蛋白质的修饰和表达
content_03 蛋白质的修饰和表达
大肠杆菌表达体系的应用
当外源蛋白质的分子量小于70kD,不存在半胱 氨酸或分子内的二硫键少于3～4个，以及不需要 翻译后修饰而能保持其生物活性的蛋白质，大多 可以利用大肠杆菌系统得到满意的结果。
1．表达载体的一般特点
(1) (2) (3) (4) (5) (6) 复制起始点 选择性基因 强的、可诱导的启动子 强的转录终止序列 核糖体结合位点 合适的多克隆位点
第三章 蛋白质的修饰和表达
第三章 蛋白质的修饰和表达
第一节 蛋白质修饰的化学途径 第二节 蛋白质改造的分子生物学途径 第三节 重组蛋白质的表达
第一节 蛋白质修饰的化学途径
一、功能基团的特异性修饰 二、基于蛋白质片段的嵌合修饰
一、功能基团的特异性修饰
在20种天然氨基酸的侧链中，大约有一半可以在足够温和 的条件下产生化学取代而不使肽键受损，其中氨基、巯基 和羧基特别容易产生有用的取代。 因为任何给定的氨基酸残基在蛋白质分子中可能出现不止 一次，如果用化学的方法对氨基酸进行修饰时，正常情况 下所有相关的氨基酸侧链都要被取代。至于谈到氨基和羧 基基团，尽管处在侧链上和末端基团的pK值有差别，但在 化学上很难将肽链的α-氨基或α-羧基基团与侧链上的氨基 或羧基相区别。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ (2) 几种寡核苷酸介导的基因突变方法
① Kunkel 突变法 ② 基于抗生素抗性“回复”的突变方法 ③ 基于去除特定限制酶切位点的突变 ④ 利用聚合酶链反应(PCR)产生定点突变
2．区域性定向突变
基因工程技术不但可使基因产生特异性位点突变，也 可以产生区域性的突变。 常用的方法如盒式突变法(cassette mutagenesis)，又称片段 取代法(DNA fragment replacement)。 这一方法的要点是利用目标基因中所具有的适当的限制性 内切酶位点，用具有任何长度、任何序列(或任何混合序 列)的DNA片段来置换或取代目标基因上的一段DNA序列。
蛋白质的修饰和表达
蛋白质的修饰和表达是蛋白质工程的重要
研究内容和手段。将从蛋白质修饰的化学
途径、蛋白质改造的分子生物学途径和重
组蛋白质的表达进行讲解。
第一节 蛋白质修饰的化学途径
蛋白质的化学修饰：凡通过活性基团的引 入或去除，而使蛋白质的一级结构发生改 变的过程。 有些情况下，化学结构的改变并不影响蛋 白质的生物学活性，这些修饰称为非必需 部分的修饰。但多数情况下，蛋白质结构 的改变将导致生物活性的改变。
（二）定向进化 在实验室中模仿自然进化的关键步骤—突变、重 组和筛选，在较短的时间内完成漫长的自然进化 过程，有效的改造蛋白质，使之适于人类的需 要。，这种策略只针对特定蛋白质的特定性质， 因而被称为定向进化。 需要两项支撑技术，一是产生大量突变体为进一 步筛选提供丰富的素材；二是有合适的筛选系统， 可迅速从突变题库中筛选到符合目标的蛋白质。
蛋白质侧链的化学修饰是通过选择性试剂 或亲和标记试剂与蛋白质分子侧链上特定 的功能基团发生化学反应而实现的。
（一）巯基的化学修饰 由于巯基有很强的亲核性，巯基基团一般 是蛋白质分子中最容易反应的侧链基团。 烷基化试剂是一种重要的巯基修饰试剂， 特别是碘乙酸和碘乙酰胺。氨基酸测序前， 常用碘乙酸来使巯基基团羧甲基化，以防 止半胱氨酸的降解。 其他一些卤代酸、卤代酰胺也可以修饰巯 基。 N-乙基马来酰亚胺也是一种有效的巯基修 饰试剂，该反应具有较强的专一性并伴随 光吸收的变化。
5，5-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）是目前 最常用的巯基修饰试剂之一，可与巯基反 应形成二硫键，使蛋白质分子上标记1个2硝基-5-硫苯甲酸（TNB），同时释放一个 有颜色的TNB阴离子，该离子在412nm有很 强的吸收，可以通过光吸收变化来检测反 应程度。
蛋白质翻译后修饰包括磷酸化乙酰化和泛素化等可以调节蛋白质表达和功能
