基因编辑技术
基因编辑技术CRISPR
基因编辑技术CRISPR基因编辑技术CRISPR（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是一种革命性的基因工程技术，它可以精准地修改生物体的基因组，为科学研究、医学治疗和农业发展带来了巨大的希望和机遇。
CRISPR技术的出现改变了基因编辑领域的格局，被誉为“基因剪刀”，具有高效、精准、便捷等特点，受到广泛关注和应用。
一、CRISPR技术原理CRISPR技术是受到细菌天然免疫系统的启发而发展起来的一种基因编辑技术。
细菌通过CRISPR/Cas系统来抵御病毒入侵，其中CRISPR是一段DNA序列，记录了细菌曾经感染过的病毒基因信息，Cas蛋白则能识别并切割这些病毒基因。
科学家们发现，通过改造CRISPR/Cas系统，可以实现对生物体基因组的精准编辑。
CRISPR技术的基本原理是利用一种叫做“引导RNA”的分子，它能够将CRISPR/Cas系统导向到特定的基因组位置，然后Cas蛋白就会在这个位置上进行切割或编辑操作。
通过设计合适的引导RNA序列，科学家可以实现对基因组的精准编辑，包括基因敲除、基因插入、基因修饰等操作。
二、CRISPR技术在科学研究中的应用CRISPR技术在科学研究领域发挥着重要作用，它为科学家们提供了一种高效、精准的基因编辑工具，帮助他们研究基因功能、疾病机制等重要科学问题。
通过CRISPR技术，科学家们可以快速生成基因敲除或基因突变的细胞系或动物模型，从而揭示基因在生物体内的功能和作用机制。
此外，CRISPR技术还被广泛应用于基因组筛选、基因组编辑、疾病模型构建等方面。
科学家们利用CRISPR技术可以精准地编辑细胞的基因组，研究基因与疾病之间的关系，为疾病的治疗和预防提供新的思路和方法。
三、CRISPR技术在医学治疗中的应用CRISPR技术在医学治疗领域具有巨大的潜力，可以用于治疗各种遗传性疾病、癌症、传染病等疾病。
生物学研究中的基因编辑技术
生物学研究中的基因编辑技术随着科技的不断发展，生物学研究领域涌现出了一种重要的技术——基因编辑技术。
该技术利用现代分子生物学的方法，可以直接修改生物体的遗传信息，从而实现对基因的精准编辑。
本文将从基因编辑技术的定义、应用范围、技术原理和未来前景等方面进行探讨。
一、基因编辑技术的定义基因编辑技术是一种通过精确定位并改变个体基因组中特定基因序列的技术。
与传统的基因改良方法相比，基因编辑技术具有更高的精准性和效率。
通过引入特定的核酸酶，例如CRISPR-Cas9系统，可以在具体的基因位点上直接切割DNA链，并将所需的基因序列插入或删除。
由于这种技术可以直接作用于生物体本身的基因组，因此更为高效和精确。
二、基因编辑技术的应用范围基因编辑技术在生物学研究领域的应用范围十分广泛。
首先，基因编辑技术可以用于研究基因的功能。
通过改变特定基因的序列，研究人员可以观察到这些改变对生物体的生理和生化过程产生的影响，以揭示基因的具体功能。
其次，基因编辑技术在农业领域也有着重要应用。
通过对作物的基因进行编辑，可以提高作物的抗病性、耐盐碱性或者营养价值，从而提高农作物的产量和质量。
此外，基因编辑技术还可以应用于治疗人类遗传疾病。
通过修正患者体内某些基因的突变位点，可以治疗一些难以根治的遗传性疾病。
三、基因编辑技术的技术原理基因编辑技术主要依赖于特异性的核酸酶。
CRISPR-Cas9系统是目前应用最广泛的一种基因编辑技术。
CRISPR是一种天然存在于细菌和古细菌中的免疫系统，可用于识别并摧毁入侵病毒的DNA。
