免疫胶体金_PPT课件
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《免疫胶体金技术》课件
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实验仪器：离心机、电泳仪、显微 镜、移液器等
实验注意事项：避免污染、控制温 度、保持湿度等
实验步骤
准备实验材料： 制备胶体金溶 制备抗体溶液： 制备抗原溶液：
包括胶体金、 液：将胶体金 将抗体与缓冲 将抗原与缓冲
抗体、抗原、 与缓冲液混合， 液混合，搅拌 液混合，搅拌
缓冲液等
搅拌均匀
提高稳定性：通过优化实验条件、选择稳定的检测试剂等方法，提高检测结果的稳定性
提高自动化程度：通过开发自动化检测设备，提高检测效率和准确性
免疫胶体金技术的实验操作
实验准备
实验材料：胶体金、抗体、抗原、 缓冲液、洗涤液、显色剂等
实验步骤：样本处理、抗体孵育、 胶体金标记、洗涤、显色等
添加标题
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云计算和大数据技术：实现 检测数据的实时分析和共享
检测灵敏度提升
技术进步：通过改进胶体金颗粒的制备工艺，提高检测灵敏度
应用领域：在生物医学、食品安全、环境监测等领域具有广泛应用前景
技术融合：与其他检测技术相结合，提高检测灵敏度和准确性
发展趋势：随着科技的发展，免疫胶体金技术的检测灵敏度将不断提高，应用范围也将不 断扩大。
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汇报人：
免疫胶体金技术
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单击输入目录标题 免疫胶体金技术概述 免疫胶体金技术的分类 免疫胶体金技术的优缺点 免疫胶体金技术的实验操作 免疫胶体金技术的应用实例
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免疫胶体金技术概述
定义和原理
免疫胶体金技术是一种基于免疫反应的检测技术 原理：利用抗原-抗体特异性结合，通过胶体金标记抗体，实现对目标抗原 的检测 特点：灵敏度高、特异性强、操作简便、快速
《胶体金检测技术》ppt幻灯片
培训资料
12
培训资料四、B-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例一 .适用范围：主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb) 。 也就是说当尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml 时，检测卡才 能检测到。
培训资料
23
培训资料六、发展方向(Developing)1.标记技术的探索顺磁粒子标记、量子点标记
免疫反应信号转化为电子信号模式
mndad/-CenjuyateSwhatratePeristaltiepurmP
2.生物传感器
wit.(b)(o)
oistansNc sbnste
培训资料
Sample Well
培训资料
20
培训资料五、常见问题及注意事项1.使用前将检测卡和待检样本恢复至室温2.保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹
免疫胶体金快速检测技术
农业部饲料质量监督检验测试中心(西安)
主要内容一、免疫胶体金技术的发展历史二、 胶体金检测卡的基本原理及构造三、 免疫胶体金层析法检测原理及应用四、S-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍五、 常见问题分析与注意事项六、 免疫胶体金技术的发展的方向
培训资料
2
培训资料一 、免疫胶体金技术的发展史1. 1939年(英，植物) Kausche 和Ruska 把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。2. 1971年(美，微生物) Faulk 和Taylor 首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。3 . 1974年(奥) Romano 等将胶体金标记在马抗人IgG 上，实现了间接免疫金染色法。同年Bauer 等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。
12
培训资料四、B-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例一 .适用范围：主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb) 。 也就是说当尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml 时，检测卡才 能检测到。
培训资料
23
培训资料六、发展方向(Developing)1.标记技术的探索顺磁粒子标记、量子点标记
免疫反应信号转化为电子信号模式
mndad/-CenjuyateSwhatratePeristaltiepurmP
2.生物传感器
wit.(b)(o)
oistansNc sbnste
培训资料
Sample Well
培训资料
20
培训资料五、常见问题及注意事项1.使用前将检测卡和待检样本恢复至室温2.保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹
免疫胶体金快速检测技术
农业部饲料质量监督检验测试中心(西安)
主要内容一、免疫胶体金技术的发展历史二、 胶体金检测卡的基本原理及构造三、 免疫胶体金层析法检测原理及应用四、S-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍五、 常见问题分析与注意事项六、 免疫胶体金技术的发展的方向
培训资料
2
培训资料一 、免疫胶体金技术的发展史1. 1939年(英，植物) Kausche 和Ruska 把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。2. 1971年(美，微生物) Faulk 和Taylor 首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。3 . 1974年(奥) Romano 等将胶体金标记在马抗人IgG 上，实现了间接免疫金染色法。同年Bauer 等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。
免疫胶体金技术ppt课件
λmax
橙色
518nm
橙色
522nm
红色
525nm
紫红ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
535nm
TEM Images of Colloidal Au
Average particle size ~ 17nm
Good gold colloids and bad (unstable) gold colloids
. 劣质金外形不均一，且 非球形，有凝集景象， 颗粒间变异系数较大
➢Final conjugation (IgG)
Take 100ml of gold sol and adjust to Ph9 Adjust the dialyzed and centrifuged antibody solution
(0.1ug/ul) to pH9.2 Add the determined amount of antibody solution dropwise
胶体金与蛋白质的结合胜利与否，取决于pH值，普 通只需在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才干结 实地结合，因此，标志之前须将胶体金溶液的pH值调至 待标志蛋白质的等电点略偏碱。
需求提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需求 降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl。测定金溶液的pH能 够损害pH测定计的探头，因此，普通用精细的pH试纸测 定其pH即可.
