盐酸克伦特罗,莱克多巴胺,沙丁胺醇联合检测卡.
金标快速检测检测试剂卡检测技术110325-02
金标免疫检测试纸条的结构
主体的膜反应体系由以下部分组成：
1： 高蛋白亲和性的高分子纤维素膜（NC膜），为反应膜用来作为 系统反应的载体和显示反应结果。 2：选用有较强吸水能力的玻璃纤维，经特殊处理后，为反应系统提 供适合的反应条件，并帮助吸水。 3：吸附力较强的玻璃纤维，作为金标记物的固相载体。 4：吸收垫，吸水，牵引反应物的运动。 5：塑料基板，作为反应体系的支撑物。
检测方法对比
检测方法 样品 处理 是否 需标 准品 测 量 耗时 优点 缺陷
确认方法
液相色谱质谱联用
最复 杂
是
定 量
24小 时
仪器价格昂贵且方 法操作复杂，存在 结果准确，检 检测成本高、检测 测精度高，灵 周期长、对检测人 敏度高 员的技术要求较高， 需要较复杂的样品 处理过程 操作简单，使 用方便 具有良好的特 异性，操作简 单方便，一步 测试，用时只 需5分钟 适于实验室检测
5、中毒事件
在互联网上用“瘦肉精中毒”搜索，可以查到有6710 项的相关报道。世界上最早的“瘦肉精”中毒事件于 1990年3月在西班牙发生。我国则于1998年5月在香港 最早出现。 1、2003年8月22日，广东信宜市发生530人瘦肉精集体中 毒事件 2、2002年2月浙江省平湖市170余名群众发生瘦肉精中毒 3、2001年11月2日，北京发生14人瘦肉精中毒 4、 2001年11月，广东河源市发生484人食用含瘦肉精的 猪肉后集体中毒的事件，闻名全国 5、1999年10月，浙江嘉兴市发生57人“瘦肉精”（含盐 酸克伦特罗)集体中毒事件 6、1998年，广东高明市发现有7例因喝猪肺汤致人中毒 事件
4-氨基-α-（叔丁胺甲基）-3，5-二氯苯甲醇盐酸盐
1、药理作用
克伦-莱克-沙丁三联检测卡(Urine)
盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三联快速检测卡使用说明书本产品是一种不需要任何仪器设备的瘦肉精快速检测卡，检测卡中分别有3条胶体金检测条，用于检测尿样中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇含量，本品盐酸克伦特罗的检测阈值为3ng/ml、莱克多巴胺的检测阈值为5ng/ml、沙丁胺醇的检测阈值为5ng/ml。
【原理】盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三联快速检测卡应用了竞争抑制免疫层析的原理，样本中的瘦肉精在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上瘦肉精－BSA 偶联物的结合。
如果样本中盐酸克伦特罗含量大于3ng/ml、莱克多巴胺含量大于5ng/ml、沙丁胺醇含量大于5ng/ml，检测线（T）无红色条带出现，结果为阳性；反之，检测线（T）显示红色条带，结果为阴性。
【试剂组份】盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三联快速检测卡（40份）；一次性塑料吸管；一次性塑料手套；产品使用说明书；每卡铝箔袋单独包装。
【标本收集】尿样标本必须收集在洁净、干燥、不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器内，取清亮尿液进行检测，如尿液混浊，则需离心处理。
若不能及时送检，尿样标本在2～8℃冷藏可保存24小时。
长期保存需冷冻-20℃，忌反复冻融；【检测程序】⑴测试前将未开封的检测卡和样本恢复至室温。
⑵从原包装铝箔袋中取出的检测卡，在一小时内使用。
⑶将检测卡平放，用塑料吸管垂直滴加2滴无气泡样品液(约60ul)于加样孔。
⑷反应3-5min，根据示意图判定结果。
【结果判定】⑴阴性：质控线（C）显示红色条带，检测线（T）也出现红色条带；阳性：质控线（C）显示红色条带，而检测线（T）无红色条带出现。
⑵无效：若质控线（C）不显色或只有检测线（T）显色，说明操作过程不正确或检测卡失效。
【贮藏及有效期】4～30℃阴凉干燥处避光保存；有效期为18个月(生产日期及批号见包装盒)。
【注意事项】⑴检测卡在室温下一次性使用。
KJ201706动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法
KJ201706动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201706）1范围本方法规定了动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于猪肉、牛肉等动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速测定。
2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇进行定性判定。