蛋白质翻译后修饰包括磷酸化乙酰化和泛素化等可以调节蛋白质表达和功能蛋白质翻译后修饰包括磷酸化、乙酰化和泛素化等可以调节蛋白质表达和功能蛋白质是构成细胞的重要组成部分，它们在细胞内执行各种功能。
然而，在合成蛋白质的过程中仅仅翻译出氨基酸链还不足以确保完成蛋白质的结构和功能。
事实上，蛋白质在翻译后还需要经历修饰的过程，其中包括磷酸化、乙酰化和泛素化等多种修饰方式。
这些修饰过程不仅可以调节蛋白质的表达水平，还能调控其功能。
一、磷酸化修饰磷酸化是指通过酶类将磷酸基团添加到蛋白质的特定氨基酸上，通常是赖氨酸、苏氨酸或酪氨酸。
磷酸化修饰在细胞信号传导、细胞周期调控和基因表达等生物过程中起着重要的作用。
磷酸化能够改变蛋白质的电荷分布，从而调节蛋白质的结构和功能。
例如，磷酸化可以导致蛋白质的构象变化，从而改变蛋白质与其他分子的相互作用。
此外，磷酸化还可以介导蛋白质的定位和降解，以及参与细胞信号传导的级联反应等。
二、乙酰化修饰乙酰化是指在蛋白质上添加乙酰基团，通常是赖氨酸残基。
乙酰化修饰通过乙酰转移酶进行，在细胞代谢、细胞周期调控和染色质结构维持等生物过程中发挥着重要的作用。
乙酰化能够调节蛋白质的功能和稳定性。
通过乙酰化，蛋白质的电荷分布和空间结构发生改变，从而影响蛋白质与其他分子的相互作用。
此外，乙酰化还能够调控蛋白质的定位和降解，参与细胞信号转导和基因表达的调控等重要生物过程。
三、泛素化修饰泛素化修饰是指在蛋白质上添加泛素分子，通常通过泛素连接酶（E3酶）介导完成。
泛素化修饰在细胞质调控、蛋白质降解和细胞凋亡等生物过程中发挥着重要的作用。
泛素化修饰能够标记蛋白质，使其被泛素酶体降解并确保细胞内的蛋白质质量控制。
此外，泛素化还可以调节蛋白质的定位和活性，影响其与其他分子的相互作用。
综上所述，蛋白质翻译后的修饰过程如磷酸化、乙酰化和泛素化等可以调节蛋白质的表达水平和功能。
这些修饰对于细胞内各种生物过程的调控起着重要的作用。
基于蛋白质表达技术的蛋白质修饰研究
基于蛋白质表达技术的蛋白质修饰研究近年来随着生物技术的不断发展，蛋白质表达技术成为研究蛋白质修饰的重要手段之一。
本文将从蛋白质表达技术和蛋白质修饰两个方面入手，探讨基于蛋白质表达技术的蛋白质修饰研究。
一、蛋白质表达技术蛋白质表达技术是指利用细胞外源性基因通过DNA重组技术在大肠杆菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞等表达宿主中表达与目标蛋白质相关的蛋白质，以获得足够的目标蛋白质供研究使用。
基于蛋白质表达技术的蛋白质修饰研究不仅能够通过表达源获得真实的修饰蛋白质，而且还能对蛋白质进行定点突变，以研究这些修饰对蛋白质结构和功能的影响。
二、蛋白质修饰蛋白质修饰是指在蛋白质生物合成过程中，蛋白质分子通过各种酶类对其氨基酸、醣类、酯等化学基团进行添加、移除、修改或调控，从而使蛋白质的结构、功能和活性等得以调节的过程。
常见的蛋白质修饰有磷酸化、甲基化、乙酰化、泛素化等。
这些修饰发挥着重要的生物学功能，如参与信号传导、影响蛋白质的互作以及控制蛋白质的降解等。
三、基于蛋白质表达技术的蛋白质修饰研究基于蛋白质表达技术的蛋白质修饰研究是通过表达来源来得到目标蛋白质，并进行定点突变来探究修饰对蛋白质的结构和生物学功能的影响。
下面简要介绍几种常用的基于蛋白质表达技术的蛋白质修饰研究方法：1.蛋白质纯化蛋白质纯化是指通过不同的方法将目标蛋白质从表达宿主的混合物中纯化出来。
蛋白质表达后需要纯化出来才能进行后续的研究。
蛋白质纯化可采用多种技术，如离子交换层析、亲和层析、凝胶过滤层析等。
2.蛋白质晶体学蛋白质晶体学是指将蛋白质晶体化并得到其三维结构的技术。
蛋白质晶体学是研究蛋白质结构与功能之间关系的重要手段。
蛋白质晶体学是基于蛋白质表达技术得到蛋白质晶体的前提条件。
3.质谱分析质谱分析是指用于鉴定蛋白质，确定其序列和修饰状态以及定量分析的分析方法。
随着质谱分析技术的发展，已经可以对蛋白质修饰进行定量和定性研究。
四、结论基于蛋白质表达技术的蛋白质修饰研究成为研究蛋白质功能以及生物学过程中的重要手段。
翻译后修饰对蛋白质表达的影响
翻译后修饰对蛋白质表达的影响研究表明，蛋白质的表达和修饰对细胞功能和生物体发育起着重要作用。
