微生物的无菌操作及接种技术PPT课件
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微生物检验基本操作技能—接种技术(食品微生物检验技术课件)
：将微生物的培养物或含有微生物的样品移植 到培养基上的操作技术。接种必须在一个无杂菌污染
的环境中进行，必须严格遵守无菌操作规范。
1.接种针；2-接种环；3-接种钩；4-涂布棒；6-接种圈；7-接种锄；8-小解剖刀
高压蒸汽灭菌锅，接种环，牛肉膏蛋白胨培养基，培 养皿，试管，三角瓶，酒精灯，移液管，无菌水，灭 菌保藏菌种的试管 （三）灼烧接种环 （四）接种环接种 （五）恒温培养
1、接种环（针、铲）一定要保证其冷却后方可进行转接，以免 烫死微生物。
2、取试管棉塞时要轻缓，不宜用力过猛。棉塞一定要夹在手上 ，不能放在桌子上。
3、斜面接种时，所划直线尽可能直，不要划破培养基，也不要 使接种环触碰管壁或管口。
4、牢固树立无菌操作概念，细心体会无菌操作要领。
为什么在接种前一定要将接种环冷却？如 何灼烧过的接种环是否已经冷却？
的环境中进行，必须严格遵守无菌操作规范。
1.接种针；2-接种环；3-接种钩；4-涂布棒；6-接种圈；7-接种锄；8-小解剖刀
高压蒸汽灭菌锅，接种环，牛肉膏蛋白胨培养基，培 养皿，试管，三角瓶，酒精灯，移液管，无菌水，灭 菌保藏菌种的试管 （三）灼烧接种环 （四）接种环接种 （五）恒温培养
1、接种环（针、铲）一定要保证其冷却后方可进行转接，以免 烫死微生物。
2、取试管棉塞时要轻缓，不宜用力过猛。棉塞一定要夹在手上 ，不能放在桌子上。
3、斜面接种时，所划直线尽可能直，不要划破培养基，也不要 使接种环触碰管壁或管口。
4、牢固树立无菌操作概念，细心体会无菌操作要领。
为什么在接种前一定要将接种环冷却？如 何灼烧过的接种环是否已经冷却？
细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
20
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
微生物接种技术-PPT
9
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
10
（1）斜面接平板 a.划线法：见平板划线分离法。 b.点种法：一般用于观察霉菌和酵母细 胞，轻轻点在平板的表面即可。
（2）平板接斜面：一般是将经 平板分散培养得到的单菌落接 种到斜面，以便作鉴定或扩大 培养、保存之用。
11
（3）平板涂布法
14
4
1.斜面接种：
从已长好微生物移接到另一斜面管的 方法。此法用于好气性微生物的接种。
左手持菌种管和斜面管，使斜面向上， 并尽量放平。用右手先将塞拧转松动， 再拿接种环，用右手的小指、无名指和 手掌拨下塞并夹紧，同时将管口在火焰 上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管 内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部， 沿斜面划曲线或直线。
5
试管斜面接种
1.两支试管呈“V”字形 3.火焰上微烧一周 5.接种、划线
2.拔下试管塞 4.接种环灼烧、冷却 6.塞上塞子，灼烧接种环 6
2.液体接种：
将菌接种到液体培养基（试管、三角瓶等）中的 方法。
操作与上法基本一致，只是在将接种 环送入液体培养基中时使环在液体与 管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分 散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀， 即可培养。 如果菌种是培养在液体培 养基中时，一般用移液管或接种环接 种。
• 倒培养基，制成平板。 • 凝固后，另取一支吸管吸取相应的菌液0.2mL放
至平板上。 •用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂 抹均匀。倒置于37℃条件下培养1～2d， 观察菌落形态及计数菌落。
12
凝 固 后
37℃ 培养
涂布法流程图
13
思考题 （1）用接种环接种时有哪些注意事项 （2）涂布棒消毒方法有哪些？各应注意什 么？
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
10
（1）斜面接平板 a.划线法：见平板划线分离法。 b.点种法：一般用于观察霉菌和酵母细 胞，轻轻点在平板的表面即可。
（2）平板接斜面：一般是将经 平板分散培养得到的单菌落接 种到斜面，以便作鉴定或扩大 培养、保存之用。
11
（3）平板涂布法
14
4
1.斜面接种：
从已长好微生物移接到另一斜面管的 方法。此法用于好气性微生物的接种。
左手持菌种管和斜面管，使斜面向上， 并尽量放平。用右手先将塞拧转松动， 再拿接种环，用右手的小指、无名指和 手掌拨下塞并夹紧，同时将管口在火焰 上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管 内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部， 沿斜面划曲线或直线。
5
试管斜面接种
1.两支试管呈“V”字形 3.火焰上微烧一周 5.接种、划线
2.拔下试管塞 4.接种环灼烧、冷却 6.塞上塞子，灼烧接种环 6
2.液体接种：
将菌接种到液体培养基（试管、三角瓶等）中的 方法。
操作与上法基本一致，只是在将接种 环送入液体培养基中时使环在液体与 管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分 散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀， 即可培养。 如果菌种是培养在液体培 养基中时，一般用移液管或接种环接 种。
• 倒培养基，制成平板。 • 凝固后，另取一支吸管吸取相应的菌液0.2mL放
至平板上。 •用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂 抹均匀。倒置于37℃条件下培养1～2d， 观察菌落形态及计数菌落。
12
凝 固 后
37℃ 培养
涂布法流程图
13
思考题 （1）用接种环接种时有哪些注意事项 （2）涂布棒消毒方法有哪些？各应注意什 么？
外植体无菌接种课件
接种后无菌生长不良
如果在接种后无菌生长不良，可 能是由于菌种活力不足、培养基 不适宜或环境条件不佳等原因导 致的。此时需要对菌种、培养基 和环境等进行检查和调整，以确 保无菌生长的顺利进行。
06
CATALOGUE
实验案例与操作实践
实验案例分享
案例一
成功实施外植体无菌接种的烟草植物实验。通过详细描述实验过程、所用设备、 操作技巧及注意事项，分享成功案例，提供学习者参考。
问题解答 针对学习者在实践操作中遇到的问题进行解答， 帮助学习者克服难关，提升实验技能。
THANKS
感谢观看
03
指导三
接种后的培养与管理。指导学习者如 何对接种后的外植体进行妥善培养， 包括温度、光照、湿度等环境因素的 调控，以确保外植体的生长与繁殖。
实践操作与问题解答
操作一 现场演示外植体无菌接种的完整流程。通过实地 操作，展示实验的全过程，使学习者更直观地掌 握接种技术。
操作二 分组实践操作。将学习者分成若干小组，每组进 行实践操作，提高学习者的动手能力和团队合作 精神。
根据植物的生长周期和季 节，选择适当的采集时间， 避免在病虫害高发期采集。