3试剂与材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1试剂3.1.1甲醇：色谱纯。
3.1.2氢氧化钠。
3.1.3磷酸二氢钾。
3.1.4磷酸氢二钠。
3.1.5盐酸。
3.1.6氯化钠。
3.1.7氯化钾。
3.1.8三氮化钠。
3.1.9乙二胺四乙酸二钠。
3.1.10三羟甲基氨基甲烷，即Tris。
3.1.11乙酸乙酯。
3.1.12磷酸二氢钠。
3.1.13氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.2）4g，用水溶解并稀释至100mL。
3.1.14缓冲液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）0.3g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.5g，溶于约800mL水中，充分混匀后用盐酸（3.1.5）或氢氧化钠溶液（3.1.13）调节pH至7.4，用水稀释至1000mL，混匀。
4℃保存，有效期三个月。
3.1.15展开液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）2g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.44g，氯化钠（3.1.6）8g，氯化钾（3.1.7）0.2g，三氮化钠（3.1.8）0.5g，乙二胺四乙酸二钠（3.1.9）1.0g溶于约500mL水中，充分混匀后用水稀释至1000mL。
肉原料肉中激素(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺)的测定
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
2.本方法检出检出限：0.025ng～2. 5ng
2 瘦肉精的测定方法
备注 在检测实验室，确证和定量瘦肉精时，相对于气质联用，更
2 瘦肉精的测定方法
2.2瘦肉精的确证和定量——液相色谱串联质谱法
(1) 原理：试样中的残留物经酶解，用高氯酸调节PH值，沉淀蛋白质后离心， 上清液用异丙醇-丁酸丁酯提取，再用阳离子交换柱净化，液相色谱-串联 质谱法测定，内标法定量。 (2)实验方法与步骤：遵照GB-T22286-2008
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
1 瘦肉精知识概述
早在2002年，农业部、卫生部、国家食品药品监督管理局就 发布公告，明令禁止在饲料和动物饮用水中添加盐酸克仑特罗和 莱克多巴胺等7种 “瘦肉精”。
2008年，最高人民检察院、公安部规定新的刑事案件立案追 诉标准，对使用“瘦肉精”养殖生猪，以及宰杀、销售此类猪肉的， 将以生产、销售有毒、有害食品罪追究刑事责任。
2 瘦肉精的测定方法
2.1筛选是否含有瘦肉精——酶联免疫法（ELISA)
(2)实验方法与步骤：遵照GB-T5009.192-2003 如果采用快速检测卡，则根据检测卡 操作要求开展检测。
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
2.本方法检出检出限：0.004ng～0.054ng
瘦肉精三联快速检测卡准确性的因素及对应措施
瘦肉精三联快速检测卡准确性的因素及对应措施任清丹1，何东伟21.吉林省畜牧总站，吉林长春 130062；2.吉林省辽源市动物疫病预防控制中心，吉林辽源 136200“瘦肉精”属于β- 肾上腺受体激动剂类，包括如莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、西马特罗等化学物质。
瘦肉精可以增加动物瘦肉率，减少饲料使用，人食用残留瘦肉精的动物制品，会出现呕吐、肌肉颤抖等症状，甚至可危及生命，长期食用，有可能会导致染色体畸变，诱发恶性肿瘤。
因此，快速检测卡的准确性，对瘦肉精的管控工作至关重要。
目前，常用检测卡为三联快速检测卡，具有检测快，易判读的优点，但操作细节一旦被忽视，容易影响检测结果准确性。
1 影响猪尿“瘦肉精”快速检测卡准确性的因素1.1 待检动物的生理情况待检动物饮水量的多少和新陈代谢的快慢，都会影响到动物尿液的排放量，尿液中的“瘦肉精”含量会被浓缩或稀释；动物生病治疗过程中使用的硫酸锌或肾上腺激素类药物等，影响检测结果的准确性。
1.2 环境温度的影响环境温度是影响检测卡准确性的因素之一。
尤其在东北地区冬季，室外温度会在0 ℃以下，即使在室内检测动物尿样，也无法在规定时间进行判断和读取。
环境温度低于5 ℃时，检测线产生较缓慢，容易产生假阳性；当温度达到30 ℃以上或强光直射，会出现假阳性或无效；因此，在20～26 ℃室温条件下操作，检测卡出现假阳性或无效概率会大大降低。