随着科技的进步，我们对于蛋白质表达的研究也越来越深入。
在翻译后修饰的过程中，蛋白质的功能、稳定性和亚细胞定位等方面均会发生变化。
本文将探讨翻译后修饰对蛋白质表达的影响，并分析其中的关键因素。
1. 翻译后修饰的概述翻译后修饰是指蛋白质在翻译过程结束后，通过特定的化学或生物学反应来改变其结构或功能的过程。
这些修饰可以发生在蛋白质的氨基酸残基上，如磷酸化、甲基化、乙酰化等。
也可以发生在蛋白质的糖基上，如糖基化。
这些修饰能够调控蛋白质的活性、稳定性、亚细胞定位以及与其他分子的相互作用。
2. 翻译后修饰对蛋白质功能的影响翻译后修饰对蛋白质的功能有着重要的影响。
例如，磷酸化是一种常见的翻译后修饰方式，它能够调控蛋白质的酶活性、亚细胞定位以及与其他蛋白质的相互作用。
磷酸化的程度不同会导致蛋白质活性的变化，从而调节细胞信号转导的过程。
另外，糖基化作为另一种常见的翻译后修饰方式，可以影响蛋白质的稳定性和功能。
糖基化的蛋白质通常具有更长的半衰期，并参与到细胞的黏附、信号传导等过程中。
3. 翻译后修饰对蛋白质稳定性的影响翻译后修饰对蛋白质的稳定性起着关键作用。
修饰的增加或减少都会直接影响蛋白质的寿命。
例如，乙酰化是一种常见的翻译后修饰方式，它能够增加蛋白质的稳定性，从而延长其寿命。
此外，泛素化作为另一种常见的翻译后修饰方式，可以促使蛋白质被降解。
泛素化的蛋白质通常被标记为需被降解的目标，从而影响其稳定性。
4. 翻译后修饰对蛋白质亚细胞定位的影响翻译后修饰还能够影响蛋白质的亚细胞定位。
不同修饰方式导致的蛋白质结构改变会决定其在细胞中的分布。
例如，糖基化可以促使蛋白质定位于细胞膜上，起到细胞信号传导的作用。
磷酸化等修饰方式也能够改变蛋白质的亚细胞定位，进而影响细胞内的生物化学过程。
5. 翻译后修饰与疾病的关联翻译后修饰异常与多种疾病密切相关。
翻译后修饰和蛋白质表达这篇文章将介绍翻译后修饰对蛋白质表达的影响包括如何改变蛋白质功能
翻译后修饰和蛋白质表达这篇文章将介绍翻译后修饰对蛋白质表达的影响包括如何改变蛋白质功能翻译后修饰和蛋白质表达蛋白质是生物体内最基本的分子之一，扮演着许多生命活动中重要角色。
蛋白质表达是指蛋白质合成和功能的产生过程，而翻译后修饰则在蛋白质合成后对其进行改变，进一步调节其功能和稳定性。
本文将介绍翻译后修饰对蛋白质表达的影响，以及如何改变蛋白质功能。
一、翻译后修饰对蛋白质表达的影响1. 磷酸化修饰磷酸化是最常见的翻译后修饰方式之一，通过在蛋白质上添加磷酸基团来改变其结构和功能。
磷酸化修饰可以调节蛋白质的活性、稳定性以及与其他分子的相互作用。
磷酸化修饰还参与细胞信号传导、细胞周期调控等生物学过程。
2. 甲基化修饰甲基化修饰是通过在蛋白质上添加甲基基团来改变其功能。
甲基化修饰在染色质结构的调控中扮演重要角色，可以影响基因的转录和表达。
甲基化修饰还参与细胞分化、胚胎发育以及人类疾病的发生发展等过程。
3. 乙酰化修饰乙酰化修饰是指通过在蛋白质上添加乙酰基团来改变其功能。
乙酰化修饰可以调节蛋白质的稳定性、亲和力和活性。
乙酰化修饰还参与细胞代谢、基因转录调控以及细胞衰老等生命过程。
4. 糖基化修饰糖基化修饰是在蛋白质上附加糖分子来改变其功能。
糖基化修饰可以影响蛋白质的稳定性、折叠和识别。
糖基化修饰还参与细胞黏附、免疫应答以及疾病的发生发展等过程。
二、翻译后修饰如何改变蛋白质功能1. 调节蛋白质活性翻译后修饰可以通过改变蛋白质的结构和环境来调节其活性。
例如，磷酸化修饰可以激活或抑制蛋白质的酶活性。
2. 调控蛋白质-蛋白质相互作用翻译后修饰可以改变蛋白质与其他分子之间的相互作用。
例如，乙酰化修饰可以增强蛋白质与DNA之间的亲和力，从而影响转录调控。
3. 调整蛋白质稳定性翻译后修饰可以影响蛋白质的稳定性。
例如，甲基化修饰可以增强蛋白质的稳定性，延长其寿命。
4. 蛋白质定位和转运翻译后修饰可以调整蛋白质在细胞内的定位和转运。
蛋白质表达和组蛋白修饰的相互作用研究进展
蛋白质表达和组蛋白修饰的相互作用研究进展蛋白质是构成生物体的重要组成部分，对维持细胞内的各种生物学过程具有至关重要的作用。