采集工具
使用锋利、无菌的剪刀或 刀片进行采集，确保切口 平整、不损伤周围组织。
采集数量
根据需要和实际情况，采 集足够数量的外植体，以 备后续处理和接种。
外植体的清洗和消毒
清洗方法
将采集的外植体立即放入无菌水中， 用软毛刷轻轻刷去表面杂质，然后用 无菌水反复冲洗数次。
环境不适宜
接种环境的洁净度、温度、湿度等因素都可能影响接种成功率。因此，在接种前需要对环境进行充分的准备和调整，确保其符合接种要求。
常见污染及防治方法
微生物的无菌操作及接种技术
实验用品
实验用品如培养基、试剂 、玻璃器皿等应经过严格 灭菌处理，确保无菌状态 。
无菌操作原则与规范
操作前准备
实验人员应穿戴整洁的工作服，戴好口罩和帽子，修剪指 甲并洗净双手。同时，检查实验用品是否齐全、无菌状态 是否良好。
操作后处理
实验结束后，及时清理实验台面，将废弃物放入指定容器 内。对实验用品进行清洗和灭菌处理，确保下次实验的无 菌环境。
生长曲线测定
通过测定微生物的生长曲线， 了解其生长速度、延滞期、对 数生长期、稳定期等生长特点 。
代谢产物检测
检测微生物代谢产生的特定物 质，如酶、酸、气体等，以判
断其生长情况和代谢活性。
05
无菌操作在科研实验 中应用举例
遗传学实验：基因转化和表达分析
基因转化
在遗传学研究中，无菌操作是基因转化的关键步骤之一。通过无菌操作，可以将 外源基因导入到受体细胞中，实现基因的转移和整合。
环境微生物学研究
无菌操作在环境微生物学研究中也非常重要。通过无菌操作，可以研究环境微生物的生长、代谢和相互作用等方 面，揭示微生物在环境中的生态功能和水平，确保实验准确性
严格遵守无菌操作规范
在进行微生物实验时，必须严格遵守无菌操作规范，包括 穿戴实验服、戴口罩和手套、使用无菌器材等，以避免实 验过程中的污染。
注意事项
接种针需灼烧灭菌，避免污染；划线时力度要均匀，避免划 破培养基。
液体培养基接种法
操作步骤
在无菌条件下，用接种环沾取少量菌 液，在液体培养基中轻轻搅动，使菌 液均匀分布在培养基中。
注意事项
接种环需灼烧灭菌，避免污染；搅动 时要轻柔，避免产生气泡。
其他特殊无菌操作方法
穿刺接种法
用接种针沾取少量菌液，穿刺到半固体培养基内部，适用于厌氧菌 等需要特殊环境的微生物培养。
微生物的无菌操作及接种技术
动态。
无菌环境的要求与保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程 度的保护以防污染并保护操作者。
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空 气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分， 现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。
பைடு நூலகம்
垂直流超净工作台
垂直流超净工作台 水平流超净工作台
无菌环境的要求与保持
超净台的使用与维护
风速保持在0.32-0.48米/秒 使用前打开紫外灯照射40~60min 开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙
酸喷洒擦拭消毒工作台面。 使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭； 请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物； 使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯； 使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照
• 与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使 环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉 塞再轻轻摇匀。 • 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管 接种
2、常用的接种方法
※ 斜面接种
1) 标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名 2) 点燃酒精灯。 3) 接种： （1）手持试管 将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握
在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量放平。 （2）旋松管塞 （3）接种环灼烧灭菌
※ 斜面接种
（4）拔管塞： 用右手的无 名指、小指和手掌边先后 取下菌种管和待接试管的 管塞，让试管口缓缓过火 灭菌(切勿烧得过烫)
无菌环境的要求与保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程 度的保护以防污染并保护操作者。
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空 气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分， 现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。
பைடு நூலகம்
垂直流超净工作台
垂直流超净工作台 水平流超净工作台
无菌环境的要求与保持
超净台的使用与维护
风速保持在0.32-0.48米/秒 使用前打开紫外灯照射40~60min 开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙
酸喷洒擦拭消毒工作台面。 使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭； 请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物； 使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯； 使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照
• 与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使 环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉 塞再轻轻摇匀。 • 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管 接种
2、常用的接种方法
※ 斜面接种
1) 标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名 2) 点燃酒精灯。 3) 接种： （1）手持试管 将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握
在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量放平。 （2）旋松管塞 （3）接种环灼烧灭菌
※ 斜面接种
（4）拔管塞： 用右手的无 名指、小指和手掌边先后 取下菌种管和待接试管的 管塞，让试管口缓缓过火 灭菌(切勿烧得过烫)