1.3 被检动物尿液理化因素动物尿液pH值、澄清度都是影响瘦肉精检测准确性的重要因素，不同动物的尿液在不同生长阶段、不同饮食、不同时间下，尿液pH值白天在8.03±0.15范围内变化；夜间在8.12±0.18范围内变化。
尿液澄清度增高时，检测线速度快，检测结果准确。
1.4 瘦肉精快速检测卡本身存在不足之处“瘦肉精”快速检测卡常温保存，常温操作，特异性强，反应快速且结果肉眼可见、容易判读，但也存在着一些不足之处。
同一品牌不同批次之间检测效果会存在差异，有的反应快，易判定；有的判定线显色差，不易判定。
β-激动剂(六合一)检测卡说明书(完整版)
β-激动剂（六合一）快速检测卡说明书使用说明书盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、氯丙那林、特布他林、马布特罗、西布特罗残留均属于β—兴奋剂，是一种人和兽医作为治疗哮喘的药物。
在牲畜中超剂量使用可以使脂肪组织转化为肌肉组织，由于能够显著改善脂肪率和生产效率，β兴奋剂往往被滥用于畜牧养殖生产中。
近来又有一些非法使用作为饲料添加，并存在滥用现象。
国家已经明令禁止在动物饲养中使用。
本品是一种不需要任何仪器设备的尿液检测法，应用单克隆抗体技术从而特异性地定性检测尿液中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、氯丙那林、特布他林、马布特罗、西布特罗残留。
本品盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇阈值为5ng/ml，氯丙那林、特布他林、马布特罗、西布特罗阈值为8 ng/ml。
【测定原理】本试剂运用抗原抗体的特异反应以及侧向层析和胶体金技术进行尿液中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、氯丙那林、特布他林、马布特罗、西布特罗分子的快速定性检测。
用BSA偶联的β兴奋剂分子与胶体金颗粒结合后，包被在醋酸纤维素膜上；在硝酸纤维素膜上将β兴奋剂抗体和BSA抗体分别包被在检测区（T）和质控区(C)。
当尿液样本加样孔后，样本中的β兴奋剂分子与β兴奋剂-BSA-胶体金偶联物一起层析泳动到检测区竞争与β兴奋剂抗体结合，剩余的β兴奋剂-BSA-胶体金继续泳动到质控区与抗体结合。
因此，当样本中的β兴奋剂浓度超过一定量后，胶体金偶联物就不能与β兴奋剂抗体结合，因此，当样本中的β兴奋剂浓度超过一定量后，胶体金偶联物就不能与β兴奋剂抗体结合，此时检测区不出现紫红色线条；当样本中β兴奋剂浓度低于一定值或样本中没有β兴奋剂时，胶体金偶联物就与β兴奋剂抗体结合，从而在检测区显示出一条紫红色线条；而无论样本中是否含有β兴奋剂分子，质控区都会出现紫红色线条，以示检测有效。
【包装组成】●β兴奋剂胶体金法检测卡（50份）●一次性塑料滴管（50支）●一次性塑料手套（5支）●使用说明书（1份）【检测所需设备】●计时器●一次性洁净塑料尿杯或玻璃容器【标本收集】尿液标本必须收集在洁净、干燥不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器内。
上海快灵生物盐酸克伦特罗检测卡说明书
上海快灵生物盐酸克伦特罗检测卡说明书
检测样品：尿液、动物组织、饲料等
灵敏度：尿液（3ppb、5ppb）、动物组织（5ppb）、饲料（10ppb）
检测时间：5分钟
特异性：盐酸克伦特罗检测卡检测100ug/ml莱克多巴胺、群勃龙醋酸酯、磺胺类、氯霉素类、大环内酯类、氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类和四环素类等药物，结果均呈阴性。
使用本品检测1ug/ml沙丁胺醇，结果显示均呈阴性。
产品用途：盐酸克伦特罗检测卡基于竞争法胶体金免疫层析技术，用于快速筛查盐酸克伦特罗(瘦肉精)超标的样品。
结果解释：
阴性：C线显色，T线肉眼可见，无论颜色深浅均判为阴性。
阳性：C线显色，T线不显色，判为阳性。
无效：C线不显色，无论T线是否显色，该试纸均判为无效。
液质联用测定饲料中的沙丁胺醇莱克多巴胺和盐酸克伦特罗
液质联用测定饲料中的沙丁胺醇莱克多巴胺和盐酸克伦特罗作者：邓艳芹吴国顺倪杨帆刘铭刘斌李红萍来源：《农业与技术》2016年第22期摘要：本试验对沙丁胺醇、盐酸克伦特罗和莱克多巴胺3种β-兴奋剂在饲料中的提取方法及其检测的色谱条件、质谱条件进行了优化。
样品经乙酸-甲醇提取，混合型阳离子交换SPE小柱净化后，采用HPLC-MS/MS检测分析。
3种目标化合物的检出限为0.005 mg/kg，定量限为0.02 mg/kg。
加标回收率为70.2%～118.1%，5次测定结果的相对标准偏差为7.6%～8.1%。
本试验所建立的前处理方法和仪器分析方法，不仅节省了检测时间，同时获得较好的回收率和精密度，可用于饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克伦特罗残留的测定。