通过利用CRISPR系统中的Cas9酶，科学家可以将其导入细胞内，使其精确识别并切割特定基因的DNA区域。
此外，还可以利用向该系统中添加合成的引导RNA序列，实现对特定基因的精准编辑。
该RNA序列通过与目标DNA序列互补配对，将Cas9引导至目标区域，从而实现基因的插入或者删除。
四、基因编辑技术的未来前景基因编辑技术的出现为生物学研究和生物技术的发展带来了巨大的机遇和潜力。
基因编辑技术简介
基因编辑技术简介基因编辑技术是一种革命性的生物技术，通过对生物体的基因进行精确的修改和改变，实现对生命活动的控制和调节。
这项技术的出现和发展为人类解决许多难题提供了新的可能性，也为医学、农业和环境等领域带来了巨大的变革。
一、基因编辑技术的原理基因编辑技术的核心原理是通过特定酶的引导，使其与目标基因发生特异性的结合，然后通过酶的催化作用来对目标基因进行剪切、修复或替换等操作，从而达到精确编辑基因的目的。
其中最常用且最受关注的基因编辑工具是CRISPR-Cas9系统。
二、CRISPR-Cas9系统的工作机制CRISPR-Cas9系统是一种起源于细菌的天然免疫系统，其主要工作机制可以概括为三个步骤：识别、切割和修复。
1. 识别：CRISPR-Cas9系统通过引导RNA（gRNA）的作用，能够特异性地与目标基因序列进行配对。
这样，Cas9酶就能准确地定位到目标位点上。
2. 切割：一旦Cas9酶与目标位点结合，它会通过其内在的核酸酶活性，将目标位点上的DNA链打断。
这样，可以引发细胞启动自身的DNA修复机制，从而实现对目标基因的修复和编辑。
3. 修复：细胞的DNA修复机制主要有两种方式，即非同源性末端连接（NHEJ）和同源重组（HR）。
NHEJ通常会导致插入或缺失特定的碱基，而HR则能够在两个双链DNA之间发生基因交换。
科学家可以通过控制修复方式，实现对基因的精确编辑。
三、基因编辑技术的应用领域基因编辑技术在医学、农业和环境等领域都有着广泛的应用前景。
1. 医学应用：基因编辑技术在医学领域的应用主要包括基因治疗和药物研发。
通过基因编辑技术，可以修复或替换一些遗传疾病相关基因的突变，从而实现疾病的治疗或预防。
此外，基因编辑技术还可以用于药物研发，加速疾病治疗的进展。
2. 农业应用：基因编辑技术在农业领域的应用主要包括农作物品质的改良、生物农药和抗病虫害作物的培育。
通过基因编辑技术，可以实现对作物的抗病性、产量和品质等性状的精确编辑和改变，从而提高农作物的产量和耐逆性。
基因编辑技术概述
基因编辑技术概述基因编辑技术，也称基因工程技术、基因修饰技术，是一种能够直接对生物体基因组进行精准操作的技术。
它通过改变细胞或有性系生物体中的特定DNA序列，实现对基因组的修改和重塑。
基因编辑技术的发展对医学研究、农业改良和生物学研究等领域都产生了重大影响。
本文旨在介绍基因编辑技术的原理、应用领域以及引发的一些伦理和法律问题。
一、基因编辑技术的原理基因编辑技术主要采用一种名为CRISPR-Cas9的系统，CRISPR是“Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats”的缩写，意为“短回文重复序列的成簇排列”。
Cas9是一种酶，具有切割DNA的能力。
该系统通过引导RNA与特定的DNA序列结合，将Cas9蛋白导向特定基因位点，并将DNA切割或修复产生所需的基因改变。
二、基因编辑技术的应用领域1. 医学研究领域基因编辑技术在医学研究中有着广泛的应用。
