免疫学应用ppt

（二）、免疫细胞功能的检测
利用已筛选建立的与某种细胞因子独特的生 物效应高度敏感的细胞系进行检测。
利用抗原抗体特异性结合反应的特性，定量检测细 胞因子。常用的方法包括ELISA、RIA、免疫印迹 法、流式细胞术等。此外，还可利用酶标或荧光标 记的抗细胞因子单克隆抗体，原位检测细胞因子在 细胞内的合成及分布情况。
E
密度稍低于分层液，
花
位于血浆层和分层液
环
界面。
（二）、免疫细胞功能的检测
磁珠分离法
阳选的原理是将IMB 与细胞悬液混合，并 置于强磁场中，能与 IMB结合的细胞滞留 在磁场中，不能与 IMB黏附的细胞则被 清除，因而使细胞得 以分离
流式细胞术 （FCM）
淋巴细胞及其 亚群的分离
尼龙毛柱分离法
玻璃黏壁分离法
将PBMC铺于培养皿上， 由于单核细胞易与玻璃 黏附而滞留于平皿上， 故未吸附的细胞即为富 含淋巴细胞的悬液（可 达90%）
将淋巴细胞悬液通 过尼龙毛（即聚酰 胺纤维）柱， B细
胞易黏附于尼龙毛， 而T细胞无此特性， 因此可分离T细胞 与B细胞
将待分离细胞制备成单细胞悬液， 用相应的荧光标记抗体染色后，在 流式细胞器液流系统中形成包裹有 鞘液的单细胞液滴，当液滴经过激 发光束时，结合在细胞上的荧光素 发射出相应荧光，经光电倍增管收 集转化光电信号，即可通过电脑鉴 定细胞表型与计数，同时利用液滴 表面的电荷使其瞬间带电，在电场 的作用下使其路径发生偏离，从而 达到富集目标细胞的目的。
泳
体成分的分析和异常体液蛋白的识别）、对流免疫电泳（施
技
加电场的双向扩散试验，可加速反应速度）、火箭免疫电泳 （施加电场的单向扩散试验，可提高反应速度及敏感性）。
术
（一）、基于抗原抗体反应的检测
免
指用荧光素、酶或放射性核素等标记抗体或抗原，进行抗原
疫
抗体反应的技术。免疫标记技术具有灵敏度高、快速、可定
标
性、定量、定位等优点，是目前应用最为广泛的免疫学检测
记
技术，根据实验中所用标记物的种类和技术的不同，分为免
技
疫荧光技术、放射免疫技术、免疫酶技术等。
术
酶联免疫吸附试验（间接法）
（一）、基于抗原抗体反应的检测
荧光抗体与 标本中的抗 原直接反应， 荧光显微镜 下对抗原定 性与定位。
用荧光素标记抗体 与待检标本中抗原 反应，然后将标本 置于荧光显微镜下 观察。在激发光照 射下，荧光素散发 荧光，借此鉴定或 定位标本中的抗原。
先用特异性抗 体（一抗）与 标本中抗原结 合，再用荧光 素标记的抗抗 体（二抗）染 色。
直接荧光法 补体荧光法
间接荧光法 双标记荧光法
（一）、基于抗原抗体反应的检测
Ag*
Ab
Ag
标记抗原 特异性抗体 待测抗原 放
( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗体复合物
射 免
疫
分离Ag*-Ab 和游离Ag*
（一）、基于抗原抗体反应的检测
颗粒性抗原
抗体（凝集素）
直接凝集反应
（一）、基于抗原抗体反应的检测
方
沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，此
法
类反应称为沉淀反应。沉淀反应分为液相沉淀反应与凝胶内
沉淀反应两大类。
单向免疫沉淀
是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制成琼 脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩 散。抗原在扩散过程中与凝胶中的抗体相遇， 形成以抗原为中心的沉淀环，环的直径与抗 原含量呈正相关
（二）、免疫细胞功能的检测
免
疫
细 淋巴细胞
胞 增殖试验
功
能
测 定
细胞毒试 验
吞噬细胞 功能测定
放射性核 素掺入法
在靶细胞中加入PHA共同培养，终止培养前8～ 15小时加入氚标记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）， 由于细胞合成DNA与3H-TdR掺入正相关，测定 细胞掺入的放射性核素水平，可反映细胞的增 殖状况
测
定
法
测定Ag*-Ab和/或游离Ag*放射性
示
意
图 从标准曲线上读知含量
（二）、免疫细胞功能的检测
密度梯度离心法
外周血单个核
细胞的分离
将稀释后的外周血铺 于比重为1.077的淋巴
细胞分离液表面，离
心后，血浆和血小板
由于密度较低悬浮于
淋巴细胞及其
分层液上部，红细胞 和粒细胞密度较大沉
亚群的分离
于底部，百度文库个核细胞
肖健
免疫学应用
学习目的
通过学习应用免疫学诊断、预防和治疗方面 的原理和技术来诊断和防治疾病。
目录
一 免疫诊断 二 免疫预防 三 免疫治疗
一 免疫诊断
定义
指应用免疫学理论和检测技术对免疫 相关物质（抗原、抗体、免疫细胞及 免疫分子等）进行定性、定量检测的 实验诊断方法。
（一）、基于抗原抗体反应的检测
原理 抗原抗体特异性结合
检测
特 点
•
➢特异性：抗原-抗体的结合。 ➢可逆性：抗原抗体结合是分子表面的非共价键
结合。 ➢比例性：抗原和抗体结合是否呈现可见的反应
现象，于两者的分子比例密切相关。 ➢阶段性：抗原抗体反应可分为两个阶段
特异性结合阶段 可见的反应阶段
（一）、基于抗原抗体反应的检测
凝集反应：指颗粒性抗原（如细菌、红细胞等）与相应抗体 在合适条件下结合，出现肉眼可见的凝集现象的反应
（一）、基于抗原抗体反应的检测
双
向
将抗原和抗体分别加于琼脂凝胶板上相对应的小孔中，使二
免
者向四周自由扩散，在相遇处（对应孔之间）形成沉淀线。
疫
扩
散
（一）、基于抗原抗体反应的检测
免
是沉淀反应与电泳分析技术的结合，它既加快了沉淀反应的
疫
速度，又提高了对不同抗原成分的分辨程度。较常用的有免
电
疫电泳（区带电泳后，再作双向扩散，主要应用于抗原、抗
方
直接凝集反应：指
间接凝集反应：指将
法
将天然颗粒性抗原 直接与相应抗体在
可溶性抗原（抗体） 包被在载体颗粒表面，
电解质存在的条件
再与相应抗体（抗原）
下结合，出现凝集
结合出现凝集现象的
现象的反应
反应。
蛋白质芯片技术：蛋白质芯片技术又称蛋白质微阵列,可实 现快速、准确、高通量地检测不同蛋白质（即靶蛋白），探 针具有多样性。
MTT比色 法
在细胞培养终止前数小时加入MTT其作为细胞 内线粒体琥珀酸脱氢酶的底物参与反应，形成 紫褐色甲臜颗粒并沉积于细胞内或细胞周围， 甲臜生成量与细胞增殖水平呈正相关，其溶解 后的比色测定值可反映细胞增殖水平
形态计数法
淋巴细胞受有丝分裂原或特异性抗原刺激后转 化为淋巴母细胞，其形态结构发生明显改变如： 细胞体积变大、胞浆增多、出现空泡、核仁明 显、核质染色质疏松等。通过染色镜检，可计 算出淋巴细胞转化率