2. Adjust the antibody (0.1ug/ul) to the proper pH with 100nM K2CO3 or 100mM HC1.
3. Add the antibody to each tube in a series from 0150ul (ie 0-15ug in steps of 0, 1, 2, 3 ....15ug).
《免疫胶体金技术》课件
该技术适用于现场快速检测和应急响 应，为及时诊断和治疗提供了有力支 持。
简便操作
免疫胶体金技术操作简便，不需要复 杂的仪器和设备，降低了对实验条件 和技术的要求。
VS
该技术适用于基层医疗机构、实验室 及家庭自测等多种场景，方便快捷， 易于推广应用。
稳定性好
免疫胶体金技术稳定性好，试剂有效期长，可长时间保存，保证了检测结果的稳定性和可靠性。
《免疫胶体金技术》PPT课件
目 录
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备 • 免疫胶体金技术的特点与优势 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的挑战与前景
01
免疫胶体金技术概述
定义与原理
总结词
简述免疫胶体金技术的定义和基本原理。
详细描述
免疫胶体金技术是一种基于胶体金标记的免疫分析方法，利用胶体金作为示踪标记物，结合抗原抗体反应进行检 测和定量分析。其原理基于抗原抗体反应的特异性和胶体金的颜色变化，实现对目标物质的快速、灵敏和可视化 检测。
组装质控线
在硝酸纤维素膜上固定另一种 抗原或抗体，形成质控线。
组装试剂条
将硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和吸水纸按顺序粘贴成试剂条
。
质量检测与控制
外观检查
观察试剂条是否平整、无破损、颜色均匀。
稳定性检测
在不同温度和湿度条件下存放试剂条，观察 其稳定性。
性能测试
通过与已知浓度的标准品进行对比，检测试 剂条的灵敏度和特异性。
历史与发展
总结词
概述免疫胶体金技术的发展历程和重要突破。
详细描述
免疫胶体金技术最早可追溯到20世纪70年代，随着科学家对胶体金和免疫学研究的深入，该技术逐渐 发展成熟。近年来，免疫胶体金技术不断取得突破，在临床诊断、生物安全检测、食品安全检测等领 域得到广泛应用。
简便操作
免疫胶体金技术操作简便，不需要复 杂的仪器和设备，降低了对实验条件 和技术的要求。
VS
该技术适用于基层医疗机构、实验室 及家庭自测等多种场景，方便快捷， 易于推广应用。
稳定性好
免疫胶体金技术稳定性好，试剂有效期长，可长时间保存，保证了检测结果的稳定性和可靠性。
《免疫胶体金技术》PPT课件
目 录
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备 • 免疫胶体金技术的特点与优势 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的挑战与前景
01
免疫胶体金技术概述
定义与原理
总结词
简述免疫胶体金技术的定义和基本原理。
详细描述
免疫胶体金技术是一种基于胶体金标记的免疫分析方法，利用胶体金作为示踪标记物，结合抗原抗体反应进行检 测和定量分析。其原理基于抗原抗体反应的特异性和胶体金的颜色变化，实现对目标物质的快速、灵敏和可视化 检测。
组装质控线
在硝酸纤维素膜上固定另一种 抗原或抗体，形成质控线。
组装试剂条
将硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和吸水纸按顺序粘贴成试剂条
。
质量检测与控制
外观检查
观察试剂条是否平整、无破损、颜色均匀。
稳定性检测
在不同温度和湿度条件下存放试剂条，观察 其稳定性。
性能测试
通过与已知浓度的标准品进行对比，检测试 剂条的灵敏度和特异性。
历史与发展
总结词
概述免疫胶体金技术的发展历程和重要突破。
详细描述
免疫胶体金技术最早可追溯到20世纪70年代，随着科学家对胶体金和免疫学研究的深入，该技术逐渐 发展成熟。近年来，免疫胶体金技术不断取得突破，在临床诊断、生物安全检测、食品安全检测等领 域得到广泛应用。
胶体金介绍ppt课件-PPT课件
3、PVC板 PVC板是用来承载膜、金子、 辅料等成分的底板，它是试纸 条的骨架。 PVC板的标准：板上的粘性 要适中；板的长度要合乎规格； 板的硬度也要达到一定的标准。
评价一个试剂的标准
评价一个试剂好坏的标准有： 1、灵敏度 2、特异性 3、背景 4、吸样和上样 5、和对照试剂比较 6、市场反馈 7、检验机构的评价
结果判读
怀孕
与常规诊断方法相比