通过编辑细胞中的特定基因，科学家可以模拟和研究各种疾病，如癌症、遗传性疾病等。
基因编辑技术还有望应用于基因治疗，即通过修复或替换患者体内的异常基因，达到治疗疾病的效果。
2. 农业改良领域基因编辑技术可以用于改良农作物和家畜，提高其产量、抗病能力和抗逆性等特性。
例如，科学家通过编辑玉米基因，使其能够在干旱条件下生长，以应对气候变化的影响。
此外，基因编辑技术还可以用于改善食品的品质，增加营养价值。
3. 生物学研究领域基因编辑技术为生物学研究提供了强有力的工具。
通过编辑实验动物的基因，科学家可以揭示特定基因对生物体发育、生长和行为等方面的影响。
此外，基因编辑技术还可以用于研究基因与环境之间的相互作用，拓展人类对生命的认识。
三、伦理和法律问题虽然基因编辑技术具有许多潜在的应用前景，但也引发了一系列伦理和法律问题。
首先，基因编辑技术可能导致人类基因组的不可逆性、持续性修改，因此如何确定修改的范围和目的成为一个重要的问题。
基因编辑技术
基因编辑技术基因编辑技术是一种能够精确修改生物体基因组特定位点的技术，通过对基因片段的添加、删除或替换，可以实现对生物体某一特性或性状的定向改造。
这一技术的兴起标志着人类进入了生命科学的新纪元，它为医学、农业、生物制药等领域带来了革命性的变革。
基因编辑技术的发展基因编辑技术的发展经历了几个重要阶段。
最初，科学家们使用限制性内切酶进行基因操作，但这种方法效率低、准确性差。
随着分子生物学的进步，锌指核酸酶（ZFNs）和类转录激活因子核酸酶（TALENs）等技术相继出现，提高了基因编辑的准确性和效率。
然而，这些技术的操作复杂、成本高昂，限制了它们的广泛应用。
2012年，CRISPR-Cas9技术的诞生彻底改变了基因编辑领域。
这项技术以其简单、高效、成本低的特点迅速成为最受欢迎的基因编辑工具。
CRISPR-Cas9系统源自细菌的一种免疫机制，通过设计特定的RNA序列，可以引导Cas9蛋白精确地切割DNA，实现基因的编辑。
基因编辑技术的应用基因编辑技术在多个领域展现出巨大的应用潜力。
在医学领域，基因编辑技术可以用来治疗遗传性疾病，如通过修正致病基因来治疗地中海贫血症、囊性纤维化等疾病。
此外，基因编辑技术还在癌症治疗、艾滋病治疗等方面显示出希望。
在农业领域，基因编辑技术用于培育抗病虫害、耐旱、高产等优良作物品种，有助于提高农作物产量和质量，保障粮食安全。
同时，基因编辑技术也在畜牧业中应用，通过改善畜禽的遗传特性，提高肉蛋奶的产量和品质。
在生物制药领域，基因编辑技术被用来生产重组蛋白药物和疫苗，提高药物的生产效率和安全性。
例如，利用基因编辑技术改造细胞系，可以生产出更为安全的抗体药物。
基因编辑技术的伦理问题尽管基因编辑技术带来了诸多益处，但其应用也引发了一系列伦理和社会问题。
如何平衡科技进步与伦理道德的界限，确保技术的安全、公平和负责任的使用，是当前社会面临的重大挑战。
例如，基因编辑技术在人类胚胎中的应用引发了广泛的争议，涉及到人类尊严、自然本性和社会公正等问题。
基因编辑技术名词解释
基因编辑技术名词解释
基因编辑技术是一种利用人工手段对生物体的基因进行精确修改的技术。
基因编辑技术可以通过剪切、插入或替换DNA序列来改变生物体的遗传信息，实现对特定基因的精准编辑和修饰。
其中最常用的基因编辑技术是CRISPR/Cas9系统，它利用CRISPR RNA和Cas9蛋白质相互作用，定位到目标DNA序列上并进行切割。
通过这种方式，科学家可以在细胞或生物体中精确地删除、插入或更
改特定基因。