微生物的无菌操作及接种技术(共39张PPT)
（二）接种的操作方法
2、常用的接种方法
斜面接种 划线接种 液体接种 穿刺接种
2、常用的接种方法
※ 斜面接种： • 从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面 培养基上的接种方法。 • 用于好气性微生物的接种。
※ 斜面接种
1) 标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名
2) 点燃酒精灯。 3) 接种：
(8) 将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。
斜面接种示意图
2、常用的接种方法
※ 液体接种
由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。
操作方法：
• 与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使环在液体与 管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉塞再轻轻摇匀。
• 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种
如用果于菌 厌种气（是性培细6养菌）在培液养穿体、培检刺养查基细：中菌将时的，运接一动般能种用力移、针液保管藏自或菌滴种培管。接养种基中心平稳、快速垂直刺入培养基，至接近
用于好气性微生物的接种。
8、穿刺试接种管时能底否将部接种，针直然接穿后透培沿养接基？种线拔出
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。
（7）塞上棉塞 种子罐的接种口周围设有沟槽，接种时先在沟槽里注入少
（8）接种针灼烧灭菌
问题和讨论
1、什么是无菌技术？
2、如何做好无菌室的消毒和防污染工作？
3、如何做好超净台的使用与保养？ 4、无菌操作的目的是什么？
5、进入无菌室前要做好哪些准备工作？ 6、验操作过程的无菌操作要求包括哪些内容？ 7、 接种时，为何要尽量使试管平放？
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安装空调设备及过滤设 备
-
7
无菌室的结构
-
8
无菌环境的要求与保持
（2）无菌室的消毒和防污染 无菌室内空气测试应基本达到无菌。 每日（使用前）紫外线照射（1~2小时）. 每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）. 每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。 定期作实验室沉降菌计数，以检查无菌室微生物生长繁殖
-
在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面管。从 斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划破培 养基。
有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作 斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。
-
25
※ 斜面接种
(7) 塞管塞： 取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞 旋上。不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁 空气。
-
2
一、微生物无菌操作技术
无菌操作材料：
材料
器械和用品：酒精灯、记号笔、标签、火柴、灭菌培 养皿、无菌水、试管架
菌种 培养基：
-
3
微生物无菌操作技术与接种技术
二、原理：
无菌技术：指在微生物实验工作中， 控制或防止各类微生物的污染及其 干扰的一系列操作方法和有关措施。
接种：将微生物接到适于它生长繁 殖的人工培养基上或活的生物体内 的过程。
消毒桶内消毒。
-
15
无菌操作要求
-
16
无菌操作要求
-
17
（二）接种的操作方法
接种的基本程序 常用接种方法
斜面接种 划线接种 液体接种 穿刺接种
-
18
（二）接种的操作方法
1、接种的基本程序
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的微生物，以免污染标本
沾取标本 接种
灭菌接种环
•操作需在无菌室或超净工作台内进行 •无菌室、超净工作台使用前后需进行 消毒。 •实验使用的物品使用前后需严格灭菌
一、微生物无菌操作技术
无菌操作技术：指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生 物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。
无菌操作目的： 保证待检物品不被环境中微生物污染； 防止被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。
-
1
一、微生物无菌操作技术
无菌操作材料：
接种工具
1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀
杀灭接种环沾染的微生物，以免污染环境
-
19
（二）接种的操作方法
2、常用的接种方法
斜面接种 划线接种 液体接种 穿刺接种
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20
2、常用的接种方法
※ 斜面接种：
• 从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜 面培养基上的接种方法。 • 用于好气性微生物的接种。
-
21
※ 斜面接种
1) 标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名 2) 点燃酒精灯。 3) 接种： （1）手持试管 将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握
精棉球将手擦干净。 （5）缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、
鞋。
-
14
无菌操作要求
（1）在操作中不应有大幅度或快速的动作； （2）使用玻璃器皿应轻取轻放。 （3）在火焰上方操作； （4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌； （5）在接种培养物时，协作应轻、准。 （6）不能用嘴直接吸吹吸管。 （7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的
在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量放平。 （2）旋松管塞 （3）接种环灼烧灭菌
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22
※ 斜面接种
（4）拔管塞： 用右手的无 名指、小指和手掌边先后 取下菌种管和待接试管的 管塞，让试管口缓缓过火 灭菌(切勿烧得过烫)
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23