优点 快速：全部检测过程仅需 3-10分钟。 简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，无需专 业人员，携带方便，可随时随地进行。 廉价：单个测试条成本极低 可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立 刻拿到结果，不必等待。 稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。 检测标本种类多：既可用于查血，又可用于检尿或唾液， 因而适合各种检查 缺点 定量问题 灵敏度问题
试纸条组成结构
胶体金垫 样品垫 控制线（C线） 吸水滤纸
PVC底板
层析方向 测试线 （T线）
NC膜（硝酸纤维素膜）
胶体金层析法一般原理介绍
（双抗体夹心）
（以HCG检测为例）
视频
早早孕产品形式
图片
形式
试纸条
卡型
笔型
电子验孕笔
价格
最经济
3-5元
5-10元
>$5.0
（国外价格）
使用方法
1.试纸：将试纸条标： “MAX”一端浸入尿液，尿液液面请勿 超过标志线，待尿液爬至观察区后取出试纸条平放。3-5分钟 观察结果，10分钟后无效。 2.用吸管吸取尿液，加入4滴到检测卡的加样孔中，3-5分钟观察 结果，10分钟后无效。 3.将尿液滴加到试纸上或直接淋在检测笔的吸尿棒上，尿液爬上 后平放，10分钟观察。
免疫胶体金技术(转)PPT课件
前景展望
1 2 3
不断改进技术
随着科学技术的不断发展，免疫胶体金技术将不 断改进和完善，提高检测的灵敏度和特异性。
拓展应用领域
免疫胶体金技术的应用领域将不断拓展，不仅限 于医学诊断，还可应用于食品安全、环境监测等 领域。
实现自动化和智能化
未来免疫胶体金技术将与自动化、智能化技术相 结合，提高检测的效率和准确性，为临床诊断和 科学研究提供更好的服务。
用。
04
免疫胶体金技术具有操作简便、特异性高、稳定性好 等优点，但也存在一些限制，如检测灵敏度相对较低， 对某些低浓度目标物质检测效果不佳。
对未来研究的建议
01
深入研究免疫胶体金技 术的反应机制和影响因 素，为优化技术提供理 论支持。
02
探索新型的标记物和信 号放大策略，提高检测 灵敏度和特异性。
成熟发展
90年代至今，免疫胶体金 技术不断优化，应用范围 逐渐扩大。
02
免疫胶体金技术的制备方法
胶体金的制备
制备原理
利用氯金酸的水溶液在碱性条件下加热产生聚合物颗粒，通过控制反应条件如 温度、pH值和反应时间，可控制胶体金的粒径大小。
制备步骤
将氯金酸水溶液加热至沸腾，加入氢氧化钠调节pH值至碱性，继续加热至溶液 变为橙红色，冷却后即可获得胶体金溶液。
免疫抗原的制备
抗原选择
选择具有特异性识别能力的抗原，如抗体、多肽等，确保与 目标分子有高亲和性。
抗原制备
将抗原与载体蛋白结合，形成抗原-载体蛋白复合
结合原理
利用抗原-抗体之间的特异性结合反应，将免疫抗原与胶体金结合，形成胶体金 标记的免疫复合物。
结合方法
免疫胶体金技术(转)ppt课 件
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备方法 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的优缺点及前景展望 • 结论
免疫胶体金PPT课件
免疫胶体金技术的应用领域
医学诊断
食品安全
用于检测各种疾病相关 的抗原、抗体，如HIV、
肝炎、癌症等。
用于检测食品中的有害 物质和添加剂，保障食
品安全。
环境监测
用于检测水体、土壤等 环境中的有害物质，保
护环境健康。
生物科学研究
用于研究生物分子相互 作用、细胞信号转导等
生物学过程。
02
免疫胶体金技术的原理
结果判断主观
02
该技术结果判断需要人工进行，不同操作者判断标准可能存在
差异，导致结果不一致。
适用范围有限
03
免疫胶体金技术主要适用于定性检测，对于定量检测和结构分
析等方面存在局限性。
改进方向
提高特异性
通过改进抗体和抗原的纯化技术、优化标记物和检测条件等手段， 提高免疫胶体金技术的特异性。
实现自动化
特点
高灵敏度、高特异性、操作简便 、结果直观等。
免疫胶体金技术的发展历程
01
02
03
起源
20世纪70年代，英国科学 家利用胶体金标记技术制 备出了第一个单克隆抗体。
发展
随着技术的不断完善，免 疫胶体金技术在医学、生 物学等领域得到了广泛应 用。
最新进展
近年来，纳米胶体金标记 技术的研究取得了重要突 破，提高了检测的灵敏度 和特异性。
抗体与抗原的结合
将抗体与抗原混合，使其在一定 条件下结合。
洗涤
去除未结合的抗原和抗体，提高 实验的特异性。
胶体金的标记
胶体金的制备
通过还原剂的作用将金离子还原成胶体金颗粒。
胶体金的标记