除了CRISPR/Cas9系统外，还有其他一些基因编辑技术，如锌指核酸酶（ZFN）和转录活化子效应器核酸酶（TALEN），它们也能够实现
类似的功能。
基因编辑技术具有广泛的应用前景，在医学、农业、环境等领域都有
重要作用。
例如，在医学领域中，基因编辑技术可用于治疗遗传性疾病、癌症等；在农业领域中，它可以帮助改良农作物品种、提高产量等；在环境领域中，则可以利用它来处理污染物等。
尽管基因编辑技术带来了许多好处，但也存在一些伦理和安全问题，
例如可能引发不可逆的基因突变、导致生态系统的扰动等。
因此，在
使用基因编辑技术时需要认真考虑其潜在风险，并制定相应的规范和标准。
基因编辑技术
基因编辑技术基因编辑技术是一种利用现代生物技术手段，对生物的基因组进行精确改变的方法。
它可以用于各种生物，包括植物、动物和微生物等。
基因编辑技术有着广泛的应用前景，可以用于疾病治疗、作物改良、动物育种等领域。
本文将从技术原理、应用前景和伦理道德等方面进行探讨。
一、技术原理基因编辑技术的核心方法是CRISPR-Cas9系统。
CRISPR （Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是一种细菌天然免疫系统。
Cas9是CRISPR系统中的核酸酶，具有剪切DNA双链的能力。
利用CRISPR-Cas9系统，科学家可以指导Cas9蛋白识别并剪切特定的DNA序列，然后通过细胞自身的修复机制来实现基因组的修改。
二、应用前景基因编辑技术在医学领域有着重要的应用前景。
通过基因编辑可以修复遗传性疾病造成的基因突变，为患者提供个性化治疗方案。
例如，在一些癌症治疗中，科学家可以利用基因编辑技术针对癌细胞中的特定基因进行靶向修复，达到治疗效果。
此外，基因编辑还可以用于研究疾病的发生机制，为疾病的早期预防和治疗提供新的思路。
基因编辑技术在农业领域的应用也备受关注。
通过编辑作物的基因组，可以提高作物的抗病虫害能力、耐逆性，实现对气候变化的适应。
这将有助于提高农作物产量和品质，解决粮食安全问题。
同时，基因编辑还可以改良作物的味道、口感，提高农产品的附加值。
对于动物育种来说，基因编辑技术可以帮助科学家更加精确地选择或改良某种特定基因，以实现对动物性状的精确调控。
这将有助于加速畜牧业的发展，提高养殖动物的抗病能力、生长速度和肉质品质。
三、伦理道德虽然基因编辑技术带来了许多潜在的好处，但也引发了一系列伦理道德问题。
首先，基因编辑技术是否应用于人类胚胎的修改是一个备受争议的问题。
修改人类胚胎基因可能影响诸多后代，因此在人类胚胎的基因编辑研究中需要更加谨慎和审慎。
其次，基因编辑可能带来非预期的副作用。
基因编辑技术
基因编辑技术基因编辑技术是一种能够精确修改生物体基因组特定位点的技术，通过对基因片段的添加、删除或替换，可以实现对生物体某一特性或性状的定向改造。
这项技术的发展为我们提供了治疗遗传性疾病、改良农作物以及保护濒危物种等可能性，同时也带来了伦理和安全方面的挑战。
基因编辑技术的发展历程基因编辑技术最早可以追溯到20世纪70年代的限制酶技术和90年代的基因打靶技术。
然而，这些早期技术操作复杂，效率低下。
直到21世纪初，随着锌指核酸酶（ZFNs）和类转录激活因子核酸内切酶（TALENs）的出现，基因编辑技术才开始迅速发展。
2012年，CRISPR-Cas9技术的问世标志着基因编辑技术进入了一个新的时代，因其设计简单、成本低廉、高效精准而受到广泛关注。