关键词：沙丁胺醇；莱克多巴胺；盐酸克伦特罗；液相色谱串联质谱；饲料中图分类号：S816.17 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20161132090盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺属于β-兴奋剂，常被非法用于肉用动物的养殖以提高瘦肉率，通过聚集在动物可食用组织中而对人的组织器官产生毒副作用。
开展饲料及饲料添加剂的检测是从食品安全源头进行控制的有效手段，对相关检测方法的研究具有重要意义。
1 实验部分1.1 仪器与试剂仪器为赛默飞TSQ quantum Access MAX液质联用；固相萃取柱（Agela公司，Cleanert PCX-SPE）。
莱克多巴胺、沙丁胺醇和盐酸克伦特罗标准品购自农业部环境保护科研监测所（100ug/ml），根据需要用2%（v/v）冰乙酸稀释至合适浓度。
HPLC级甲醇和乙腈（J.T.Baker）。
甲酸铵、氨水为分析纯，冰乙酸为优级纯，甲酸为色谱纯。
用水符合GB/T6682-2008《分析实验室用水规格和试验方法》的规定。
1.2 样品前处理按GB/T14699.1规定方法采样约1.5kg，以四分法缩减至200g。
用橡皮锤对样品进行粉碎，过40目筛后充分混匀，装入磨口瓶中备用。
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瘦肉精三联检测卡
(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇联合检测卡说明书
【简介】
瘦肉精是一类人工合成的β-受体激动剂,根据结构差异分为盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇。
因该类药物可以提高瘦肉率,减少脂肪沉积和促进动物生长,被一些畜牧养殖户和养殖企业作为养殖促进剂使用。
人食用了饲喂瘦肉精的禽畜产品后,残留的瘦肉精可引起食物中毒,牲畜产品中瘦肉精残留已成为公众关注的社会问题。
因此,世界许多国家禁止在饲料中使用瘦肉精。
瘦肉精三联快速检测卡可同时测定猪尿中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇,提供生猪饲养时是否使用瘦肉精的依据。
【检测原理】
瘦肉精三联快速检测卡是采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术设计的一种快
速检测试剂,可同时检测尿液样品中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三类瘦肉精。
具有简单、快速、无需特殊的仪器设备等特点,既可以在实验室进行,也可在养猪场、屠宰车间等实地进行测定。
由于样本需要量少、简便快速、适用于大量样本的筛查。
结果准确,检测盐酸克伦特罗灵敏度为3ppb、莱克多巴胺灵敏度为5ppb、沙丁胺醇的灵敏度为10ppb,准确率大于95%。
【样品处理】
尿液可直接用于检测。
若尿样呈浑浊状,需先用滤纸过滤或离心,取清亮部分用于检测。
【操作步骤】
1、从检测卡袋中取出所需的检测卡,放置室温复温,在卡上做好样品编号标记。
2、用一次性取样滴头吸取样品,滴入加样孔,每孔3滴(75ul,在加液过程中勿使液体溢出加样孔。
3、5-10分钟内观察结果,15分钟后的结果无效。
【结果】
对照线(C和检测线(T同时出线,表明尿液样品中
【储存条件】
1、在4-30℃阴凉避光干燥处储存,忌冷冻。
2、在4-30℃下的环境温度操作。
3、有效期见包装盒侧面。
4、保存期间应避免光照、潮湿和过热。
检测卡保质期为12个月。
5、检测线T出现,产品失效。
【结果判断】
泳道1:克伦特罗
泳道2:莱克多巴胺
泳道3:沙丁胺醇
阴性(-:质控线出现、检测线清晰出现,表示样品中不含有瘦肉精或其浓度低于检测限。
阳性(+:质控线出现,检测线不出现或若隐若无,则表示样品中瘦肉精浓度高于或等于检测限。
无效:质控线不出现,表明操作过程不正确或检测卡已失效。
【注意事项】
1、对检测卡进行验证时,请用蒸馏水测试,或者采用纯阴性尿液测试。
2、如果不立即检测,尿样在2~8℃冷藏可保存24小时,要注意避免腐败造成失效或污染;尿液若非常浑浊请离心后取上清检测;检测前需将尿液取少量放置室温回温后用于检测;避免使用冻融两次以上的尿液用于检测,需重新取样检测。
3、出现阳性结果时应按法定程序分瓶封装样品,用于确证法检测。
4、检测时避免阳光直射和电风扇直吹。
5、不要触摸检测卡中央的白色膜面。
6、测试不同尿液时,先将滴管甩干,并用蒸馏水涮洗一遍甩干,后可重复使用。
7、出现假阳性的猪尿请用蒸馏水稀释一倍重测。
8、特别粘稠以至于影响层析速度的猪尿,请用蒸馏水稀释一倍重测。
【生产企业】广州健仑生物科技有限公司。