将已制备好的胶体金与已结合的抗体结合，形成 金标抗体复合物。
胶体金免疫层析试验.ppt
《临床免疫学检验技术》 第十四章 胶体金免疫分析
胶体金免疫层析试验
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
第步
打开包装取出试 纸条
第步
插入待检样本中
第步
观察结果
• 临床免疫学检验技术
胶体金免疫层析试验
(goldimmunochromatography assay, GICA)
目录
试纸条长什么样子？ 它是怎么工作的？ 它有哪些结果？
分离
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
蛋白质层析方向
Ag
金标抗体
样品垫 胶体金区
T
C
硝酸纤维膜
三、结果判定
组成 工作原理 结果判定 临床应用
层析方向
S
G
T
C
抗人-HCG抗体 抗人-HCG抗体
阳性结果 B
阴性结果
S
G
T
C
B
C
结果判定
T
MAX
C
C
C
T
T
T
阳性
阴性
无效
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
2 结果判定
HCG夹心法
阳性
阴性
C
C
T
T
胶体金免疫 层析实验
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
1. 胶体金免疫标记技术
胶体金免疫标记技术是以胶体金作为示踪物或显示剂应 用于抗原抗体反应的一种免疫标记技术
抗原抗体复合物
免疫标记技术
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
2. 蛋白质层析技术
蛋白质分离技术
固相与液相组成
蛋白质理化性质不同
胶体金免疫层析试验
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
第步
打开包装取出试 纸条
第步
插入待检样本中
第步
观察结果
• 临床免疫学检验技术
胶体金免疫层析试验
(goldimmunochromatography assay, GICA)
目录
试纸条长什么样子？ 它是怎么工作的？ 它有哪些结果？
分离
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
蛋白质层析方向
Ag
金标抗体
样品垫 胶体金区
T
C
硝酸纤维膜
三、结果判定
组成 工作原理 结果判定 临床应用
层析方向
S
G
T
C
抗人-HCG抗体 抗人-HCG抗体
阳性结果 B
阴性结果
S
G
T
C
B
C
结果判定
T
MAX
C
C
C
T
T
T
阳性
阴性
无效
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
2 结果判定
HCG夹心法
阳性
阴性
C
C
T
T
胶体金免疫 层析实验
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
1. 胶体金免疫标记技术
胶体金免疫标记技术是以胶体金作为示踪物或显示剂应 用于抗原抗体反应的一种免疫标记技术
抗原抗体复合物
免疫标记技术
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
2. 蛋白质层析技术
蛋白质分离技术
固相与液相组成
蛋白质理化性质不同
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最近由于原料的精选和制作工艺的改进，已能制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生产的用于急性心 肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的GICA试剂和匹配的简便测读器Cardiac Reader，其精密度和准确性均符合 定量测定要求。
04
免疫胶体金技术的展望
免疫胶体金技术展望
01
提高胶体金的制备质量
04
实现多元化检测
采用多膜复合或单膜多元 受体固定的方式，是实现 多元检测的有效方法。
谢谢聆听
汇报人：詹积 学号：6160109017 专业：营养与食品卫生学
抗体和金颗粒的耦联
在适宜条件下，抗原和抗体与胶体金颗粒 反应产生聚集，达到一定的密度时，大量 聚集的标记物显示出肉眼可见的红色或粉 红色斑点。
胶体金的制备——化学还原法
基本原理：在氯化金水溶液中加入一定量的还原剂，使金离子还原成金原子。在适当条件下，还原的金原子
凝聚成一定大小的金颗粒，形成金溶胶。
Stop heating when a deep red color is obtained.