CRISPR-Cas9技术简介CRISPR-Cas9技术源自细菌的一种天然免疫机制，通过设计一段导向RNA（gRNA）来引导Cas9蛋白切割目标DNA序列，实现基因的定点编辑。
该技术不仅在基础研究中展现出巨大潜力，也在医学、农业等领域的应用中显示出前所未有的可能性。
例如，通过CRISPR-Cas9技术，科学家们已经成功治愈了一些遗传性疾病的模型动物，为未来的临床治疗奠定了基础。
基因编辑技术的应用领域基因编辑技术的应用领域十分广泛，包括但不限于：- 医学领域：通过修复致病基因，治疗遗传性疾病；通过编辑免疫细胞，增强抗癌疗法的效果。
- 农业领域：培育抗旱、抗病的作物新品种，提高农作物产量和品质。
- 环境保护：用于濒危物种的保护和恢复，以及生态系统的平衡。
基因编辑技术的伦理与法律问题尽管基因编辑技术带来了巨大的科学突破和应用前景，但其所涉及的伦理和法律问题也不容忽视。
如何确保技术的安全性、避免潜在的生态风险、保护个人隐私、以及公平地分配技术成果等问题，都需要全社会共同面对和解决。
此外，不同国家和地区对于基因编辑技术的应用也有着不同的法律法规限制。
结论基因编辑技术作为一项革命性的科学技术，其发展速度和应用范围都在不断扩展。
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（2） β-半乳糖苷酶系统筛选
（二）根据重组子结构特征进行筛选的方法 （1）快速裂解菌落并鉴定分子大小 （2）内切酶酶切图谱鉴定
（3）分子杂交
（4）PCR
（5）核酸序列测定
小结：
（1）分离：提取和获得目的基因和载体
（2）切割：分别对目的基因和载体DNA
酶切； （3）连接：目的基因与载体连接，形成 新的重组 DNA分子； （4）转化：用重组DNA分子转化受体细 胞； （5）筛选：筛选转化成功的细胞克隆 （6）表达：培养获得外源基因的细胞或
4、碱性磷酸酶
去除DNA、RNA、dNTP和NTP 5ˊ端的磷酸根。
（1）5’端标记 （2）制备载体时，用碱性磷酸酶处理后，可防止载体自身 连接，提高重组效率。 碱性磷酸酶有细菌碱性磷酸酶（BAP）和牛小肠碱性磷酸 酶（CIP）。CIP能在 1% SDS溶液中68 ℃加热15 min而 失活，故CIP较为常用。
↓
克隆基因的表达
1、 制备目的基因
（1）化学合成： 已知目的基因的核苷酸序列或根据基因产物的氨基酸序 列推导出相应基因DNA碱基序列。 目前使用DNA合成仪合成的片段长度有限，一般用于小 分子活性多肽基因的合成，较长的链则须分段合成，然后用
连接酶NA用物理或酶学的方法 切割成预期大小的片断，并将 所有这些片断都与适当的载体 连接，引入相应的宿主细胞中 保存和扩增。 理论上讲，这些重组载体 上带有了该生物体的全部基
有多大的实用价值。 Ⅱ型酶： 应用广泛，能在DNA分子内部的特异位点，识别和切 割双链DNA，其切割位点的序列可知、固定。 通常所说的限制性内切酶就是指Ⅱ型酶。
4.识别和切割位点：
识别位点：即为Ⅱ型酶识别的特殊DNA序列
通常是4～8个碱基对、具有回文序列的DNA片段 5’ – G A A T T C - 3’ 3’ – C T T A A G - 5’
。
① 5`突出粘性末端
② 3`突出粘性末端
③ 平头（钝性末端）
5ˊ突出黏性末端(EcoRⅠ)： 5ˊ-G↓AATTC-3ˊ
3ˊ-CTTAA↑G-5ˊ
5ˊ-G
3ˊ-CTTAA
+
AATTC-3ˊ
G-5ˊ
3ˊ突出黏性末端(PstⅠ)： 5ˊ-CTGCA↓G-3ˊ 5ˊ-CTGCA 3ˊ-G↑ACGTC-5ˊ 3ˊ-G