蛋白质的功能受到其结构和翻译后修饰的影响，其中组蛋白修饰在调节蛋白质表达和功能发挥中起着重要的角色。
本文将就蛋白质表达和组蛋白修饰的相互作用进行研究进展的探讨。
一、蛋白质表达的基本概念和过程蛋白质表达是指基因转录为mRNA，然后由细胞内的核糖体通过翻译过程将mRNA转化为相应的蛋白质的过程。
该过程包括转录、剪接、翻译等多个步骤。
蛋白质表达的调控可以在转录、翻译或后转录过程中发生，其中后转录调控主要是通过组蛋白修饰实现的。
二、组蛋白修饰的种类和功能组蛋白修饰是指通过改变组蛋白的结构或者连接染色质上的蛋白质，从而对基因的表达进行调控的一系列化学修饰过程。
主要的组蛋白修饰包括乙酰化、甲基化、磷酸化等。
这些修饰可以改变染色质的结构，影响转录因子的结合以及转录起始复合物的装配，进而调控基因的表达。
组蛋白修饰在细胞的生长、分化以及疾病发生中起着重要的作用。
三、蛋白质表达与组蛋白修饰的相互作用蛋白质表达和组蛋白修饰之间存在着密切的相互作用。
研究发现，组蛋白修饰可以影响蛋白质的翻译速度和效率，从而调节蛋白质的表达水平。
同时，组蛋白修饰也可以影响转录因子的结合和转录起始复合物的装配，从而对转录过程进行调控。
此外，一些研究还发现，在基因转录和翻译过程中，组蛋白修饰可以与其他调控机制相互作用，如RNA剪接和miRNA调控等。
四、研究进展近年来，关于蛋白质表达和组蛋白修饰的相互作用的研究进展迅速。
研究人员通过多种技术手段，如质谱法、染色质免疫沉淀和组蛋白定位测序等，揭示了一系列新的蛋白质表达与组蛋白修饰之间的相互作用。
这些研究为我们更好地理解蛋白质的表达调控机制和疾病发生提供了重要的线索。
五、未来展望尽管在蛋白质表达和组蛋白修饰的研究中取得了很多进展，但仍然存在许多问题值得我们进一步探讨。
首先，我们需要更深入地了解蛋白质表达和组蛋白修饰之间的相互关系，尤其是在特定细胞类型和特定疾病状态下的调控机制。
蛋白质的修饰和表达
定向进化的应用
目标酶
所需功能
方法
结果
实施菌种
卡那霉素核苷基 转移酶
枯草杆菌蛋白酶
β-内酰胺酶 对硝基苯酯酶
胸苷激酶 β-半乳糖苷酶 砷酸脱毒途径
热稳定性
作用于有机溶 剂
作用于新底物
有机溶剂中的 底物特异性和
活性 第五特异性 基
因理疗 底物特异性
砷酸抗性
定位诱变+选择 易错PCR+选择
DNA改组+选择 易错PCR+重组
化学修饰影响的条件
• 1、温和的反响条件是防止蛋白质分子变性 的一个必要条件
• 2、pH值得变化：决定了具有潜在反响能力 的基团所处的可反响和不可反响的离子状 态。
• 3、温度：影响活性巯基的微环境 • 4、有机溶剂：试剂需要有机溶剂来助溶，
但有机溶剂可使蛋白质变性。
• 化学方法：
•
• 产生半合成的结构，一个天然多肽与一个 人造〔或化学修饰〕的多肽相缔合
Amps
Tetr
Tetr
Amps
突变 氨苄青霉素抗性的阳性克隆
设计突变体引物 氨苄青霉素抗性修复寡核苷酸
PCR方法介导的定点突变
• 通过改变引物中的某些碱基而改变基因序 列，到达有目的改造蛋白质结构、研究蛋 白质的结构和功能之间的关系的目的
• 取代突变、插入突变、缺失突变
5’ 3’
5’
3’ 3’
• 亚氨代乙酰基：亚氨代乙酰化反响可区分α氨基和ε-氨基。完全亚氨代乙酰化的蛋白质 仍保持在水溶液中的可溶性。
• α-异硫氰酸苯酯在严格控制的条件下可对α氨基进行相当特异性的修饰，而不作用于ε氨基。
羧基的化学修饰
• 由于羧基在水溶液中的化学性知识的蛋白 质分子中的谷氨酸和天冬氨酸的修饰方法 很有限，产物一般是酯类或酰胺类。水溶 性的碳化二亚胺类特定修饰羧基基团，可 在较温和的条件进行
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（一）亲和标记
亲和标记是一类位点专一性的化学修饰， 试剂可以专一性标记于酶的活性部位上， 使酶不可逆的失活，因此又称为专一性的 不可逆抑制作用。
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这类抑制剂可分为两类：