※ 斜面接种
（5）取菌: 接种环冷却，轻 沾取少量菌体或胞子， 然后将接种环移出菌种 管，注意不要使接种环 碰到管壁，取出后带菌 接种环不可通过火焰。
(8) 将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。
-
26
斜面接种示意图
-
27
2、常用的接种方法
※ 液体接种
由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。 操作方法：
• 与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使 环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉 塞再轻轻摇匀。 • 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管 接种
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10
垂直流超净工作台
垂直流超净工作台 水平流超净工作台
无菌环境的要求与保持
超净台的使用与维护
风速保持在0.32-0.48米/秒 使用前打开紫外灯照射40~60min 开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙
酸喷洒擦拭消毒工作台面。
使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭； 请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物； 使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯； 使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照
动态。
-
9
无菌环境的要求与保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程 度的保护以防污染并保护操作者。
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空 气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分， 现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。
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2、常用的接种方法
※划线接种
目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得 纯菌、活菌计数。 方法：
-
4
二、 微生物接种技术
接种的准备工作
无菌环境的要求与保持 进入无菌室前的准备 无菌操作的要求
接种的操作方法
-
5
（一）接种的准备工作
无菌环境的要求与保持
无菌室 无菌环境 超净工作台
-
6
无菌环境的要求与保持
1、无菌室 （1）无菌室的结构： 应有更衣间、缓冲间、
操作间 应有良好的通风条件，
射15min. 定期做无菌试验，以测定净化台是否符合无菌要求。
-
12
无菌环境的要求与保持
3、无菌器材准备
灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等. 消毒器材：接种试管、无菌室内的凳子、试管架、天平、
工作台等
-
13
进入无菌室前的准备
（1）定期检查无菌环境的空气是否符合规定； （2）用紫外线灭菌处理30~60min； （3）检查无菌器材是否完备； （4）实验人员进入无菌室前先用肥皂洗手，然后用75％酒
-
7
无菌室的结构
-
8
无菌环境的要求与保持
（2）无菌室的消毒和防污染 无菌室内空气测试应基本达到无菌。 每日（使用前）紫外线照射（1~2小时）. 每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）. 每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。 定期作实验室沉降菌计数，以检查无菌室微生物生长繁殖
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在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面管。从 斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划破培 养基。
有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作 斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。
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※ 斜面接种
(7) 塞管塞： 取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞 旋上。不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁 空气。
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一、微生物无菌操作技术
无菌操作材料：
材料
器械和用品：酒精灯、记号笔、标签、火柴、灭菌培 养皿、无菌水、试管架
菌种 培养基：
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微生物无菌操作技术与接种技术
二、原理：
无菌技术：指在微生物实验工作中， 控制或防止各类微生物的污染及其 干扰的一系列操作方法和有关措施。
接种：将微生物接到适于它生长繁 殖的人工培养基上或活的生物体内 的过程。
消毒桶内消毒。
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无菌操作要求
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无菌操作要求
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（二）接种的操作方法
接种的基本程序 常用接种方法
斜面接种 划线接种 液体接种 穿刺接种
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（二）接种的操作方法
1、接种的基本程序
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的微生物，以免污染标本
沾取标本 接种
灭菌接种环
•操作需在无菌室或超净工作台内进行 •无菌室、超净工作台使用前后需进行 消毒。 •实验使用的物品使用前后需严格灭菌
一、微生物无菌操作技术
无菌操作技术：指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生 物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。
无菌操作目的： 保证待检物品不被环境中微生物污染； 防止被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。