真菌的转化 一般需要制备原生质体
植物遗传转化方法和技术
根癌农杆菌介导的植物转基因
图10-1 农杆菌侵染伤口的模式图
基因枪介导法
电转化法 PEG转化法 花粉管通道法
动物遗传转化方法和技术
原核显微注射法 胚胎干细胞介导法 病毒载体法
基因重组/敲除的概念及简史
1980年代初，ES细胞分离和体外培养成功奠 定了基因重组/敲除的技术基础 1985年首次证实了哺乳动物细胞中同源重组 的存在奠定了基因重组/敲除的理论基础 1987年，Thompsson et al首次建立了完整的ES 细胞基因敲除的小鼠模型 在随后的时间里基因敲除技术得到了进一步 发展和完善
的DNA在体外重组于能自我复制 的载体DNA分子上，然后将重组 DNA导入宿主细胞中进行增生， 以获得大量的目的DNA片段，或 以此为基础，通过基因的诱导 表达，得到大量相应蛋白质产 物的过程。 又称为分子克隆技术或基 因工程技术
第二节
重组DNA技术的发展史
基因工程的诞生
1、Berg的开创性实验－第一个实现DNA重组 猴病毒SV40的DNA+λ噬菌体的DNA
ACG-OH TACTTAA-P P-AATTCGT OH-GCA
-ACGAATTCGT-TGCTTAAGCA
3、DNA聚合酶
具有5`→3`聚合活性、5`→3`外切酶活性、3`→5`外 切酶活性。
可用于合成双链cDNA分子或片断连接，探针制备，序
列分析等。
耐热DNA聚合酶 最适反应温度为75～80℃ 具有5ˊ→3ˊ外切酶活性，不具有3ˊ→5ˊ外切酶活性
第四节
重组DNA技术常用载体
一、定义
是指能携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的
一类DNA分子。
分类： 克隆载体：用于在宿主细胞中克隆和扩增外
源DNA片段。
表达载体：用于在宿主细胞中获得外源基因 表达产物。
二、特点
1、具备复制能力。 2、具备一个或多个筛选标志。
3、具备较多拷贝数，易从宿主细胞中分离纯化。
核苷酸片段。 Eco RⅠ 5´- CCGAATTCG 3´- GGCTTAAGC
4、重组DNA导入受菌体
将重组DNA或其他外源DNA导入宿主细胞的常用方法：
转化、感染、转染、显微注射、电穿孔等。 转化（transformation）：是指将重组质粒DNA导入受体细胞。
转染（ transfection）：将重组噬菌体 DNA 直接引入受体细 胞的过程。 转导（transduction）：重组噬菌体DNA分子，在体外经过包 装成具有感染能力的噬菌体颗粒，再以此噬菌体为载体，将 重组DNA导入受体细胞内的过程，也称为感染（infection）。
基因敲除的原理
① ② ③
RNAi 基因突变
同源重组
RNAi引起基因敲除的机制
同源重组引起的基因敲除
同源重组进行的基因敲除是通常意义上 的基因敲除 适用范围：适用的细胞既可以是原核细 胞，也可以是真核细胞; 原理(应用DNA同源重组原理)：通过外源 载体和内源靶位点相同的核苷酸序列之 间的同源重组,使外源DNA定点整合到靶 细胞的特定的基因座上
4、具备一个或多个限制性内切酶的单一识别点（多 克隆位 点，MCS）。 5、具有较高的遗传稳定性。
3、常用载体
质粒DNA、噬菌体DNA、病毒DNA、酵母DNA
这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋 予一些新的功能：如有利于进行筛选的标志基因、单一 的限制酶切点等。