Hale Waihona Puke 3胶体金技术的种类及特点免疫胶体金快速诊断技术
快速免疫金渗滤法
免疫层析法 ( immunochromatogra-phy，ICA)
(immuogold filtration assay ，IGFA)
A：金标记抗体 B：标本中的抗原 C：包被抗体 D：NC膜 E：吸水材料 F：塑料盒
Add 100 mL of 1.0 % HAuCl4 to a 200 mL Erlenmeyer flask on a stirring hot plate. Add a magnetic stir bar and bring the solution to a boil.
To the boiling solution, add 1.5 mL of a 1% solution of trisodium citrate dihydrate, Na3C6H5O7 · 2H2O
制备大小均匀、分散度好的胶 体金颗粒在检测中至关重要。
02
提高灵敏度、检测范围
提高检测灵敏度的关键是对捕获信号进 行放大。 结合相应的生物传感器和电化学设备等， 对靶信号染色标记，可拓宽检测范围
03
实现半定量或定量检测
通过检测线结合已知定量的分 析物，产生温度计式的条带梯 度，达到定量或半定量的检测 目的
免疫层析法中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛 细管作用(基于层析作用的横流 （lateral flow） )
主要由两部分组成：膜渗滤装置和标记结合物。前 者为一塑料小盒，其中填满吸水性物质，面上紧贴 放置一片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例) 的硝酸纤维膜，标记结合物为免疫金。
向另一端移动。移动过程中被分析物 与固定在膜 上某一区域的受体(抗原或者抗体)结合而被固相化， 无关物质则越过该区域而被分离，然后通过标记 物显色来判定试验结果，以胶体金为标记物的实 验称为胶体金免疫层析试验。
免疫胶体金技术的特点
技术优点：
1. 胶体金制备简单 2. 标记简单，检测快速 3. 特异性强 4. 敏感性高 5. 定位准确 6. 适应性广 7. 易于双重和多重标记
技术不足：
胶体金免疫测定中应用的是单份试 剂，难于进行质量控制。即使是同 一批生产的试剂，也很难保证每个 试剂的同一性。因此胶体金免疫测 定一般只能用于定性试验。 其定量检测和灵敏度的提高还有赖 于新原料和新材料的开发与应用。
胶体金技术相关定义
免疫胶体金技术 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗
体的一种新型的免疫标记技术。
胶体金标记 实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金
颗粒表面的包被过程。
目录
CONTENTS
01 发展历程 02 制备方法
03 种类及优点
04 技术展望
01
胶体金技术的发展
Development of Immune colloidal gold technique
胶体金基本原理
胶体金概念
是氯金酸 (chloroaurie acid，HAuCl4 ) 在还原 剂( 白磷、抗坏血酸、枸 橼酸钠和鞣酸等 ) 作用 下，聚合成带负电的疏
水胶溶液。
胶体金颗粒带电情况
胶体以金颗粒为核，表面吸附AuCl4-和H+双层离子， 与蛋白质分子及其它非共价的生物大分子 ( 毒素、酶、 抗生素、激素、多肽等 ) 正电荷基团形成静电结合， 且不影响其生物特性。