一类是Ks型的不可逆抑制剂，它是根据底 物的结构设计的，它具有和底物结构相似 的结合集团，同时还具有和活性部位氨基 酸残基的侧链基团反应的活性基团。
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（一）巯基的化学修饰
由于巯基有很强的亲核性，巯基基团一般 是蛋白质分子中最容易反应的侧链基团。
烷基化试剂是一种重要的巯基修饰试剂， 特别是碘乙酸和碘乙酰胺。氨基酸测序前， 常用碘乙酸来使巯基基团羧甲基化，以防 止半胱氨酸的降解。
其他一些卤代酸、卤代酰胺也可以修饰巯 基。
N-乙基马来酰亚胺也是一种有效的巯基修 饰试剂，该反应具有较强的专一性并伴随 光吸收的变化。
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四、蛋白质的化学交联和化学偶联
化学交联可以发生于分子内的亚基与亚基 之间，也可以发生与蛋白质分子与分子之 间，也可以发生于蛋白质分子与分子之间， 也可发生于多个分子之间，而形成网状交 联。交联剂为含有双功能基团的化学试剂。 如戊二醛
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5，5-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）是目前 最常用的巯基修饰试剂之一，可与巯基反 应形成二硫键，使蛋白质分子上标记1个2硝基-5-硫苯甲酸（TNB），同时释放一个 有颜色的TNB阴离子，该离子在412nm有很 强的吸收，可以通过光吸收变化来检测反 应程度。
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（二）氨基的化学修饰
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影响化学修饰的主要因素有两方面：
1、蛋白质功能基的活性反应，包括基团之 间的氢键和静电作用等，基团之间的的空 间阻力。
2、修饰剂的反应活性。
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一、蛋白质侧链的化学修饰
在20种天然氨基酸的侧链中，大约有一半可以在足够温和 的条件下产生化学取代而不使肽键受损，其中氨基、巯基 和羧基特别容易产生有用的取代。
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另一类是Kcat型的不可逆抑制剂，是根据酶 催化过程设计的。这类抑制剂具有和底物 类似的结构，具有被酶催化和结合的性质。 此外还有一个潜伏反应基团，在酶对它进 行催化反应时，这个潜伏基团被酶催化而 活化，对活性部位起不可逆抑制作用。这 类抑制剂的专一性很高，被称为“自杀性 底物”。
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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（二）光亲和标记
这类试剂在结构上除了有一般亲和试剂的 特点外，还具有一个光反应基团。
反应一般分两步进行：第一步，试剂先与 蛋白质的活性部位在暗条件下发生特异性 结合；第二步，光照，试剂被光激活后， 产生一个高度活泼的功能基团，与活性部 位的侧链基团发生反应。
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三、蛋白质的聚乙二醇修饰
聚乙二醇（PEG）由环氧乙烷聚合而成， 两端各有一个羟基，若一端以甲基封闭则 得到单甲氧基聚乙二醇（mPEG）。蛋白质 修饰中应用最多的是mPEG的衍生物。
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PEG与蛋白质的非必需基团共价结合时， 可作为一种屏障挡住蛋白质分子表面的抗 原决定簇，避免抗体产生，或者阻止抗原 与抗体的结合而抑制免疫反应的发生。
还可以保护蛋白质不易被蛋白酶水解。
修饰后，分子量增加，肾小球滤过减少。