1、质粒（plasmid）: 质粒为细菌染色体之外一些能独立复制并保持稳 定遗传的复制子。结构上，它是一种双链闭合环状的 DNA分子。
存活的ES细胞
图 示
ZFN 技术原理
锌指核酸酶（Zinc-finger nucleases, ZFN）是人工改造的限制性核酸内 切酶，利用不同的锌指结构识别特异DNA序列，利用核酸酶切断靶DNA。
• 锌指结构中每一个α螺旋可以特异识别 3-4个碱基； • 人工设计识别特异DNA序列的α螺旋采 用如上的通用序列，通过改变其中7个 X来实现识别不同的三联体碱基， TGEK是多个螺旋间的连接序列； • 构建成对人工锌指结构域和FokI融合 蛋白（ZFN）可以在指定区域切断 DNA双链。因，称为基因。(3)构建cDNA：
(4)聚合酶链反应（PCR）
已知目的基因的基因序列，用PCR从基因组 DNA中获得目的基因，或用逆转录PCR方法直接 从mRNA获得特定基因的cDNA。
(5)直接用限制性内切酶切取、分离： 对一些物理图谱已经确定，背景资料 清楚的原核生物、噬菌体及病毒等基因组， 可直接用限制性内切酶消化后，通过分离获 得目的基因。
1980年Nobel化学奖
2、Boyer-Cohen实验－第一个取得基因工程成功 1973年构建双重抗药性重组质粒 1973年是基因工程诞生的元年
第三节
工具酶
1、
“基因剪刀”－限制性核酸内切酶
Werner Arber 理论预见限制酶
Hamilton O. Smith 得到第一个限制酶
Daniel Nathans 用限制酶切得SV40 DNA片断
pBR322质粒载体
①相对分子质量小，长度为4.3kb。
②含有氨苄青霉素和四环素的抗性 基因(Ampr和Tetr)。
③有24种限制性内切酶位点。
④有一个复制起始点（ori）及与 DNA复制有关的序列，赋予该质粒 复制子特性。 ⑤为松弛型复制子。
2、噬菌体（bacteriophage,phage)
1978年Nobel生理或医学奖
1.定义：能识别双链DNA分子中某特定的核苷酸序列，并
在识别序列内或附近切割DNA双链结构的一类核
酸内切酶（在核酸分子链的内部制造切口的酶）。
2.来源：原核生物
3.分类：根据结构、作用特点不同，分为三类。 Ⅰ型酶、Ⅲ型酶：
具有限制切割与甲基化修饰活性。Ⅰ型和Ⅲ型酶都没
生物体，获得所需的遗传性
状或表达出所需要的产物。
修改遗传信息的第二步： 怎样将需要的信息导入到细胞？
重组质粒DNA转化微生物
化学转化法
电转化法 基因枪转化法
化学转化法的特点 适用微生物较少 效率较高
电转化法的特点 适用微生物多 效率高 死亡率高
基因枪转化法的特点 适用微生物较少 效率较高
革兰氏阳性菌的转化 一般需要制备原生质体
2； 待测DNA序列使用M13噬菌体。
3、目的基因与载体的连 接
⑴粘性末端连接：
由同一种限制酶切 割或不同的限制酶切割 形成互补的黏性末端。 经退火后，由DNA连接 酶连接。
CELLECTIS S.A. NASDAQ
2015.11.18 DNA剪切技术治疗1岁女童获成功
基因组编辑技术简介
Genome Editing
2015.11.22 HuangCH @ J208
修改遗传信息的第一步： 按我们的设计来重组DNA
第一节
基 本 概 念
重组DNA技术：
是指在基因水平上，将目
EcoRⅠ+ Bg lⅡ 双酶切
AATTC G A TCTAG
AATTC G GATCT A
Eco RⅠ+ Bg lⅡ 双酶切
+
AATTC G
A TCTAG
T4 DNA连接酶
GAATTC CTTAAG AGATCT TCTAGA
重组体