ恒温水 浴 锅 中预热 ５ ｍｉｎ，然后 加入 预 先 一 并倒人容量瓶中 ，然后用 ０．２ ｍｏｌ／Ｌ醋酸缓 冲液定容 稀释 的柚 皮 苷样 品液 １ ｍＬ，充 分摇 匀 ，４０℃下 保 温 ３０
ｍＴ 。
关键 词 ：黑曲霉 ３－９；柚苷酶 ；柚 皮苷
分 类 号 ：￥６６６：Ｑ９４６．５
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１００６—２５０５（２０１２）０３—００２８—０３
０ 前言 柑 桔类 水 果 包 括 柠 檬 、脐 橙 柚 、葡 萄 柚 等 ，是 世 界
上最 主要 的亚 热带 水果 之 一 。柑桔 的果 实 中含 有 多种 营养 成 分 ，除含 有 丰 富 的葡 萄 糖 、果糖 等 ，还 含有 一 定 量 的硫 胺 素 、核 黄 素 、生物 类 黄 酮 、类 胡 萝 卜素等 生 理 活性 物 质 ，因此 开展 柑 桔 加工 和 综合 利 用 ，很 有必 要 Ｉｌ】。 但是 柑桔加工过程 中会 出现 明显苦 味 ，使 许多 消费 者难 以接 受 ，这就 限 制 了其 在食 品 工 业 中的广 泛 应 用 。柑 桔 中苦 味物 质 主要 是 柚 皮 苷 和柠 檬 苦 素 ，其 中柚皮 苷 含 量较 大 ，如无 核桔 汁柚皮 苷含 量达到 ３０ ｍ ｇ左右［２１。
萄糖 苷酶 组成 ，它 能使 柚 皮苷 经 过柚 皮 素 一Ｂ一葡 萄 糖 苷 中间产 物最 终水解 生 成柚 皮素 ，因此此 酶 可 以广 泛 应 用 于桔 子汁 、桔 子酒 、桔子 皮等 的脱 苦 。 １ 材料与方法 １．１ 材 料 １．１．１ 菌种 。黑 曲霉 ３－９，江西 农 业 大学 生物 技 术研 究 中心 自行 分离 筛选 获得 。 １．１．２ 斜面培养基 ＼选择｝生分 离平板培养基 （％）。 Ｍｇ— ＳＯ４·７Ｈ２０，０．５；桔 皮 粉 ，０．５；Ｋ２ＨＰＯ４，０．５；ＫＣ１，０．５；ＦｅＳ一 ０４·５Ｈ２０，０．０１；琼脂 ，２．０；ｐＨ值 自然 。 １．１＿３ 液体摇瓶发酵培养基配方（％）。桔皮粉 ，１；豆渣 （湿 ），５；黄 豆 粉 ，２； 蔗 糖 ，０．５；ＣａＣ１２，０．１；ＺｎＳＯ４，０．１； Ｋ２ＨＰ０４，０．１；ＭｇＳ０４￣７Ｈ２０，０．１；自来水 ，１００；ｐＨ值 ６．５。 １．１．４ 主 要试 剂 。① 柚皮 苷 ，含 量 ９８％，陕 西 慧科 植 物 开发 有 限公 司提供 ；② 一缩 二 乙二 醇 ；冰 醋酸 ，醋酸 钠 ， 氢氧化钠等（均为分析纯）；③桔皮粉 、豆饼粉 、含水量约 ４０％的豆渣 （自制 ）。 １．１．５ 主要仪器设备与玻璃器皿 。①仪器设备：７２２分 光光 度 计 、摇 床 、离心 机 、超净 工作 台 、培 养箱 、灭菌 锅 ； ②玻 璃 器皿 ：２０ ｍＬ带塞 试管 、平 皿 、容 量 瓶 、移 液管 。 １．２ 方 法 １．２．１ 菌种 的斜面培养。将供试菌株接种到斜面培养 基上 ，培养 ，备用 。 １．２．２ 摇瓶培养基的制备。按供试配方称料 ，加入所需 水 的体积 ，隔水煮沸后维持 ２０ ｍｉｎ，搅 拌均匀分装 于 ２５０ ｍＬ三角瓶 ，每瓶 ３０ ｍＬ，绒布塞瓶 口，并用牛皮纸 包扎 ，１２１℃消毒 ３０ ｍｉｎ，备用。