这些均有助于蛋白质类药物循环半衰期的 延长。
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修饰时，先对PEG进行活化，活化的PEG 可与蛋白质分子侧链上的各种化学基团反 应而与蛋白质相偶联，蛋白质分子上与 PEG进行偶联的基团主要是氨基、巯基和 羧基。
赖氨酸的ε-氨基是蛋白质分子中亲核反应 活性很高的基团，是蛋白质或多肽分子比 较容易与修饰剂发生作用的位点。
常见的修饰剂有三硝基苯磺酸、烷基化试 剂、氰酸盐以及盐酸吡哆醛等。
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（三）羧基的化学修饰 谷氨酸、天冬氨酸 修饰方法很有限，产物一般是脂类或酰胺
类。
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（四）二硫键的化学修饰
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3、精氨酸残基含一个胍基，精氨酸残基的 强碱性，使其很难与大多数试剂发生修饰 反应，但可以和二羰基化合物发生反应。
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4、色氨酸吲哚基可以发生取代反应或者被 氧化裂解。N-溴代琥珀酰亚胺（NBS）可以 使吲哚基团氧化成羟吲哚衍生物，但专一 性较差，酪氨酸残基也可与该试剂发生反 应。
因为任何给定的氨基酸残基在蛋白质分子中可能出现不止 一次，如果用化学的方法对氨基酸进行修饰时，正常情况 下所有相关的氨基酸侧链都要被取代。至于谈到氨基和羧 基基团，尽管处在侧链上和末端基团的pK值有差别，但在 化学上很难将肽链的-氨基或-羧基基团与侧链上的氨基 或羧基相区别。
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蛋白质侧链的化学修饰是通过选择性试剂 或亲和标记试剂与蛋白质分子侧链上特定 的功能基团发生化学反应而实现的。
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5、蛋氨酸主要是由于硫醚的硫原子的亲核 性所引起的，一些氧化剂可以使蛋氨酸氧 化。
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二、蛋白质的位点专一性修饰
专一性包括两方面的含义：一是试剂对被 修饰基团的专一性；二是试剂对蛋白质分 子中被修饰部位，如膜蛋白质上的激素结 合部位、酶的活性部位等位点的专一性， 一般这类试剂不仅具有对被作用基团的专 一性，而且具有对被作用部位的专一性。 这类专一性的化学修饰，称为亲和标记或 专一性的不可逆抑制作用。这类修饰试剂 也被称为位点专一性抑制剂。
第三章 蛋白质的修饰和表达
蛋白质的修饰和表达是蛋白质工程的重要 研究内容和手段。将从蛋白质修饰的化学 途径、蛋白质改造的分子生物学途径和重 组蛋白质的表达进行讲解。
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第一节 蛋白质修饰的化学途径
蛋白质的化学修饰：凡通过活性基团的引 入或去除，而使蛋白质的一级结构发生改 变的过程。
有些情况下，化学结构的改变并不影响蛋 白质的生物学活性，这些修饰称为非必需 部分的修饰。但多数情况下，蛋白质结构 的改变将导致生物活性的改变。
一般用变性剂如巯基乙醇，将二硫键还原 成游离的巯基，再通过巯基修饰的方法对 其进行修饰，如经过羧甲基化处理，以防 止重新氧化成二硫键。
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（五）其他侧链基团的修饰
1、组氨酸残基的咪唑基可以通过氮原子的 烷基化或碳原子的亲核取代来进行修饰。
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2、酪氨酸残基的修饰既可以是酚羟基的修 饰，也可以是芳香环上的取代反应。