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一、微生物无菌操作技术
无菌操作材料：
接种工具
1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀
杀灭接种环沾染的微生物，以免污染环境
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（二）接种的操作方法
2、常用的接种方法
斜面接种 划线接种 液体接种 穿刺接种
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2、常用的接种方法
※ 斜面接种：
• 从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜 面培养基上的接种方法。 • 用于好气性微生物的接种。
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※ 斜面接种
1) 标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名 2) 点燃酒精灯。 3) 接种： （1）手持试管 将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握
精棉球将手擦干净。 （5）缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、
鞋。
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无菌操作要求
（1）在操作中不应有大幅度或快速的动作； （2）使用玻璃器皿应轻取轻放。 （3）在火焰上方操作； （4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌； （5）在接种培养物时，协作应轻、准。 （6）不能用嘴直接吸吹吸管。 （7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的
在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量放平。 （2）旋松管塞 （3）接种环灼烧灭菌
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※ 斜面接种
（4）拔管塞： 用右手的无 名指、小指和手掌边先后 取下菌种管和待接试管的 管塞，让试管口缓缓过火 灭菌(切勿烧得过烫)
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※ 斜面接种
（5）取菌: 接种环冷却，轻 沾取少量菌体或胞子， 然后将接种环移出菌种 管，注意不要使接种环 碰到管壁，取出后带菌 接种环不可通过火焰。
(8) 将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。
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斜面接种示意图
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2、常用的接种方法
※ 液体接种
由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。 操作方法：
• 与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使 环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉 塞再轻轻摇匀。 • 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管 接种
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垂直流超净工作台
垂直流超净工作台 水平流超净工作台
无菌环境的要求与保持
超净台的使用与维护
风速保持在0.32-0.48米/秒 使用前打开紫外灯照射40~60min 开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙
酸喷洒擦拭消毒工作台面。
使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭； 请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物； 使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯； 使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照
动态。
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无菌环境的要求与保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程 度的保护以防污染并保护操作者。
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空 气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分， 现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。
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2、常用的接种方法
※划线接种
目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得 纯菌、活菌计数。 方法：
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二、 微生物接种技术
接种的准备工作
无菌环境的要求与保持 进入无菌室前的准备 无菌操作的要求
接种的操作方法
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（一）接种的准备工作
无菌环境的要求与保持
无菌室 无菌环境 超净工作台
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无菌环境的要求与保持
1、无菌室 （1）无菌室的结构： 应有更衣间、缓冲间、
操作间 应有良好的通风条件，
射15min. 定期做无菌试验，以测定净化台是否符合无菌要求。
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无菌环境的要求与保持
3、无菌器材准备
灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等. 消毒器材：接种试管、无菌室内的凳子、试管架、天平、
工作台等
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进入无菌室前的准备
（1）定期检查无菌环境的空气是否符合规定； （2）用紫外线灭菌处理30~60min； （3）检查无菌器材是否完备； （4）实验人员进入无菌室前先用肥皂洗手，然后用75％酒